细菌检验技术ppt课件

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1、微生物学检验微生物学检验第五章第五章 细菌菌检验技技术 3本章内容第一第一节细菌形菌形态检验技技术1第二第二节细菌接种与培养技菌接种与培养技术2第三第三节 细菌生化菌生化鉴定技定技术3第四第四节 微生物微生物检验的自的自动化与微型化化与微型化4第五第五节 细菌的其他菌的其他鉴定技定技术54本章内容学学习目目标：掌握：掌握：革兰染色的原理、操作及结果判断；细菌接种技术、培养方法、细菌在不同培养基中的生长现象、生化反应的原理。熟悉：熟悉：细菌染色标本检查的基本程序，细菌培养常用培养基和器材。了解：了解：细菌不染色标本的检查方法和用途；免疫学技术、分子生物学技术及自动化检测技术等鉴定微生物。本章重点

2、本章重点：革兰染色的原理、操作方法及意义细菌培养及生长现象细菌生化反应及临床应用5第一节细菌形态检验技术一、染色一、染色标本本镜检（一）染色（一）染色标本本检查的一般程序的一般程序6第一节细菌形态检验技术1.单染色法细菌标本经涂片、干燥固定后，滴加染液染色1分钟，水洗后待玻片燥后即可镜检（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法7第一节细菌形态检验技术（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法 2.革兰染色法 【方法】 8第一节细菌形态检验技术（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法 2.革兰染色法【结果】紫色革兰阳性菌（1000）红色革兰阴性菌（1000）9第一节细菌形态检验技术（二）常用的染色

3、方法（二）常用的染色方法 3.抗酸染色法 【结果】 抗酸染色结果（1000）：红色为抗酸杆菌，蓝色为非抗酸杆菌10第一节细菌形态检验技术（三）其他染色法（三）其他染色法 1.特殊结构染色法（1）荚膜染色法荚膜染色结果，100011第一节细菌形态检验技术（三）其他染色法（三）其他染色法 1.特殊结构染色法（2）鞭毛染色法鞭毛染色结果，100012第一节细菌形态检验技术（三）其他染色法（三）其他染色法 1.特殊结构染色法（3）芽孢染色法芽孢染色结果，100013第一节细菌形态检验技术（三）其他染色法（三）其他染色法1.特殊结构染色法（4）异染颗粒染色法异染颗粒亚甲蓝染色结果：白喉棒状杆菌，1000

4、14第一节细菌形态检验技术（三）其他染色法（三）其他染色法 2.负染色法墨汁荚膜染色（脑脊液中的新型隐球菌，400）15第一节细菌形态检验技术二、不染色二、不染色标本本镜检 1.压滴法压滴法镜检结果：尿涂片，40016第一节细菌形态检验技术二、不染色二、不染色标本本镜检 2.悬滴法17第一节细菌形态检验技术二、不染色二、不染色标本本镜检 3.毛细管法18三、其他三、其他显微微镜检查第一第一节 细菌形菌形态检验技技术19第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术一、基本条件一、基本条件 接种接种环培养皿培养皿红外外接接种种灭菌菌器器20培培 养养 箱箱生物安全柜生物安全柜第二第二节 细菌接种与

5、培养技菌接种与培养技术一、基本条件一、基本条件21培养基成份培养基：人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。营养物质：牛肉膏、蛋白胨、肉浸液、糖醇类、血液、鸡蛋及动物血清、生长因子、无机盐等水凝固剂：琼脂、明胶抑制剂：孔雀绿、煌绿、胆盐、抗生素等指示剂：溴麝香草酚蓝，溴甲酚紫、酚红等第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术22第二节细菌接种与培养技术基础培养基：普通琼脂平板营养培养基：满足营养需求较高细菌的生长，如血琼脂平板、巧克力琼脂平板等鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖铁培养基（KIA）及各种生化反应用培养基选择培养基：具有选择性抑制非目的菌生长作用，用于选择

6、性培养目的菌，如SS平板、中国蓝琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板等增菌培养基：用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤、GN增菌肉汤特殊培养基：厌氧培养基、L型细菌培养基培养基种培养基种类（按用途分）（按用途分）23培养基培养基第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术24第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术液液体体培培养养基基25培养基的种类（按物理性状分类）液 体 培 养 基 ： 不 含 凝 固 剂 ， 用 于 增 菌 和 接 种 纯 种 细 菌 。半固体培养基 ： 含 0.2 0.5琼脂，用于观察细菌的动力。固 体 培 养 基 ： 含 2 3 琼 脂 ， 用 于 细 菌 的 分 离 培 养

7、 。第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术26第二节细菌接种与培养技术培养基培养基灭菌菌基基础培养基：培养基：121高高压蒸汽蒸汽灭菌菌15分分钟 含糖培养基：含糖培养基：113 灭菌菌15分分钟含含鸡蛋、血清培养基：蛋、血清培养基：间歇歇灭菌菌3天天3次次不耐高温的液体成分：不耐高温的液体成分：滤过除菌除菌调配配溶化溶化调Ph过滤澄清澄清分装分装灭菌菌检定定保存保存培养基制培养基制备程序程序27（一）无菌技术u细菌检验的操作应在无菌室或生物安全柜内进行u无菌室、生物安全柜使用前后均需进行消毒灭菌u细菌检验使用过的物品使用前后需严格灭菌处理u标本的采集严格无菌操作u无菌试管、烧瓶的使用时

8、注意管口灭菌第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术二、二、细菌接种与培养技菌接种与培养技术28 （二）（二）细菌接种与分离技菌接种与分离技术第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术灭菌接种环（针）冷却挑取标本（细菌）接种灭菌接种环（针）平板划线法分区划线连续划线 29分区划线法第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术30连续划线法第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术31斜面接种半固体穿刺接种液体接种第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术32（三）细

9、菌培养方法一般培养（需氧培养）：培养需氧或兼性厌氧菌培养温度：35 37 培养时间：1824小时二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等培养厌氧菌第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术33三、细菌的生长现象第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术菌落与菌苔血平板上溶血现象34细菌在液体培养基中生长现象第二第二节 细菌接种与培养技菌接种与培养技术菌膜对照沉淀浑浊沿穿剌沿穿剌线扩散生散生长在穿剌在穿剌线上生上生长细菌在半固体培养基中的现象35一、碳水化合物的代一、碳水化合物的代谢试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：

10、多糖原理：多糖单糖糖丙丙酮酸酸酸性酸性产物物(或或产气气)pH 呈酸性呈酸性变色色(或出或出现气泡气泡)方法：方法： 将待将待检细菌以无菌操作接种菌以无菌操作接种到糖到糖发酵管中，置酵管中，置35温箱培养温箱培养1824h，观察察结果。果。1、糖（醇、苷）、糖（醇、苷）类发酵酵试验结果36一、碳水化合物的代一、碳水化合物的代谢试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：根据原理：根据细菌在分解葡萄糖的代菌在分解葡萄糖的代谢过程中程中对氧分子需求的不同，将氧分子需求的不同，将细菌分菌分为氧化、氧化、发酵和酵和产碱型三碱型三类2、 O/F试验结果方法：取方法：取2支支HL葡萄糖培葡萄糖培养管煮沸

11、养管煮沸驱氧，冷却后接氧，冷却后接种种细菌。将其中一管敞开，菌。将其中一管敞开，另一管用液体石蜡封管，另一管用液体石蜡封管，培养培养18 24h观察察结果果37 3、甲基、甲基红试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：细菌菌发酵葡萄糖，酵葡萄糖，产生丙生丙酮酸，酸，进一步分解生成大量混合酸，一步分解生成大量混合酸，使培养使培养pH下降至下降至4.4以下，加入甲以下，加入甲基基红后，呈后，呈现红色反色反应。为甲基甲基红试验阳性。阳性。方法：将待方法：将待检菌种接种于葡萄糖蛋菌种接种于葡萄糖蛋白白胨水中水中,35培养培养1824小小时后后,往培养基中加入甲基往培养基中加入甲基红指示指示

12、剂少少许,观察察结果。果。结 果果38 4、V-P试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：细菌分解葡萄菌分解葡萄糖糖产生丙生丙酮酸，丙酸，丙酮酸脱酸脱羧生成乙生成乙酰甲基甲基甲醇，在碱性甲醇，在碱性环境中，境中，乙乙酰甲基甲醇被氧化甲基甲醇被氧化为二乙二乙酰，二乙，二乙酰与与胍基化合物胍基化合物结合，生合，生成成红色化合物，是色化合物，是为V-P试验阳性。阳性。方法：把待方法：把待检细菌接种在葡萄糖蛋白菌接种在葡萄糖蛋白胨水中，水中，35培养培养1824h后，按每后，按每毫升培养液加入毫升培养液加入0.1ml含含2肌酸或肌肌酸或肌酐的的40KOH溶液溶液,数分数分钟或数小或数小时后

13、后观察察结果。果。结 果果空白空白对照照阴性阴性阳阳性性39 5、 -半乳糖苷半乳糖苷酶试验（ONPG）第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：有的原理：有的细菌菌可可产生生-半乳糖半乳糖苷苷酶，能分解，能分解邻硝基酚硝基酚-D半乳糖半乳糖苷苷(ONPG)而生成而生成黄色的黄色的邻硝基苯硝基苯酚，酚，该试验也称也称为ONPG试验。 方法：将被方法：将被检制成菌制成菌悬液，加入液，加入1滴甲滴甲苯充分振苯充分振摇，37水浴水浴5 分分钟，使，使酶释放，然后再加入放，然后再加入0.25ml ONPG，混匀，混匀后，置于后，置于37水浴中温育，菌水浴中温育，菌悬液呈液呈黄色黄色为阳性反阳性反应。

14、结 果果阴性阴性阳性阳性40 6、七叶苷水解七叶苷水解试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：某些某些细菌能分解七叶苷菌能分解七叶苷产生葡生葡萄糖与七叶素，七叶素与培养基中的萄糖与七叶素，七叶素与培养基中的Fe2+结合后，形成黑色的化合物，使合后，形成黑色的化合物，使培养基培养基变黑。黑。方法：将待方法：将待检细菌接菌接种到七叶苷培养基上，种到七叶苷培养基上，培养后培养后观察察结果，培果，培养基养基变黑色者黑色者为阳性，阳性，培养基不培养基不变色色为阴性。阴性。结 果果+-41 二、二、蛋白蛋白质和氨基酸的代和氨基酸的代谢第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：细菌菌产生色

15、氨酸生色氨酸酶，分解，分解培养基中色氨酸，生成靛基培养基中色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基），靛基质与与对二甲基氨二甲基氨基苯甲基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基作用，生成玫瑰靛基质， 是是为靛基靛基质试验阳性。阳性。方法：将待方法：将待检菌接种于蛋白菌接种于蛋白胨水水中，中，35培养培养1824h，取出后，取出后沿沿试管壁加入靛基管壁加入靛基质试剂数滴，数滴，在两液面在两液面观察察结果。果。结 果果1、靛基靛基质（吲哚）试验42 二、二、蛋白蛋白质和氨基酸的代和氨基酸的代谢第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：细菌菌产生生酶，分解含硫氨基酸生，分解含硫氨基酸生成硫化成硫化氢，硫化，硫化氢与

16、培养基中的与培养基中的亚铁盐或或铅盐结合生成黑色化合物。合生成黑色化合物。方法：方法：将将细菌穿刺接种菌穿刺接种到醋酸到醋酸铅培养基中，培养基中， 35、1824h，观察察结果。果。结果：果：黑色黑色管管为阳性阳性2、硫化、硫化氢试验43 二、二、蛋白蛋白质和氨基酸的代和氨基酸的代谢第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：细菌菌产生生脲酶，水解尿素生成，水解尿素生成氨和二氧化碳，培氨和二氧化碳，培养基呈碱性反养基呈碱性反应方法：将待方法：将待检菌菌接种于尿素培养接种于尿素培养基中，基中，35培养培养1824h取出取出观察。察。结 果果3、尿素尿素酶试验 - +44 二、二、蛋白蛋白质和

17、氨基酸的代和氨基酸的代谢第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：细菌菌产生苯丙氨酸脱氨生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨形成苯丙使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，酸，苯丙苯丙酮酸与三酸与三氯化化铁作用，形成作用，形成绿色化合物色化合物方法：将待方法：将待检菌接种于苯丙菌接种于苯丙氨酸微量培养管中（接种量氨酸微量培养管中（接种量稍大），培养后在培养基上稍大），培养后在培养基上直接滴加直接滴加10氯化化铁试剂，出出现绿色反色反应者者为阳性。阳性。 结 果果4、苯丙氨酸脱氨苯丙氨酸脱氨酶试验 - +45 三、碳源利用三、碳源利用试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：有的有的细菌能利用培

18、养基中的菌能利用培养基中的枸枸橼酸酸盐作作为唯一的碳源，唯一的碳源，细菌在菌在生生长过程中分解枸程中分解枸橼酸酸盐产生碳酸生碳酸盐，使培养基呈碱性反，使培养基呈碱性反应方法：将待方法：将待检菌接种于枸菌接种于枸橼酸酸盐培养基上，培养后培养基上，培养后观察察结果。果。培养基由淡培养基由淡绿色色变为深深蓝色者色者为阳性，培养基中无菌生阳性，培养基中无菌生长、仍仍为绿色者色者为阴性。阴性。结 果果枸枸橼酸酸盐利用利用试验 + -46 四、四、酶类试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：某些某些细菌具有氧化菌具有氧化酶（细胞色素氧化胞色素氧化酶），能将二），能将二甲基甲基对苯二胺或四甲基苯

19、二胺或四甲基对苯二苯二胺氧化生成胺氧化生成红色的色的醌类化合物。化合物。方法：方法：取取洁净滤纸条，粘取条，粘取被被检细菌菌落，滴加氧化菌菌落，滴加氧化酶试剂1滴于菌落上。或将滴于菌落上。或将试剂直直接滴加在被接滴加在被检细菌的菌落上。菌的菌落上。阳性者立即出阳性者立即出现红色，色，继而而变为深深红色至深紫色。色至深紫色。结果果1、氧化氧化酶（细胞色素氧化胞色素氧化酶）试验47 四、四、酶类试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：细菌菌产生的触生的触酶（过氧化氧化氢酶）能催化）能催化过氧化氧化氢放出初生放出初生态氧，氧，继而形成氧分子出而形成氧分子出现气泡。气泡。方法：方法：取待取

20、待检细菌少菌少许，置于置于洁净的的载玻片上，玻片上，滴加滴加3H2O2试剂12滴，滴，观察察结果。一分果。一分钟内内产生大量气泡者生大量气泡者为阳阳性，不性，不产生气泡者生气泡者为阴阴性。性。结 果果2、触触酶试验 + -48 四、四、酶类试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：金黄色葡萄球菌能金黄色葡萄球菌能产生生凝固凝固酶，使血，使血浆中的中的纤维蛋白蛋白原原转变为不溶性的不溶性的纤维蛋白。蛋白。方法：于方法：于3支支试管中分管中分别加入加入1:4稀稀释的血的血浆0.5ml，1支管支管加入待加入待检菌肉菌肉汤培养物培养物0.5ml,另两支分另两支分别加阴阳性加阴阳性对照菌肉照菌

21、肉汤培养物培养物0.5ml，35培养培养34h后后观察察结果。果。结果果3、凝固凝固酶试验（试管法）管法）49 四、四、酶类试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：金黄色葡萄球菌能金黄色葡萄球菌能产生生凝固凝固酶，使血，使血浆中的中的纤维蛋白蛋白原原转变为不溶性的不溶性的纤维蛋白蛋白。方法：取未稀方法：取未稀释的兔血的兔血浆和生理和生理盐水各一滴分水各一滴分别置置于于载玻片的两玻片的两侧，挑取金，挑取金黄色葡萄球菌少黄色葡萄球菌少许分分别与与它它们混合，立即混合，立即观察察结果。果。细菌在生理菌在生理盐水中无自凝，水中无自凝，菌液呈均匀混菌液呈均匀混浊状状态凝固凝固酶试验为阴性；菌

22、液聚集阴性；菌液聚集成成团块或或颗粒状，粒状，则血血浆凝固凝固酶试验为阳性。阳性。结果果4、凝固凝固酶试验（玻片法）（玻片法）50 四、四、酶类试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：某些原理：某些细菌能菌能还原培原培养基中的硝酸养基中的硝酸盐为亚硝酸硝酸盐，亚硝酸硝酸盐与醋酸作用，与醋酸作用，生成生成亚硝酸，硝酸，亚硝酸与硝酸与试剂中的中的对氨基苯磺酸作用氨基苯磺酸作用生成重氮磺酸，再与生成重氮磺酸，再与-萘胺胺结合，生成合，生成N-萘胺偶胺偶氮苯磺酸氮苯磺酸(红色化合物色化合物)。方法：方法：将被将被检细菌接种于硝酸菌接种于硝酸盐培养培养基中，基中，35培养培养1824小小时，加入甲

23、，加入甲液（液（对氨基苯磺酸氨基苯磺酸0.8g、5molL醋酸醋酸100ml）和乙液（）和乙液（-萘胺胺0.5g、5molL、醋酸、醋酸100ml）等量混合液，）等量混合液，观察察结果。立即出果。立即出现红色者色者为阳性。若加入阳性。若加入试剂不出不出现红色，需要色，需要检查硝酸硝酸盐是否被是否被还原，可于培养管内加入少原，可于培养管内加入少许锌粉，如粉，如无色，无色，说明明亚硝酸硝酸盐进一步分解，硝酸一步分解，硝酸盐还原原试验为阳性。若加阳性。若加锌粉后出粉后出现红色，色，说明明锌使硝酸使硝酸盐还原原为亚硝酸硝酸盐，而待而待检细菌无菌无还原硝酸原硝酸盐的能力，硝酸的能力，硝酸盐还原原试验为阴

24、性。阴性。5、硝酸硝酸盐还原原试验51 红色色为阳性阳性无色无色为阴性阴性 四、四、酶类试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术5、硝酸硝酸盐还原原试验 -+无色无色+锌粉粉无色：阳性无色：阳性无色无色+锌粉粉红色：阴性色：阴性+-结果果52 四、四、酶类试验第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理： B群群链球菌能球菌能产生生CAMP因子，可促因子，可促进金黄色葡金黄色葡萄球菌萄球菌溶血素活性。其他溶血素活性。其他链球球菌不菌不产生生CAMP因子。因子。方法：用方法：用产生生-溶血素的金黄溶血素的金黄色葡萄球菌在血平板上划种一色葡萄球菌在血平板上划种一条直条直线，将待，将待检菌距金黄色

25、葡菌距金黄色葡萄球菌萄球菌3mm处垂直划种一短垂直划种一短线。用同。用同样方法接种阴性和阳方法接种阴性和阳性性对照菌株。照菌株。35孵育孵育1824h。结果果6、CAMP试验对照阴性阳性检测菌阳性阳性矢状溶血53 五、复合生化反五、复合生化反应第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术原理：原理：KIA琼脂中含有牛肉膏、酵母浸膏、蛋白胨、乳糖、葡萄糖、枸橼酸铵铁、酚红指示剂等。乳糖的浓度为葡萄糖的10倍，若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，培养基中的葡萄糖被分解后只能产生少量的酸，在最初培养的811小时内，这些酸也足以使培养基的底层和斜面变黄色。但连续培养数小时后，在细菌和氧的作用下，培养基的斜面所含氨

26、基酸发生降解，释放氨类，立即中和斜面部分的酸，培养1824小时后，整个斜面转变成碱性，斜面又变成红色。培养基深层中，氨基酸的降解作用不足以中和所形成的酸，故仍呈黄色。因此KIA斜面呈碱性，深层呈酸性反应，说明该菌只分解葡萄糖而不分解乳糖。若细菌分解乳糖则产生大量的酸，这些酸能中和斜面产生的碱，使整个培养基呈黄色。若细菌能分解培养基中含硫氨基酸，则可产生H2S，H2S与培养基中枸橼酸铵铁起反应，产生不溶性的黑色硫化亚铁沉淀。 KIA试验54 六、复合生化反六、复合生化反应第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术方法：方法：用接种针挑取待检细菌，先穿刺接种到KIA深层，距管底35mm为宜，再从深层向上

27、提起，在斜面上由下至上划线，35培养1824小时，观察结果 KIA试验 常见的反应结果：斜面碱性/底层碱性：不发酵糖类，如粪产碱杆菌。斜面碱性/底层酸性：葡萄糖发酵，乳糖不发酵，如志贺菌。斜面碱性/底层酸性（黑色）：葡萄糖发酵、乳糖不发酵，产生H2S。如沙门菌、普通变形杆菌。斜面酸性/底层酸性：葡萄糖和乳糖发酵，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属。 55 六、复合生化反六、复合生化反应第三第三节细菌生化菌生化鉴定技定技术KIA试验结果果56第四节微生物检验的自动化和微型化一、一、 微生物自微生物自动培养系培养系统（一）自动血培养检测系统1.基本原理（1）放射性物质标记法一般采用放射性碳14标记

28、法：细菌生长时利用标记底物产生含14C的CO2，当14C标记的CO2量超过界限时，检测器报告阳性生长。（2）二氧化碳感受器每一血液培养瓶底部都含有Novel颜色感应器，当血液培养瓶内有微生物生长释出之CO2后，感应器之酸碱值也跟着改变，从深绿色变为黄色，检测器报告阳性。（3）均质荧光技术在血培养基内含有发荧光物质。微生物生长代谢过程中产生各种带电荷的原子团，培养瓶发出的荧光，即可检测有细菌存在。572仪器的基本结构和配套试剂全自动恒温孵育系统包括恒温装置和震荡培养装置，仪器培养瓶容量常分为60瓶、120瓶、240瓶等，对培养瓶进行震荡恒温培养，温度常设为37。仪器均配置电脑，在电脑上可设置培养

29、时间、温度等参数，显示阳性或阴性瓶所在的位置，及自动分析。3注意事项及结果报告制度（1）培养瓶的选择如果患者未使用抗生素，可选择一般需氧菌培养瓶，如果已经使用抗生素则选用可中和血液中抗生素的培养瓶。如怀疑厌氧菌、L型菌、真菌、分枝杆感染，则选用厌氧菌培养瓶、L型菌培养瓶、真菌培养瓶、分枝杆菌培养瓶。（2）采血时间对入院患者中有高热、寒战、白细胞增多或疑有感染者，最好在使用抗生素前采血送检。住院患者出现发热等败血症症状时，应及时采血，尽可能在使用抗生素前采血。已使用抗生素的患者最好在下次使用抗生素前采血。第四第四节 微生物微生物检验的自的自动化和微型化化和微型化58第四节微生物检验的自动化和微型

30、化（3）采血量采血量一般为血培养瓶中肉汤培养基量的1/4-1/5为宜，成人一般每次采集3-10ml，以8-10ml最佳，小儿一般每次采集1-3ml即可。每天最好采血2-3次，以提高检出率，并帮助判断是感染菌或污染菌。（4）采血方法一般多从肘静脉采血，采集前应严格消毒采血部位，采血过程中注意无菌操作，否则易被皮肤表面细菌污染，导致假阳性。使用真空采血系统，利用配套的一次性使用的无菌采血管，血液因负压作用进入培养瓶中。（5）标本送检采血后应及时送检，检验者收到血培养瓶后应尽快上机。如不能及时送检，应将血培养瓶放置室温保存。59第四节微生物检验的自动化和微型化（二）自动分枝杆菌培养检测系统多数自动血

31、培养检测系统可检测血液中的分枝杆菌，目前针对分枝杆菌有专门的自动分枝杆菌培养检测系统，可对各类标本中的分枝杆菌进行培养及检测，原理基本同自动血培养检测系统，配套专门的培养瓶。一般将各类标本直接送检，检验者收到标本后，如为清亮的穿刺液标本，可直接注入培养瓶内，放入仪器自动培养并检测。如为痰液等其他含有杂菌或细胞的标本，应先进行消化、中和等处理后再注入培养瓶，否则会导致假阳性结果。60第四节微生物检验的自动化和微型化二、微生物鉴定的自动化和微型化（一）微生物数码分类原理1数据库由许多细菌条目组成，每个条目代表一个细菌种或一个细菌生物型。2编码将细菌生化反应模式转换成数学模式，可把生化反应结果快速转

32、录成数字（编码），经查阅编码检索本或电脑分析系统又可将数字转化成相应的细菌名称。3查码在编码检索本内寻找数码信息：如菌名，鉴定结果的评价，生化结果，阳性百分率，必须增加的补充试验项目，指出注意要点等。614解解释如果一个编码只对应一种细菌，无论几率大小，为该种细菌的可能性( ID %) 均为99. 99 %。如果一个编码对应两种或两种以上种类的细菌，应计算每种细菌出现的几率所占的百分比ID % 。如ID % 99 %，为该种菌的可能性非常大；如ID % 90 %，为该种菌的可能性较大；如ID %80 %，为该种菌的可能性也较大，但需做补充试验进一步确证；如ID %80 %，则一般无法准确区分菌

33、种，必须增加多个补充试验才可得出准确结果。第四第四节 微生物微生物检验的自的自动化和微型化化和微型化62第四第四节 微生物微生物检验的自的自动化和微型化化和微型化（二）微生物自二）微生物自动鉴定定仪器的基本器的基本结构和配套构和配套试剂数码分类鉴定系统的组成由鉴定卡、添加试剂及检索工具配套形成的完整的微生物鉴定体系。（1）鉴定卡常用的生化反应有：发酵试验；同化试验；同化或发酵抑制试验；酶试验；其他传统的生化反应。（2）添加试剂：有些试验经孵育后需添加试剂才能呈现颜色变化。添加的试剂有配套试剂盒或单种试剂。（3）检索工具：检索工具可由电脑自动处理并报告。63第四节微生物检验的自动化和微型化三、微

34、生物药敏试验的自动化和微型化（一）原理自动化药敏试验使用药敏试验卡进行检测，实质就是微型化的肉汤稀释试验。根据不同的药物对不同菌种最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration, MIC）的不同，每一种药物一般选用3种或以上不同药物浓度，每一药敏试验卡（板）可同时检测约20种抗生素的药敏试验结果。药敏试验检测原理有：光电比浊法测定细菌浓度、荧光标记法测定荧光强度的变化、氧化还原指示剂检测细菌生长代谢产物等方法。经数小时孵育后，每隔一定时间自动测定每一药敏试验孔中细菌生长情况，与细菌生长对照孔的结果进行比较计算出生长率。将药敏试验卡中各测定孔的生长率在数据库中进行

35、比较分析，可得到最低抑菌浓度MIC值，常参照相关标准，判断最终结果为敏感(S)、中度敏感(MS)和耐药(R)，并对结果进行解读。64第四节微生物检验的自动化和微型化（二）仪器的基本结构和配套试剂微生物自动鉴定系统大多与药敏试验系统组合在一起，药敏试验系统常配备计算机专家系统。药敏试验卡是系统的工作基础，一般与鉴定卡配套，常分为革兰阴性菌、革兰阳性菌、厌氧菌、苛氧菌、酵母菌等的药敏试验卡。（三）注意事项及影响因素1.药敏试验卡的保存2.接种的菌液浓度3.检验信息系统的应用65一、免疫学一、免疫学鉴定定第五第五节细菌的其他菌的其他鉴定技定技术免疫学免疫学鉴定：定：是应用免疫学试验的原理和方法，用已

36、知的抗原（或抗体）来检测标本中的抗体（或抗原），是细菌感染性疾病重要的诊断方法。方法：方法：抗原检测和抗体检测检测抗原方法包括：抗原方法包括：凝集反应、荧光免疫显微技术、免疫比浊法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析等。检测抗体方法包括：抗体方法包括：肥达反应、外斐反应、性病研究实验室试验、免疫比浊法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析等。66二、药敏敏鉴定定试验 第五第五节细菌的其他菌的其他鉴定技定技术 药敏敏鉴定定试验：细菌对药物的敏试验是在体外测定药物抑制或杀死细菌能力的试验，有些药敏试验亦可用于鉴定某些细菌。 方法包括：方法包括：杆菌肽试验、O/129抑菌试验、Optochin敏感试验。67