《临床班医学微生物学实验七 肠道微生物感染的病原学诊断——粪便检查（1）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床班医学微生物学实验七 肠道微生物感染的病原学诊断——粪便检查（1）（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验七实验七 肠道微生物感染的病原学诊断肠道微生物感染的病原学诊断粪便检查（粪便检查（1）1、大肠、伤寒、副乙、痢疾在、大肠、伤寒、副乙、痢疾在S.S平板上菌落平板上菌落及双糖铁培养基及双糖铁培养基 示教示教2、粪便标本的致病性肠道杆菌分离鉴定程序、粪便标本的致病性肠道杆菌分离鉴定程序1）标本的采集）标本的采集2）粪便标本接种肠道杆菌鉴别培养基（）粪便标本接种肠道杆菌鉴别培养基（SS平板平板 划线分离培养）划线分离培养） 1份份/组组3）双糖铁培养基接种）双糖铁培养基接种 2支支/组组4）系统生化反应）系统生化反应 示教示教n肠道杆菌：肠道杆菌：n非致病菌：非致病菌：大肠杆菌等大肠杆菌等n致病
2、菌：致病菌：痢疾杆菌、伤寒杆菌痢疾杆菌、伤寒杆菌-肠道杆菌在形态和染色性方面无特征性肠道杆菌在形态和染色性方面无特征性如何鉴定致病性肠道杆菌如何鉴定致病性肠道杆菌?n利用肠道杆菌某些生物学性状（利用肠道杆菌某些生物学性状（生化反应、生化反应、抗原性抗原性等）的差异，对其进行鉴别。等）的差异，对其进行鉴别。致病性肠道杆菌分离鉴定程序致病性肠道杆菌分离鉴定程序标本采集标本采集SS平板分离培养平板分离培养红色菌落红色菌落无色半透明菌落无色半透明菌落接种双糖铁培养基接种双糖铁培养基系统生化反应系统生化反应血清学鉴定血清学鉴定1、标本采集、标本采集n采集病人粪便标本采集病人粪便标本n尽量挑取脓血或黏液部
3、分尽量挑取脓血或黏液部分n及时送检或适当保存（甘油缓冲盐水）及时送检或适当保存（甘油缓冲盐水）n1号号、2号标本号标本 2 2、S.S.S.S.平板分离培养平板分离培养nS.S平板的主要成分及功能：平板的主要成分及功能：n蛋白胨等营养成分蛋白胨等营养成分n乳糖及中性红乳糖及中性红鉴别鉴别n胆盐、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、煌绿胆盐、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、煌绿选择选择n原理：原理：n致病性肠道杆菌不分解乳糖；致病性肠道杆菌不分解乳糖；n非致病性肠道杆菌分解乳糖。非致病性肠道杆菌分解乳糖。n结果观察：两种颜色的菌落结果观察：两种颜色的菌落可见无色的可疑致病菌菌落，及红色非致病菌菌落。可见无色的可疑致病菌
4、菌落，及红色非致病菌菌落。伤寒、副乙、痢疾、大肠在伤寒、副乙、痢疾、大肠在S.S平板上菌落平板上菌落3 3、接种双糖铁培养基、接种双糖铁培养基 （2 2支支/ /组）组）n原理：双层培养基（全红色）原理：双层培养基（全红色）上上层层下下层层（固固体体斜斜面面） （半半固固体体）含含乳糖乳糖及酚红及酚红发酵乳糖发酵乳糖硫酸亚铁硫酸亚铁H2S产生产生动力动力葡萄糖发酵葡萄糖发酵是因为某些细菌能分是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁生成黑色的硫化亚铁沉淀。沉淀。发酵乳糖的细菌发酵乳糖的细菌(
5、(e.coli) )，则产生大，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。量的酸，使整个培养基呈现黄色。选取选取1 1号，号，2 2号号 SSSS平板上的红色和无色半透明菌落分别接种平板上的红色和无色半透明菌落分别接种1 1只双糖铁只双糖铁n用途：用途：n初步鉴别致病性肠道杆菌初步鉴别致病性肠道杆菌n增菌增菌n接种方法：接种方法： 用接种针挑取用接种针挑取SS平板中的无色菌平板中的无色菌落，先接种下层半固体，再接种上层落，先接种下层半固体，再接种上层斜面斜面肠道杆菌在肠道杆菌在ss平板和双糖铁培养基中平板和双糖铁培养基中的生长现象的生长现象SS平板平板双糖铁培养基双糖铁培养基乳糖乳糖H2S动力动力
6、葡萄糖葡萄糖大肠杆菌大肠杆菌粉红色大菌落粉红色大菌落-+伤寒杆菌伤寒杆菌无色小菌落无色小菌落-+甲型副伤甲型副伤寒杆菌寒杆菌无色小菌落无色小菌落-+乙型副伤乙型副伤寒杆菌寒杆菌无色小菌落无色小菌落-+痢疾杆菌痢疾杆菌无色小菌落无色小菌落-+E.coil乙型副伤寒沙门菌伤寒沙门菌志贺痢疾杆菌痢疾、伤寒、副乙、大肠在痢疾、伤寒、副乙、大肠在双糖铁培养基的现象双糖铁培养基的现象4、系统生化反应、系统生化反应（示教示教）n糖发酵实验：糖发酵实验：沙门菌属沙门菌属，除伤寒沙门氏菌只产酸除伤寒沙门氏菌只产酸不产气外，不产气外， 葡萄糖（葡萄糖（ ） 、麦芽糖（、麦芽糖（ ） 、甘露、甘露醇（醇（ ） 、山
7、梨醇（、山梨醇（ ） ； 乳糖（乳糖（-） 、蔗糖（、蔗糖（-）nH2S产生实验产生实验（+）n尿素酶实验尿素酶实验 （-）酸性，）酸性，酚红黄色,(+)碱性，碱性，酚红黄色。n半固体培养基观察动力半固体培养基观察动力（+）注意事项：注意事项：先观察对照组再观察实验组先观察对照组再观察实验组肠道杆菌在肠道杆菌在ss平板和双糖铁培养基中平板和双糖铁培养基中的生长现象的生长现象乳糖乳糖H2S动力动力葡萄糖葡萄糖大肠杆菌大肠杆菌-+伤寒杆菌伤寒杆菌-+甲型副伤甲型副伤寒杆菌寒杆菌-+乙型副伤乙型副伤寒杆菌寒杆菌-+痢疾杆菌痢疾杆菌-+SS平平板板划划线线分分离离培培养养 双双糖糖铁铁培培养养基基接接种种非致病菌非致病菌：大肠杆菌大肠杆菌等等致病菌致病菌：痢疾杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌伤寒杆菌、副伤寒杆副伤寒杆菌菌生化反应示教生化反应示教 下次实验课观察结果，并将双糖铁下次实验课观察结果，并将双糖铁中细菌做血清学和肥达氏反应实验中细菌做血清学和肥达氏反应实验
