《分离以尿素为氮源的微生物.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分离以尿素为氮源的微生物.ppt（38页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1B 2B 3C 4C D 6B 7B 10. D 11.B 12.C 13.C13.“培养基的稀释率（培养基的更新速培养基的稀释率（培养基的更新速率）率）”的含义就是的含义就是“添加新的培养基以及添加新的培养基以及放出老的培养基的速度放出老的培养基的速度”。横坐标为。横坐标为“培培养基的稀释率（培养基的更新速率）养基的稀释率（培养基的更新速率）”，也就是，也就是“添加新的培养基以及放出老添加新的培养基以及放出老的培养基的速度的培养基的速度”。1 4（1）目的菌）目的菌 选择选择 （2）化合物）化合物A 异养需氧型异养需氧型 （3）减少）减少 增加增加（4）划线）划线 （5）定期取样）定期取样
2、 细菌数目的对数细菌数目的对数 （6）灭菌）灭菌实验实验2 2 分离分离以尿素为氮以尿素为氮 源的源的微生物微生物 细菌细菌 尿素尿素 NH3 中性中性 碱性碱性 酚红颜色：酚红颜色： 黄色黄色 红色红色( (变色范围变色范围 pH6.4-8.2) pH6.4-8.2)任务任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？：怎么从土壤中分离出它们呢？利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。配制培养基尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml选择培养基选择培养基琼脂是未被纯化的混合物琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化
3、合内含一定量的含氮化合物物（1）将土壤中的固氮菌分离出来（2）将土壤中自养微生物分离出来举一反三（3）筛选出抗青霉素的微生物（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物2 2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基、要验证以尿素为唯一氮源的培养基对土壤中的细菌确实具有选择作用，你对土壤中的细菌确实具有选择作用，你该如何设计实验。该如何设计实验。思考：思考： 配制培养基尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10mlLB培养基 蛋白胨： 0.25g 酵母粉： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组对照组选择培
4、养基选择培养基实验组实验组3 3、请你提供一种方法，判断分解、请你提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。思考：思考： 方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂中加入酚红指示剂, ,接种培养该细菌，若接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。二、实验目的二、实验目的: : 使用专一培养基使用专一培养基( (含有尿素含有尿素) )分离专一的细菌分离专一的细菌 通过指示剂（酚红）通过指示剂（酚红）颜色的变化颜色的变化检知脲酶催化检知脲酶催化的化学反应的化学反应三、实
5、验中涉及到的一些问题：三、实验中涉及到的一些问题：（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题）？（选材的问题）（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？对尿素分解能力的高低？没硬化，腐殖质丰富的土壤没硬化，腐殖质丰富的土壤碳源、尿素、无机盐、水、酚红碳源、尿素、无机盐、水、酚红培养基红色的深浅培养基红色的深浅三、实验中涉及到的一些问题：三、实验中涉及到的一些问题：重复性
6、原则重复性原则对照原则对照原则（排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度）（四四）实验设计要遵循的原则：）实验设计要遵循的原则： 过滤灭菌后过滤灭菌后的尿素的尿素（二）制备细菌悬液制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液配制菌悬液1个个99ml无菌水无菌水 2个个4.5ml无菌水无菌水得得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液的菌悬液1g土壤土壤倒平板需要倒3个LB平板，9个尿素平板LB(对照)尿素10-310-410-5每个稀释度每个稀释度 1个个LB对照平板对照平板 3个尿素平板个尿素平板(平行重复组平行重复组)接种取0.1ml菌悬液涂布分离高浓度高浓度低浓
7、度，换枪头低浓度，换枪头低浓度低浓度高浓度，可不用换枪头高浓度，可不用换枪头涂布分离37倒置培养按浓度捆成一摞按浓度捆成一摞恒温恒温37培养培养10-4 、 10-3,、 10-2本实验尿素固体培养基上生长本实验尿素固体培养基上生长的菌落都是以尿素为氮源的微的菌落都是以尿素为氮源的微生物吗？生物吗？思考与练习2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下就会被水解，水解后的度下就会被水解，水解后的NH3会使土壤变会使土壤变成碱性，成碱性，NH3与其他阴离子物质如与其他阴离子物质如SO42
8、、CO32、NO3等形成化合物，则会使土壤等形成化合物，则会使土壤板结。板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中中氮的循环氮的循环。4与与全营养培养基全营养培养基早早的菌落的菌落比较，为什么尿比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落？素培养基上只有少数菌落？因为全营养培养基中的氮源是蛋白胨，很因为全营养培养基中的氮源是蛋白胨，很多细菌都能利用它，而尿素培养基中的氮多细菌都能利用它，而尿素培养基中的氮源只有尿素，只有含脲酶的细菌才能利用源只有尿素，只有含脲酶的细菌才能利用尿素，能存活。尿素
9、，能存活。这一现象表明能利用尿素的细菌在土壤菌这一现象表明能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占有群中只占有 极少数量。极少数量。1土壤中有些微生物能利用尿素是因为土壤中有些微生物能利用尿素是因为()A其体内含有脲酶其体内含有脲酶B其体内含有氨其体内含有氨(NH3)酶酶C它能将它能将CO2合成为有机物合成为有机物D它们不需要氮源它们不需要氮源A【例题【例题2】 分离以尿素为氮源的细菌和分离分离以尿素为氮源的细菌和分离大肠杆菌都使用了大肠杆菌都使用了LB培养基，其成分培养基，其成分()A前者含琼脂，后者不含琼脂和琼脂糖前者含琼脂，后者不含琼脂和琼脂糖B两者都含有琼脂两者都含有琼脂C前者含有琼脂糖，后者
10、含琼脂前者含有琼脂糖，后者含琼脂D两者都不含琼脂和琼脂糖两者都不含琼脂和琼脂糖C3用用104稀释度的细菌悬液分别涂布于稀释度的细菌悬液分别涂布于LB、尿素培养基上，培养后的结果，以下叙述尿素培养基上，培养后的结果，以下叙述正确的是正确的是()ALB培养基上未出现任何菌落培养基上未出现任何菌落B尿素培养基上出现的菌落数量和种类都尿素培养基上出现的菌落数量和种类都多于多于LB培养基上的培养基上的C尿素培养基上出现的菌落数量和种类都尿素培养基上出现的菌落数量和种类都少于少于LB培养基上的培养基上的D尿素培养基上是不可能出现菌落的尿素培养基上是不可能出现菌落的C5.5.在做分离分解尿素的细菌实验时，在
11、做分离分解尿素的细菌实验时，A A同同学从对应学从对应1010- -6 6培养基上筛选出大约培养基上筛选出大约150150个菌个菌落，而其他同学只选择出大约落，而其他同学只选择出大约5050个菌落。个菌落。A A同学的结果产生原因可能有同学的结果产生原因可能有( )( ) 由于土样不同由于土样不同 由于培养基污染由于培养基污染 由于操作失误由于操作失误 没有设置对照没有设置对照 A A B B C C D DA 2为什么本实验中要用琼脂糖来代替琼脂配制固体培养基呢？琼脂糖与琼脂有何区别？琼脂在制作固体培养基时起凝固剂的作用。但它却是一种未被纯化的混合物，里面有一定量的含氮化合物。在本实验中所使
12、用的尿素培养基却要求提供氮元素的物质只有尿素，用这种培养基才能分离得到含脲酶的细菌。若用琼脂来制备本实验的尿素固体培养基，则提供氮元素的物质除了尿素还有琼脂，用这种培养基就不难只得到含脲酶的细菌，还会得到大量以非尿素为氮源的细菌，这样就达不到分离出以尿素为氮源的细菌这一实验目的了。所以要将琼脂纯化，去除那些含氮化合物，这样经纯化得到的琼脂糖就可以代替琼脂做固体剂且不会带来含氮化合物对本实验的干扰了。3本实验的微生物分离与上一实验中大肠杆菌的分离实质上一样吗？两者的细菌分离有很大的不同。实验名称 分离方法 分离的内容 分离结果实验1：大肠杆菌培养和分离 划线分离法 从同种菌种中分离得到同种菌的单菌落 在划线的末端出现大肠杆菌单菌落实验2：分离以尿素为氮源的微生物 涂布分离法 从土壤浸出液里所存在的各种细菌中只将含有脲酶的细菌分离出来 只出现含有脲酶的细菌菌落
