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1、1医学免疫学医学免疫学第二十二章第二十二章 免疫学检测免疫学检测原理及临床应用原理及临床应用2抗原抗体检测抗原抗体检测免疫细胞检测免疫细胞检测免疫分子检测免疫分子检测3第一节第一节 基于抗原基于抗原- -抗体反应的检测抗体反应的检测方法方法 用已知抗原检测未知抗体，诊断或辅助诊用已知抗原检测未知抗体，诊断或辅助诊断疾病断疾病用已知抗体检测未知抗原，鉴定病原体或用已知抗体检测未知抗原，鉴定病原体或辅助诊断疾病辅助诊断疾病定性或定量检测体内各种大分子物质，诊定性或定量检测体内各种大分子物质，诊断或辅助诊断相关疾病断或辅助诊断相关疾病用已知抗体检测某些半抗原物质，监测血用已知抗体检测某些半抗原物质，
2、监测血清中药物浓度或运动员违禁药品水平清中药物浓度或运动员违禁药品水平4一、抗原抗体结合一、抗原抗体结合一、抗原抗体结合一、抗原抗体结合 反应的特点反应的特点反应的特点反应的特点特异性和交叉反应特异性和交叉反应 带现象与可见性带现象与可见性 可逆性可逆性 二、抗原二、抗原二、抗原二、抗原- - - -抗体反应的影响因素抗体反应的影响因素抗体反应的影响因素抗体反应的影响因素电解质，酸碱度，温度电解质，酸碱度，温度抗原和抗体的性质、浓度、比例是决定因素抗原和抗体的性质、浓度、比例是决定因素 三、抗原抗体反应的基本检测方法三、抗原抗体反应的基本检测方法三、抗原抗体反应的基本检测方法三、抗原抗体反应的
3、基本检测方法5（一）凝集反应（一）凝集反应(agglutination)6（二）沉淀反应（二）沉淀反应(precipitation) 单扩的原理单扩的原理双扩的原理双扩的原理单扩实验单扩实验7双双扩扩实实验验8免疫电泳免疫电泳9（三）（三）补体参与的反应补体参与的反应溶血空斑试验（见后）溶血空斑试验（见后）补体依赖细胞毒实验补体依赖细胞毒实验 补体结合试验补体结合试验10 （四）免疫标记技术（四）免疫标记技术1. 免疫荧光技术免疫荧光技术112. 酶免疫测定酶免疫测定(enzyme immunoassay, EIA)酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunoso
4、rbent assay，ELISA) 直接法直接法12ELISA双抗体夹心法和间接法双抗体夹心法和间接法13ELISPOT14biotin avidin system(BAS)ELISA153. 免疫组化技术免疫组化技术(immunohistochemistry techenique) 4. 放射免疫测定法放射免疫测定法(radioimmunoassay，RIA) 5. 胶体金标记技术胶体金标记技术6. 化学发光免疫分析化学发光免疫分析7. 免疫印迹法免疫印迹法 (immunoblot) 1617第二节第二节 免疫细胞检测免疫细胞检测（一）外周血单个核细胞（一）外周血单个核细胞(PBMC)的分
5、离的分离一、免疫细胞及其亚群计数一、免疫细胞及其亚群计数（二）淋巴细胞亚群的分离（二）淋巴细胞亚群的分离1. 尼龙棉分离法尼龙棉分离法 2. E花环分离法花环分离法 183.洗洗淘淘法法194. 流式细胞术流式细胞术(flow cytometry，FCM)205.磁磁分分离离技技术术21（三）淋巴细胞亚群计数（三）淋巴细胞亚群计数1. 免疫荧光技术免疫荧光技术2. 补体依赖微量细胞毒试验补体依赖微量细胞毒试验3. 流式细胞术流式细胞术4. 花环试验花环试验 22用用FITC-抗抗IgM单抗计数单抗计数B细胞细胞2324二、淋巴细胞功能测定二、淋巴细胞功能测定（一）淋巴细胞功能测定的体外试验（一
6、）淋巴细胞功能测定的体外试验 1. 淋巴细胞增殖试验淋巴细胞增殖试验刺激物刺激物 * 非非特特异异性性：丝丝裂裂原原PHA、Con A、LPS，抗抗CD3单抗，同种单抗，同种MHC等等 * 特特异异性性：破破伤伤风风类类毒毒素素、PPD、白白色色念念珠珠菌、肿瘤细胞等菌、肿瘤细胞等方法：方法：核素掺入法、核素掺入法、MTT法和形态学计数法法和形态学计数法淋巴细胞增殖试验（淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）掺入法）252. 细胞毒试验细胞毒试验CTL、NK细胞可直接杀伤靶细胞细胞可直接杀伤靶细胞51Cr释放法释放法LDH释放法释放法26细胞凋亡检测细胞凋亡检测DNA Ladder电泳图谱电泳
7、图谱27TUNEL法检测凋亡细胞法检测凋亡细胞28FCM检测凋亡细胞检测凋亡细胞293. 分泌功能测定分泌功能测定细胞因子分泌细胞：细胞因子分泌细胞： ELISPOT 抗体形成抗体形成 细胞测定：细胞测定： 溶血空斑溶血空斑 试验试验（一）测定淋巴细胞功能的体内试验（一）测定淋巴细胞功能的体内试验 迟发型超敏反应皮肤试验迟发型超敏反应皮肤试验特异性特异性: OT皮试、过敏原皮试皮试、过敏原皮试非特异性非特异性: PHA 皮试、皮试、DNCB皮试皮试32第三节第三节 免疫分子检测免疫分子检测一、免疫球蛋白一、免疫球蛋白/抗体的测定抗体的测定免疫比浊、免疫比浊、ELISA、RIA、免疫电泳等、免疫
8、电泳等二、补体测定二、补体测定免疫比浊、免疫比浊、ELISA、RIA、CH50 三、细胞因子检测三、细胞因子检测1. 1. 免疫学测定法免疫学测定法免疫学测定法免疫学测定法 分泌性细胞因子检测：分泌性细胞因子检测：ELISA、RIA、WB 胞内细胞因子检测：胞内细胞因子检测：FCM、ELISPOT2. 2. 生物活性测定法生物活性测定法生物活性测定法生物活性测定法 促进细胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性测定法、促进细胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性测定法、直接杀伤法、趋化活性测定法直接杀伤法、趋化活性测定法3. 3. 分子生物学测定法分子生物学测定法分子生物学测定法分子生物学测定法PCR、实时定量
9、、实时定量PCR、RNA印迹法、核酸酶保护印迹法、核酸酶保护分析法和原位杂交法等分析法和原位杂交法等33四、四、CD分子、表面受体和黏附分子检测分子、表面受体和黏附分子检测 细胞表面分子：细胞表面分子：细胞表面分子：细胞表面分子：间接免疫荧光法、间接免疫荧光法、FCM等等 可溶性分子：可溶性分子：可溶性分子：可溶性分子：ELISA等等五、五、HLA分型分型 方法：方法：方法：方法：血清学方法、细胞学方法、基因分型血清学方法、细胞学方法、基因分型 应用：应用：应用：应用：同种移植供受者配型、法医鉴定、某些同种移植供受者配型、法医鉴定、某些疾病研究等疾病研究等 34第四节第四节 免疫学诊断与检测免
10、疫学诊断与检测35一、疾病相关因子检测一、疾病相关因子检测（一）用已知抗体检测未知抗原（一）用已知抗体检测未知抗原病原体及其抗原组分：病原体及其抗原组分：属、型、血清型属、型、血清型肿瘤抗原的定性、分型、定量与定位：肿瘤抗原的定性、分型、定量与定位：AFP、CEA、体内示踪、体内示踪红细胞血型抗原红细胞血型抗原（二）用已知抗原检测未知抗体（二）用已知抗原检测未知抗体（二）用已知抗原检测未知抗体（二）用已知抗原检测未知抗体 病原特异性抗体：病原特异性抗体：病原特异性抗体：病原特异性抗体：检测检测HIV抗体确定抗体确定HIV感染感染 外斐氏试验检测立克次体抗体外斐氏试验检测立克次体抗体 肥达氏反应
11、测伤寒杆菌抗体肥达氏反应测伤寒杆菌抗体 变应原抗体：变应原抗体：变应原抗体：变应原抗体：体外用不同的变应原与患者血清反应体外用不同的变应原与患者血清反应确定变应原；体内用多种变应原进行皮试确定变应原；体内用多种变应原进行皮试 自自自自身抗体：身抗体：身抗体：身抗体：组织切片，免疫荧光、免疫酶组化组织切片，免疫荧光、免疫酶组化 细胞毒抗体：细胞毒抗体：细胞毒抗体：细胞毒抗体：待移植患者血清与供体细胞混合并加待移植患者血清与供体细胞混合并加入补体（补体依赖细胞毒试验，交叉组织配型）入补体（补体依赖细胞毒试验，交叉组织配型）36（一）体液免疫功能（一）体液免疫功能（一）体液免疫功能（一）体液免疫功能
12、 免疫球蛋白：免疫球蛋白：免疫球蛋白：免疫球蛋白：免疫缺陷病、免疫增殖性疾病免疫缺陷病、免疫增殖性疾病 抗体水平：抗体水平：抗体水平：抗体水平：检测某些针对疫苗或感染因子的抗体检测某些针对疫苗或感染因子的抗体 B B细胞数量与功能：细胞数量与功能：细胞数量与功能：细胞数量与功能：原发或继发免疫缺陷原发或继发免疫缺陷（二）细胞免疫功能（二）细胞免疫功能（二）细胞免疫功能（二）细胞免疫功能 T T细胞总数与亚群：细胞总数与亚群：细胞总数与亚群：细胞总数与亚群：CD3、4、8、25，Th1、Th2 T T细胞功能：细胞功能：细胞功能：细胞功能：增殖反应（非特异、特异）、细胞毒、皮试增殖反应（非特异、
13、特异）、细胞毒、皮试（三）（三）（三）（三）细胞因子及其受体和粘附分子水平细胞因子及其受体和粘附分子水平细胞因子及其受体和粘附分子水平细胞因子及其受体和粘附分子水平（四）（四）（四）（四）非特异免疫功能非特异免疫功能非特异免疫功能非特异免疫功能 补体、补体、NK细胞、巨噬细胞及其产物、中性粒细胞等细胞、巨噬细胞及其产物、中性粒细胞等37二、免疫功能检测二、免疫功能检测感染性疾病转归和预后：乙肝、感染性疾病转归和预后：乙肝、AIDS等等肿瘤发展、预后与疗效判断肿瘤发展、预后与疗效判断移植排斥反应的预测、药物选择、疗效移植排斥反应的预测、药物选择、疗效评估评估38三、免疫学监测三、免疫学监测39
14、抗原与抗体特异性结合，抗体又能与抗抗原与抗体特异性结合，抗体又能与抗Ig特异性结特异性结合，这一关系被用于多种检测方法。合，这一关系被用于多种检测方法。 抗原抗体反应分为凝集反应和沉淀反应，免疫标记抗原抗体反应分为凝集反应和沉淀反应，免疫标记技术具有灵敏度高，能定性、定量等优点，应用技术具有灵敏度高，能定性、定量等优点，应用广泛。广泛。 免疫细胞具表面标志，利用抗体可鉴别不同细胞群免疫细胞具表面标志，利用抗体可鉴别不同细胞群及其数量；体外功能试验反映某一细胞群的功能，及其数量；体外功能试验反映某一细胞群的功能，体内功能试验则反映整体免疫功能水平。体内功能试验则反映整体免疫功能水平。 免疫分子的
15、检测可采用免疫学方法、生物活性测定免疫分子的检测可采用免疫学方法、生物活性测定法及分子生物学方法。法及分子生物学方法。 了解上述基本原理后，可举一反三，根据需要选择了解上述基本原理后，可举一反三，根据需要选择或设计相应实验，用于基础和临床研究。或设计相应实验，用于基础和临床研究。 小小 结结40思考题思考题名名词词解解释释：indirect agglutinastion， ELISA， BAS， ELISPOT， double immunodiffusion， immunoblot（Western blot），）， FCM，RIA抗抗原原抗抗体体反反应应有有哪哪些些特特点点？哪哪些些基基本本类类型型？最最敏敏感感和最不敏感的方法各是哪一类？和最不敏感的方法各是哪一类？可用哪些方法测定血清中可用哪些方法测定血清中Ig含量？其原理如何？含量？其原理如何？有哪些免疫标记技术？它们之间有何主要不同？有哪些免疫标记技术？它们之间有何主要不同？ 有有哪哪些些方方法法可可检检测测T、B细细胞胞的的功功能能？细细胞胞增增殖殖试试验和细胞毒性试验各有哪些基本方法？验和细胞毒性试验各有哪些基本方法？
