不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案

上传人:新** 文档编号:569829259 上传时间:2024-07-31 格式:PPT 页数:28 大小:723KB
返回 下载 相关 举报
不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案_第1页
第1页 / 共28页
不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案_第2页
第2页 / 共28页
不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案_第3页
第3页 / 共28页
不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案_第4页
第4页 / 共28页
不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案_第5页
第5页 / 共28页
点击查看更多>>
资源描述

《不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案》由会员分享,可在线阅读,更多相关《不可忽视的细部分血液基因组提取学习教案(28页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。

1、会计学1不可忽视的细部分不可忽视的细部分(b fen)血液基因组提血液基因组提取取第一页,共28页。pDNADNA提取的原则提取的原则p基因组提取方法基因组提取方法p样本保存和前处理样本保存和前处理(chl)(chl)p基因组提取流程基因组提取流程pDNADNA保存及检测方法保存及检测方法p试剂选择原则试剂选择原则 内容内容(nirng)第1页/共27页第二页,共28页。没有严格要求没有严格要求: PCR Southern Blots RFLP严格要求片段长度严格要求片段长度: 构建文库构建文库 PFGE(脉冲场凝胶电泳脉冲场凝胶电泳)DNA LengthDNA提取原则提取原则(yunz)1:

2、DNA片段长度片段长度第2页/共27页第三页,共28页。没有没有(mi yu)严格严格要求要求 常规常规PCR严格要求产物纯度严格要求产物纯度(chnd) 存档、产物长期保存存档、产物长期保存 Southern杂交杂交 荧光定量荧光定量PCR SNP Microarray CGH (比较基因组杂交比较基因组杂交) DNA提取提取(tq)原则原则2:DNA产物纯度产物纯度第3页/共27页第四页,共28页。pDNADNA提取提取(tq)(tq)的原则的原则p基因组提取基因组提取(tq)(tq)方法方法p样本保存和前处理样本保存和前处理p基因组提取基因组提取(tq)(tq)流程流程pDNADNA保存

3、及检测方法保存及检测方法p试剂选择原则试剂选择原则 内容内容(nirng)第4页/共27页第五页,共28页。基因组提取基因组提取(tq)方法方法p溶液盐析法:无需酚氯仿,样本量灵活可变,得率高溶液盐析法:无需酚氯仿,样本量灵活可变,得率高p硅胶膜吸附法:利用硅胶膜吸附法:利用(lyng)(lyng)硅胶膜特异吸附核酸的原理来纯化核酸硅胶膜特异吸附核酸的原理来纯化核酸p磁珠法:独特包埋的磁珠,在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁磁珠法:独特包埋的磁珠,在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。珠释放吸附的核酸,能够达

4、到快速分离纯化核酸的目的。p传统酚氯仿法:传统方法,抽提时间长,成本低。但酚氯仿有毒,危害身体健康。传统酚氯仿法:传统方法,抽提时间长,成本低。但酚氯仿有毒,危害身体健康。第5页/共27页第六页,共28页。pDNADNA提取的原则提取的原则p基因组提取方法基因组提取方法p样本样本(yngbn)(yngbn)保存和前处理保存和前处理p基因组提取流程基因组提取流程pDNADNA保存及检测方法保存及检测方法p试剂选择原则试剂选择原则 内容内容(nirng)第6页/共27页第七页,共28页。样本保存样本保存(bocn)和前处理抗凝血液和前处理抗凝血液p保存保存p 柠檬酸、柠檬酸、EDTAEDTA、肝素

5、三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶反应有可能、肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶反应有可能(knng)(knng)起阻害作用起阻害作用, ,采血时如没有特殊要求采血时如没有特殊要求, ,请使用柠檬酸或请使用柠檬酸或EDTAEDTA处理血样。处理血样。加入抗凝剂混匀后加入抗凝剂混匀后2-82-8保存一周;保存一周;2020保存一个月;保存一个月;7070长期保存。尽长期保存。尽可能可能(knng)(knng)保证样本不经过反复冻融。保证样本不经过反复冻融。p样本前处理样本前处理p 1. 1. 冻存的抗凝血液使用前溶解应在冻存的抗凝血液使用前溶解应在3737水浴迅速溶解。水浴迅速溶解。2. 2. 抗凝

6、血提取前需要彻底混匀后再吸取实验所需的体积。抗凝血提取前需要彻底混匀后再吸取实验所需的体积。第7页/共27页第八页,共28页。样本保存样本保存(bocn)和前处理非抗凝血和前处理非抗凝血p保存保存p 非抗凝血即血凝块。非抗凝血即血凝块。-20-20保存一个月;保存一个月;-70-70长期长期(chngq)(chngq)保存。尽可能保保存。尽可能保证样本不经过反复冻融。证样本不经过反复冻融。p样本前处理样本前处理1. 1. 冻存的血凝块使用前应在冻存的血凝块使用前应在3737水浴溶解,轻柔颠倒混匀。水浴溶解,轻柔颠倒混匀。 2. 2. 血凝块取出后先采取机械破碎的方法(例如:放入无粉橡胶手套中捏

7、碎或匀浆)血凝块取出后先采取机械破碎的方法(例如:放入无粉橡胶手套中捏碎或匀浆)将血凝块破碎,然后再根据自己的实验取适量样本。将血凝块破碎,然后再根据自己的实验取适量样本。血凝块前期破碎程度血凝块前期破碎程度(chngd)越高,提取基因组越高,提取基因组就越容易!就越容易!第8页/共27页第九页,共28页。样本样本(yngbn)保存和前处理白膜层保存和前处理白膜层p保存保存p 全血分离得到的白膜层放置全血分离得到的白膜层放置-20-20或或-70-70长期保存。尽可能保证样本不经过长期保存。尽可能保证样本不经过反复冻融。反复冻融。p样本前处理样本前处理p 1. 1. 白膜层是将全血离心取中间层

8、所得。白细胞则是用红细胞裂解液裂解红细白膜层是将全血离心取中间层所得。白细胞则是用红细胞裂解液裂解红细胞后得到的沉淀。胞后得到的沉淀。2. 2. 冻存的白膜层使用前应在冻存的白膜层使用前应在3737水浴溶解,轻柔颠倒混匀。水浴溶解,轻柔颠倒混匀。 3. 3. 虽然得到的是白膜层,但是会有少量红细胞存在,所以红细胞裂解液虽然得到的是白膜层,但是会有少量红细胞存在,所以红细胞裂解液 还是必还是必要的,但用量减半要的,但用量减半(jin bn)(jin bn)。p 4. 4. 采用白膜层提取核酸时,所用到的提取溶液体积需按照全血体积进行操作。采用白膜层提取核酸时,所用到的提取溶液体积需按照全血体积进

9、行操作。即:即:1ml1ml全血得到的白膜层提取时需要加入提取全血得到的白膜层提取时需要加入提取1ml1ml全血的试剂量。全血的试剂量。第9页/共27页第十页,共28页。样本保存和前处理样本保存和前处理(chl)血清血清/血浆血浆p保存保存p 现在很多科研者使用血清现在很多科研者使用血清/ /血浆提取游离核酸进行研究,例如:肿瘤研血浆提取游离核酸进行研究,例如:肿瘤研究。分离得到的血清究。分离得到的血清/ /血浆放置血浆放置-70-70保存。尽量避免样本反复冻融。保存。尽量避免样本反复冻融。p样本前处理样本前处理1. 1. 冻存的血清冻存的血清/ /血浆使用前溶解应在血浆使用前溶解应在3737

10、水浴溶解,轻柔颠倒混匀。水浴溶解,轻柔颠倒混匀。2. 2. 血清血清/ /血浆核酸提取时无需红细胞裂解血浆核酸提取时无需红细胞裂解(li ji)(li ji)。3. 3. 只需只需100-200ul100-200ul样本,基本能满足下游常规样本,基本能满足下游常规PCRPCR或荧光定量或荧光定量PCRPCR检测。检测。第10页/共27页第十一页,共28页。样本保存和前处理微量血液样本保存和前处理微量血液(xuy)/干血点干血点/羊羊水水/胸水胸水p保存保存p 微量血液微量血液(xuy)(xuy):抗凝血液:抗凝血液(xuy)-20(xuy)-20或或-70-70保存;保存;干血点:干燥后室温或

11、干血点:干燥后室温或44保存;保存;羊水:羊水: -20 -20或或-70-70保存。保存。p样本前处理样本前处理1. 1. 微量血液微量血液(xuy)(xuy)处理同抗凝血液处理同抗凝血液(xuy)(xuy),不同之处是无需进行红细胞裂解步,不同之处是无需进行红细胞裂解步骤。骤。2. 2. 干血点加入缓冲液直接进行提取。干血点加入缓冲液直接进行提取。3. 3. 羊水羊水/ /胸水提取时先离心得到沉淀,再进行裂解提取核酸。胸水提取时先离心得到沉淀,再进行裂解提取核酸。第11页/共27页第十二页,共28页。样本保存样本保存(bocn)和前处理口拭子和前处理口拭子/漱口水漱口水p保存保存p 口拭子

12、:干燥后室温保存口拭子:干燥后室温保存漱口水:漱口水:44保存或离心得到沉淀保存或离心得到沉淀-20-20或或-70-70保存保存p样本前处理样本前处理1. 1. 拭子将拭子棉头剪入到离心管里,加入缓冲液直接进行提取拭子将拭子棉头剪入到离心管里,加入缓冲液直接进行提取(tq)(tq)。2. 2. 有些拭子的棉头剪不下来,可以将拭子在生理盐水里漂洗几次,离有些拭子的棉头剪不下来,可以将拭子在生理盐水里漂洗几次,离心得到沉淀再进行核酸提取心得到沉淀再进行核酸提取(tq)(tq)。3. 3. 漱口水先进行离心得到沉淀再进行核酸提取漱口水先进行离心得到沉淀再进行核酸提取(tq)(tq)。第12页/共2

13、7页第十三页,共28页。pDNADNA提取的原则提取的原则p基因组提取方法基因组提取方法(fngf)(fngf)p样本保存和前处理样本保存和前处理p基因组提取流程基因组提取流程pDNADNA保存及检测方法保存及检测方法(fngf)(fngf)p试剂选择原则试剂选择原则 内容内容(nirng)第13页/共27页第十四页,共28页。基因组提取基因组提取(tq)流程流程加入吸附柱缓冲液漂洗DNA洗脱收集样本裂解纯化去蛋白沉淀核酸洗涤去盐溶解DNA沉淀样本裂解溶液溶液(rngy)法(盐析法)法(盐析法)吸附吸附(xf)柱法柱法第14页/共27页第十五页,共28页。红细胞裂解红细胞裂解(li ji) 哺

14、乳动物血液的红细胞中没有细胞核且核酸酶含量丰富,所以裂解红细胞对核哺乳动物血液的红细胞中没有细胞核且核酸酶含量丰富,所以裂解红细胞对核酸提取非常酸提取非常(fichng)(fichng)重要。红细胞裂解有两种方式:重要。红细胞裂解有两种方式:采用红细胞裂解液进行裂解(通常红细胞裂解液按照采用红细胞裂解液进行裂解(通常红细胞裂解液按照3 3倍全血体积加入进行裂解倍全血体积加入进行裂解).).采用细胞裂解液进行裂解(采用细胞裂解液进行裂解(TIANGENTIANGEN的细胞裂解液的细胞裂解液CLCL是按照倍全血体积),细胞裂解是按照倍全血体积),细胞裂解液将红细胞裂解的同时可以裂解白细胞,得到的为

15、细胞核沉淀,更方便基因液将红细胞裂解的同时可以裂解白细胞,得到的为细胞核沉淀,更方便基因组组DNADNA的提取。的提取。红细胞裂解充分的现象:红细胞裂解充分的现象:得到的沉淀得到的沉淀(chndin)(chndin)应为白色沉淀应为白色沉淀(chndin)(chndin)或淡粉色沉或淡粉色沉淀淀(chndin)(chndin)。有时血液需要进行两次裂解,注意第二次加。有时血液需要进行两次裂解,注意第二次加入裂解液后需要将沉淀入裂解液后需要将沉淀(chndin)votex(chndin)votex彻底混匀。彻底混匀。第15页/共27页第十六页,共28页。核细胞核细胞(xbo)裂解裂解p如果有裂红

16、的步骤,请尽量将上清去除再加入裂解液。如果有裂红的步骤,请尽量将上清去除再加入裂解液。p加入裂解液(如:加入裂解液(如:TIANGENTIANGEN试剂盒中的试剂盒中的GBGB或或FGFG)和蛋白酶)和蛋白酶K K需要彻底混匀。将沉淀打需要彻底混匀。将沉淀打散混匀后再进行水浴。散混匀后再进行水浴。p水浴时看到溶液变清,没有粘稠物或沉淀时即可进行下步操作,通常水浴时间水浴时看到溶液变清,没有粘稠物或沉淀时即可进行下步操作,通常水浴时间(shjin)10-30min.(shjin)10-30min.p若采用有机(酚若采用有机(酚/ /氯仿)抽提时应充分混匀,动作要轻柔。离心分离两相时,应保氯仿)抽

17、提时应充分混匀,动作要轻柔。离心分离两相时,应保证一定的转速和时间证一定的转速和时间(shjin)(shjin),且吸取上清时注意不要吸取到中间层及有机相。,且吸取上清时注意不要吸取到中间层及有机相。第16页/共27页第十七页,共28页。核酸核酸(h sun)吸附或沉淀吸附或沉淀p硅胶膜吸附法硅胶膜吸附法1. 1. 加入乙醇颠倒混匀后可能会出现絮状沉淀,动作要轻柔。加入乙醇颠倒混匀后可能会出现絮状沉淀,动作要轻柔。2. 2. 将裂解的溶液和絮状沉淀全部加入到吸附柱里,此时的溶液应是高将裂解的溶液和絮状沉淀全部加入到吸附柱里,此时的溶液应是高盐低盐低pHpH值的。通过硅胶膜特异吸附核酸值的。通过

18、硅胶膜特异吸附核酸(h sun)(h sun)的特性将裂解溶液中的特性将裂解溶液中的核酸的核酸(h sun)(h sun)吸附到硅胶膜上。吸附到硅胶膜上。p溶液法溶液法1. 1. 当沉淀时间有限时,用预冷的异丙醇沉淀,沉淀会更充分。当沉淀时间有限时,用预冷的异丙醇沉淀,沉淀会更充分。2. 2. 加入异丙醇颠倒混匀后应出现丝状沉淀,动作要轻柔,避免基因组加入异丙醇颠倒混匀后应出现丝状沉淀,动作要轻柔,避免基因组因过于猛烈的外力而降解。因过于猛烈的外力而降解。3. 3. 分离沉淀的方法:分离沉淀的方法:a.a.用枪头小心地将丝状沉淀挑出;用枪头小心地将丝状沉淀挑出;b.b.离心分离,离心分离,应保

19、证一定的转速和时间。应保证一定的转速和时间。第17页/共27页第十八页,共28页。核酸洗脱核酸洗脱(x tu)或溶解或溶解p硅胶膜吸附法硅胶膜吸附法1. 1. 用去蛋白液、漂洗液将膜上的核酸漂洗后,将不加用去蛋白液、漂洗液将膜上的核酸漂洗后,将不加(b ji)(b ji)溶液的吸附柱离心以去除残溶液的吸附柱离心以去除残留的液体及挥发乙醇成分。加入适量洗脱液留的液体及挥发乙醇成分。加入适量洗脱液TB bufferTB buffer(或自己配制的(或自己配制的bufferbuffer)后放置)后放置5-10 5-10 minmin后再进行离心得到基因组后再进行离心得到基因组DNADNA。p溶液法溶

20、液法1. 1. 使用使用70-7570-75乙醇对核酸沉淀进行洗涤。溶解乙醇对核酸沉淀进行洗涤。溶解DNADNA前需要室温或前需要室温或3737放置几分钟晾干核酸放置几分钟晾干核酸(使乙醇挥发),然后再加入适量的(使乙醇挥发),然后再加入适量的TB bufferTB buffer(或自己配制的(或自己配制的bufferbuffer)溶解)溶解DNADNA。第18页/共27页第十九页,共28页。pDNADNA提取提取(tq)(tq)的原则的原则p基因组提取基因组提取(tq)(tq)方法方法p样本保存和前处理样本保存和前处理p基因组提取基因组提取(tq)(tq)流程流程pDNADNA保存及检测方法

21、保存及检测方法p试剂选择原则试剂选择原则 内容内容(nirng)第19页/共27页第二十页,共28页。 浓度:浓度:浓度:浓度:100100100100300ng/ul300ng/ul300ng/ul300ng/ul 纯度:任何杂质都可能导致纯度:任何杂质都可能导致纯度:任何杂质都可能导致纯度:任何杂质都可能导致DNADNADNADNA在储存过程中的降解,因此要确保纯化得到的核酸的纯度。在储存过程中的降解,因此要确保纯化得到的核酸的纯度。在储存过程中的降解,因此要确保纯化得到的核酸的纯度。在储存过程中的降解,因此要确保纯化得到的核酸的纯度。 温度:纯化得到基因组温度:纯化得到基因组温度:纯化得

22、到基因组温度:纯化得到基因组DNADNADNADNA之后需将之后需将之后需将之后需将DNADNADNADNA溶液分装保存到溶液分装保存到溶液分装保存到溶液分装保存到-20-20-20-20,反复,反复,反复,反复(fnf)(fnf)(fnf)(fnf)冻溶会导致冻溶会导致冻溶会导致冻溶会导致DNADNADNADNA的降解。的降解。的降解。的降解。 溶解溶解溶解溶解DNA BufferDNA BufferDNA BufferDNA Buffer:纯化得到的基因组:纯化得到的基因组:纯化得到的基因组:纯化得到的基因组DNADNADNADNA最好溶解在最好溶解在最好溶解在最好溶解在TB Buffer

23、 (TIANGEN) TB Buffer (TIANGEN) TB Buffer (TIANGEN) TB Buffer (TIANGEN) 或者或者或者或者TrisTrisTrisTris缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液里,因为大片段的基因组里,因为大片段的基因组里,因为大片段的基因组里,因为大片段的基因组DNADNADNADNA在酸性水溶液中不稳定,易水解。在酸性水溶液中不稳定,易水解。在酸性水溶液中不稳定,易水解。在酸性水溶液中不稳定,易水解。核酸核酸(h sun)保存保存第20页/共27页第二十一页,共28页。纯度(纯度(纯度(纯度( OD260-320 /OD280-320 OD260-32

24、0 /OD280-320 OD260-320 /OD280-320 OD260-320 /OD280-320 ) 紫外分光光度计进行测量紫外分光光度计进行测量紫外分光光度计进行测量紫外分光光度计进行测量(cling)(cling)(cling)(cling)(选择正确的稀释倍数,确保(选择正确的稀释倍数,确保(选择正确的稀释倍数,确保(选择正确的稀释倍数,确保OD260 OD260 OD260 OD260 值在之间,值在之间,值在之间,值在之间,通常离心柱法稀释通常离心柱法稀释通常离心柱法稀释通常离心柱法稀释4 4 4 45 5 5 5倍;溶液裂解法稀释倍;溶液裂解法稀释倍;溶液裂解法稀释倍;

25、溶液裂解法稀释2020202030303030倍)倍)倍)倍)OD260-320 /OD280-320 1.7 OD260-320 /OD280-320 1.7 OD260-320 /OD280-320 1.7 OD260-320 /OD280-320 1.9 OD260-320 /OD280-320 1.9 OD260-320 /OD280-320 1.9 OD260-320 /OD280-320 1.9 说明有部分降解或有说明有部分降解或有说明有部分降解或有说明有部分降解或有RNARNARNARNA污染污染污染污染得率得率得率得率 紫外分光光度计进行测量紫外分光光度计进行测量紫外分光光度计

26、进行测量紫外分光光度计进行测量(cling)(cling)(cling)(cling)YieldYieldYieldYield OD26050ng/ul OD26050ng/ul OD26050ng/ul OD26050ng/ul稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数DNA检测方法检测方法(fngf)紫外分光光度法紫外分光光度法第21页/共27页第二十二页,共28页。Tiangen 产品产品(chnpn)提取得率提取得率产品详细产品详细(xingx)细节请直接点击产品名称细节请直接点击产品名称样本样本处理量处理量DNA/RNA得率得率(g)推荐试剂盒推荐试剂盒哺乳动物全血哺乳动物全血100l2DP3

27、27-磁珠法基因磁珠法基因组提取提取试剂盒盒DP316-微量微量样品基因品基因组DNADNA提取提取试剂盒盒200l 4-12DP318-血液基因血液基因组提取提取试剂盒盒(0.1-1ml)600l12-2012-201ml4-304-30DP319-血液基因血液基因组提取提取试剂盒盒(0.1-20ml)5ml100-20020ml300-700禽类、两栖类全血禽类、两栖类全血5-205-40DP318-血液基因血液基因组提取提取试剂盒盒(0.1-1ml)血凝块血凝块200-500ul1-81-8DP318/ DP319500-1000ul8-158-15DP318/ DP3191ml-5ml

28、5-150DP319口腔拭子口腔拭子1个个0.5-3.5DP322-口腔拭子基因口腔拭子基因组提取提取试剂盒盒第22页/共27页第二十三页,共28页。DNA检测方法检测方法(fngf)电泳检测电泳检测取取2l 洗脱液洗脱液1% 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳, 检测检测(jin c)DNA分子大小,纯度以及完整性分子大小,纯度以及完整性TIANamp TIANamp 血液基因组血液基因组DNADNA提取试剂盒提取提取试剂盒提取相同血样不同起始相同血样不同起始(q sh)(q sh)体积的体积的DNADNA电电泳图泳图 电泳检测要控制上样量。上样量过大会导致泳道过亮、拖尾等现象,影响正确判断。电泳

29、检测要控制上样量。上样量过大会导致泳道过亮、拖尾等现象,影响正确判断。电泳检测要控制上样量。上样量过大会导致泳道过亮、拖尾等现象,影响正确判断。电泳检测要控制上样量。上样量过大会导致泳道过亮、拖尾等现象,影响正确判断。 如果加样孔里有亮带,说明有蛋白污染。如果加样孔里有亮带,说明有蛋白污染。如果加样孔里有亮带,说明有蛋白污染。如果加样孔里有亮带,说明有蛋白污染。 若上样量合适,泳道有弥散、拖尾现象,说明书基因组若上样量合适,泳道有弥散、拖尾现象,说明书基因组若上样量合适,泳道有弥散、拖尾现象,说明书基因组若上样量合适,泳道有弥散、拖尾现象,说明书基因组DNADNADNADNA有降解。有降解。有

30、降解。有降解。第23页/共27页第二十四页,共28页。TIANampTIANampTIANampTIANamp微量样本基因组微量样本基因组微量样本基因组微量样本基因组DNADNADNADNA提取试剂盒提取试剂盒提取试剂盒提取试剂盒样本来源一致,分别样本来源一致,分别样本来源一致,分别样本来源一致,分别(fnbi)(fnbi)(fnbi)(fnbi)取取取取1l1l1l1l,10l10l10l10l,50l50l50l50l,100l100l100l100l为起始样本提取为起始样本提取为起始样本提取为起始样本提取基因组基因组基因组基因组 。各取。各取。各取。各取2l2l2l2l基因组基因组基因组

31、基因组DNADNADNADNA为模板,为模板,为模板,为模板,扩增扩增扩增扩增GAPDHGAPDHGAPDHGAPDH基因,荧光定量基因,荧光定量基因,荧光定量基因,荧光定量PCRPCRPCRPCR分析实验分析实验分析实验分析实验结果。结果。结果。结果。DNA检测方法荧光检测方法荧光(ynggung)定量定量PCR检测检测微量样本基因组微量样本基因组 DNADNA的检测通常采用荧光的检测通常采用荧光 (ynggung)(ynggung) 定量定量PCRPCR检测,例如:干血点、微量血液等。检测,例如:干血点、微量血液等。第24页/共27页第二十五页,共28页。pDNADNA提取提取(tq)(t

32、q)的原则的原则p基因组提取基因组提取(tq)(tq)方法方法p样本保存和前处理样本保存和前处理p基因组提取基因组提取(tq)(tq)流程流程pDNADNA保存及检测方法保存及检测方法p试剂选择原则试剂选择原则 内容内容(nirng)第25页/共27页第二十六页,共28页。试剂选择试剂选择(xunz)指南指南硅胶膜吸附法硅胶膜吸附法微量样本微量样本(DP316)口拭子口拭子(DP322)0.2-1ml血液血液(DP318)应用:应用:1.1. HLAHLA分型、亲子鉴定及芯片检测实验:对分型、亲子鉴定及芯片检测实验:对 DNADNA的纯度、浓度均有要求。的纯度、浓度均有要求。2. 2. 口拭子

33、等特殊样本的提取口拭子等特殊样本的提取适合样本:适合样本:全血、白膜层、血细胞、血凝块、白细胞、口拭子、干血点、羊水、血清全血、白膜层、血细胞、血凝块、白细胞、口拭子、干血点、羊水、血清/ /血浆、漱口水、微量组织等血浆、漱口水、微量组织等溶液法溶液法(DP319)应用:应用:下游实验所需下游实验所需 DNADNA量较大,例如量较大,例如 SNPSNP适合样本:适合样本:全血、白膜层、血细胞、血凝块、白细胞等全血、白膜层、血细胞、血凝块、白细胞等磁珠法磁珠法(DP327)应用:应用:微量样本微量样本DNADNA提取,可配合工作站使用。提取,可配合工作站使用。适合样本:适合样本:微量血液、干血点、微量组织微量血液、干血点、微量组织第26页/共27页第二十七页,共28页。内容(nirng)总结会计学。但肝素对酶反应有可能起阻害作用,采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。1. 冻存的抗凝血液使用前溶解应在37水浴迅速溶解。3. 只需100-200ul样本,基本能满足下游常规PCR或荧光定量PCR检测。样本保存和前处理微量血液/干血点/羊水/胸水。样本前处理1. 微量血液处理同抗凝血液,不同之处是无需(wx)进行红细胞裂解步骤。3. 漱口水先进行离心得到沉淀再进行核酸提取第二十八页,共28页。

展开阅读全文
相关资源
正为您匹配相似的精品文档
相关搜索

最新文档


当前位置:首页 > 高等教育 > 研究生课件

电脑版 |金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号