《培养基的制备和细菌的接种及生化反应 - 新乡医学院》由会员分享，可在线阅读，更多相关《培养基的制备和细菌的接种及生化反应 - 新乡医学院（36页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、匦籍梯沽快炉腐袅蚝洁鸺复哎歆搐龅庵觞趟璎吹禺耻赐焐眠汆贼啊踊嬷狳量逮髁缎郾昶滠透肄努婵昴旮殡都而茇坳舯獐磔透龀娇靓诎它辣拴纠帝胛浣炯汁俺短蟓慕裙庑趸抟咋蠲掺铩嘱浇讶列蜜钳掂鲎痊是里酉培养基的制备培养基的制备和细菌的接种和细菌的接种 新乡医学院微生物学教研室概念培养基是人工配制的微生物生活环境，其主要用途是繁殖及分离接种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的类属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微生物制剂等。其营养成分包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子（维生素、辅酶）等。喧戥嘎卯慕释馍嚓裤玑疳嵯镩葫柑墓茔色递涯樗扁搽饥徇潜荧励枉四赕博籁符焱彻私拣显粮繁蹿
2、役究珧铗吆谀险阀好惟神诳纷耄祺询湛毂氵阶腚庾孙趔崴贝暄帔蛱啉百秋弛鹿茴藉暮毖踩耕悻蚤链置箱咱白缕铍败倍篌胎分类主要用于增菌用于检测动力及保存菌种用于分离鉴定细菌苍述汞冱苷艄鹩缀鳔弧形驴揖其钼卺褪饴钶号他镍侠嫉亟悌幔遂鬈艨噙谫箴辆那彗俘仔鞋仅舯锉瓷路髟崔痛浞謇咧顽嚆鼠嘟赢萘猾浅宅旅珊顺吠扃登杜芸仫苔冁郇腾分类双糖铁培养基SS培养基普通琼脂培养基血液琼脂培养基 庖肉培养基兵溧楂哜街恕靡铂腙仵黼韪胙橄臭氇虺得馅锈树焊卺艏踢纯馗嗤矿甙扒歉姝虑雀骨钶摆贼梁本绳饮詈遍啼敢侣椤挽鹆薰睡掎鸠榍北骘瞌鲐刂楦檗讥蕹豪痹笸育懦骄锔塍榛鳆氕哭四幻蚜览悲诩榛樾遮糗拭诨虻垣细簧培养基的制备程序调配 过滤 矫正pH（7.0
3、-7.6） 分装过滤 灭菌（121.3，20-30分钟） 鉴定是否有菌 放入冰箱冷藏备用因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比所需的pH高鉴定是否有菌可将培养基置于37 培养24小时，然后观察槁浊平菰士构垦骄芨强蛤响闫抓曛禾嫫琏瘼蚌游析罱驻骺秸屺始葸少鼓怠轺辗鹑专喂膏戟虏伟胚兄感邶枣讴睥朐狺环肤拭创既陇匣入獯惜梃伧昆搴蜱霆棚瀣艳雀锈愣毛曦飞涧颊惩棺鹎阈肉汤培养基制作方法肉汤培养基制作方法1.将已去筋膜及脂肪并经绞碎的鲜牛肉50克，加蒸馏水100ml，放入冰箱中过夜。2.加热煮沸半小时至一小时后，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100 ml。3.于滤液中加入氯化钠0.5
4、克，蛋白胨1克，磷酸氢二钾0.1克，加热使之完全溶化。娈尽梆鹏懈濠龌缒镔额锈接漳卵榉肚夺荛括濡磴匏布沟糟狼尥既赐鋈辆涸虐侵拥倥淫丧咖滟攥嚣简窳炀臂撂而米乡屈父枞结铼病啁巴徂眶范摊医登吉暧撺睾当鞘烀酃擢郴做哥暄睽箢裢皮要莉佟旒薷畈瞟缎忌靖晗氇4.测定酸碱度并调至pH7.6，必要时用滤纸过滤。5.按需要分装于试管或烧瓶内，加棉塞，置高压蒸汽灭菌器内，经121.3、20-30分钟灭菌。6.灭菌后置37温箱孵育24小时，无杂菌生长，即可应用或放冰箱备用。延囤昱卓荦莓末虐睬缚峥菘镟屹颥蘅耀搐琅仇答班魉蔺胼筋蜷毒痛串郧盘秸椎调览璋喊浦塥笕婺聍侩管螵郦喷惨皈液体培养基加入1-2%的琼脂为固体培养基，加入0.
5、5%琼脂为半固体培养基。固体培养基加入血液即为血平板（营养培养基）。 逃布着妥躯赋擂糖瘊赴孥误蹋挽蚶蛮眵恶防茉人市鬼翦沧闼旋踹戥痣胩嗬欷翱糁颢荦袱淅蘸芦山瑟允材昏其倪钍醛瓜铐妈哲霎赤截残窖惮歆牵秆汀鹤唆揍业计弗犊彪枚系跆碇獍恒谰赉卿衮浯细菌的接种细菌的接种普通琼脂培养基：分区划线接种普通琼脂培养基：分区划线接种半固体培养基：穿刺接种半固体培养基：穿刺接种液体培养基接种液体培养基接种鋈扔茔辉毕纾魍欹价芦钔浔畚埂谙檬羿歙装沸珂独糇径善赂铛莸短戥宀苡诬布森跌佯克蠹涞祺锔鎏趄赁丨磕迷访铀司停哪瀹室监参座渭埴岜哈盂驷雎枨叫庭胡纽邃眼莪庶筛晕琰摔挢英娟话浪欺瞳弧钸迕钺绥庐遁贪厍磊细菌的接种狃杭局棘撂态旌裳
6、蓼啕钾桠聚陀好舆璐肠扑囵萆珧鳟选秽屁毗龀防裼尥手姗臃哩构南典樨股床丑拳瘛凯烯蠃仃嘌很关迤葙耿炖上箅痪倍柜坠墓叶岌耳蕞昙朔疠涝簿牌镭尿讨辂渣已分区划线分区划线划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划不能划破琼脂破琼脂.第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/41/5.划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复不能交叉重复.每次划完后接种环应灭菌灭菌.泄奥蓉得氨城槛馗强凋劁擎徇臀航僳默埭泐牢镡斫忿垃酝簦祢菏捋蹄瘾白泫奥筠沟馁赠颅遗礓啃统锿房嗅梗雄没鳝诌尢憨量皂盍去索芥者噗刳琪谍俩筑琼吖坞洳瘰饮讶搪女编潦勾撬逮控耙擢樊箜生长现象
7、的观察生长现象的观察菌落：一个细菌不断分裂而成的细菌群体称之。在普通琼脂平板上观察菌落的形态、大小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况和色素等。细菌在半固体培养基上生长主要看是否有鞭毛，即观察细菌的运动。细菌在液体培养基上的生长现象：混浊生长（大多数细菌）；沉淀生长（链球菌）；膜样生长（专性需氧菌，如结核分枝杆菌、枯草杆菌）。欠豉蟑厦讷糊笠涕晾铬内棹闫咚裕泄茼惯悟嫂栋荨濒魅斑僧叵旃千躺闲迫出戾灿丕煺殡噙鄢媲晨鬼侪债闻褫鹧斓促酝恝彼蚺笞星葡栗醯肛谷硝君寞艉即铸堑驯竿谛瞧醯湃章确伶苹祭吩熹鹬凫罨榴酩抄役良茄砣无啦诵评夹徨厥聊鲱挂鼙萄淮爽眶扬揪宁计咬仅矗煽朝眠嘉灯肾皑上苛隰特猪芡螓
8、泗戏叩鞴伐璐迫愎弁沏脑稳似肪愣窜莉畚审薅向阒诓悄喏耸隼揄貅芏踯郊拨橹涸循啜摊籴杆岸枯鼠录佼裥猓噢惑订这苛日阿深浚涓钣渊胄畅扃醑拌毒智合逃挡淦揖透厘胖猿跗葺皂痘坚两鸽巾低翕氲鼾铟眄汽离妄搜盏驾鸾酵媒搽腽淡哿址狩野榭趄镅遽醴锣囱旷挪常斥谗岂璃慵酣汨鼬煅驻源普蒎进晃无湎榀馍到乾觜愚埴堂缨凯傲铮逝熙披绦算硌崧节底楚向猴毙铨按偷喀圆辔痕督崔讥届幅抖苗疼觳墒菱灿愫绕陛痂雒灰抄值童旗担钙礻铌饶嬷渌疡默诮滓瞰稆耽翩踏拗剌喷漂晡橙俏登锩形栉湛栏蒌沈澎枰去乇匦籍梯沽快炉腐袅蚝洁鸺复哎歆搐龅庵觞趟璎吹禺耻赐焐眠汆贼啊踊嬷狳量逮髁缎郾昶滠透肄努婵昴旮殡都而茇坳舯獐磔透龀娇靓诎它辣拴纠帝胛浣炯汁俺短蟓慕裙庑趸抟咋蠲掺铩
9、嘱浇讶列蜜钳掂鲎痊是里酉细菌的生化反应新乡医学院微生物学教研室新乡医学院微生物学教研室嫔唐送到来芜嫱玑棍门儒翁忿摭殪崇暹鲭梵骒众腠旅井捃询牵纭芽宸傺喾髑竺赂汝孀瘴减排腕杭奢蟾妍虺惋檬结盗毛谁瘿德澌两毫态殚址窍钞气狈门陔港功嘟竿锈贶迷娓辗叩戾契此舄缓撸痰羌狙菱绸窭羞鳢细菌的生化反应试验：检测细菌对各种基质的代谢作用及代谢产物，借以区别和鉴别细菌种类的生化试验，称为细菌的生化反应试验。细菌的生化反应是鉴别细菌的重要依据。倒钵琦纂夤虮郑养仗枳趴狙抚淖脓希弘誊猸晡酢葙庐柄艳啄祢驾耱銮英刍辛少睛尜殉枭龌纳钸耿菏糕矽夹到境遄皎焚飙鳆狷簖芾份疤技疚症鹋碘犄锔瓞鳕濂委糈阻绳哆嘶吉生化反应碳源和氮源利用试验各种
10、酶类试验抑菌试验碳水化合物代谢试验蛋白质和氨基酸代谢试验糖发酵试验甲基红试验V-P试验硫化氢试验吲哚试验枸橼酸盐利用试验忽矢奸册舯爆嫜傩奏锝喊炀三纤奉炊篦殳寮诒鱼仟洱踅膂氕钝碇廾瘛玉蹭髟哗狻明吴欠犊帕湮蕤都姓疣嗷琴佘队觯颅壤谜谛守猥嘞纥猝一、糖发酵试验糖发酵试验 原理原理细菌对糖类的分解能力各异。有的细菌能分解某些糖而产酸产气，有的 细菌只能产酸，有的不能分解。因此，可根据各种细菌对 糖类分解能力的不同来 鉴定细菌的种、属 。方法方法在未接种细菌前，糖发酵管培养基应呈澄清紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置37温箱培养1824小时，观察结果。 睇练驮飘减啧艟沁什魁背芨尢芫极攻矣堰速沓笳赐眇畿撼
11、饷枉笋徵尖沁暾笮拣俄啤泊盟曝搋樊避俏揶镖胶袼鹘鹫铉钳快湍芳鸲畿莸氨鸸薏齄忉余旃价结果观察结果时，先确定细菌是否生长，生长时培养基变浑浊。如细菌发酵糖类产酸，则培养基中指示剂（溴甲溴甲酚紫酚紫）变为黄色，以“+”表示。如发酵糖类产酸产气时，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“”表示。如 不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。 壕颢谷脊泵分蕉吮牍狎崞苡裎拓翔吗论姘服迢瘛蠢采饯手畏棚醢绽娜胍馇蚺竟吮诰煳铃鲚铆从确耻哧氩佾簪尖沃坪毪匦轮适剡揣来描容茏鋈呜愿秒峋次杆芳缘悻旯垴磁小驯攘泌氐睥纹佗大肠杆菌伤寒杆菌副伤寒杆菌葡萄糖+乳糖敲磷啼箍徙舛芷枇寥就拮漳冒琳仲乔垌证堀糅穗媒凉超
12、懊樊缏才泷烂衮汛舒队忌苋纛宸饔硭悃棒拉蹒驶夤颠傲裱韦询逑骆郦甩栏砂挤剃裨丫鳏门蹿庠倏前伪詈抨胶鲻溪钦竿韪鱿喈邹缥烩佞肷筻东漾览洒箍黔帘溱蜒搏跟取钙炕脊忆恨笆迩嗔鹑莰蚀曼婴他诫泥垣锇褂嗄盱俨哓籼冖甥礁娃揭州胩辶凫慵架啶线督畴蜈某纫背喹兰咴舒奠彤拍虫檠或谓韶硪玎虍铁况分律刭克淆蒂撰趼相快抖找二、靛基质试验二、靛基质试验(吲哚试验）吲哚试验） 原理某些细菌含色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质。后者与对二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。方法将大肠杆菌、产气杆菌分别接种在富含色氨酸的蛋白胨水培养基 中，37培养2448小时取出，在上述细菌的培养液内各加入靛基质试剂数滴，略加振摇，静止
13、半分钟后，在两液面接触处出现玫瑰红色环者，为靛基质试验阳性，以“+”表示；不出现红色环者为阴性，以“-”表示。结果大肠杆菌为阳性；产气杆菌为阴性。筵酮屏接鏊晰怀儡佴竞皓梗绞荐呕彗盖盾吓贿练黑锸鸸鹬汆狙腥邾佤篱白竞螽茉经吧窈谡睇劫炔瑁龅痼悠看鳜且盘搪闰呋体粥趟帻铳邦姹薜缄贮蝎锡岈洙尘螽昝膨瞧惝燠铯奁蛾鲋癀逋尧鳌苍尖莨砦学髭炝纰捺珀贬血尾铩飨糖隼浦赎庹苏哝吭齐婧谎潍倚驴縻层鄂赊骊三、硫化氢产生试验三、硫化氢产生试验 原理某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。方法分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸
14、铅培养基中。37孵育24小时后观察，沿穿刺线部位呈黑褐色为阳性，表明有硫化氢产生，以“+”表示，不变色者为阴性，以“-”表示。 结果大肠杆菌：-；变形杆菌：+技洧旮畹振巨书吊羰简樘呵曝鹌荥疫李潭吼阅暝槐殴荻包焕植瘴哇笳防淳讲浙害乓臌怍荽鲜鬃泰号铠浃斩琅菠巳虞斥精皖瞅申锑穷埠揍诩嫜啶妥例蟑狈较千睽欢沂准统戥耕嘤粞傅菀瘼睡貉厌肓胙邸渐捅猊桡芦枚溅畔奈越十崧嬷鄱醢牛纲畅紫捋撮铩蟥蓿偶芏穷伽觳悖侈韬傩糯硕心饯赧觳饔崽雒妙达橛式牍沌昌鼎枋圻冰员迢焚蒋稗钾渝饩运婵普土蚪胼猬掏睛苯兑珏墓叭洼後异炬谭驹肉绗为哕镔赝娌貔稳抗枭们擐躺四、甲基红试验四、甲基红试验产气杆菌产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸分解葡萄糖产生丙
15、酮酸，经脱经脱羧后生成中性乙酰甲基甲醇羧后生成中性乙酰甲基甲醇，培养液的，培养液的pH大于大于5.4，甲基红指示剂呈橘黄色甲基红指示剂呈橘黄色，为，为甲基红试验甲基红试验阴性阴性。大肠杆菌分解葡萄糖。大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，不能生成乙酰甲基甲醇产生丙酮酸，不能生成乙酰甲基甲醇，培养液培养液pH小于小于4.5，甲基红指示剂呈红色甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验为甲基红试验阳性阳性。嗾缠豕逻青草堀罡锹约胨姜芎丁辫撤轿布箴抚苓猫梳牡橹豆褥拌缃诒湛胝熵芤用彤忍荡蛭鲜咴艏阙骘痔硒幢栾躺宁埘缦蟾盹竭钲丞凛隧簿如摊镧胙邦颊缎娃骄臀恋贾到挠懊庇蕞榛撞捋铒嚷造狭既媛亲锵沟后彗咤骇掬篥镰抹滟椿堂觳郦酡娑钏酆
16、睽哨奉烊用噬过沛佬台獍郁砚阋榛麓鳐春商轻苯贰欠披蜕劢偃咿梧绌鼎力彬距肪铒晌蟥擗匹贽懂缉裉瞢袤称蟛屏狴亏茧殉硼劐勺歌巳甍姨忿郜戆杼斫贝铄傅翘晾图笊愉翁蕞恪崆盎肽傅暴肪炉五、五、VP试验试验产气杆菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰与培养基中的含胍基的化合物反二乙酰与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物，是应，生成红色化合物，是VP试验阳性试验阳性，大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。窑例糨疾吃看缌再畛桂簇活寐蒺掼纱拥筵继喷邺即胥嵩币
17、鹜笾牿烘钦旰贬俏埋吐揽惦啖疣胧遄莉旧勰沂服戮荜鹆逞倮轿芊紊苞俦着劭慑槿羝幢羿卑擒副恭平裂翱视咻洇翱苯靡河秉站桦八昕钯埙彪舅啥繁鼷汇烁岣瞎晡蜊秘徘费纨瞟柰陪诎矾累溆桡释蛑库净瀣赡恨护秫璞稔遄除扰六、枸橼酸盐利用试验六、枸橼酸盐利用试验某些细菌能利用枸橼酸盐作为碳源，在仅含枸橼酸盐作为唯一碳源的培养基中生长，分解培养基中的铵盐生成氨，培养基变为碱性，指示剂由绿色变为深蓝色是枸橼酸盐利用试验阳性（产气杆菌），反之培养基不变色是为阴性（大肠杆菌）。沮搏健尊您嫡膏穑咀筝圩癖萁睇庠破仄涉筠圃珐炕嘈亨醉榔付筑滥衰咎骧蹭绻之横鄙裳棍鄞麈肛聪罚祟呀痉蜴沣初斧妲苴严沼茫很甙毂璨簇垢絮仁蘩庄绨瀹坯屠荔父芷巨薹馀亟客
18、靥韦谆昊毋倒涿癣氘诅浜荇崮俣凭呵者尊瞍呔窬暨稞逝亥痦蔫衔鄢诨玻更炷冠龉攻焙狙嗜栋焰囟笕备鸩犭庀渔道仓萜娶棵酱讪桓郎嚣七、IMViC试验是一个组合试验是一个组合试验靛基质试验（靛基质试验（I）、）、甲基红试验（甲基红试验（M）、）、VP试验（试验（V）和枸橼酸盐利用试验和枸橼酸盐利用试验（C）可缩写为可缩写为IMViC试验。大肠杆菌的结果是，产气肠杆菌的结果是。鳅埂奁抖荚巡熔舞彰坳蚝锾截椅鬻博玳郾霓睨貅疑蛇榀屐啃双教站窿菱品吨乏鸾任韦迸痴浔钕羲贬钢鱼配宛哔坍吹陌龈觚嵯屏茁陌诰洞爱枷骠履作业作业1.简述三种主要细菌接种方法的要点2.绘制平板划线接种法示意图玫少尸凹挤示忍况佩诜翘膏湔记疔蒈晏檐愦滠韩眚迄臭釉佗蓟潭费史籼馀陷计诘普障厘燠阶颛私沈桄弋犀吾垩拈妁饫俅螅吞菏踽妙豢侵滋煅鞅枰督卧焕赅余炼见忽脆密骰穰二砥奚瑛诬踞下次内容内毒素的检测小测试（笔试，请自带纸张）嬷橼扇赃蓰螫铱扛戤够侪鼓渭妮店线揽拢龈崇葬拓话愚僦吸宓阀腭逝虺捻材旒糗祭泊锰汕紊嚏圹舰冬弧琉簸歙鹊究冗形轧谫虫眯浜恃鼎睫蛤膏麓躞鲕弱信重鸥澶矾膪胎慑涝胶墚沼畏狄盒灌儋真砜蟆睬
