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1、二、培养操作中注意：动作准确敏捷有序；培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口；一个吸管只能吸一种液体；不能面向操作台讲话(jing hu)或咳嗽。第1页/共38页第一页，共39页。基本(jbn)的培养方法悬滴培养方法：第2页/共38页第二页，共39页。悬滴培养(piyng)用的凹载玻片 单位：mm第3页/共38页第三页，共39页。（一）单盖玻片培养(piyng)方法第4页/共38页第四页，共39页。左图；凹载玻片支架(zhji)右图：单盖玻片培养法操作图解 1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块 4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡(sh l)密封 a为正确操作 b错误操作第5
2、页/共38页第五页，共39页。8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养9、培养7-8个小时，组织块向外生长，培养24小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞(xbo)圈），48小时候生长减慢甚至停止。需要重新加入鸡胚浸出液。第6页/共38页第六页，共39页。盖玻片法再培养 1、2、眼科刀切除生长(shngzhng)晕 3 方型培养物切为两到四片 4、5培养物漂洗 6、7、再培养第7页/共38页第七页，共39页。（二）双盖玻片悬滴培养(piyng)法第8页/共38页第八页，共39页。 双盖玻片图解：1、载体(zit)盖玻片 2、带培养物盖玻片 第9页/共38页第九页，共39页
3、。与单盖玻片不同之处：1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少(jinsho)污染。第10页/共38页第十页，共39页。二、培养瓶培养方法20世纪50年代(nindi)Carrel设计了卡氏瓶Earle设计了T-培养瓶第11页/共38页第十一页，共39页。用血浆固定(gdng)组织块的培养方法第12页/共38页第十二页，共39页。 图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆(xujing)加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖 8.消毒 9加入培养液 10.通气第
4、13页/共38页第十三页，共39页。用透明纸固定组织(zzh)块的培养方法第14页/共38页第十四页，共39页。图:内放有孔透明纸的培养瓶培养 a. 一个(y )T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶接种后图解 1.有孔透明纸 2.组织块 3.培养液第15页/共38页第十五页，共39页。旋转管培养法：与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替(jiot)与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长。第16页/共38页第十六页，共39页。旋转管培养方法用具(yngj) a.简易旋转鼓，可放入培养箱内 b.带旋转鼓装置的培养箱 c.培养用的旋转管 1.示血浆的高度 2.示接种组织间间距 3.示加培养液 4
5、.示可放旋转鼓内培养 d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用 2.观察时用)第17页/共38页第十七页，共39页。四.灌注(gunzh)小室培养法优点1.连续观察活细胞的动态变化2.研究理化性质对培养细胞的影响和作用3.活细胞的反应.第18页/共38页第十八页，共39页。不锈钢培养小室图 A 中央(zhngyng)切面图 B侧面图(mm)第19页/共38页第十九页，共39页。灌注小室及灌注系统示意图 A.排液瓶 B.受液瓶 C.不锈钢灌注小室 D.扁锥型小孔道 E、F、J .2号注射针头 G、H.塑料导管(dogun) I玻璃导管(dogun) K、L.14号注射针头(塞以棉花)第20页/共
6、38页第二十页，共39页。五.培养(piyng)板培养(piyng)方法第21页/共38页第二十一页，共39页。第22页/共38页第二十二页，共39页。培养培养(piyng)过程：过程：1、取材并制备拟用于培养的细胞悬液2、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内3、给培养板各孔补加足够的培养液4、加盖，放入CO2培养箱中培养。（贴壁能力弱的细胞在接种后放置于CO2培养箱中培养3-5小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养）5、每隔2-3天换液，换液时先将旧的培养液吸出，加入平衡(pnghng)盐溶液洗涤，吸出平衡(pnghng)盐溶液，再加入新的培
7、养液。盖上盖子继续培养。第23页/共38页第二十三页，共39页。六、转瓶培养(piyng)第24页/共38页第二十四页，共39页。第25页/共38页第二十五页，共39页。第26页/共38页第二十六页，共39页。第27页/共38页第二十七页，共39页。第28页/共38页第二十八页，共39页。第29页/共38页第二十九页，共39页。第30页/共38页第三十页，共39页。第31页/共38页第三十一页，共39页。生物(shngw)观测台第32页/共38页第三十二页，共39页。第33页/共38页第三十三页，共39页。第34页/共38页第三十四页，共39页。第35页/共38页第三十五页，共39页。第36页/共38页第三十六页，共39页。第37页/共38页第三十七页，共39页。感谢您的观赏(gunshng)！第38页/共38页第三十八页，共39页。内容(nirng)总结二、培养操作(cozu)中注意：。第1页/共38页。第2页/共38页。8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养。2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少污染。二、培养瓶培养方法。与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长。3.活细胞的反应.。五.培养板培养方法。第37页/共38页。感谢您的观赏第三十九页，共39页。
