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1、 现代病理学技术概略主主讲人：周人：周晓龙讲课时间：20212021年年1 1月月6 6号号病理学的定义l lPathology Pathology 是病痛是病痛是病痛是病痛 pathos pathos 的研的研的研的研讨讨讨讨(logos) (logos) l l联络联络联络联络根底医学与根底医学与根底医学与根底医学与临临临临床医学的床医学的床医学的床医学的桥桥桥桥梁梁梁梁 l l研研研研讨讨讨讨疾病形状下疾病形状下疾病形状下疾病形状下细细细细胞、胞、胞、胞、组织组织组织组织和器官构造和功能的改和器官构造和功能的改和器官构造和功能的改和器官构造和功能的改动动动动l l经过经过经过经过各种手段
2、解各种手段解各种手段解各种手段解释释释释疾病，疾病，疾病，疾病，为临为临为临为临床床床床诊诊诊诊断，治断，治断，治断，治疗疗疗疗和疾病的和疾病的和疾病的和疾病的预预预预防提供根据防提供根据防提供根据防提供根据l l l l 病理学技病理学技术 病理学包括病理学病理学包括病理学实际实际和病理学技和病理学技术术。病理学技。病理学技术术是是“ “病理病理学之母。病理学的学之母。病理学的实际实际和技和技术术被被视为视为一一辆车辆车的两个的两个轮轮子，缺子，缺一不可，互一不可，互为为依存，相互促依存，相互促进进，两者的，两者的结结合决合决议议着病理学的开着病理学的开展。展。 病理学技病理学技术术包括尸体
3、解剖、大体包括尸体解剖、大体标标本的制造、制片石腊切本的制造、制片石腊切片、冰片、冰冻冻切片、半薄切片、超薄切片等、切片、半薄切片、超薄切片等、组织组织化学方法，免化学方法，免疫疫组组化技化技术术、原位、原位杂杂交、分子病理技交、分子病理技术术、电镜电镜技技术术、图图像分析像分析等。等。 病理技病理技术术的开展促的开展促进进了病理学了病理学实际实际的提高。的提高。病理学的开展器官病理学器官病理学时代：代：Giovanni Battista Morgagni 1682 ,1 1771,11 意大利解剖学家意大利解剖学家现代解剖病理学之父代解剖病理学之父编写写，包含，包含646例解剖例解剖记录 奠
4、定了病理学开展的根底奠定了病理学开展的根底遗憾：没有将病理与憾：没有将病理与临床床联络病理学的开展组织病理学病理学时代代Rudolf Virchow 1821,10-1902,12) 德国医德国医生生现代病理学之父代病理学之父编著著开开创了了细胞病理学胞病理学时代代病理学的开展现代病理学代病理学时代代(近近400年年历史史电子子显微微镜：细胞超微构造的察看胞超微构造的察看免疫病理学：免疫免疫病理学：免疫组化技化技术的运用的运用分子病理学：疾病分子病理学：疾病遗传和基因的研和基因的研讨数字病理学：数字病理学：病理学技病理学技术l l传统传统病理学技病理学技病理学技病理学技术术l l HE HE染
5、色技染色技染色技染色技术术l l 组织组织化学染色化学染色化学染色化学染色l l 细细胞病理学技胞病理学技胞病理学技胞病理学技术术l l l现代病理学技术现代病理学技术l 超微病理超微病理l 免疫病理免疫病理l 分子病理分子病理l 数字化病理数字化病理l 传统病理学技术传统病理学技术l l病理学技病理学技术术的根底和根本，是的根底和根本，是临临床和科研最常用的技床和科研最常用的技术术l l全手工操作开展全手工操作开展为为自自动动化的机器：脱水机，包埋机，封片化的机器：脱水机，包埋机，封片机，染色机，包埋盒和切片打号机，液基机，染色机，包埋盒和切片打号机，液基细细胞制片技胞制片技术术l l资资料
6、的料的优优化：塑料包埋盒，一次性切片刀化：塑料包埋盒，一次性切片刀l l试剂试剂的的该进该进：试剂试剂的商的商业业化，非化，非污污染染环环保保试剂试剂l l低温恒冷切片机替代二氧化碳制冷机等低温恒冷切片机替代二氧化碳制冷机等现代病理学技术现代病理学技术l l免疫免疫免疫免疫组织组织化学技化学技化学技化学技术术：开展快，运用广，已成：开展快，运用广，已成：开展快，运用广，已成：开展快，运用广，已成为临为临床床床床诊诊断，靶向断，靶向断，靶向断，靶向药药物的物的物的物的挑挑挑挑选选以及科研的重要手段；以及科研的重要手段；以及科研的重要手段；以及科研的重要手段；虽虽然存在然存在然存在然存在问题问题。
7、l l电镜电镜技技技技术术：包括透射：包括透射：包括透射：包括透射电镜电镜，扫扫描描描描电镜电镜，免疫，免疫，免疫，免疫电镜电镜等，用于等，用于等，用于等，用于肿肿瘤的分型，瘤的分型，瘤的分型，瘤的分型，肾脏肾脏病的病的病的病的诊诊断，肌肉疾病的断，肌肉疾病的断，肌肉疾病的断，肌肉疾病的诊诊断等；科研。断等；科研。断等；科研。断等；科研。l l分子病理技分子病理技分子病理技分子病理技术术：近：近：近：近2020年来开展最快，分子生物学技年来开展最快，分子生物学技年来开展最快，分子生物学技年来开展最快，分子生物学技术术与病理形状与病理形状与病理形状与病理形状结结合，合，合，合，用于疾病用于疾病用
8、于疾病用于疾病诊诊断和分断和分断和分断和分类类，靶向，靶向，靶向，靶向药药物的挑物的挑物的挑物的挑选选，病原体的，病原体的，病原体的，病原体的检测检测，遗传遗传学研学研学研学研讨讨等。等。等。等。l l数字化病理：病理切片数字化病理：病理切片数字化病理：病理切片数字化病理：病理切片扫扫描技描技描技描技术术，远远程会程会程会程会诊诊，图图像分析系像分析系像分析系像分析系统统，档案的，档案的，档案的，档案的数字化管理。数字化管理。数字化管理。数字化管理。l l 病理技病理技病理技病理技术术的提高促使人的提高促使人的提高促使人的提高促使人类类的的的的认识认识从大体、从大体、从大体、从大体、细细胞、超
9、微构造、分胞、超微构造、分胞、超微构造、分胞、超微构造、分子基因程度逐子基因程度逐子基因程度逐子基因程度逐渐渐深化。深化。深化。深化。免疫组化免疫组化(pubmed检索检索 运用免疫学抗原抗运用免疫学抗原抗体反响和组织化学化体反响和组织化学化学反响的原理，对组织学反响的原理，对组织切片或细胞标本中的某些切片或细胞标本中的某些成份进展原位定性、定位成份进展原位定性、定位甚至定量研讨的技术。甚至定量研讨的技术。 现代病理学技术现代病理学技术免疫免疫免疫免疫组织组织化学技化学技化学技化学技术术的运用：的运用：的运用：的运用：临临床床床床诊诊断和断和断和断和鉴别诊鉴别诊断断断断肿肿瘤的分型瘤的分型瘤的
10、分型瘤的分型肿肿瘤来源的判瘤来源的判瘤来源的判瘤来源的判别别靶向靶向靶向靶向药药物的挑物的挑物的挑物的挑选选肿肿瘤生物学行瘤生物学行瘤生物学行瘤生物学行为为的判的判的判的判别别病原体的病原体的病原体的病原体的检测检测?分子病理分子病理(pubmed检索索现代病理学技术现代病理学技术分子病理学技分子病理学技分子病理学技分子病理学技术术：FISHFISHPCRPCR原位原位原位原位杂杂交交交交基因基因基因基因测测序序序序分子病理学技分子病理学技分子病理学技分子病理学技术术的运用的运用的运用的运用诊诊断与断与断与断与鉴别诊鉴别诊断断断断肿肿瘤瘤瘤瘤预预后判后判后判后判别别药药物的挑物的挑物的挑物的挑
11、选选.分子病理在临床中的运用分子病理在临床中的运用l l肺非小肺非小肺非小肺非小细细胞癌胞癌胞癌胞癌EGFREGFR突突突突变变的的的的检测检测：EGFREGFR突突突突变变阳性者运用阳性者运用阳性者运用阳性者运用络络氨酸激氨酸激氨酸激氨酸激酶药酶药物易瑞沙有效，否那么效果不佳物易瑞沙有效，否那么效果不佳物易瑞沙有效，否那么效果不佳物易瑞沙有效，否那么效果不佳l l血尿的血尿的血尿的血尿的诊诊断：断：断：断：检测检测9 9号，号，号，号，3 3号，号，号，号，1717号，号，号，号，7 7号染色体可以号染色体可以号染色体可以号染色体可以辅辅助助助助膀胱癌的膀胱癌的膀胱癌的膀胱癌的诊诊断和断和断
12、和断和预测术预测术后复后复后复后复发发的能的能的能的能够够l lC-kitC-kit突突突突变变的的的的检测检测：C-kitC-kit突突突突变变可用于可用于可用于可用于选择选择能否运用能否运用能否运用能否运用药药物物物物格列格列格列格列卫卫“ “l l大大大大肠肠癌癌癌癌k-rask-ras基因基因基因基因检测检测：rasras基因突基因突基因突基因突变对变对西妥昔西妥昔西妥昔西妥昔单单抗治抗治抗治抗治疗疗无无无无效，患者效，患者效，患者效，患者预预后差。后差。后差。后差。l l淋巴瘤的分型：运用淋巴瘤的分型：运用淋巴瘤的分型：运用淋巴瘤的分型：运用FISHFISH检测检测可可可可辅辅助淋巴
13、瘤的分型，助淋巴瘤的分型，助淋巴瘤的分型，助淋巴瘤的分型，为临为临床治床治床治床治疗疗提供根据。提供根据。提供根据。提供根据。l l.电子子显微微镜技技术n n电电子子子子显显微微微微镜镜，包括透射，包括透射，包括透射，包括透射电镜电镜和和和和扫扫描描描描电镜电镜n n电镜电镜技技技技术术包括包括包括包括负负染色技染色技染色技染色技术术、冷、冷、冷、冷冻蚀冻蚀刻技刻技刻技刻技术术、电镜细电镜细胞化学胞化学胞化学胞化学技技技技术术、电镜电镜X X射射射射线显线显微分析技微分析技微分析技微分析技术术、电镜电镜放射自放射自放射自放射自显显影技影技影技影技术术等等等等n n主要用于主要用于主要用于主要
14、用于肾肾小球小球小球小球肾肾炎的分型炎的分型炎的分型炎的分型n n确定确定确定确定肿肿瘤瘤瘤瘤细细胞的胞的胞的胞的组织发组织发生、生、生、生、类类型和分化程度型和分化程度型和分化程度型和分化程度n n扫扫描描描描电镜电镜可以直接察看可以直接察看可以直接察看可以直接察看样样品的外表的构造，血管腔面改品的外表的构造，血管腔面改品的外表的构造，血管腔面改品的外表的构造，血管腔面改动动共聚焦激光共聚焦激光共聚焦激光共聚焦激光扫扫描描描描显显微微微微镜镜 confocal laser scanning microscopyconfocal laser scanning microscopyconfoca
15、l laser scanning microscopyconfocal laser scanning microscopy 利用利用利用利用计计算机及算机及算机及算机及图图像像像像处处置系置系置系置系统对组织统对组织，细细胞及胞及胞及胞及亚细亚细胞构造胞构造胞构造胞构造进进展断展断展断展断层扫层扫描，再描，再描，再描，再现现三三三三维维立体空立体空立体空立体空间间构造，将形状学研构造，将形状学研构造，将形状学研构造，将形状学研讨讨从平从平从平从平面面面面图图像程度提高到三像程度提高到三像程度提高到三像程度提高到三维维立体程度；在察看培育立体程度；在察看培育立体程度；在察看培育立体程度；在察看培
16、育细细胞形状构造胞形状构造胞形状构造胞形状构造的同的同的同的同时时，直接，直接，直接，直接显显示培育活体示培育活体示培育活体示培育活体细细胞内的代胞内的代胞内的代胞内的代谢变谢变化。化。化。化。 共聚焦激光共聚焦激光扫描描显微微镜l察看活细胞、活组织：在不损伤细胞的前提下,对活组织、活细胞进展察看和丈量，省去了繁琐的样品前期处置过程，而且察看过的样品还可以继续用于其他的研讨。这种功能对于细胞培育、转基因研讨尤为重要。这可以说是最大的优势。l生化成分准确定位察看：配合公用的分子探针,对于要检测的成分不仅可以定位到细胞程度,还可以定位到亚细胞程度和分子程度共聚焦激光共聚焦激光扫描描显微微镜l动态察
17、看：在同一样品平面上随时间进展延续扫描动态察看：在同一样品平面上随时间进展延续扫描,就可就可分析细胞构造、内含、和标志等动力学变化。如察看心肌分析细胞构造、内含、和标志等动力学变化。如察看心肌或平滑肌细胞内游离钙、钠、钾离子浓度或的动态变或平滑肌细胞内游离钙、钠、钾离子浓度或的动态变化。化。l数据、图像的数字化：计算机替代了普通的照相机数据、图像的数字化：计算机替代了普通的照相机,得到得到的图像是数字化的的图像是数字化的,可及时输出或长期储存可及时输出或长期储存,而且还可进一而且还可进一步加工处置。步加工处置。l定量丈量：运用专注的荧光探针对样品进展染色定量丈量：运用专注的荧光探针对样品进展染
18、色,样品的样品的荧光强度和所测成分的含量呈正比荧光强度和所测成分的含量呈正比, 经过对比各组样品之经过对比各组样品之间的荧光强度值间的荧光强度值,可得出特定成分的含量比。可得出特定成分的含量比。生物芯片技生物芯片技术 n n基因芯片、蛋白基因芯片、蛋白基因芯片、蛋白基因芯片、蛋白质质芯片、芯片、芯片、芯片、细细胞芯片、胞芯片、胞芯片、胞芯片、组织组织芯片、以及元件芯片、以及元件芯片、以及元件芯片、以及元件型微型微型微型微阵阵列芯片、通道型微列芯片、通道型微列芯片、通道型微列芯片、通道型微阵阵列芯片、生物列芯片、生物列芯片、生物列芯片、生物传传感芯片等新型感芯片等新型感芯片等新型感芯片等新型生物
19、芯片。可生物芯片。可生物芯片。可生物芯片。可对对DNADNA、RNARNA、多、多、多、多肽肽、蛋白、蛋白、蛋白、蛋白质质、细细胞、胞、胞、胞、组组织织以及其它生物成分以及其它生物成分以及其它生物成分以及其它生物成分进进展高效快捷的展高效快捷的展高效快捷的展高效快捷的测试测试和分析。和分析。和分析。和分析。 组织芯片芯片 组组织织芯芯芯芯片片片片又又又又称称称称组组织织微微微微列列列列阵阵tissue tissue microarraymicroarray 是是是是将将将将数数数数十十十十个个个个 数数数数百百百百个个个个乃乃乃乃至上千个小的至上千个小的至上千个小的至上千个小的组织组织片整片整
20、片整片整齐齐的的的的陈陈列在一同到列在一同到列在一同到列在一同到载载玻片玻片玻片玻片, ,构成微构成微构成微构成微缩缩的的的的组织组织切片。切片。切片。切片。 激光激光显微切割微切割术 Laser micro-desection 在在在在显显微微微微镜镜下用手工或下用手工或下用手工或下用手工或仪仪器采器采器采器采样样的方法从的方法从的方法从的方法从组织组织切切切切片或片或片或片或细细胞涂片上将所要研胞涂片上将所要研胞涂片上将所要研胞涂片上将所要研讨讨的形状或表型一的形状或表型一的形状或表型一的形状或表型一样样的的的的细细胞从胞从胞从胞从组织组织三三三三维维构造中分构造中分构造中分构造中分别别出
21、来，出来，出来，出来，获获得得得得纯纯的的的的细细胞群胞群胞群胞群pure cell populationpure cell population，以，以，以，以备进备进一步作分子程度一步作分子程度一步作分子程度一步作分子程度的研的研的研的研讨讨。微切割技。微切割技。微切割技。微切割技术术的奉献就是抑制了的奉献就是抑制了的奉献就是抑制了的奉献就是抑制了组织组织的的的的细细胞胞胞胞成分非常繁成分非常繁成分非常繁成分非常繁杂这杂这一一一一艰艰苦的缺陷。苦的缺陷。苦的缺陷。苦的缺陷。 小小结l l各学科相互交融成各学科相互交融成各学科相互交融成各学科相互交融成为为当今开展的主流当今开展的主流当今开展的主流当今开展的主流l l现现代病理学技代病理学技代病理学技代病理学技术术是多学科相互交融的是多学科相互交融的是多学科相互交融的是多学科相互交融的结结果果果果l l病理病理病理病理诊诊断，断，断，断，肿肿瘤瘤瘤瘤预预后判后判后判后判别别和指点和指点和指点和指点临临床治床治床治床治疗疗的主要手段的主要手段的主要手段的主要手段l l对对疾病的疾病的疾病的疾病的认识认识更加深化更加深化更加深化更加深化
