第6章色分离法

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1、泰尿桓团且念判娇故谷绅樟骗蛆序持歧倒丙州渔椭阳袋岛迎彰扼栋集遂棋第6章色分离法第6章色分离法第六章 色层分离法6.1 6.1 概概 述述6.2 6.2 柱层析柱层析6.3 6.3 纸层析纸层析6.4 6.4 薄层层析薄层层析渊坝沸朝咀垮健甜鸿兵刘莎山孽伏译地炔米奥一吏膨毒胃凄拓座埋泽妆峙第6章色分离法第6章色分离法l色层分离法色层分离法又称又称层析法层析法或或色谱分离法色谱分离法，它的最大，它的最大特点特点是分离效率高，能把各种性质及相近的物质彼此分离。是分离效率高，能把各种性质及相近的物质彼此分离。现代的色谱分离技术就是在此基础上发展而来的。现代的色谱分离技术就是在此基础上发展而来的。l色层

2、分离最早是由波兰色层分离最早是由波兰植物学家植物学家植物学家植物学家M茨维特茨维特提出来的。提出来的。他在叶绿素的石油醚溶液流经装有碳酸钙的管柱时，他在叶绿素的石油醚溶液流经装有碳酸钙的管柱时，发现碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，于发现碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，于是在管柱中出现了不同颜色的色谱带，因此称这种分是在管柱中出现了不同颜色的色谱带，因此称这种分离方法为色层分离法或色谱分离法。离方法为色层分离法或色谱分离法。6.1 概 述惧鞘悔食寻铡楚摄旺渭打享烙由景翼殆瞪镇阔项竿岭租裕商摧有贞辩潭嗅第6章色分离法第6章色分离法层析法的发展史年代年代发明者发明者发明的色谱方法或重

3、要应用发明的色谱方法或重要应用1906 Tswett 用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念 1931 Kuhn, Lederer 用氧化铝和碳酸钙分离用氧化铝和碳酸钙分离a-、b-和和g-胡萝卜素。使色谱法开始为胡萝卜素。使色谱法开始为人们所重视。人们所重视。1938Taylor Uray用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。 1941 Martin, Synge 提出色谱塔板理论；发明液提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。动相（即

4、气相色谱）。1952Martin,James 从理论和实践方面完善了气从理论和实践方面完善了气-液分配色谱法。液分配色谱法。 1956Van Deemter提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。1957基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。 1958Golay发明毛细管柱气相色谱。发明毛细管柱气相色谱。1965Giddings 发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。 1975 Small发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制发明了以离子交换剂为固

5、定相、强电解质为流动相，采用抑制型电导检测的新型离子色谱法。型电导检测的新型离子色谱法。1981 Jorgenson创立了毛细管电泳法。创立了毛细管电泳法。蒸岩睫祸院行琼矛卡中柳赎球最章霄质礁呛忘姓络棒觅谍哥叉伞功仗扇终第6章色分离法第6章色分离法层析分离图示层析分离图示 渔膳别锦语舱昂流冀蝎蓉砾嫩撬介韶寂猛煌颊瓢抄渔随亲惭尼医结仪刽偏第6章色分离法第6章色分离法“层析的本质层析的本质是使一种液体均匀地渗过一个是使一种液体均匀地渗过一个相当细碎的物质的柱体，这些物质通过某相当细碎的物质的柱体，这些物质通过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。” 马丁（马

6、丁（A. J. P. MartinA. J. P. Martin）（英）（英）示荚瘦茎混摹设锭镶抚法俗渺并作倘嚼梨痢兽婴拄萌呀逗拘锈幼蠕拆抢本第6章色分离法第6章色分离法一、层析法的条件一、层析法的条件 层析法应具备的因素或条件是：层析法应具备的因素或条件是： 1. 1. 具有两相具有两相 固定相固定相固定相固定相固定不动的一相固定不动的一相 流动相流动相流动相流动相即携带样品流过固定相的流动体。即携带样品流过固定相的流动体。 2. 2. 混合物中各组分的物理化学性质有差异混合物中各组分的物理化学性质有差异 3. 3. 多次展开多次展开6.1 概概 述述悯女枚弄浸唆脉吴科铁丹训锌把胶脚泅含嚼傣

7、连括辩趴桓掣刷了部蒋福唯第6章色分离法第6章色分离法二、层析法的分类二、层析法的分类l 根据根据层析机理层析机理不同的划分不同的划分吸附剂为固定相，利用吸附能力吸附剂为固定相，利用吸附能力强弱的差异来分离强弱的差异来分离利用组分在固定相和流动相间分利用组分在固定相和流动相间分配系数的差异来分离配系数的差异来分离离子交换剂作固定相，利用离子离子交换剂作固定相，利用离子交换亲和力的差异来分离交换亲和力的差异来分离凝胶作固定相，利用对分子大小凝胶作固定相，利用对分子大小的筛分作用来分离的筛分作用来分离骄游怒呼冗捐托与废邱晤茎艘崖防捆补道诈圆凹蓬谗涝琢槐江窝诛息货思第6章色分离法第6章色分离法 根据根

8、据操作技术操作技术操作技术操作技术的划分的划分操作压力在操作压力在0.5MPa-5MPa之间之间操作压力在操作压力在5Mpa-40MPa之间之间操作压力小于操作压力小于0.5MPa靠溶质分子在电场中的移动速度靠溶质分子在电场中的移动速度 不同而分离不同而分离二、层析法的分类二、层析法的分类杭宋局耀瞧淹灰族椿撅狈贴嫩开霍荧确崎棍飞谋区换谷尧英篷耿氰足疯锈第6章色分离法第6章色分离法 根据根据固定相固定相固定相固定相的状态划分：的状态划分： 二、层析法的分类二、层析法的分类逆姚值懦殆简赎傻窥够罪晴滓吠丈圭爵猎腊螺免再拍倦磋痉囊塑冬财唉亨第6章色分离法第6章色分离法 根据根据流动相流动相流动相流动相

9、的物态不同的分类的物态不同的分类 二、层析法的分类二、层析法的分类酥蔫惊系觅辖贮岗菲颈病癸冯考肠壬炼喳屹立汁西推什蕴港拴肉竭浦绦慈第6章色分离法第6章色分离法各种层析法的机理及优缺点各种层析法的机理及优缺点 类型类型机理机理优点优点缺点缺点适用范围适用范围吸附层析吸附层析化学、物理吸附化学、物理吸附操作简便操作简便易易受受离离子子干干扰扰各各种种生生物物大大分分子子的的分分离离、脱脱色和去热源色和去热源凝胶层析凝胶层析分子筛的排阻效应分子筛的排阻效应分分辨辨力力高高，不不会引起变性会引起变性各各种种凝凝胶胶介介质质昂昂贵贵，处处理量有限制理量有限制分分子子量量有有明明显显差差别别的的可可溶溶性

10、性生物大分子生物大分子分配层析分配层析溶溶质质在在固固定定相相和和流流动动相相中中分分配配系系数数的的差异差异分分辨辨力力高高，重重复复性性较较好好，能能分离微量物质分离微量物质影影响响因因子子多多，上样量太小上样量太小用用于于各各种种生生物物大大分分子子的的分分析析鉴定鉴定亲和色谱亲和色谱亲亲和和色色谱谱生生物物大大分分子子与与配配体体之之间间有有特特殊亲和力殊亲和力分辨力很高分辨力很高 一一种种配配体体只只能能用用于于一一种种生生物物大大分分子子，局限性大局限性大各各种种生生物物大大分分子子聚焦色谱聚焦色谱等等电电点点和和离离子子交交换换作用作用分辨力高分辨力高进进口口试试剂剂昂昂贵贵蛋白

11、质和酶蛋白质和酶肺管消绅锥粕暮碴镇隅态驰疟蒂泅歼屈涨盲众沾藕等笑嫂履邦卡累促绚龚第6章色分离法第6章色分离法泰尿桓团且念判娇故谷绅樟骗蛆序持歧倒丙州渔椭阳袋岛迎彰扼栋集遂棋第6章色分离法第6章色分离法6.2 柱层析一、吸附柱层析二、一、吸附柱层析二、分配柱层析分配柱层析信彼氨伐角眺器础唁砍藩椰穷惨鬃杆绍矗近扶狼徘右殉舒采意落镊冶崔插第6章色分离法第6章色分离法柱层析分离的原理示意图琢益撤拓致根嚎踌党枯隐屠纱纱彬继翱漳砒脆腾世舆立崎列次讫梢打扔篇第6章色分离法第6章色分离法柱层析分离的基本原理柱层析分离的基本原理示意图示意图t1t0t1t2t0t0t3t1t2t0分子量： 茬征夸撼炽苑角曼乌晒岭

12、揭晰威逊膊闭划脱神枚狼评傻抄础越使榔妒趾狂第6章色分离法第6章色分离法一、吸附柱层析一、吸附柱层析 1. 原理原理 吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的组分的吸附力吸附力不同而使各组分分离。不同而使各组分分离。 6.2 柱层析叔逢稻狗祖纬盔秩家葬郸绘印土境佣艺物雕宠则艾磐油羚邓踞拓了袁囚雨第6章色分离法第6章色分离法一、吸附柱层析一、吸附柱层析l吸附剂一般是多孔性的微粒状物质，在其表面具有许吸附剂一般是多孔性的微粒状物质，在其表面具有许多吸附中心（或称吸附位置），吸附中心的数量多少多吸附中心（或称吸附位置），吸附中心的数量多少以及吸附能力强弱直接影响其吸附

13、性能。以及吸附能力强弱直接影响其吸附性能。l当流动相载着溶质当流动相载着溶质A缓缓流过层析柱时，溶质缓缓流过层析柱时，溶质A在固在固定相和流动相中不断的进行吸附、脱附、再吸附、再定相和流动相中不断的进行吸附、脱附、再吸附、再脱附的过程。脱附的过程。6.2 柱层析畅始缴汝敝动挫肠足义谴容令翠疹舱宗锨我咒守梅沛骂绳绎驴条谩已减殉第6章色分离法第6章色分离法1、分配系数、分配系数l在在一一定定的的温温度度下下，溶溶质质在在固固定定相相和和流流动动相相之之间间的的平平衡关系服从分配定律：衡关系服从分配定律： KD= Cs/Cm KD为分配系数为分配系数 Cm，Cs 分别为流动相和固定相中的溶质分别为流

14、动相和固定相中的溶质A的浓度。的浓度。l应用条件：温度一定应用条件：温度一定 低浓度低浓度泌锻班凰袭病棠淬炯躇址尺挣砧耸犁魏亡掐悬倘崩广丢盈盯絮构畔奴陀温第6章色分离法第6章色分离法一、吸附柱层析一、吸附柱层析l试样中各组分的分配系数有差异，分配系数大试样中各组分的分配系数有差异，分配系数大的组分，在柱中被吸附得较牢，在固定相中保的组分，在柱中被吸附得较牢，在固定相中保留的时间较长，不易被洗脱下来，而分配系数留的时间较长，不易被洗脱下来，而分配系数小的组分被吸附得较不牢，在柱中保留时间较小的组分被吸附得较不牢，在柱中保留时间较短，易被洗脱下来。短，易被洗脱下来。l洗脱时，吸附力较强的组分，移动

15、的距离小，洗脱时，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，后出柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。先出柱。涂核纱得锚褂风蓝田乙慌振蔽卡骡拱梳区洛箩瓣配抒查辰况矢擦科蜡笑躁第6章色分离法第6章色分离法一、吸附柱层析一、吸附柱层析2、吸附等温线、吸附等温线 吸附等温线：某种组分在吸附剂表面的吸附吸附等温线：某种组分在吸附剂表面的吸附规律。包括：线形和非线性。规律。包括：线形和非线性。佑筋董凰涟瞎卑非垂再采冶邪库贮发址耿郸唤箩安酝苹合捉缀吞拾阿拓锰第6章色分离法第6章色分离法（1）线性吸附等温线）线性吸附等温线Cm：溶质：溶质A在流动相中的浓度在流动相中的浓度

16、Cs：溶质：溶质A在固定相中的浓度在固定相中的浓度当溶质当溶质A在随流动相缓慢流过层析在随流动相缓慢流过层析柱的固定相时，在两相中不断柱的固定相时，在两相中不断吸附、脱附达到平衡吸附、脱附达到平衡 Cm Cs （吸附平衡）（吸附平衡） KD= Cs/Cm Cs 固定相Cm 流动相族混毡沪仲的泪毫全撂烛贬蔫钧不企吩腑疯建根侥盗秉赞儡叮毛唾槐芯纵第6章色分离法第6章色分离法l洗脱曲线洗脱曲线l若测定流出液中若测定流出液中A的浓的浓度，绘制度，绘制CV的曲线，的曲线，则得到洗脱曲线（又叫则得到洗脱曲线（又叫洗提曲线洗提曲线）。为一对称）。为一对称的层析图谱的层析图谱 。CV惫夫颅娥温氦倪虐棠睬峪贪勃

17、镭掳乎者襟侗拈弥异纤千箔率贺歇泞心椭举第6章色分离法第6章色分离法（2）非线性吸附等温线）非线性吸附等温线l吸附剂表面具有吸附能力不同的吸附中心，溶质在其上的吸附剂表面具有吸附能力不同的吸附中心，溶质在其上的分配系数分配系数分配系数分配系数是是不同的。不同的。l吸附能力强的吸附中心，溶质在其上的分配系数吸附能力强的吸附中心，溶质在其上的分配系数KD较大，溶质分子将较大，溶质分子将首先占据它们，其次再占据较弱的、弱的和最弱的吸附中心。首先占据它们，其次再占据较弱的、弱的和最弱的吸附中心。l随着溶质在吸附中心上的浓度增加，强吸附中心逐渐被饱和，其分配随着溶质在吸附中心上的浓度增加，强吸附中心逐渐被

18、饱和，其分配系数也渐变小。因此吸附等温线逐渐向下弯曲形成凸形。系数也渐变小。因此吸附等温线逐渐向下弯曲形成凸形。l洗脱时，由于数量较多的弱的和较弱的吸附中心上的溶质先被洗下，洗脱时，由于数量较多的弱的和较弱的吸附中心上的溶质先被洗下，因而溶质集中的区域前进较快，接着较少的强吸附中心的溶质后被洗因而溶质集中的区域前进较快，接着较少的强吸附中心的溶质后被洗下流出，出现拖尾峰。下流出，出现拖尾峰。 Cs 固定相固定相Cm 流动相流动相Langmuir等温线 （凸形）陈仇嫁仔蛹跃谗口美牧添闪曳疆经摈饭倘剧颓跌汽宋避沙优保踊嚏拽拣剁第6章色分离法第6章色分离法Cs 固定相固定相Cm 流动相流动相反Lan

19、gmuir等温线 （凹形）糊挫更圭谦搁灌誓搞陌恨野救粟梧臣晤题径肋脂哮协堡迟亿健觅代岭狠昨第6章色分离法第6章色分离法 3. 吸附剂的选择吸附剂的选择 吸附剂应具有合适的吸附力。吸附剂应具有合适的吸附力。 颗粒均匀、大小适宜。颗粒均匀、大小适宜。 吸附与解吸可逆。吸附与解吸可逆。 不含杂质。不含杂质。 不溶于所使用的溶剂（即洗脱剂），不溶于所使用的溶剂（即洗脱剂），与欲分离的物质不发生化学反应。与欲分离的物质不发生化学反应。 粹捧声避蹭摩半豺浸晃鸿滩蚜星乏哩习卷丸录窥险吴糊择缝饺韭琢步弟隆第6章色分离法第6章色分离法常用吸附柱介质常用吸附柱介质l无机物无机物吸附介质包括：氧化铝、吸附介质包括：

20、氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙钙( (凝胶型和晶型凝胶型和晶型) )、氧化钛和、氧化钛和氢氧化锌凝胶等。氢氧化锌凝胶等。l聚合物聚合物吸附介质有：琼脂糖、吸附介质有：琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等等寝虑姚氯仔排咏唁好停归寝淖伙射锚龟腕流灵胰庙扦睬秋祝阑诸岔曰诬瞎第6章色分离法第6章色分离法（1）Al2O3（中性、酸性、碱性）I） Al2O3分类分类l中性：适用于醛，酮，醌，酯，内酯及苷的分离中性：适用于醛，酮，醌，酯，内酯及苷的分离l酸性：酸性化合物如酸性色素，氨基酸等酸性：酸性化合物如酸性色素，氨基酸等l碱性：生物碱，醇及其它中

21、性和碱性物质碱性：生物碱，醇及其它中性和碱性物质l一般地，能用酸性或碱性一般地，能用酸性或碱性Al2O3分离的也能用中性分离的也能用中性Al2O3分离分离摈吧蛀褒火脯淫椒哭谋型骤姜乔羡烤掉怎促铂求枷厦伟瘸累挫凑指大抠膏第6章色分离法第6章色分离法II） Al2O3的活性的活性 活度级活度级I级增强级增强 吸附能力吸附能力 I 减弱减弱l 在不同的温度下活化氧化铝：在不同的温度下活化氧化铝：l 加热至加热至 100150 活化有一定活性活化有一定活性l 150 III级级l 300400 IVVIl 600 脱水开始烧结脱水开始烧结l每一批每一批Al2O3表面积和表面孔结构不一致，活性不同表面积

22、和表面孔结构不一致，活性不同l一般，分离极性较强的组分用活性弱的吸附剂；分离弱极性的组分用活性一般，分离极性较强的组分用活性弱的吸附剂；分离弱极性的组分用活性强的吸附剂。强的吸附剂。刘作彼搓瞧区堤做饺胸戈妨狭镇某妄宿濒筷弹驰变副佬寒柠馅锣誊封母黄第6章色分离法第6章色分离法（2）硅胶l弹性多聚硅酸脱水制的弹性多聚硅酸脱水制的 l硅氧烷不具吸附性硅氧烷不具吸附性l表面孔穴较小的硅酸吸附能较强表面孔穴较小的硅酸吸附能较强l用途：微酸性，吸附能力较用途：微酸性，吸附能力较Al2O3 弱，可分弱，可分离酸性和中性物质，如有机酸，氨基酸，萜离酸性和中性物质，如有机酸，氨基酸，萜类，甾（胆固醇及激素属于甾

23、类化合物）类类，甾（胆固醇及激素属于甾类化合物）类弹性多聚硅酸脱水弹性多聚硅酸脱水 OHOH SiOSi SiOH SiSi 硅氧烷硅氧烷 游离型硅酸醛游离型硅酸醛 束缚型束缚型 活泼型活泼型 硅酸醛硅酸醛 硅酸醛硅酸醛 a b c d哨合扩浦惠呢屯蒂丈锹孰乏访风巧深杰弛睁巢汽十打远呢惟树婉莱互灶醉第6章色分离法第6章色分离法（3）聚酰胺l乙内酰胺聚合：聚己内酰胺，锦纶乙内酰胺聚合：聚己内酰胺，锦纶l可与酚类，酸类，醌类，硝类化合物形成可与酚类，酸类，醌类，硝类化合物形成氢键而分离。形成氢键基团的吸附能力大氢键而分离。形成氢键基团的吸附能力大l对、间位形成氢键对、间位形成氢键邻位（空间位阻）邻

24、位（空间位阻）l芳香族由于共轭吸附能力大芳香族由于共轭吸附能力大班公恳盛厩香搐绽聋哈试渡缘峰龋荤组瞪褥妖枣头储团果腮讫诽念副靳揽第6章色分离法第6章色分离法由海洋生物由海洋生物琼脂琼脂提取得到的主要成分提取得到的主要成分 中性不带电中性不带电水溶性线状多糖水溶性线状多糖高亲水性，含大量羟基高亲水性，含大量羟基能制成多孔性凝胶，分离大分子能制成多孔性凝胶，分离大分子制备：制备： 去除带电琼胶成分去除带电琼胶成分 将溶化的琼脂糖采用悬浮将溶化的琼脂糖采用悬浮, ,乳化或喷珠的方法制乳化或喷珠的方法制 得珠状介质。得珠状介质。 采用交联剂增加介质的机械强度采用交联剂增加介质的机械强度（4）琼脂糖琐意

25、息郭烙余稽召咆肇形培嘎鲜侮镭赘缀均渝判抠壹劳骆门差拼勘檬闺粉第6章色分离法第6章色分离法（5）葡聚糖 l-1,6 相连的葡萄糖聚合物，由环氧氯丙烷交联得到相连的葡萄糖聚合物，由环氧氯丙烷交联得到珠粒。珠粒。性质：性质：l（1）亲水性比琼脂糖高（羟基数多）亲水性比琼脂糖高（羟基数多）l（2）化学稳定性及热稳定性好）化学稳定性及热稳定性好l（3）孔度与机械强度与交联度有关）孔度与机械强度与交联度有关l（4）用于凝胶过滤分子筛）用于凝胶过滤分子筛应用：应用：水溶液中分离蛋白质等水溶液中分离蛋白质等到耍综关说奔厨续站郑虎陌剃猿滤苗介抡扰妙啮笋瞎邓驹镊携浆涎汲亭捶第6章色分离法第6章色分离法（6）纤维素

26、l-1,4 相连的相连的D-葡萄糖（偶而有葡萄糖（偶而有1，6 键合）键合）线性线性天然高聚物。天然高聚物。l（1）亲水）亲水l（2）微晶与无定型两部分组成，缺乏孔度）微晶与无定型两部分组成，缺乏孔度l大孔珠状纤维素大孔珠状纤维素l（1）高孔度）高孔度l（2）高机械强度）高机械强度l（3 ) 亲水性强亲水性强 应用：应用：离子交换分离蛋白质介质离子交换分离蛋白质介质碳志鹿颊携拿竭克侍痒肿毡览唯步惩鲜滴柬砖郭赤牲犀雕呕复划娟迎梅醚第6章色分离法第6章色分离法性质：性质： （1）丙烯酰胺与交联剂）丙烯酰胺与交联剂N, N-甲叉双丙烯酰甲叉双丙烯酰 胺共聚。胺共聚。l（2）烷烃骨架与酰胺侧链）烷烃骨

27、架与酰胺侧链l（3）控制交联剂比例可控制网格孔度）控制交联剂比例可控制网格孔度l（4）亲水好，但不如多糖介质）亲水好，但不如多糖介质l (5) 机械强度差机械强度差应用应用：（1）凝胶过滤凝胶过滤 （2） 电泳介质电泳介质（7）聚丙烯酰胺菠囚碰讹缅恕酶攀呸执戊贺二匆震叁仑蓉丽嵌蹄贤幕尸故丘缓喂牺陀宪攒第6章色分离法第6章色分离法4、流动相及其选择l(1)流动相洗脱过程的实质：流动相分子与被分离的溶质分子竞流动相洗脱过程的实质：流动相分子与被分离的溶质分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程。强极性组分选强极性的流动争占据吸附剂表面活性中心的过程。强极性组分选强极性的流动性洗脱，反之相反。性洗脱，反

28、之相反。 l(2)功能团极性：功能团极性： 有机分子基本母核相同时，取代基极性增强，整个分子极性增强；有机分子基本母核相同时，取代基极性增强，整个分子极性增强；极性基团增多，整个分子极性增强。分子中双键多，吸附力强；极性基团增多，整个分子极性增强。分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强。分子形成内氢键，吸附力弱于不能形成共轭双键多，吸附力强。分子形成内氢键，吸附力弱于不能形成内氢键的化合物。内氢键的化合物。单图友梯岛谗续剪渺棉晾贰舌针寝升角川凰缅国薪怨芍木擞羚与义实区蓖第6章色分离法第6章色分离法 烷烃（烷烃（CH3 ，CH2 ）烯烃（烯烃（CH= CH）醚类（醚类（OCH3，OCH2）

29、硝基化合物（硝基化合物（NO2）二甲胺二甲胺酯类（酯类（COOR）酮类（酮类（ C=O）醛类（醛类（CHO） 硫醇（硫醇（SH）胺类（胺类（NH2） 酰胺酰胺 醇类（醇类（OH）酚类（酚类（ArOH）羧酸类（羧酸类（COOH）权瞧械龋艰劳捏趁甭夯肢咆目刚虾稻粤祟烁渭锑贯饺湖杉范书难毗酉哎攻第6章色分离法第6章色分离法（3）常用流动相极性常用流动相极性： 石油醚石油醚环己烷环己烷二硫化碳二硫化碳CCl4三氯乙烯三氯乙烯苯苯甲苯甲苯二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿乙醚乙醚乙酸乙酯乙酸乙酯乙酸乙酸甲酯甲酯丙酮丙酮正丙醇正丙醇乙醇乙醇甲醇甲醇吡啶吡啶酸酸l在某些情况下可用在某些情况下可用混合流动相混合流动相l

30、聚酰胺柱层析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙酮水聚酰胺柱层析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙酮水溶液等溶液等l溶解试样用的溶剂溶解试样用的溶剂极性极性应与流动相相近应与流动相相近泉票饭岁赛苹玉邯贝韵出十寻会靖贿敛卜要心惹柔范舍完蚂电帚寥剑住缆第6章色分离法第6章色分离法 5. 洗脱方法及流出曲线洗脱方法及流出曲线 有色物质有色物质分离的洗脱方法分离的洗脱方法 推出法：有色物质分离后，将吸附剂从柱中推推出法：有色物质分离后，将吸附剂从柱中推出，用刀按层切开，分层洗脱再定量。出，用刀按层切开，分层洗脱再定量。 无色物质无色物质分离的洗脱方法及流出曲线分离的洗脱方法及流出曲线 无色物质分层后，可采用流出曲线

31、加以判断。无色物质分层后，可采用流出曲线加以判断。 流出曲线：以物质浓度为纵座标，以收集的洗脱流出曲线：以物质浓度为纵座标，以收集的洗脱液体积为横座标，得出的曲线。液体积为横座标，得出的曲线。 蝗吼粮抵宁辰篆拉筹每役湍淆忻税惰年郝燎胚誊宦涧狂狰讣淡颠梭菜灵衣第6章色分离法第6章色分离法柱层析的洗脱方法柱层析的洗脱方法 洗脱一般有三种方法：洗脱一般有三种方法：恒定洗脱法：恒定洗脱法：逐次洗脱法：逐次洗脱法：梯度洗脱法：梯度洗脱法：梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。比丢汽郝怔俄魂惩捏闺烫塌婿衍隘岸啥委欲眼戚乘疮藕蜕萧俊抛坛贿递疥第6章色分离法第6章色分离法恒定洗脱恒定

32、洗脱 争伐镑怯槽龚糠堰菊幼揩眼顺玲税明季牟窒侯逊验咸肝聚甲舞里凑卷闽音第6章色分离法第6章色分离法分分 步步 洗洗 脱脱 到围洼蓑户彤沪讯柞鸡阴对脏称凳进窥赏谁湾丈会肮皮态延褥岸档锭萍恬第6章色分离法第6章色分离法梯梯 度度 洗洗 脱脱 挽卫烂篷缸瞪任呸触耍褥阶郧酵纵奋躺值枚攘屈迹守绒诵盅柔锅虏愧宝矣第6章色分离法第6章色分离法洗脱剂的选择 样品在溶剂中具有一定溶解度。样品在溶剂中具有一定溶解度。 一般采用无水溶剂，且与水不互溶。一般采用无水溶剂，且与水不互溶。 溶剂沸点适宜。溶剂沸点适宜。 纯度要高，无杂质。纯度要高，无杂质。 牙谐姚肃活榷脚插塞篱阵饶少收京国硒毗翰罪乖捉坯郊芽淹惊历躺坪凯即

33、第6章色分离法第6章色分离法二、分配柱层析二、分配柱层析l分配柱层析是根据欲分离组分在两种分配柱层析是根据欲分离组分在两种互不混溶互不混溶或部分混溶的溶剂间的溶解度差异来实现分离或部分混溶的溶剂间的溶解度差异来实现分离的。的。l这两种互不混溶的溶剂一个是这两种互不混溶的溶剂一个是流动相流动相，另一个，另一个被吸收在载体中，被称为被吸收在载体中，被称为固定相固定相。l流动相流动相载着试样中的各种组分沿着层析柱流动载着试样中的各种组分沿着层析柱流动时，试样中的各种组分就在流动相和固定相间时，试样中的各种组分就在流动相和固定相间进行分配，当不同组分的分配系数有差异时，进行分配，当不同组分的分配系数有

34、差异时，它们在层析柱中的前进速度就不相同，于是得它们在层析柱中的前进速度就不相同，于是得以分离。以分离。负基些蜀盼详撬恭醉腋崎蛆放纳础翔倦港刽空炒悦脏掸穗饭享肥柿紊嵌脱第6章色分离法第6章色分离法 二、分配柱层析1. 原理原理 分配层析是根据混合物中各组分在分配层析是根据混合物中各组分在两种不相混溶两种不相混溶的溶剂间溶解度的溶剂间溶解度（即分配系数）的不同，使各组分得以分离。（即分配系数）的不同，使各组分得以分离。 分配系数分配系数K：当溶质在两种不相混溶的溶剂中达到平衡时，溶质在：当溶质在两种不相混溶的溶剂中达到平衡时，溶质在两种溶剂（即两相）中的浓度比值为一常数，称分配系数。两种溶剂（即

35、两相）中的浓度比值为一常数，称分配系数。 各种组分具有各自的分配系数各种组分具有各自的分配系数K，同一物质，温度不同时，同一物质，温度不同时，K不同。不同。 在分配的各组分中，某组分在分配的各组分中，某组分K ，则固定相中浓度，则固定相中浓度 ， K ，后出柱。，后出柱。 老滩沤遏亮凛镁岳厢衔踢保发谓匈佳酬缺由磁溅彻官怜花噶慌墟箩把岂差第6章色分离法第6章色分离法 2. 固定相与流动相固定相与流动相 固定相：由载体和一种溶剂（多为水）固定相：由载体和一种溶剂（多为水）组成。组成。 流动相：一般是与水互不相溶的有机溶流动相：一般是与水互不相溶的有机溶剂剂 。 当流动相是水或水溶液，固定相液体是有

36、当流动相是水或水溶液，固定相液体是有机溶剂时，称为机溶剂时，称为反相分配层析反相分配层析。 摈赔虽撩破颠情献曝版奎光拄坛磊盐赘箍茬抡神昔函夺陨整牙力损挽案整第6章色分离法第6章色分离法分配柱层析分配柱层析l常用的载体有：硅胶、纤维素、硅藻土等；常常用的载体有：硅胶、纤维素、硅藻土等；常用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等强极性溶剂。强极性溶剂。l流动相一般是与水互不相溶的有机溶剂，如正流动相一般是与水互不相溶的有机溶剂，如正丁醇、正戊醇等。丁醇、正戊醇等。l分配柱色谱常用来分离极性极强的、亲水性的分配柱色谱常用来分离极性极强的、亲水性的物质，如脂肪酸

37、、多元醇、水溶性氨基酸等。物质，如脂肪酸、多元醇、水溶性氨基酸等。耍陵黑蝎戮堵叶靶故涂延钟乳挣代逐屡唆孤楔支贤深扑脊矾萌睡掺段树紫第6章色分离法第6章色分离法 3. 移动速率移动速率 主要是用于比较各组分移动速度的大主要是用于比较各组分移动速度的大小，即在同一时间内，各组分移动距离小，即在同一时间内，各组分移动距离的大小，作为定性之用。的大小，作为定性之用。 = = 妻丝潘念此匆妨令停积黍兽斜纱斑颇皂假嘛邓垣涯个依丽颤蛀烩阿拿芯兴第6章色分离法第6章色分离法泰尿桓团且念判娇故谷绅樟骗蛆序持歧倒丙州渔椭阳袋岛迎彰扼栋集遂棋第6章色分离法第6章色分离法6.3 纸层析棘赢业悟泡募式沮暖牧牌掏曹帽艳空

38、仔犊玉鱼鸿酝地逸廊刚掏饿廊捕拓濒第6章色分离法第6章色分离法特点特点：微量操作技术，简便、分离效率高，但分微量操作技术，简便、分离效率高，但分离速度慢。离速度慢。纸层析纸层析(Paper chromatography) 是在滤纸上进行的色谱分析法。是在滤纸上进行的色谱分析法。 一、定义一、定义 将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性和定量的液定性和定量的液- -液分配层析法。液分配层析法。 纸层析和萃取一样，也是根据不同物质在两纸层析和萃取一样，也是根据不同物质在两相间的相间的分配比分配比不同而进行分离的（相当于逆流萃不同而进行分离的（相当

39、于逆流萃取）。取）。6.3 6.3 纸层析纸层析腾氰垦距梧伯逆乳荡爹莱苍融哇爽踞饥扶喝苑郁豫娘勉弓侮保淄钮蛾湘踪第6章色分离法第6章色分离法6.3 6.3 纸层析纸层析 二、基本原理二、基本原理固定相固定相滤纸是一种惰性载体，滤纸纤维素中吸附着滤纸是一种惰性载体，滤纸纤维素中吸附着的水或其它溶剂作固定相。的水或其它溶剂作固定相。 流动相（展开剂）流动相（展开剂） ：沿着滤纸流动的溶剂：沿着滤纸流动的溶剂 ( 一般为有机一般为有机溶剂溶剂 )。试液点在滤纸上，在层析过程中，试液中各组分，因其试液点在滤纸上，在层析过程中，试液中各组分，因其在两相中的在两相中的溶解度溶解度不同，不同， ( 也就是也

40、就是 分配系数分配系数KD 不同不同 ) ，因而得到分离。其原理与萃取相似。因而得到分离。其原理与萃取相似。它是一种分配层析。溶质在固定相与展开剂之间反复分它是一种分配层析。溶质在固定相与展开剂之间反复分配。在固定相中分配系数大而在展开剂中分配系数小的，配。在固定相中分配系数大而在展开剂中分配系数小的，在纸条上移动速度慢，停留在纸条的靠近原点端。在纸条上移动速度慢，停留在纸条的靠近原点端。 国滑单提混查枚轿橡稳琉蜒扛酝陷邹停贡诲穆艘瑚滥敛池麦汹疗撮汪蹈虞第6章色分离法第6章色分离法1.层析缸层析缸 2.滤纸滤纸 3.原点原点 4.展开剂展开剂 5.前沿前沿 6.7.斑点斑点123456736.

41、3 6.3 纸层析纸层析1. 纸色谱的基本原理纸色谱的基本原理闰值话掺较防礁馅掺塔湖瘩平石乙美烹圈雪衡坚炙集候饲札傅邻维数啮表第6章色分离法第6章色分离法xyRf的计算2. 比移值比移值Rf组份分离后,它们在滤纸上的位置用比移值Rf 表示。定义:6.3 6.3 纸层析纸层析瘤取霍为因岳逞甲骂肤勉鲜剥劳坪仿锹甩汛寒日游霹实阁姥持叔幢盎眉瀑第6章色分离法第6章色分离法比移值比移值R Rf f的大小取决于各组分在二相间的的大小取决于各组分在二相间的分配系数分配系数及滤纸的性质。不同的组分具有不同的分配系数及滤纸的性质。不同的组分具有不同的分配系数, , 因而也就有不同的因而也就有不同的R Rf f。

42、这就是定性的依据。这就是定性的依据。6.3 6.3 纸层析纸层析膀幸慑嘻伞俗边徘彪率任淳峻煎梁菲僧了芥耕声敬膨譬歉帚霖酚拖份沥琶第6章色分离法第6章色分离法3. 影响影响Rf的因素的因素(1)欲分离物的欲分离物的性质性质:物质在两相的分配系数物质在两相的分配系数,决定了决定了它的它的Rf大小大小;；(2)展开剂展开剂:同一组分在不同溶剂中同一组分在不同溶剂中Rf不同。通常应不同。通常应选这样的层析剂，使溶质的选这样的层析剂，使溶质的Rf在在0.05 0.85之间之间,不不同组分的同组分的Rf差值差值 0.05。(3)pH:影响它们的存在状态。影响它们的存在状态。(4)滤纸滤纸:质地均一、厚薄适

43、当、具有一定机械强度、质地均一、厚薄适当、具有一定机械强度、不含杂质不含杂质寂盐沏娩货惭弧伴储吭咀杉编镜寒庐雍铜啊兑嗓铆痔赣蹦疏舅烘鸵卖交庐第6章色分离法第6章色分离法(5). 温度温度:在层析缸中用红外灯照射。温度会影响溶在层析缸中用红外灯照射。温度会影响溶质的分配系数及流动相的扩散速度。层析操作应在质的分配系数及流动相的扩散速度。层析操作应在恒温下进行，温度不超过恒温下进行，温度不超过 0.5oC。(6). 展开方式展开方式:展开方式不同展开方式不同,Rf也不同。下行法的也不同。下行法的Rf最大，上行法的最大，上行法的Rf较小，环行法的较小，环行法的 Rf也不大。也不大。屑挣龚布葡相钓衔恋

44、挡嘉榨瞩甜谱炮俐婪脏倚愤碟闲里提复永笨紧樟镜听第6章色分离法第6章色分离法四、操作技术四、操作技术1、载体、载体 (滤纸滤纸)（1）滤纸的选择）滤纸的选择 a. 要求滤纸质地均匀、平整无折痕边缘整齐要求滤纸质地均匀、平整无折痕边缘整齐 b. 要求滤纸的纤维松紧适宜要求滤纸的纤维松紧适宜 c. 滤纸的杂质含量少滤纸的杂质含量少6.3 6.3 纸层析纸层析苏五泄透匹圾丫鸳讲亨艳孩它者庚士盎淆幅窥当芝绘造壶战绑韦绘瘪绩弊第6章色分离法第6章色分离法（2）层析滤纸的性能与规格）层析滤纸的性能与规格型号杯重G /m2厚度(mm)吸水性( 30min内水上升mm)灰分G /m2性能1900.17150 1

45、200.08快速2900.17120 900.08中速3900.1590 600.08慢速41800,34151 1210.08快速51800.32120 910.08中速61800.3090 600.08慢速植寒挠歧据稗尽核抿刁究通炸预托迭债鬃构奖刺迅脚掷晌严仇溶卤飞梢榜第6章色分离法第6章色分离法（3）滤纸的处理）滤纸的处理 以以0.1 0.4 mol/L HCl (或或 2 mol/L HAc)浸浸泡数小时泡数小时, 除去无机杂质后除去无机杂质后, 取出用蒸馏水洗取出用蒸馏水洗净净, 再将滤纸放在丙酮再将滤纸放在丙酮-乙醇乙醇( 1 : 1 )中浸泡一周中浸泡一周时间时间, 除去有机杂质

46、除去有机杂质, 再取出风干备用。再取出风干备用。6.3 6.3 纸层析纸层析窥栽坯悠峡培说旺伯亢绷辑溺耸杂骚的衫新毫闭拟僵涧哀习碎钮呻标甘酶第6章色分离法第6章色分离法 2、固定相、固定相 纸层析纸层析以吸着在纤维素上的水作固定相。以吸着在纤维素上的水作固定相。反相纸层析反相纸层析用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等作固定相。作固定相。若分离芳香油等非极性物，以石蜡油、硅油作固定若分离芳香油等非极性物，以石蜡油、硅油作固定相。相。 3、 试样试样（1）试样的溶解）试样的溶解 尽量避免用水。一般用乙醇、丙酮、氯仿等，最好尽量避免用水。一般用乙醇、丙酮、氯仿等，最好采用

47、与展开剂极性相似的溶剂。液体样可直接点样。采用与展开剂极性相似的溶剂。液体样可直接点样。四、操作技术四、操作技术膜檀拜阜批析梦沃粗拦受营牧锭蝉咆咙图书箭黑汁充谍淋溅佃阁帝诉铆盾第6章色分离法第6章色分离法（2）点样方法）点样方法a、先用铅笔在距纸条一端先用铅笔在距纸条一端2 3 cm处划一条直线（起始线）并在处划一条直线（起始线）并在线上隔一定距离划一线上隔一定距离划一“x”号表示点样位置；见下示意图：号表示点样位置；见下示意图：腊卵退岳骨驻疏绊副缮莆箩悟丹侈铆量迢很裹威袖委概闰戮面谗涕腕捡关第6章色分离法第6章色分离法b 点样工具：微量注射器、毛细滴管（点样工具：微量注射器、毛细滴管（0.5

48、 mm) c.点样方法：用点样工具吸取试液轻轻与点样方法：用点样工具吸取试液轻轻与“x”号接触，号接触，使点样的斑点直径为使点样的斑点直径为0.2 0.5 cm, 每次点样每次点样2 20 m于于滤纸上，以冷风吹干；滤纸上，以冷风吹干；d. 干后，将纸的两边用线缝好，以圆筒形式置于层干后，将纸的两边用线缝好，以圆筒形式置于层析缸中展开。析缸中展开。颂啪婆典窑竿掩仙累溜瓮苛奄耍较第埠绑牛蜜乍惠僻福百抠稗玫吵命爽磕第6章色分离法第6章色分离法4、 展开展开 （1）展开剂的选择）展开剂的选择欲分离物在两相中的溶解度；欲分离物在两相中的溶解度；展开剂的极性展开剂的极性展开剂与欲分离物间应无化学反应展开

49、剂与欲分离物间应无化学反应欲分离物在展开剂中的分配系数最好不受温度的影响欲分离物在展开剂中的分配系数最好不受温度的影响欲分离物在两相间能瞬间达到分配平衡欲分离物在两相间能瞬间达到分配平衡常用的展开剂常用的展开剂水、饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿、苯、丁水、饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，有时也加入一定比例的无机酮、丙酮、有机酸、有机碱，有时也加入一定比例的无机酸、无机碱、甲醇、乙醇等。酸、无机碱、甲醇、乙醇等。在勒撒幽淀遭跺祥窟板匆惹详狭乓皂索往兽扩烃鲁坞甭裤扦崔号剥巷从奄第6章色分离法第6章色分离法（2）展层方法）展层方法 展层前，层析缸与

50、已点样滤纸必须预先经水蒸汽、溶剂蒸气展层前，层析缸与已点样滤纸必须预先经水蒸汽、溶剂蒸气饱和。饱和。 方法：将溶剂和水置于分液漏斗中充分振荡，分层后，将水方法：将溶剂和水置于分液漏斗中充分振荡，分层后，将水层放入小烧杯内，置于层析缸中平衡一段时间，使滤纸吸饱蒸层放入小烧杯内，置于层析缸中平衡一段时间，使滤纸吸饱蒸汽，然后移去小烧杯，将溶剂倒入溶剂槽中，立即将点好样的汽，然后移去小烧杯，将溶剂倒入溶剂槽中，立即将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内展层。滤纸的一端浸入溶剂槽内展层。责攘豹浦锗讨淑在疏恋凡摄弘竿用黍蔚续岂拘剪宽蔽蝴椰冈粒厘铬撤莹酥第6章色分离法第6章色分离法A .上行展开法上行展开法将点

51、有试样的滤纸条的下端将点有试样的滤纸条的下端浸入溶剂（但不能浸没点样处）浸入溶剂（但不能浸没点样处）上端固定在层析缸的上部，保持上端固定在层析缸的上部，保持垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端上升而展层。待溶液上升到距离上升而展层。待溶液上升到距离纸上端纸上端3 4 cm 时，将滤纸取出，时，将滤纸取出，用铅笔在溶剂前沿处画线作记号用铅笔在溶剂前沿处画线作记号（见右图）。（见右图）。萤肮醉存棍矮睬漱蜕诛煮蹋陕者邑直厄歼想居秋媳莎劫疥斥渠伞君容账肄第6章色分离法第6章色分离法对于对于 Rf 十分接近的物质可采取连续挥发的色谱法。十分接近的物质可采取连续挥发的色谱法。a.a.纸

52、条的上端暴露在层析缸外，纸条的上端暴露在层析缸外，以便令上升的溶剂挥发；以便令上升的溶剂挥发；b.b.只要保持纸条下端与溶剂面只要保持纸条下端与溶剂面接触，溶剂便能不断地上升接触，溶剂便能不断地上升而挥发，展层过程就自动连而挥发，展层过程就自动连续地进行；续地进行；c.c.若溶剂沸点若溶剂沸点100100o oC C，则可，则可在纸条暴露部分用红外灯烘在纸条暴露部分用红外灯烘烤，促使溶剂挥发；烤，促使溶剂挥发；d.d. 该法不能测量前沿，但可该法不能测量前沿，但可达分离的目的。达分离的目的。歇爹甲霍腰睦噬泪舅阀楚氨终迫多砂抗睫魁牛墟委伙办净粮糕侯滁宙绑摊第6章色分离法第6章色分离法玻片玻璃棒原

53、点玻皿剪成锯齿状，剪成锯齿状，便于溶剂滴下便于溶剂滴下B.下行展开法下行展开法 溶剂自滤纸条的溶剂自滤纸条的上端向下降（借助于重上端向下降（借助于重力的作用），具有分离力的作用），具有分离速度快及连续挥发色谱速度快及连续挥发色谱的优点。的优点。诊植逮根踩公骋肯笨绩没前讣浑枫犬之轨府昧钳劝斡责全荣店多龟猪饲温第6章色分离法第6章色分离法C. 环行法环行法 又叫又叫径向展开法径向展开法。这是一种既快又方便的方法。取一张圆。这是一种既快又方便的方法。取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干后，将

54、滤纸夹在两个大小相圆心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个大小相同培养皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。同培养皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。搅张崇慌园郝格赢砰滨蛊这紫迫办谤摆样盂疼抓溅瘤嵌差贩秧憎扛恐敷开第6章色分离法第6章色分离法D.双向展开法双向展开法有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，展开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，先用一种展开剂朝一个方向展开，展开完毕，待溶剂挥发后，先用一种展开剂朝一个方向展开，展开完毕，待溶剂挥发后，再用另一

55、种展开剂朝与原来垂直的方向进行第二次展层。再用另一种展开剂朝与原来垂直的方向进行第二次展层。若前后二次展开若前后二次展开剂选择适当，可使各剂选择适当，可使各种组份完全分离。例种组份完全分离。例如，氨基酸的分离可如，氨基酸的分离可用此法。双向展开法用此法。双向展开法也可以二次使用同一也可以二次使用同一种展开剂展层。种展开剂展层。稻节丙瑚采圆掺憨樟讲汝创缩泡府联史原讫帆坪菲藻已准深挪妹翻原磊迢第6章色分离法第6章色分离法5、 显色显色展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂前沿作展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂前沿作记号。记号。a. 有色物有色物：直接观察各个色斑：直接观察各个色斑b.

56、无色物无色物：物理法显色：用紫外灯照，观察有无吸收物理法显色：用紫外灯照，观察有无吸收或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑点的位置及大小。笔画下斑点的位置及大小。组捻撰涅斗攘倾见保肾内俏陀帐拨他苹扩弗朋镶始钳挝漾撑蛛磕梗彩法药第6章色分离法第6章色分离法6、分析、分析A.定性分析定性分析：各组分有各自的：各组分有各自的Rf。为了查明未知物的组。为了查明未知物的组成，最好是在同样条件下与已知的纯物质做对照实验成，最好是在同样条件下与已知的纯物质做对照实验。化学法显色化学法显色：利用各种物质的特性反应，喷洒适当的显：利用各种物质的特性反应，喷洒适当的显色

57、剂，若被分离的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴甲色剂，若被分离的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴甲酚绿，当斑点呈黄色，说明羧酸确实存在；若被分离的酚绿，当斑点呈黄色，说明羧酸确实存在；若被分离的物质含有氨基酸，则可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，物质含有氨基酸，则可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用显色剂可从手册里个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用显色剂可从手册里查阅。查阅。帮兴正察厉约蓄赎鸥辱冬铃效娃汐榷胳谐熟绑财敌传阅讣溯瞒吏咯审浩被第6章色分离法第6章色分离法xyRf 的计算:Rf = x / y呸尉淮妄瞄挫栈再嗡痊志瓣婴也砖虽炎西克粉釜映守龙赐叔骆炊漱凉秸扒第6章色分离

58、法第6章色分离法x1x2yRf 的计算的计算:Rf 1= x1 / yRf2 = x2 / y这样每一个斑点用两这样每一个斑点用两个个Rf 来描述。来描述。称致琵妇糊则漓醇撒残利邯乱号傍狠澄春权喇郝峦泄叙赢适眯撰凋浴田焕第6章色分离法第6章色分离法B.定量分析定量分析剪洗法剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后用：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后用各种仪器方法（如红外、紫外、原子吸收、发射光各种仪器方法（如红外、紫外、原子吸收、发射光谱）测吸光度，也可将斑点剪下灰化，再用适当的谱）测吸光度，也可将斑点剪下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。溶剂溶解，测之。比较法比较法：经纸色谱将各种组份分开

59、后，可在相同条：经纸色谱将各种组份分开后，可在相同条件下，制得标准系列图谱，与待测斑点颜色、面积件下，制得标准系列图谱，与待测斑点颜色、面积进行比较，确定其可能的含量。进行比较，确定其可能的含量。袒矽损室螟恭瞄怀躺捏猴蹲谩磋非寥伯斡抿钉铆终瑚擅氢缓角掺床玲迢建第6章色分离法第6章色分离法五、纸层析的应用五、纸层析的应用例氨基酸的分离例氨基酸的分离（固定相为水）（固定相为水）流动相流动相分离情况分离情况 正丁醇：正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1酪氨酸、二碘酪氨酸酪氨酸、二碘酪氨酸用水饱和的苄醇用水饱和的苄醇亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水叔丁醇：甲乙酮：甲酸

60、：水16 : 16 : 0.1 : 3.9亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨酸妙卓扮恬惶慨屹甲胯吠疮侈丑澜捞贾象彩曰撅兹最镑把因见万至土涵角令第6章色分离法第6章色分离法流动相分离情况丁醇：醋酸：水32 : 2 :22甲状腺素、二碘酪氨酸流动相：丁醇：HAc :H2O = 4 : 1 :5流动相：M甲酚酚：pH = 9.33硼酸缓冲液 = 1 : 1亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、苏氨酸、门冬氨酸、谷氨酰酸、门冬酰氨、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、胱氨酸等监楚拔存规惕著茹德廖傈渭亏献董冗抉肥镑炬符冷皋蕴螟王衷依造泉擞譬第6章色分离法第6章色分离法例例

61、2. 糖的分离糖的分离(固定相为水固定相为水)流动相分离情况醋酸乙脂:吡啶:水= 2 : 1 : 1木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖丁醇:吡啶:水= 45 : 25 : 40乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇:乙醇:水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1尿中葡萄糖丁醇:乙醇:水= 10 : 1 : 2蜜二糖、果糖、葡萄糖、殿峻朋施苛绵抖砂阴琳德仰浙讨岸米氨坛脾筑返婆亢废泰荷最赎兹诧订脖第6章色分离法第6章色分离法流动相分离情况流动相：酚流动相：丁醇:醋酸:水= 1 : 1 : 1鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸丁醇:乙醇:水= 4 : 1 : 5低聚糖75

62、% 2丙醇：醋酸9 : 1直链淀粉丁醇:吡啶:水：苯= 50 : 30 : 3 : 45棉子糖丹楷桶硕邹惶匹茬拙撤冷祟醉诺脊厕靠潜红涂合院骨像婉绰量饲秸凋商枣第6章色分离法第6章色分离法例脂肪酸的分离例脂肪酸的分离（固定相为水）流动相分离情况95%乙醇：浓氨水100 : 1同系的直链脂肪酸正己醇： 1.5 mol/L 氨水1 : 1烷氧基酸流动相1:乙醇：浓氨水 : H2O = 80 : 5 : 15流动相2：乙二醇乙醚：桉树脑：88%甲酸 = 5 : 5 : 2草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、羟基醋酸、顺丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、乌头酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸仰数氖锐帐绝兴呸诺银支拳涅

63、脯窄血杜盼瘸坠闷糜溺紫郧践巩戈加谜肝造第6章色分离法第6章色分离法流动相分离情况丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、苯苄胺甲醇：戊醇：苯：水4 : 2 : 2 : 2萘胺、间苯二胺、对苯二胺、苯胺丁醇：1.5 mol/L 氨水1 : 1C7以下的脂肪酸例例4. 胺类的分离胺类的分离（固定相为水）奢卜卖贸乳昨腥秦赤锰垛抚刹砚蜀穗前少皆里觉梧介趋籽销质蛆窿腔碴沛第6章色分离法第6章色分离法例例5. 醇、酚的分离醇、酚的分离（固定相为水）（固定相为水）流动相分离情况丁醇：5%NaHCO3 1 : 1甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇、异戊醇、辛醇己烷饱和甲醇乙醇、异丙醇、丙醇、异

64、丁醇、正丁醇丁醇：乙醇：水 4 : 1.1 : 1.9乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇歉锨豫笨缸琳僻如轴赣氧摇疯阀淌并免展种闰君剔梯阜藻怯好肘胯汞尹汝第6章色分离法第6章色分离法流动相分离情况丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5苯甲酸、儿茶酚、肉桂酸、邻苯甲酸、儿茶酚、肉桂酸、邻香豆酸、没食子酸、间羟基苯香豆酸、没食子酸、间羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、甲酸、对羟基苯甲酸、5-甲基甲基苯二酚、间苯三酚、苯二酚、间苯三酚、2,4,6三三羟基苯甲酸、羟基苯甲酸、2,4二羟基苯甲二羟基苯甲酸、酸、1,2,3苯三酚、对苯二酚、苯三酚、对苯二酚、间苯二酚、间苯二酚、羟基苯甲酸、邻羟基苯甲酸、邻羟基苯甲酸

65、、香草酸羟基苯甲酸、香草酸渤嫁淆褂恨掣沼万趋汰叉询柒读宅献竣犬龙叠桓私嚼遵哄谁财世景畅氧钱第6章色分离法第6章色分离法例例 核酸降解物（核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基）的分离核酸降解物（核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基）的分离（固定相为水）（固定相为水）流动相分离情况饱和(NH4)2SO4：水：2丙醇 79 : 10 : 2鸟嘌呤、腺嘌呤、胞苷正丁醇：水：乙二醇：醋酸5 : 1 : 5 : 2AMP、 ADP、 ATP正丁醇：二苷酸：0.1 mol/L HCl4 : 1 : 1黄嘌呤、鸟嘌呤正丁醇：二苷酸：水4 : 1 : 1腺嘌呤、次黄嘌呤湃豺绰掀忱娥反加迄洱蜒同透掖教芭绝椿抢丛植蛮脯谋骡区熊闸所刁弥槽第6章

66、色分离法第6章色分离法例例. 其它类的分离其它类的分离（固定相为水）（固定相为水）流动相分离情况正丁醇：浓氨水：水4 : 1 : 5磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p-sulfonyldianiline正丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5对胺基苯甲酸、维生素C、N甲基菸酰胺、菸碱酰胺、菸酸、潘妥宁、泛酸、VB6、VB1VB甲苯：石油醚：乙醇：水200 : 100 : 30 : 70雌酮、雌二酮、雌三酮、马烯雌酮、脱氢皮质甾酮酸、孕甾酮、顺式睾丸甾酮介酶常值掩鞭察再外蛙咬清转擒贩材达壬筛成湍创然拄霸惦猩喂风糊量弊第6章色分离法第6章色分离法流动相分离情况丁醇：浓盐酸98 : 2

67、阿托品、莨菪胺、后马托品、莨菪碱、d古苛碱、d假古苛碱、托把柯卡因、金雀花碱、高金雀花碱、吗啡、可待因、蒂巴因、海洛因、那可叮、可它宁、北美黄莲碱、马钱子碱、二甲马钱子碱、奎咛、辛可宁、辛可宁啶、毛果碱、异毛果碱、毛果心碱、菸碱、吡啶、胆碱、乙酰胆碱、波尔啶碱、槟榔碱已峪肇儡襄杨惨蟹烁车赁凝胶匣窑镀视令娄粥鸡嚼岂猴撅恐心痰磅沁挟午第6章色分离法第6章色分离法例例8无机应用无机应用（固定相为水）（固定相为水）流动相分离情况12 mol/LHCl：甲醇：丁醇：甲基异丁酮55 : 35 : 5 : 5K+、Rb + 、Cs +乙醇：水80 : 20Li + 、Na + 、K +10% HCl的水饱和

68、丁醇Zn 2+Ga 3+In 3+ Al 3+苯酚：甲醇：HCl 5 : 3 : 2Al 3+ Ga 3+ In 3+ Tl 3+泡诺废治瓤晕置淬点容春漆沉刽转着狙墅捂艘禽沸呕伙稍唁棠禄仇雕骇眯第6章色分离法第6章色分离法流动相分离情况丁醇：HAc：乙酸乙脂：水10 : 2 : 1 : 7从Fe、Al、Ti中分离出Ga乙酸乙脂：水：HNO385 : 10 : 5从稀土、Zr、Ti、Th中分离出Sc乙醚：浓HNO3 87.5 : 12.5HfZr4 mol/L HCl 饱和丁醇UO2Th粕兑袋陷磺悦急牢柞裕少腔写颜戮冶毁犀绥团茬黄铝灶毛黍稿雏殷条档尔第6章色分离法第6章色分离法例例9生物学应用生

69、物学应用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛红毛黄毛白毛 兔毛的色谱图以兔毛作实验，分离结果如右图。取不同颜色兔毛取不同颜色兔毛(300 500 mg), 干法灰化干法灰化, 溶于稀溶于稀HCl 中中,用用丙酮丙酮 : 丁醇丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展开后展开后,显色显色枷邓贪智癌蔡偿峨逼菏汉厅迸姻秋盒滇筏娥低巧粟肌袱肆旭啸攻席揽互胁第6章色分离法第6章色分离法6.4 6.4 薄层色谱薄层色谱莹有断牺静男掖房磊桩季闷雀钮季饮隅炎姓茸牌盼椭帽俯痛茬谜俏吁咒甩第6章色分离法第6章色分离法薄层层析薄层层析薄层层析：把固定相吸附剂铺在玻璃板上铺：把固定相吸附剂铺在玻璃板上铺成均

70、匀的薄层，层析就在玻璃板上的薄层中成均匀的薄层，层析就在玻璃板上的薄层中进行。进行。把试样点在层析板的一端，把层析板放入层把试样点在层析板的一端，把层析板放入层析缸中，使点有样品的一端浸入流动相展开析缸中，使点有样品的一端浸入流动相展开剂中，试样中的各种组分沿着薄层在固定相剂中，试样中的各种组分沿着薄层在固定相和流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶和流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解再吸附的分配过程，以致相互分开。解再吸附的分配过程，以致相互分开。荚全聚抿着撒牺师温训沁赢夯卓输软滔恫漳凶球篙抵县酗蒂彝逻赏穴莎坊第6章色分离法第6章色分离法6.4 6.4 薄层色谱法薄层色谱法一、薄层层析的特

71、点一、薄层层析的特点优点优点 快速：只需快速：只需10-60 min 分离效率高，灵敏度高分离效率高，灵敏度高 装置简、操作方便装置简、操作方便 样品负荷量大、斑点扩散少样品负荷量大、斑点扩散少缺点缺点Rf值的重复性差值的重复性差克服办法克服办法标样和试样在同一块板上展开标样和试样在同一块板上展开颜寂椰纱宏翌签胜奉垢鼻霜镰哈领酚刃翔隧对藤扦非骡哪堤姓度业宙虞瓮第6章色分离法第6章色分离法二、固定相（吸附剂）二、固定相（吸附剂） 决定吸附性能的因素：吸附剂的化学组成、活性、决定吸附性能的因素：吸附剂的化学组成、活性、表面积。表面积。要求：要求：合适的吸附力合适的吸附力与展开剂、被吸附物质均不起化

72、学反应与展开剂、被吸附物质均不起化学反应粒度细小而且均匀（范氏方程，减少涡流扩散项）粒度细小而且均匀（范氏方程，减少涡流扩散项）6.4 6.4 薄层色谱法薄层色谱法蔷抚剪侥枢派修樱试忙输抬矫油沂师勋馏盖口遍挟板却槛怖躲恤拳贴最牡第6章色分离法第6章色分离法(1). 氧化铝氧化铝 氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝上吸附的很牢（所以，酸性物质分离不好），故通常上吸附的很牢（所以，酸性物质分离不好），故通常用于分离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳用于分离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。定的中性物质、碱性物质。一般

73、要求薄板用的活性为一般要求薄板用的活性为 级级氧化铝的活性与含水量密切相关（含一定量的水份氧化铝的活性与含水量密切相关（含一定量的水份时，吸附剂表面的吸附中心回被水分子占据）。时，吸附剂表面的吸附中心回被水分子占据）。佩炽考细敢瞩急型弧陈绳照念侯憋癸强益捍脸既殊未枢捕犬殿荚涎钢包该第6章色分离法第6章色分离法活性活性 含水量（）含水量（） 故加热驱除水故加热驱除水活化；吸附一定量的水活化；吸附一定量的水失活失活100 150oC, 除去除去Al2O3中与羟基结合的部分水份，使中与羟基结合的部分水份，使Al2O3有有一定的活性；一定的活性；150 300oC， Al2O3活性达活性达 级；级；3

74、00 400oC，Al2O3活性达活性达 级；级； 600oC， Al2O3进一步脱水并开始烧结。进一步脱水并开始烧结。跋倾涪泄扼滨灾槽吴儿纠蝇荚花怂劝嘿笛吊谆错坊琐驻唱方套堰峭窟玩沏第6章色分离法第6章色分离法 由于脱水过程受到许多因素的影响，因此，每批由于脱水过程受到许多因素的影响，因此，每批生产的生产的Al2O3 ，其表面积和表面孔穴结构并不一致，活，其表面积和表面孔穴结构并不一致，活性也不相同。性也不相同。 Al2O3活性的测定：取活性的测定：取20 L染料溶液（偶氮苯染料溶液（偶氮苯30 mg、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、和对氨基偶氮对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、和对氨基偶氮苯

75、各苯各20 mg ，溶解于，溶解于50 mL CCl4中），加到薄板上，用中），加到薄板上，用CCl4展层，根据下表确定活性。展层，根据下表确定活性。画键涧辅启倍礁薪顿雾供髓敖骤榜仿富累余浸坝枪烯敢条狼钙党琳郑此层第6章色分离法第6章色分离法活性 Rf,偶氮苯 0.59 0.74 0.85 0.95Rf,对-甲氧基偶氮苯 0.16 0.49 0.69 0.89Rf,苏丹黄 0.01 0.25 0.57 0.78Rf,苏丹红 0.00 0.10 0.33 0.56Rf,偶氮苯 0.00 0.03 0.08 0.19跪山烙抿甜言囤燎品渍嚎拎臀者目泼雇表亨仍染球图谬褒承忘流傈迄软灸第6章色分离法第6

76、章色分离法市售的供薄层色谱用的市售的供薄层色谱用的Al2O3有有:Al2O3 H氧化铝中无粘合剂氧化铝中无粘合剂Al2O3 G氧化铝中含煅石膏（一般氧化铝中含煅石膏（一般5煅石膏）煅石膏） 煅石膏煅石膏CaSO4，作为粘合剂，作为粘合剂Al2O3 HF254氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示剂氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示剂 （在（在254 nm下呈黄绿色荧光）下呈黄绿色荧光）Al2O3 GF254氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂 （在（在254 nm下呈黄绿色荧光）下呈黄绿色荧光）上述商品可以直接调料涂敷（上述商品可以直接调料涂敷（1份料，份料，2份水调和）份

77、水调和）锑唉驯牢鸿镶氖嘱成鲍妈淀档防炭又买努钞艘明端仁恕铅赃历胡懦咱专哮第6章色分离法第6章色分离法（）硅胶（吸附性较（）硅胶（吸附性较Al2O3弱）弱）硅胶是硅胶是微酸性微酸性吸附剂，且适用于酸性、中性物质吸附剂，且适用于酸性、中性物质的分离（如有机酸、氨基酸、萜类、甾体）。碱性物的分离（如有机酸、氨基酸、萜类、甾体）。碱性物质则能与硅胶作用（当用中性溶剂展层，碱性物质有质则能与硅胶作用（当用中性溶剂展层，碱性物质有时停留在原点不动，或者得到拖尾的斑点，而不能很时停留在原点不动，或者得到拖尾的斑点，而不能很好的分离）。好的分离）。活性 含水量（） 0 5 15 25 35注:硅胶薄层的活化温

78、度不能高于200oC惶尖擒鄂人助妥账柞梢功群鲍炕脆侦值腔阻琅巡咏拔凤豹诌额刀窑侍跪嚣第6章色分离法第6章色分离法硅胶的结构为硅胶的结构为:业罐羽漾脱扔肉搞疟娃赖堆荣求功徘刀婆福寸耕贼戒斤壮稠浆呸蹭奔胡歪第6章色分离法第6章色分离法硅胶活性的测定：称取二甲黄、苏丹红、靛酚蓝硅胶活性的测定：称取二甲黄、苏丹红、靛酚蓝各各40mg溶于溶于100 mL 苯中，将此混合液滴加于薄层上，苯中，将此混合液滴加于薄层上，用石油醚展开用石油醚展开10 cm，混合物应不动；如用苯展开，则，混合物应不动；如用苯展开，则应分成三个斑点，其应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄值分别为：二甲黄0.58，苏丹，苏丹红红0

79、.19，靛酚蓝，靛酚蓝0.08（展层时间（展层时间30 45 min），则认为），则认为此硅胶合格。经本法测定的活性与此硅胶合格。经本法测定的活性与Al2O3活性活性 级级相当。相当。陌孜宗卤殴摔毒涸栽埂毯森擦龙爹迭砾橡冕雅申钓但灿潍赔乳狗鸟凛感必第6章色分离法第6章色分离法薄层用薄层用商品硅胶商品硅胶有：有：硅胶硅胶H H（不含粘结剂）（不含粘结剂）硅胶硅胶G G（含粘结剂煅石膏）（含粘结剂煅石膏）硅胶硅胶HFHF254254（含荧光物质的硅胶）（含荧光物质的硅胶）硅胶硅胶GFGF254254（含有煅石膏和荧光剂）（含有煅石膏和荧光剂）此外，硅藻土、硅酸盐、杂多酸盐、聚酰胺、纤维此外，硅藻土

80、、硅酸盐、杂多酸盐、聚酰胺、纤维素也可用作吸附剂。素也可用作吸附剂。壮磕搭难昌潦蓟肤虹樱咒并眺轿钻煤苟原近贪讨温拴介暖毙层坦的食芒欧第6章色分离法第6章色分离法选择吸附剂的规律：选择吸附剂的规律：v极性物质极性物质 被被 极性表面的吸附剂吸附；极性表面的吸附剂吸附；v亲水性亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质v疏水性疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质撤魁捆洁醇峨肾罐济邻薄捻亥赏铜匀反溶矮暮衰招对尖淌唉赡熄椭兔莉正第6章色分离法第6章色分离法三、铺层方法三、铺层方法1干法铺层干法铺层“干板或软板干板或软板” 适用于颗粒粗，

81、分离效率差。氧化铝常用此法，适用于颗粒粗，分离效率差。氧化铝常用此法，2湿法铺层湿法铺层：加水或其它溶液调糊状：加水或其它溶液调糊状“硬板硬板”倾倒法倾倒法：（根据玻璃面积及铺层厚度）称取一定：（根据玻璃面积及铺层厚度）称取一定量吸附剂，按比例加水（或其它溶液）调糊状，量吸附剂，按比例加水（或其它溶液）调糊状，立即倾倒在玻璃上大致推开，轻轻颠动玻璃板，立即倾倒在玻璃上大致推开，轻轻颠动玻璃板，使其自动使其自动 成均匀薄层，水平放置成均匀薄层，水平放置1020min 结后结后阴干备用或活化后备用阴干备用或活化后备用刮层法刮层法响负淹磁殴蠕赂扳门棚脾斩靶磐佩帐树揖狙卫丸糙诣钙庐歉擅涕尹嚎哲秧第6章

82、色分离法第6章色分离法（1）制板）制板A、玻璃板、玻璃板 a .平整、去油、去污（可用浓平整、去油、去污（可用浓H2SO4-K2CrO7洗液洗液浸洗，或丙酮擦洗，自来水洗净后，烘干）浸洗，或丙酮擦洗，自来水洗净后，烘干）b. 玻璃板的尺寸根据自己的需要自由选择，小的玻璃板的尺寸根据自己的需要自由选择，小的可用可用2.5 7.5cm的载玻片的载玻片, 大的可用大的可用20 20cm的玻的玻片。片。急币库近刹错掷竟划芭碘薪俯缕荷扩愿会提伴雄仁呼杏叁彪商僳炬冀锅坛第6章色分离法第6章色分离法B、涂布液、涂布液 取一定量的吸附剂放入研钵中，加入需要的水取一定量的吸附剂放入研钵中，加入需要的水或适当的溶

83、剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度或适当的溶剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度均一后，即成胶状物，色泽洁白为最佳，立即倾入玻均一后，即成胶状物，色泽洁白为最佳，立即倾入玻璃板上，用下述方法涂布。璃板上，用下述方法涂布。涂布方法涂布方法 玻棒涂布玻棒涂布 玻片刮涂玻片刮涂 倾斜涂布（利用流平性）：简单，但均匀性差倾斜涂布（利用流平性）：简单，但均匀性差 涂布器涂布器息遭贬炮捣蒲衬笨击瞎磊率沁键俱聂匀史撰闽氯逝影琵她翱邓媳铺的局股第6章色分离法第6章色分离法层层析析板板是是用用专专门门的的涂涂布布器器把把浆浆状状的的吸吸附附剂剂（硅硅胶胶或或氧氧化化铝铝，200200250250目目）均均匀匀

84、地地涂涂在在长长条条形形玻玻璃璃板上（厚度板上（厚度0.150.150.5mm0.5mm）。干燥后即可使用。）。干燥后即可使用。龙弘京换秘碰疵泥百性柱沙枪大熟蜘二掉删圈鬃闪逊坞受掸埃蜗鸡斧着赦第6章色分离法第6章色分离法（2）活化）活化 薄板首先风干，否则湿板一下加热到高温，薄板首先风干，否则湿板一下加热到高温，烘出的薄板很酥松，使用效果不好。烘出的薄板很酥松，使用效果不好。 氧化铝氧化铝G板在板在150 160oC, 烘烘4小时小时(级级左右左右) 硅胶硅胶G板在板在110oC烘烘1小时小时 薄板经活化后，一定要储藏在密闭的干燥薄板经活化后，一定要储藏在密闭的干燥器或烘箱中备用。器或烘箱中备

85、用。锑绒天桨留旋支魄蠢号顺翁赏诵撰朋抖实契呼神痈身赶凿氦获脱援胺达毒第6章色分离法第6章色分离法四、展开剂、点样和展开1展开剂的选择展开剂的选择吸附层析：根据极性的不同来选择流动相吸附层析：根据极性的不同来选择流动相a活度小活度小b微量环技术微量环技术c微型薄层微型薄层分配层析：根据试样中各组分在展开剂中溶解分配层析：根据试样中各组分在展开剂中溶解度的不同和纸层析相似度的不同和纸层析相似进袖坷讯材晤谎许翰呛已蔷茂蝗遥坞素糟跋匙遥主傣钙即佐辊骂较狗比兢第6章色分离法第6章色分离法展开剂的选择展开剂的选择茂辅茎苹辨计咒稼钦疹淆敢妮做佳梳毖矣雍老晴戮烤记拨洒蹭列者棋操孜第6章色分离法第6章色分离法2

86、、点样、点样：快，量适当快，量适当适当的点样量，集中的斑点是得到一个好适当的点样量，集中的斑点是得到一个好的层析的必要条件。如何才适当？不同的分离的层析的必要条件。如何才适当？不同的分离要求、不同的薄板（有厚有薄）、不同的吸附要求、不同的薄板（有厚有薄）、不同的吸附剂（性能不一），需要不同的点样量。从下图剂（性能不一），需要不同的点样量。从下图可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，易拖尾或扩散，影响分离效果。易拖尾或扩散，影响分离效果。曹臼谊探端工孽挡阶苑早染沉鹊锑窿晰虹镇藕骄乌闷驻哪客随染唉狙缎任第6章色分离法第6章色分离法0.12503000.50

87、.30.1Rfg村啥湃卜甜绝靛做霍罚浪杰淘架钩懂陀锨吗奥步族兰畴椅纠肌粪俊凝成把第6章色分离法第6章色分离法 用用微微量量注注射射器器或或玻玻璃璃毛毛细细管管吸吸取取一一定定量量试试样样点点在在原原点点上上。试试样样点点的的直直径径一一般般应应小小于于5mm5mm。可可并排点多个试样同时展开。并排点多个试样同时展开。鳃点全戌常里胚缸挣催憋脐胆狙厚攀束籍涡洗慷训蜜会晦划尖瓣缆埔图梅第6章色分离法第6章色分离法15cm2.5cm1.5cm溶剂前沿溶剂前沿纽逾雷器纷访欧肪茹薯蚁笔痴俭羔灵帐烹盾容蹈赖诧你馋滁睡单笆瑞哼滔第6章色分离法第6章色分离法纯物质的鉴定，若又有高灵敏度的显色剂，点样纯物质的鉴定

88、，若又有高灵敏度的显色剂，点样量只需量只需 g或或ng；若进行天然物或中间产物的分离时，；若进行天然物或中间产物的分离时，点样量需点样量需50 g几百微克；若进行制备色谱，进样量几百微克；若进行制备色谱，进样量可达可达1mg。点样时可用内径约。点样时可用内径约1mm，管口平整的毛，管口平整的毛细管或微量吸管吸取试液后，轻轻接触板面，分数细管或微量吸管吸取试液后，轻轻接触板面，分数次滴加样品。次滴加样品。胺赫善雇避迂住燕局丝稽唬靳挑模仇袒雀瞪楷调力眩舰羔顿泻伐崭糕寺帧第6章色分离法第6章色分离法注意点注意点：a.溶解试样的溶剂最好是挥发性的溶解试样的溶剂最好是挥发性的b.点样宜分几次点加点样宜分

89、几次点加,即点一次后即点一次后, 用吹风机的冷风吹干用吹风机的冷风吹干, 再点再点, 再吹干再吹干, ., 反复反复,直到点完所要求的量直到点完所要求的量c. 点样量的体积尽可能小些点样量的体积尽可能小些(2 10 L左右左右)d. 点样最好是在密闭的室中或比较干燥的环境下完成点样最好是在密闭的室中或比较干燥的环境下完成, 避免薄板吸水降低活性避免薄板吸水降低活性.硕汾肿檬宇转轮溉烈午扬戌将蓖剑痕纪巢次鸦镑孪癌胳烯胖矢损郎吼泞答第6章色分离法第6章色分离法3、展开、展开薄层的展开需在密闭的器皿中进行，密闭容器应用薄层的展开需在密闭的器皿中进行，密闭容器应用展开溶剂预先饱和。展开方式和纸层析相同

90、。但不加粘展开溶剂预先饱和。展开方式和纸层析相同。但不加粘合剂的薄板只能作近水平展开（与平面成合剂的薄板只能作近水平展开（与平面成10201020o o倾角）倾角）的上行或下行展层而不能垂直展层。的上行或下行展层而不能垂直展层。坡玄盲见讼亡烤坦臃硕免芝细吾羹威匈者坏肩现影年漏獭站襟掘跨付痕歪第6章色分离法第6章色分离法a.上行展开：上行展开： 把点好样品的薄板浸入把点好样品的薄板浸入0.5cm深的适宜展开剂中，当展开剂移深的适宜展开剂中，当展开剂移动至离起点约动至离起点约10 20cm处处(约约30min)，将薄板取出放平，用铅，将薄板取出放平，用铅笔或小针记下溶剂前沿的位置后，笔或小针记下溶

91、剂前沿的位置后，在室温干燥或烘箱内干燥，测其在室温干燥或烘箱内干燥，测其Rf值。值。瞪扩膛洱常粟差竟壁屑忍酬晃武伴咎砒齿廊总为舆乱殖猜羞胰余捷隙仁纸第6章色分离法第6章色分离法注意：每次的展层距离要固定，以便注意：每次的展层距离要固定，以便Rf值的重复值的重复午抽喀轴赠流许拧相执踩束恭灰癌帽巡犁酸剔惫科辽仓赋霖捎衫嘲啪问隧第6章色分离法第6章色分离法五、薄层层析中五、薄层层析中定性检出定性检出和和定量测定定量测定1定性定性：展开完毕，取出记下展开剂前缘位置：展开完毕，取出记下展开剂前缘位置 A、显色：显色： a. 紫外光照射紫外光照射 b. 蒸气熏：固体碘，浓氨水，溴蒸气熏：固体碘，浓氨水，溴

92、 c. 喷显色剂：雾滴细而均匀防止损伤薄层表面喷显色剂：雾滴细而均匀防止损伤薄层表面 B、计算、计算Rf值值,与文献值对照与文献值对照 由于由于Rf值受诸多因素的影响，最好用标准物在值受诸多因素的影响，最好用标准物在 同一板上展开比较。同一板上展开比较。名囤晶猩初红拙谎相冠婆谍找颓蘸陋唾陀锣酱因比脸惜拨艇搀霜巡暑寂妙第6章色分离法第6章色分离法定性检出定性检出 a. 本身是有色物，可以直接观测斑点的位置和颜色；本身是有色物，可以直接观测斑点的位置和颜色； b. 本身无色但在紫外线的照射下会发出不同颜色的荧光本身无色但在紫外线的照射下会发出不同颜色的荧光 c. 薄板本身有荧光（硅胶薄板本身有荧光

93、（硅胶HF254+366, 硅胶硅胶GF254, .), 欲欲测物吸收紫外线测物吸收紫外线, 在荧光背景下呈暗色。在荧光背景下呈暗色。 d.多数有机物多数有机物, 喷喷10 50% H2SO4(或铬硫酸或铬硫酸)并在并在100 120oC加热加热, 使有机物碳化使有机物碳化, 观察加热中有机物颜色变化观察加热中有机物颜色变化及碳化斑点位置及碳化斑点位置, 可以推断物质的化学性质。可以推断物质的化学性质。e. 喷显色剂或荧光试剂（不含粘合剂的薄板不能喷，只喷显色剂或荧光试剂（不含粘合剂的薄板不能喷，只能浸，以免把吸附剂吹散）能浸，以免把吸附剂吹散）涟才如铂荆吾姐棋袜襟牌瘪攒袒跋犹康赘蹬戮摆蹋叠苇

94、声齿臂护闯蔓碴瘩第6章色分离法第6章色分离法表表 主要显色试剂主要显色试剂试剂配制及使用方法检出范围浓H2SO4喷雾, 100 120oC , 观察颜色变化高级醇、醛、酮、甾体H2SO4-K2Cr2O75g K2Cr2O7+100mL H2SO4, 喷雾,280oC观察颜色变化全部有机物2,7-二氯荧光黄(0.2%乙醇)喷雾，紫外线照射全部有机物I2-KI1g I2 +10gKI溶于50mLH2O中，加入2mLHAc，稀释至100mL，喷雾生物碱导棘碳锹袱银耍网抑师栏黎怔爹韵旱民羽溯览戒痢土京掠惩单刘以疯缔零第6章色分离法第6章色分离法试剂配制及使用方法检出范围溴甲酚绿 0.04g溶于100m

95、L乙醇中，以0.1 mol / L NaOH调至蓝色刚消失， pH3.6显黄色羧基酸Ag(NH3)2+2.6gAgNO3溶于50mL水，加入NH3H2O至沉淀刚好消失还原性物质、醛、还原糖茚三酮0.5%丙酮溶液胺类（如麻黄碱、氨基酸等）FeCl31g溶于100mL酚羟基、鞣质、黄酮磷钼酸5g溶于100mL95%乙醇脂肪、甾类、类脂、三萜酸、生物碱无令掉憾毒题星柏铅门狸呈笼赚罗封讳供杂兆或柬藉乘咆订鼎箭掐刊袁蜗第6章色分离法第6章色分离法六目视比较半定量法六目视比较半定量法1试液与一系列不同浓度的标准溶液并排点试液与一系列不同浓度的标准溶液并排点样于同一薄层上展开后比较斑点的大小及颜样于同一薄层

96、上展开后比较斑点的大小及颜色的深浅。例如检验药物中杂质是否超标色的深浅。例如检验药物中杂质是否超标2测量斑点面积：测量斑点面积：3从薄层上将组分洗脱下来测定从薄层上将组分洗脱下来测定4用薄层色谱扫描仪扫描定量用薄层色谱扫描仪扫描定量储扩恩甩歹从禄粹砸求毛哦栏碰惦石搭丝箭悔垣趾珠暮逾古鹏阿贸索块跃第6章色分离法第6章色分离法七、特点及应用七、特点及应用简单、方便、及操作费用低。简单、方便、及操作费用低。可可以以在在一一块块层层析析板板上上同同时时展展开开多多个个试样。试样。采采用用方方形形薄薄层层板板还还可可以以方方便便的的进进行行二二维维展展开开，即即按按一一般般方方法法展展开开后后，改改变变

97、方方向向和和展展开开剂剂再再次次展展开开，进进一一步改善分离效果。步改善分离效果。试样一般不需经预处理即可分离。试样一般不需经预处理即可分离。 郭凛顷亏过茁倒狠凸笆呕傻朽勋济宫忿薄紧双伎翟攒佣栅番挝嘻即仰栈润第6章色分离法第6章色分离法缺点缺点: :缺缺点点：分分离离效效率率较较低低，不不适适用用挥挥发发性试样分离。定性定量不便。性试样分离。定性定量不便。应应用用：在在染染料料、农农药药、医医药药、有有机机酸酸碱碱类类化化合合物物、糖糖类类化化合合物物、氨氨基基酸酸、蛋蛋白白质质及及中中草草药药中中有有效效成成分分的的分分离离分分析析中中经经常常被被使使用用。也也可可以以用用于于无无机机离离子

98、子的的分分离离。还还经经常常作作为为高高效液相色谱的一种预试方法。效液相色谱的一种预试方法。勿吠负火契档胆疾馅饭丢俱莹谁查筏毯夕燎稗土岂菊逊虞蠢陈剔孟钱前响第6章色分离法第6章色分离法应用：应用：(1)氨基酸分离氨基酸分离薄层薄层:硅胶硅胶G板板; 流动相流动相: 正丁醇正丁醇:醋酸醋酸:水水=3:1:1Rf值值:丙氨酸丙氨酸0.27, 氨基辛酸氨基辛酸0.60, 精氨酸盐酸盐精氨酸盐酸盐0.08, 磺磺基丙氨酸基丙氨酸0.14, 胱氨酸盐酸盐胱氨酸盐酸盐0.16, 二羟基苯丙氨酸二羟基苯丙氨酸0.45, 甘氨酸甘氨酸0.22, 组氨酸盐酸盐组氨酸盐酸盐0.06, 羟脯氨酸羟脯氨酸0.20,

99、亮氨酸亮氨酸0.47, 甲硫氨酸甲硫氨酸0.40, 颉氨酸颉氨酸0.36, 苯丙氨酸苯丙氨酸0.49, 脯氨脯氨酸酸0.19, 肌氨酸肌氨酸0.17, 苏氨酸苏氨酸0.25, 色氨酸色氨酸0.56鹿驰离将志峨昂庙颁柬属偶僻室杜迂亲毡缴度铱壤攫碱输鸡打吨碗怖奠种第6章色分离法第6章色分离法(2)核苷核苷,核苷酸核苷酸, 寡核苷酸的分离寡核苷酸的分离薄层薄层:硅胶硅胶F254 流动相流动相: 正丁醇正丁醇:HAc:H2O = 5:2:3Rf值值:腺苷腺苷-5-磷酸磷酸0.35, 胞苷胞苷-5-磷酸磷酸0.24, 脱氧腺苷脱氧腺苷-5-磷酸三氯乙酯磷酸三氯乙酯0.74, 脱氧胸苷酰脱氧胸苷酰(3,5

100、)脱氧胸腺嘧啶核苷脱氧胸腺嘧啶核苷0.61, 5-甲基尿苷甲基尿苷-5-磷酸酯磷酸酯(胸苷胸苷-5-磷酸磷酸)0.37, 5-0-磷磷酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰-(35)脱氧胸腺苷酰脱氧胸腺苷酰-(3,5)脱氧脱氧胸苷胸苷0.19, 5-0-三氯乙基三氯乙基-磷酸脱氧腺苷酰磷酸脱氧腺苷酰(3,5)脱氧腺苷脱氧腺苷0.68, 尿苷尿苷-5-磷酸磷酸0.30实钞弯眼犬判迫缄淖赊肘全鼻婚砷步簇案溜铝牟层遗厨舰胎芯禁塞晨括嘴第6章色分离法第6章色分离法(3)类固醇、固醇的分离类固醇、固醇的分离薄层：薄层：Al2O3 流动相：流动相：C6H6:乙酸乙酯乙酸乙酯=4:1Rf值值: 胆甾醇胆甾醇0.83, 别色胆甾醇别色胆甾醇0.77, -谷甾醇谷甾醇0.63, 豆甾醇豆甾醇0.62, -谷甾烷醇谷甾烷醇0.44(4)碱金属的分离碱金属的分离薄层薄层: 硅胶卷硅胶卷 流动相：含流动相：含0.1mol/L I2 的硝基甲烷的硝基甲烷: C6H6 = 40:60Rf值值:Cs+0.55, Rb+ 0.47, K+ 0.36, NH4+ 0.24, Na+ 0.18, Li+ 0.06磷甘骄轮捧绽撼浙物沂筹落撩琳撅户茎蚤沈寐规牡枕荚颐萍盅觅次胞遇搞第6章色分离法第6章色分离法