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1、微生物实验微生物实验6 6目的要求目的要求掌握肠道杆菌的主要生物学性状掌握肠道杆菌的主要生物学性状熟悉肠道杆菌有关的鉴定方法熟悉肠道杆菌有关的鉴定方法(1)SS平板平板(2)EMB平板平板大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌致病菌致病菌致病菌致病菌SS或或EMB培养基生长现象观察培养基生长现象观察大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌SSSSSSSS菌落的菌落的菌落的菌落的形态特征形态特征形态特征形态特征EMBEMBEMBEMB菌落的菌落的菌落的菌落的形态特征形态特征形态特征形态特征（二）肠道杆菌生化反应及动力试验（二）肠道杆菌生化反应及动力试验 材料材料 1 1、菌种：
2、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、培养物培养物2 2、培养基：克氏双糖斜面培养基、生化反、培养基：克氏双糖斜面培养基、生化反应管、半固体培养基应管、半固体培养基3 3、其他：接种环、接种针、酒精灯等。、其他：接种环、接种针、酒精灯等。克氏双糖斜面培养基生化反应原理克氏双糖斜面培养基生化反应原理该培养基含葡萄糖与乳糖的比例为该培养基含葡萄糖与乳糖的比例为1:101:10，并含硫酸亚铁和指，并含硫酸亚铁和指示剂酚红。示剂酚红。大肠杆菌大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，所以培养基呈黄色，发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，所以培养基呈黄色，直立段有气泡存在直立段有气泡存在肠道病
3、原菌肠道病原菌不能发酵乳糖，只能发酵葡萄糖，分解葡萄糖不能发酵乳糖，只能发酵葡萄糖，分解葡萄糖产酸，使产酸，使PHPH下降，斜面部分先呈现黄色，由于葡萄糖含量下降，斜面部分先呈现黄色，由于葡萄糖含量少，所生之酸接触空气而氧化，又因细菌的生长利用含氮少，所生之酸接触空气而氧化，又因细菌的生长利用含氮物质生成碱性化合物，所以斜面部分后来又变成红色由物质生成碱性化合物，所以斜面部分后来又变成红色由于直立段于直立段( (底层底层) )呈厌氧状态，细菌发酵葡萄糖所生的酸不呈厌氧状态，细菌发酵葡萄糖所生的酸不被氧化，所以一直呈黄色。大肠杆菌产气，有动力被氧化，所以一直呈黄色。大肠杆菌产气，有动力( (沿穿
4、沿穿刺线向周围扩散生长刺线向周围扩散生长) )伤寒杆菌有动力，而痢疾杆菌则没伤寒杆菌有动力，而痢疾杆菌则没有动力有动力 某些细菌如变形杆菌，乙型副伤寒杆菌某些细菌如变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能分解培养基中含能分解培养基中含硫氨基酸（如胱氨酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚铁中硫氨基酸（如胱氨酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁，而的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁，而痢疾杆菌痢疾杆菌不产生硫不产生硫化铁化铁 方法方法 1 1、克氏双糖铁斜面培养基：、克氏双糖铁斜面培养基：分别取大肠杆菌、变形杆菌分别取大肠杆菌、变形杆菌的培养物，用穿刺加斜面划线接种方法接种于的培养物，用穿刺加
5、斜面划线接种方法接种于2 2支克氏双支克氏双糖斜面培养基，糖斜面培养基，3737培养培养18-24h18-24h以后观察结果。以后观察结果。2 2、生化反应管：、生化反应管：取葡萄糖、乳糖等反应管，每种反应管取葡萄糖、乳糖等反应管，每种反应管分别穿刺接种大肠杆菌、痢疾杆菌，分别穿刺接种大肠杆菌、痢疾杆菌，3737培养培养18-24h18-24h以后以后观察结果。观察结果。3 3、动力试验：、动力试验：分别取大肠杆菌、痢疾杆菌的培养物，用分别取大肠杆菌、痢疾杆菌的培养物，用穿刺接种方法接种于穿刺接种方法接种于2 2支半固体培养培养基，支半固体培养培养基，3737培养培养18-18-24h24h以
6、后观察结果。以后观察结果。结果观察结果观察大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌变形杆菌变形杆菌变形杆菌变形杆菌克氏双糖克氏双糖克氏双糖克氏双糖铁铁铁铁葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖乳糖乳糖乳糖乳糖硫化氢硫化氢硫化氢硫化氢动动动动 力力力力尿素尿素尿素尿素生化反应生化反应生化反应生化反应管管管管葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖乳糖乳糖乳糖乳糖黄黄黄黄色色色色- - -+ + + + +- -+ +- -+ +- - -+ +- - -+ + + +- -+ +黄黄黄黄色色色色黄黄黄黄色色色色黄黄黄黄色色色色红红红红色色色色黄黄黄黄色色色色红红红红色色
7、色色黄黄黄黄色色色色肥达氏反应肥达氏反应原理原理 用已知伤寒杆菌用已知伤寒杆菌O/HO/H抗原（抗原（TO/THTO/TH）和）和甲乙型副伤寒杆菌甲乙型副伤寒杆菌H H抗原（抗原（PA/PBPA/PB）与患者）与患者血清做定量凝集实验，以测定患者血清中血清做定量凝集实验，以测定患者血清中有无相应抗体，根据抗体含量多少及增长有无相应抗体，根据抗体含量多少及增长情况可辅助诊断伤寒及副伤寒。情况可辅助诊断伤寒及副伤寒。2.2.材料材料 待检患者血清，待检患者血清，TO/TH/PA/PBTO/TH/PA/PB菌液，菌液，生理盐水，试管，生理盐水，试管，1ml1ml吸管等。吸管等。3. 方法 12345671.倍比稀释血清0.5mlNS+0.5ml血清2.加四种菌液（顺序：从后往前）3. 3718-24h观察结果TOTHPAPB弃去效价判断：以出现效价判断：以出现+的血清最高稀释度为抗体效价。的血清最高稀释度为抗体效价。肥达氏反应诊断意义肥达氏反应诊断意义: :O O效价效价 H H效价效价 诊断意义诊断意义升高升高 升高升高 感染可能性大感染可能性大不高不高 不高不高 感染可能性小感染可能性小不高不高 升高升高 预防接种或回忆反应预防接种或回忆反应升高升高 不高不高 早期反应或交叉反应早期反应或交叉反应结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！19
