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1、2.2 动物细胞工程动物细胞工程动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其它动物细胞工程的基础其它动物细胞工程的基础2.2.1 动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术阅读课本阅读课本44-47动物细胞培养动物细胞培养请尝试回答以下问题：请尝试回答以下问题：1.什么是动物细胞培养什么是动物细胞培养?2.怎样进行动物细胞组织培养？怎样进行动物细胞组织培养？3.动物细胞培养需要哪些条件？动物细胞培养需要哪些条件？4.动物细胞培养有哪些方面的应用？动物细胞培养有哪些方面的应用？什么是细胞贴壁？什么是贴附性
2、细胞？怎样才有利于贴附性细胞的生长？什么是细胞贴壁？什么是贴附性细胞？怎样才有利于贴附性细胞的生长？什么是原代细胞？什么是传代细胞？什么是原代细胞？什么是传代细胞？什么是接触抑制，怎样解除接触抑制？什么是接触抑制，怎样解除接触抑制？一、动物细胞培养的应用和概念：一、动物细胞培养的应用和概念：1 1、概念：、概念：动物细胞培养就是从动物有动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的机体中取出相关的组织组织, ,将它分散成将它分散成单单个细胞个细胞, ,然后然后, ,放在适宜的放在适宜的培养基培养基中中, ,让让这些这些细胞生长和增殖细胞生长和增殖. .2、原理：、原理：细胞增殖细胞增殖3 3、总结：
3、动物细胞、总结：动物细胞培养过程培养过程动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液剪碎用胰蛋白酶处理剪碎用胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加加培养液稀释培养液稀释传代传代1010代以内，代以内，遗传物质不改变，遗传物质不改变，保持保持正常正常二倍体核型二倍体核型。传代传代10-5010-50代左右，增长缓慢以至于完代左右，增长缓慢以至于完全停止，全停止，部分细胞核型可能发生变化部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变（遗传物质可能改变）为什么用胰蛋白酶
4、处理？为什么用胰蛋白酶处理？分瓶分瓶传代培养传代培养原代培养特点：原代培养特点：细胞贴壁、细胞贴壁、接触抑制接触抑制继续传代培养少部分细胞继续传代培养少部分细胞获得不获得不死性死性，细胞突变细胞突变，遗传物质已经遗传物质已经改变改变，等同于癌细胞等同于癌细胞。原原代代培培养养强调一：细胞贴壁过程强调一：细胞贴壁过程细胞贴壁：细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求：培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于表面光滑、无毒、易于帖附。帖附。当贴壁细胞分裂生当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时长
5、到表面相互接触时, ,细胞就会停止分裂增细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细殖，这种现象称为细胞的接触抑制。胞的接触抑制。强调二：接触抑制强调二：接触抑制有关概念有关概念v原代培养：原代培养：v动物细胞组织消化后的初次培养称为原代培养。动物细胞组织消化后的初次培养称为原代培养。 一般培养的代数为一般培养的代数为10代之内。代之内。v传代培养：传代培养： 将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。养，称为传代培养。 传代细胞一般传至传代细胞一般传至10代就不易传
6、下去了。代就不易传下去了。少数可传至少数可传至50代代（寿命极限），（寿命极限），其中有一些可获得不死性无限增殖其中有一些可获得不死性无限增殖（突变成癌细胞）（突变成癌细胞）。细胞株：传代细胞一般能传到细胞株：传代细胞一般能传到40-5040-50代，代，遗遗传物质一般不会发生改变传物质一般不会发生改变，叫细胞株。，叫细胞株。强调：细胞系、细胞株（强调：细胞系、细胞株（了解即可，老课本体系了解即可，老课本体系）细胞系：传代细胞系：传代5050代以后不能再传下去，代以后不能再传下去，部分细胞部分细胞遗传物质发生了改变遗传物质发生了改变，能连续传代，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。获得不死性，叫
7、细胞系。 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题：以下问题：讨论讨论1.体外培养细胞时需要提供哪些物质体外培养细胞时需要提供哪些物质2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？充足的营养供给、适宜的温度、适宜的充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境和气体环境 无菌、无毒的环境。无菌、无毒的环境。 3、温度和、温度和pH 温度温度36.5+（-）0.5度度, pH7.2-7.44、气体环境、气体环境 O2和和CO2（95%空气和空气和
8、5% CO2 ）培养条件：培养条件：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养（糖糖（葡萄糖）（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、元素、维生素、血清血清、血浆血浆等。等。合成培养基合成培养基）v大规模培养生产生物制品大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）v作为基因工程中的受体细胞作为基因工程中的受体细胞v培养的动物细胞可以用于检测有毒物培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性质，判断某种物质的毒
9、性v用于生理、病理等方面的研究用于生理、病理等方面的研究v（如筛选抗癌药物为治疗和预防癌症及其他疾病如筛选抗癌药物为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据提供理论依据）应用：应用：动物细胞培养定义：动物细胞培养定义：v概念概念:就是从动物机体中取出相关的组就是从动物机体中取出相关的组织织,将它分散成单个细胞，然后将它分散成单个细胞，然后,放在适放在适宜的培养基中宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。让这些细胞生长和增殖。植物组织培养植物组织培养 在无菌和人工控制的条件下在无菌和人工控制的条件下, ,将离体的植将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培养基
10、上，给予适宜的培养条件，诱导其产生养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或或细胞产物细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、血清、葡萄糖、血清、血浆血浆蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物
11、细胞和动物细胞培养的比较1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？的吗？、动物细胞培养过程将组织分散成单个细、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？胞的吗？、为何动物细胞培养过程将组织分散成单、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？个细胞的呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？没有没有是是 成块的组织细胞靠在一起成块的组织细胞靠在一起,彼此彼此限制了细胞的生长和增殖限制了细胞的生长和增殖先用剪刀剪碎先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理。后用蛋白酶处理。思考题思考题 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的
12、细胞是、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 - -（ ） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 -（ ） A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD课堂反馈练习课堂反馈练习3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞这样的组织细胞 （ ）A.A.
13、容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D4、下列属于动物细胞工程中的工具是（、下列属于动物细胞工程中的工具是（ ） A限制性内切酶限制性内切酶 BDNA连接酶连接酶 C胰蛋白酶胰蛋白酶 D果胶酶果胶酶C5、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（ ）A动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白泌蛋白B动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散C细胞遗传物质的改变发生于
14、原代培养过程中细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D培养至培养至50代后继续传代的细胞是细胞株代后继续传代的细胞是细胞株6、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为（无限制地传代下去，这种传代细胞称之为（ ）A原代培养原代培养 B传代培养传代培养 C细胞株细胞株 D细胞系细胞系BD 7、动物细胞培养的正确过程是（、动物细胞培养的正确过程是（ ）A.原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系 B. 原代培养原代培养传代培养传代培养细胞系细胞系细胞株细胞株C.传代培养传代培养细胞系细胞系原代培养原代培
15、养细胞株细胞株 D. 原代培养原代培养细胞系细胞系传代培养传代培养细胞株细胞株8、下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是（、下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是（ ）A培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清动物血清B原代培养的细胞一般传至原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞代左右便会出现生长停滞C动物细胞培养一般能够传到动物细胞培养一般能够传到4050代，但其遗传物质代，但其遗传物质发生了改变发生了改变D动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞康细胞AC
