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1、光学显微镜的认识、使用光学显微镜的认识、使用及动植物细胞的镜下观察及动植物细胞的镜下观察实验目的 1.了解光学显微镜的基本构造，学会规范的显微镜操作方法。 2.学习并掌握临时装片的制作与镜下观察，观察动植物细胞的不同。 3.学习徒手切片技术，观察叶的横切面结构。 4.熟练掌握绘制生物学图的基本方法。实验原理 1、表面为曲面的玻璃或其他透明材料制成的光学透镜可以使物体放大成像，光学显微镜就是利用这一原理将微小的物体放大到人眼足以观察的尺寸。我们所用的显微镜采用两级放大，分别由焦距很短的物镜和焦距较长的目镜组成。被观察的物体位于物镜的前方，被物镜做第一级放大后成一倒立的实像，然后这一实像再被目镜二
2、级放大，成一虚像，人眼看到的就是虚像。其放大的倍数为物镜放大倍数于目镜放大倍数的乘积。2、玻片标本类型按照制作标本保存时间长短，分为永久玻片标本和临时玻片标本。临时玻片标本的制作方法有三种，即切片、涂片、装片。3、生物简图要求作者从科学研究的角度出发，用科学的观点去观察所画的生物材料，绘图必须符合实际，实事求是。实验器材 显微镜 镊子 解剖针 刀片 载玻片 盖玻片 毛笔 玻璃皿 牙签 绘图笔 绘图纸 吸管 小西红柿 新鲜菠菜 胡萝卜实验内容及方法一、正置显微镜 1、安放 右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。单筒的一般放在左侧，距离桌边34厘
3、米处。 2、清洁 检查显微镜是否有毛病，是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。透镜要用擦镜纸擦拭，如有胶或粘污，可用少量二甲苯清洁之。 3、对光 镜筒升至距载物台12厘米处，低倍镜对准通光孔。调节光圈和反光镜，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜，反光镜要用双手转动。若使用的为带有光源的显微镜，可省去次步骤，但需要调节光亮度的旋钮。 4、安装标本 将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。 5、调焦 调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧面仔细观察，直到物镜贴近玻片标本，然后左眼自目镜观察，左手旋转粗调焦旋钮抬
4、升镜筒，直到看清标本物像时停止，再用细调焦旋钮回调清晰。 操作注意：不应在高倍镜下直接调焦；镜筒下降时，应从侧面观察镜筒和标本间的间距；要了解物距的临界值。若使用双筒显微镜，如观察者双眼视度有差异，可靠视度调节圈调节。另外双筒可相对平移以适应操作者两眼间距。 6、观察 若使用单筒显微镜，两眼自然张开，左眼观察标本，右眼观察记录及绘图，同时左手调节焦距，使物象清晰并移动标本视野。右手记录、绘图。镜检时应将标本按一定方向移动视野，直至整个标本观察完毕，以便不漏检，不重复。光强的调节：一般情况下，染色标本光线宜强，无色或未染色标本光线宜弱；低倍镜观察光线宜弱，高倍镜观察光线宜强。除调节反光镜或光源灯
5、以外，虹彩光圈的调节也十分重要。 （1）低倍镜观察 观察任何标本时，都必须先使用低倍镜，因为其视野大，易发现目标和确定要观察的部位。 （2）高倍镜观察 从低倍镜转至高倍时，只需略微调动细调焦旋钮，即可使物像清晰。使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮，否则易压碎盖玻片并损伤镜头。转动物镜转换器时，不可用手指直接推转物镜，这样容易使物镜的光轴发生偏斜，转换器螺纹受力不均匀而破坏，最后导致转换器就会报废。 （3）油镜的观察 先用低倍镜及高倍镜将被检物体移至视野中央后，再换油镜观察。油镜观察前，应将显微镜亮度调整至最亮，光圈完全打开。使用油镜时，先在盖玻片上滴加一滴香柏油（镜油），然后降低镜筒并从侧面仔细观
6、察，直到油镜浸入香柏油并贴近玻片标本，然后用目镜观察，并用细调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本的焦段时停止并调节清晰。香柏油滴加要适量。油镜使用完毕后一定要用擦镜纸沾取二甲苯擦去香柏油，并再用干的擦镜纸擦去多余二甲苯。 7、结束操作 观察完毕，移去样品，扭转转换器，使镜头V字型偏于两旁，反光镜要竖立，降下镜筒，擦抹干净，并套上镜套。若使用的是带有光源的显微镜，需要调节亮度旋钮将光亮度调至最暗，再关闭电源按钮，以防止下次开机时瞬间过强电流烧坏光源灯 二、临时装片的制作 1、擦片 用洁净的纱布（吸水纸）将载玻片和盖玻片擦拭干净。将擦拭干净的载玻片和盖玻片放在干净的培养皿中，取时用镊子，不要用手，避免污
7、染。 2、滴水或染液 3、取材 剖开番茄，用解剖针挑取其中少许成熟的果肉细胞。去菠菜叶下表皮时，用镊子轻轻撕下。去口腔上皮细胞时，用消毒牙签的钝端在淑净的口腔任一侧的颊部轻刮几下，次数不应过多。 4、展平 将取下的材料迅速放入载玻片的水滴中，用解剖针展平。番茄果肉细胞和人的口腔上皮细胞应用解剖针搅散。 5、盖上盖玻片 用镊子夹起盖玻片，让其一端先接触载玻片上的水滴端，再轻轻地盖上，以免产生气泡。 6、镜下观察并画图二、徒手切片的制作 1、准备夹持物 夹持物用刀从一端的中线纵向劈开，但不要劈到底，以加持叶片。 2、切取观察材料 将准备好的新鲜的叶子切去叶茎叶尖和叶缘，切成长宽都小于夹持物劈缝的长
8、方片，放入夹持物劈缝中。 3、握夹持物和持刀 用左手的拇指和食指捏紧夹有叶片的夹持物，并使劈缝与自己身体本身平行，拇指低于食指。夹持物上端略高于手指。右手拿刀，刀口朝自己，刀身放平，拇指压紧刀身，捏紧刀片右下角。 4、拉切 拉切的刀先蘸水，在夹持物上端横切一刀，使其表面平整。然后刀口对着夹持物，继续拉切。拉切方向向着操作者，保持水平，速度要快，才能切的又薄又平。连续拉切后，将切下的薄片迅速刷入清水中备用。 5、在清水中选取最薄的切片制成临时装片。 6、镜下观察并绘图。三、绘图 1、镜下观察 2、起草 按实体外形轮廓定一个比例分割点，并在纸上的适当位置画出这个点，通过这个点做一条对称虚线，然后按
9、照实体外形轮廓各部到虚线的距离远近分别定出各个点，然后用细的铅笔将各个点连起来，即得到一个外形图，内部再按比例绘出。先得到略图，然后再近一步详绘加工使线条明晰、光滑、整洁。图形应偏左，以便右边做标注。3、点点衬阴 将画好的草图，根据实体的薄厚、光线的明暗用铅笔垂直在纸面上点出许许多多疏密不同粗细均匀的小圆点来表现 。实体厚、光线暗，用多而密的点来表现，反之用少而稀疏的点表现。明暗有过渡。打点时应注意，手握笔中部，保持笔杆与纸面垂直，轻轻转动笔杆可以画出大小均匀的圆点。点要圆，笔尖要细，不要画出逗号或者短线，不涂阴影，只能用铅笔作图。4、图题及标注 图绘成之后在图的下方或上方适当的位置标明图形题目，包括放大倍数，并在右方做标注。作业： 1、 分别菠菜叶片细胞与人口腔上皮镜下显微结构的不同。 2、绘菠菜叶片横切面镜下显微结构图。
