第六章-兽药残留检测技术--磺胺类课件

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1、第六章 兽药残留检测技术第五节第五节 磺胺类药物残留的危害分磺胺类药物残留的危害分析与检测方法析与检测方法 一、概述一、概述l磺胺类磺胺类(Slfonamides)药物是兽医上较常用的一药物是兽医上较常用的一类合成抗感染药物类合成抗感染药物,具有抗病原体范围广、化学具有抗病原体范围广、化学性质稳定、使用方便、易于生产等优点。性质稳定、使用方便、易于生产等优点。l磺胺药种类繁多磺胺药种类繁多,兽医上常用的有兽医上常用的有10余种余种(图图) 。l磺胺药单独使用磺胺药单独使用,病原体易产生耐药性病原体易产生耐药性,与抗菌增与抗菌增效剂如效剂如TMP(甲氧苄啶甲氧苄啶)等联用等联用,抗菌范围扩大抗菌

2、范围扩大,疗疗效明显增强效明显增强,用来治疗畜禽肠道感染、乳腺炎、用来治疗畜禽肠道感染、乳腺炎、肺炎等疾病。肺炎等疾病。l同时也被广泛的用作饲料添加剂同时也被广泛的用作饲料添加剂,用来增肥用来增肥 犊牛犊牛和猪。和猪。危害危害l这种药物可以残留在动物的体内这种药物可以残留在动物的体内,人食用后对人体产生耐人食用后对人体产生耐药性等副作用药性等副作用,尤其是致癌性物质磺胺二甲嘧啶尤其是致癌性物质磺胺二甲嘧啶,能引起能引起人的人的再生障碍性贫血再生障碍性贫血,粒细胞缺乏症粒细胞缺乏症等疾病。等疾病。l再生障碍性贫血再生障碍性贫血:骨髓造血干细胞和骨髓造血干细胞和/或造血微环境损伤或造血微环境损伤性

3、血液病。性血液病。l粒细胞缺乏症粒细胞缺乏症又叫白细胞减少症又叫白细胞减少症,本病多起病缓慢，慢性本病多起病缓慢，慢性经过，少数可无症状。患者可有头晕、乏力、头痛、四经过，少数可无症状。患者可有头晕、乏力、头痛、四肢无力、食欲不振、低热、失眠等；可有易感染倾向，肢无力、食欲不振、低热、失眠等；可有易感染倾向，如易患疖痈、肺炎、尿路感染，甚至发生败血症等。如易患疖痈、肺炎、尿路感染，甚至发生败血症等。 l根据肠道吸收的程度和临床用途根据肠道吸收的程度和临床用途,分为分为内服难吸收内服难吸收用于肠用于肠道感染的磺胺药、道感染的磺胺药、外用外用磺胺药、磺胺药、内服易吸收内服易吸收用于全身感用于全身感

4、染的磺胺药三大类。染的磺胺药三大类。l除磺胺脒除磺胺脒(琥磺胺噻唑、酞磺胺噻唑现已少用琥磺胺噻唑、酞磺胺噻唑现已少用)用于肠道用于肠道感染、磺胺嘧啶银局部外用外感染、磺胺嘧啶银局部外用外,其他均用于全身性细菌感其他均用于全身性细菌感染染,某些品种亦用于弓形体病、球虫病和住白细胞原虫病某些品种亦用于弓形体病、球虫病和住白细胞原虫病的治疗。的治疗。l不同的磺胺药抗菌作用强度不同不同的磺胺药抗菌作用强度不同,一般依次为磺胺一般依次为磺胺-6-甲甲氧嘧啶氧嘧啶(SMM)磺胺甲基异恶唑磺胺甲基异恶唑(SMZ) 磺胺异恶唑磺胺异恶唑(SIZ)磺胺嘧啶磺胺嘧啶(SD) 磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲氧嘧啶(SDM)

5、磺胺对甲磺胺对甲氧嘧啶氧嘧啶(SMD) 磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶(SM2) 磺胺邻二甲氧嘧磺胺邻二甲氧嘧啶啶(SDM)。吸收后存在形式吸收后存在形式l磺胺药吸收后磺胺药吸收后,一部分在血浆中保持游离状态一部分在血浆中保持游离状态(游游离型离型),一部分与血浆蛋白相结合一部分与血浆蛋白相结合(结合型结合型),另一部另一部分在肝脏中高度乙酰化变成分在肝脏中高度乙酰化变成乙酰磺胺乙酰磺胺。l游离型游离型具抗菌作用具抗菌作用,且能透过毛细血管进入各种且能透过毛细血管进入各种体液和组织。体液和组织。l结合型结合型无抗菌活性无抗菌活性,也不能透入体液或组织中也不能透入体液或组织中,但但结合较疏松结合较疏松

6、,能不断分解出游离型磺胺。能不断分解出游离型磺胺。l乙酰化乙酰化是磺胺的主要代谢产物是磺胺的主要代谢产物,无抗菌活性。无抗菌活性。体内分布、代谢体内分布、代谢l磺胺药在体内分布相当广泛。各种组织和体液均能到达。磺胺药在体内分布相当广泛。各种组织和体液均能到达。以以血液血液中含量中含量最高最高,肝、肾肝、肾次之次之,胸水、腹水、滑膜液、房胸水、腹水、滑膜液、房水中浓度也较高水中浓度也较高,并能并能透过胎盘透过胎盘进入胎儿体内。进入胎儿体内。l磺胺药在磺胺药在神经神经、肌肉肌肉及及脂肪脂肪组织中的含量则组织中的含量则较低较低。l磺胺药主要在肝脏代谢磺胺药主要在肝脏代谢,代谢方式代谢方式有乙酰化、羟

7、基化、结有乙酰化、羟基化、结合等合等,其中以其中以乙酰化为主乙酰化为主。l磺胺药乙酰化后失去抗菌作用磺胺药乙酰化后失去抗菌作用,且在尿中的溶解度降低且在尿中的溶解度降低,易易在肾小管析出结晶在肾小管析出结晶,造成对泌尿道的损害。应注意同服碳造成对泌尿道的损害。应注意同服碳酸氢钠酸氢钠,并增加饮水并增加饮水,可减少或避免其对泌尿道的损害。可减少或避免其对泌尿道的损害。l部分磺胺药及代谢产物在部分磺胺药及代谢产物在肝肝内成为水溶性的内成为水溶性的葡萄糖醛酸结葡萄糖醛酸结合物合物而失去活性。而失去活性。排泄排泄l内服难吸收内服难吸收的磺胺药的磺胺药,主要由主要由粪便粪便排出排出;l内服易吸收内服易吸

8、收的磺胺药主要通过的磺胺药主要通过肾脏肾脏排泄排泄,通过肾小球滤过通过肾小球滤过或肾小管分泌到达肾小管腔内的药物或肾小管分泌到达肾小管腔内的药物,有一部分被肾小管有一部分被肾小管重吸收。重吸收少、排泄快的药物如磺胺异恶唑在尿中重吸收。重吸收少、排泄快的药物如磺胺异恶唑在尿中浓度较高浓度较高,适用于治疗泌尿道感染。主要由肾小管分泌适用于治疗泌尿道感染。主要由肾小管分泌,重吸收多的药物在尿中浓度低重吸收多的药物在尿中浓度低,但在血中有效浓度维持时但在血中有效浓度维持时间较长间较长,多属长效如多属长效如SMZ、SMM等。等。l磺胺药尚可经肠液、胆汁分泌排出磺胺药尚可经肠液、胆汁分泌排出,也可由乳汁排

9、泄也可由乳汁排泄,但但量量较少较少。常见磺胺药常见磺胺药l磺胺嘧啶磺胺嘧啶l三甲氧苄啶三甲氧苄啶l磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶l磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲氧嘧啶l磺胺喹恶啉磺胺喹恶啉l磺胺噻唑磺胺噻唑l巴喹普林巴喹普林磺胺嘧啶磺胺嘧啶l属广谱抑菌剂属广谱抑菌剂,用于各种动物敏感菌的全身感染。用于各种动物敏感菌的全身感染。l内服易吸收内服易吸收,排泄较缓慢排泄较缓慢,血药浓度易达到有效水平。血药浓度易达到有效水平。l磺胺嘧啶与磺胺嘧啶与血浆蛋白的结合率低血浆蛋白的结合率低,脑脊液中的浓度比其他脑脊液中的浓度比其他磺胺药高磺胺药高,因此是磺胺类药中治疗脑部细菌性感染的首选因此是磺胺类药中治疗脑部细菌性感染

10、的首选药。药。l鳗鱼内服鳗鱼内服放射性标记磺胺嘧啶后放射性标记磺胺嘧啶后,以以胆胆和和皮皮中含量中含量最高最高,血液血液、肝肝和和肾肾次之次之。磺胺嘧啶磺胺嘧啶/甲氧苄啶甲氧苄啶l猪猪内服磺胺嘧啶内服磺胺嘧啶/甲氧苄啶后甲氧苄啶后,胃肠道吸收甲氧苄啶较磺胃肠道吸收甲氧苄啶较磺胺嘧啶快胺嘧啶快,但甲氧苄啶消除期较磺胺嘧啶消除期缓慢。休但甲氧苄啶消除期较磺胺嘧啶消除期缓慢。休药药1天甲氧苄啶残留最高的靶组织为肝脏天甲氧苄啶残留最高的靶组织为肝脏(0.29g/kg),但但磺胺嘧啶残留最高的靶组织为肾脏磺胺嘧啶残留最高的靶组织为肾脏(0.23mg/kg)。休药休药8天天所有组织均所有组织均检测不出检测

11、不出磺胺嘧啶和甲氧苄啶的磺胺嘧啶和甲氧苄啶的残留量残留量。l在在8 的水温的水温,海水海水鳟鱼鳟鱼投喂混合鱼料投喂混合鱼料(添加磺胺嘧啶和添加磺胺嘧啶和甲氧苄啶甲氧苄啶)后后,开始时药物消除很快开始时药物消除很快,但到达某一残留量时但到达某一残留量时基本不再下降基本不再下降,即使即使休药休药90天天鱼体内的鱼体内的残留量仍可被检出残留量仍可被检出。因此因此,在在10以上的水温以上的水温,鳟鱼用药鳟鱼用药(磺胺嘧啶磺胺嘧啶/甲氧苄啶甲氧苄啶)后的休药期应为后的休药期应为60天天,在在10 以下的水温不得使用。以下的水温不得使用。三甲氧苄啶三甲氧苄啶l属化学合成抗菌药属化学合成抗菌药,曾称曾称“磺

12、胺增效剂磺胺增效剂”。l抗菌谱与磺胺相近抗菌谱与磺胺相近,它能抑制二氢叶酸还原酶它能抑制二氢叶酸还原酶,而磺胺药而磺胺药则抑制二氢叶酸合成酶。则抑制二氢叶酸合成酶。两者合用两者合用,可使细菌的叶酸代谢可使细菌的叶酸代谢受到双重阻断受到双重阻断,因而可因而可大幅度提高抗菌活性大幅度提高抗菌活性(可增效数倍可增效数倍至数十倍至数十倍),并可减少抗菌菌株的出现。并可减少抗菌菌株的出现。l内服吸收快而完全内服吸收快而完全,体内分布广体内分布广,组织组织中浓度一般比中浓度一般比血血中中浓度高浓度高,肺肺、肾肾中浓度分别比中浓度分别比血血中浓度高中浓度高17倍和倍和10倍倍,胆胆汁汁中浓度分别比血中浓度高

13、中浓度分别比血中浓度高2.5倍和倍和2倍。倍。三甲氧苄啶三甲氧苄啶l三甲氧苄啶以三甲氧苄啶以非离子形式非离子形式从从肾肾排出排出,24h排出内服量的排出内服量的40%60%。少量从胆汁排泄。少量从胆汁排泄,其浓度比血浓度高。其浓度比血浓度高。l马、水牛、黄牛、奶山羊和猪静脉注射的消除半衰期分马、水牛、黄牛、奶山羊和猪静脉注射的消除半衰期分别为别为4.2h、3.4h、o.94h、1.43h和和2.5h。鸡、鸭约。鸡、鸭约2h。体体内代谢较少内代谢较少,代谢过程包括氮氧化和羟基化代谢过程包括氮氧化和羟基化,所有代谢物之所有代谢物之和不超过总残留的和不超过总残留的5%。l猪按规定剂量肌注后猪按规定剂

14、量肌注后310天天,组织中未检出残留量。连续组织中未检出残留量。连续饲喂饲喂10日剂量日剂量5mg/(kgd),休药休药3天只有一个肌肉样品能检天只有一个肌肉样品能检测到残留量测到残留量34g/kg(方法检测限方法检测限15酽酽kg),休药休药5天有两个天有两个皮皮/脂肪样品的残留量为脂肪样品的残留量为31g/kg,休药休药10天为天为27g/kg。三甲氧苄啶三甲氧苄啶l鱼体内吸收和消除取决于水温鱼体内吸收和消除取决于水温。鳟鱼喂服。鳟鱼喂服20mg/kg,15 水温、用药后水温、用药后6h内血浆中可以检测到残留量内血浆中可以检测到残留量,但但7水温、水温、血浆中检测不到残留量血浆中检测不到残

15、留量,即使延长到即使延长到12h也是如此。也是如此。鱼体鱼体内肾中残留量最高内肾中残留量最高,皮和血液次之皮和血液次之。血药浓度是肌肉浓度。血药浓度是肌肉浓度的的23倍。消除半衰期约倍。消除半衰期约24h。主要通过胆汁排泄主要通过胆汁排泄。l三文鱼饲喂三文鱼饲喂30mg/(kgd),连喂连喂10日日,休药休药710天血浆中残天血浆中残留量约留量约12mg/kg,肌肉在喂服后立刻采样测定肌肉在喂服后立刻采样测定,测得平均残测得平均残留量留量10740g/kg,停药停药30天和天和40天肌肉中平均残留量为天肌肉中平均残留量为100g/kg和和10g/kg。磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶l近年来细菌对本品

16、的耐药性增高近年来细菌对本品的耐药性增高,尤其是链球菌属、奈瑟菌尤其是链球菌属、奈瑟菌属以及肠杆菌科细菌。主要用于巴氏杆菌病、乳腺炎、子属以及肠杆菌科细菌。主要用于巴氏杆菌病、乳腺炎、子宫炎、呼吸道及消化道感染宫炎、呼吸道及消化道感染,亦用以防治兔、禽球虫病和猪亦用以防治兔、禽球虫病和猪弓形虫病。弓形虫病。l内服后吸收迅速而完全内服后吸收迅速而完全,维持有效血药浓度时间较长。维持有效血药浓度时间较长。l磺胺二甲嘧啶在磺胺二甲嘧啶在牛体内的代谢方式牛体内的代谢方式有乙酰化、羟基化、结有乙酰化、羟基化、结合等合等,其中以其中以羟基化为主羟基化为主,其次为乙酰化其次为乙酰化,代谢物代谢物为为6-羟甲

17、基羟甲基磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶和和N-乙酰磺胺二甲嘧啶乙酰磺胺二甲嘧啶。l血液血液和和奶奶中药物浓度中药物浓度最高最高,肌肉肌肉、肾肾和和肝肝次之次之。l肌肉、肾和肝中的肌肉、肾和肝中的N-乙酰磺胺二甲嘧啶浓度比母药浓度低乙酰磺胺二甲嘧啶浓度比母药浓度低,但但肾肾中的中的6-羟甲基磺胺二甲嘧啶羟甲基磺胺二甲嘧啶浓度浓度超过超过母药浓度。母药浓度。磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶l奶牛奶牛内服或肌注后内服或肌注后,奶中母药残留量内服较肌注高奶中母药残留量内服较肌注高,但残留消但残留消除期基本相同。例如除期基本相同。例如,休药休药3天奶中的乳糖结合物和乙酰化天奶中的乳糖结合物和乙酰化代谢物均低于代谢物均

18、低于10g/kg,休药休药4天奶中母药残留量均低于天奶中母药残留量均低于10g/kg。l猪体内代谢主要以猪体内代谢主要以乙酰化乙酰化为主为主,血浆和组织中血浆和组织中N-乙酰磺胺二乙酰磺胺二甲嘧啶甲嘧啶代谢物浓度最高代谢物浓度最高,其他代谢物其他代谢物(如磺胺二甲嘧啶如磺胺二甲嘧啶-寡糖寡糖缀和物、脱氨基磺胺二甲嘧啶等缀和物、脱氨基磺胺二甲嘧啶等)则次之。组织消除半衰期则次之。组织消除半衰期1014h,血浆消除半衰期血浆消除半衰期39天。休药天。休药18天血浆中残留量接天血浆中残留量接近允许限量值近允许限量值(0.1mg/kg)。l羊羊一次静注一次静注107mg/kg后后,体内残留消除很快体内

19、残留消除很快,休药休药5天组织天组织(肉、肉、肝、肾、脂肪肝、肾、脂肪)中残留量低于中残留量低于0.1mg/kg。l鱼鱼体内的代谢物主要为体内的代谢物主要为N-乙酰磺胺二甲嘧啶乙酰磺胺二甲嘧啶,少量为羟基化少量为羟基化衍生物和酰基化衍生物。衍生物和酰基化衍生物。磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲氧嘧啶l主要用于防治犊牛、鸡、兔球虫病主要用于防治犊牛、鸡、兔球虫病,亦用于防治鸡传染性亦用于防治鸡传染性鼻炎、禽霍乱、卡氏住白细胞原虫病、猪狗的弓形体病鼻炎、禽霍乱、卡氏住白细胞原虫病、猪狗的弓形体病及诺卡菌病。及诺卡菌病。l家禽家禽饲服后饲服后吸收快而排泄慢吸收快而排泄慢,作用维持时间长。作用维持时间长。肝肝和

20、和肾肾中中有有较高较高的的药物浓度药物浓度,血浆蛋白结合血浆蛋白结合率为率为80%85%。l除肾脏外除肾脏外,其他组织中药物浓度降低至其他组织中药物浓度降低至0.1mg/kg或以下需或以下需休药休药8天。天。蛋鸡蛋鸡或或火鸡火鸡内服后内服后,蛋鸡休药蛋鸡休药6天、火鸡休药天、火鸡休药8天天,这样组织残留可低于允许限量值这样组织残留可低于允许限量值(0.1mg/kg)。l体内乙酰化率低体内乙酰化率低,代谢物代谢物N4-乙酰磺胺二甲嘧啶乙酰磺胺二甲嘧啶主要存在主要存在于于血浆血浆、组织组织和和粪粪中中,消除期约消除期约7天。天。磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲氧嘧啶l蛋鸡蛋鸡饮服饮服1.0g/L/日或日或0

21、.5g/L/日日,连续连续5日日,蛋中有较高的残留蛋中有较高的残留,蛋清和蛋黄的最高残留可达蛋清和蛋黄的最高残留可达30mg/kg和和9mg/kg;残留降至残留降至0.1mg/kg,蛋清需体药蛋清需体药46天天,蛋黄需休药蛋黄需休药7天。天。l与奥美普林与奥美普林(ormethoprim)联用联用,三文鱼三文鱼用药后用药后38天天,两种两种药物在血浆和组织中达到一个相对稳定的残留量。磺胺二药物在血浆和组织中达到一个相对稳定的残留量。磺胺二甲氧嘧啶的最高平均残留量甲氧嘧啶的最高平均残留量:血浆血浆14.3mg/kg、肌肉、肌肉17.7mg/kg、肝、肝7.4mg/kg、肾、肾6.8mg/kg;消

22、除半衰期消除半衰期:血浆血浆h、肌肉、肌肉19h、肝、肝62h、肾、肾45h。l奥美普林的最高平均残留量奥美普林的最高平均残留量:血浆血浆1.5mg/kg、肌肉、肌肉3.7mg/kg、肝、肝9.1mg/kg、肾、肾166.0mg/kg;消除半衰期消除半衰期:血浆血浆63h、肌肉、肌肉143h、肝、肝95h、肾、肾410h。磺胺喹恶啉磺胺喹恶啉l别名磺胺喹沙啉别名磺胺喹沙啉,为类白色或淡黄色粉末为类白色或淡黄色粉末,无臭无臭,不溶于水不溶于水,溶于甲醇、乙醇溶于甲醇、乙醇,易溶于碱性溶液。易溶于碱性溶液。l磺胺喹恶啉属磺胺类药兼有抗球虫作用磺胺喹恶啉属磺胺类药兼有抗球虫作用,广泛用于养禽业广泛用

23、于养禽业,治疗鸡鸭的家禽霍乱及球虫病。治疗鸡鸭的家禽霍乱及球虫病。l家禽家禽内服后内服后吸收迅速吸收迅速,但但排泄缓慢排泄缓慢,残留在组织器官及鸡残留在组织器官及鸡蛋中时间长蛋中时间长。l兔兔饲喂饲喂100mg/kg,一日两次、连喂一日两次、连喂5日日,肝和肾中残留量较肝和肾中残留量较高高,第第4天达峰值。休药天达峰值。休药78天天,肝、肾和血浆中的残留量肝、肾和血浆中的残留量降到降到0.1mg/kg。磺胺噻唑磺胺噻唑l抗菌作用比磺胺嘧啶强抗菌作用比磺胺嘧啶强,能抑制细菌的二氢叶酸合能抑制细菌的二氢叶酸合成酶成酶,阻碍细菌的叶酸合成阻碍细菌的叶酸合成,抑制细菌生长和繁殖。抑制细菌生长和繁殖。l

24、对溶血性链球菌、肺炎杆菌、淋球菌、葡萄球菌、对溶血性链球菌、肺炎杆菌、淋球菌、葡萄球菌、脑膜炎球菌、大肠杆菌及痢疾杆菌等有抗菌作用。脑膜炎球菌、大肠杆菌及痢疾杆菌等有抗菌作用。l用于敏感菌所致的肺炎、出血性败血症、子宫内用于敏感菌所致的肺炎、出血性败血症、子宫内膜炎及禽霍乱、雏白痢等。对感染创可外用其软膜炎及禽霍乱、雏白痢等。对感染创可外用其软膏剂。同时也被用作膏剂。同时也被用作饲料添加剂饲料添加剂,增肥犊牛和猪。增肥犊牛和猪。磺胺噻唑磺胺噻唑l内服吸收不完全内服吸收不完全,马、牛、猪、羊一次内服马、牛、猪、羊一次内服0.1mg/kg,其血药峰浓度仅为其血药峰浓度仅为20mg/L。l其可溶性钠

25、盐其可溶性钠盐肌肉注射后迅速吸收肌肉注射后迅速吸收。吸收后。吸收后排泄迅排泄迅速速,单胃动物内服后单胃动物内服后,在在12h内经肾排出约内经肾排出约50%,24h约约90%。其。其半衰期短半衰期短,不易维持有效血浓度。不易维持有效血浓度。l在体内与血浆蛋白的在体内与血浆蛋白的结合率结合率和和乙酰化程度乙酰化程度均均较高较高,其其乙酰化物溶解度比原药低乙酰化物溶解度比原药低,易产生结晶尿而损害肾脏。易产生结晶尿而损害肾脏。巴喹普林巴喹普林l巴喹普林巴喹普林(BQP)是一种是一种新型动物专用的磺胺类药物新型动物专用的磺胺类药物,最早最早由美国由美国Wellcome Foundation 公司于公司

26、于1989年创制年创制,1991年年美国美国Malhnd Rrodt公司将其与磺胺类药物配成复方制剂公司将其与磺胺类药物配成复方制剂上市。上市。lBQP抗菌谱与其他磺胺类药相近抗菌谱与其他磺胺类药相近,同时又是磺胺等同时又是磺胺等抗菌药抗菌药物的增效剂物的增效剂。主要用于牛的肺炎及肠炎、腐蹄病、脐部。主要用于牛的肺炎及肠炎、腐蹄病、脐部感染、感染性外伤、感染性角膜结膜炎、非泌乳期牛的感染、感染性外伤、感染性角膜结膜炎、非泌乳期牛的木舌病和放线菌下颌肿块木舌病和放线菌下颌肿块;猪胃及肠道感染、胸膜肺炎、猪胃及肠道感染、胸膜肺炎、乳腺炎、子宫炎、无乳综合症等乳腺炎、子宫炎、无乳综合症等;狗的泌尿系

27、、呼吸系、狗的泌尿系、呼吸系、胃肠道及皮肤感染。胃肠道及皮肤感染。巴喹普林巴喹普林l内服生物利用度高且分布广泛、体内的消除半内服生物利用度高且分布广泛、体内的消除半衰期长。衰期长。猪肌注猪肌注的休药期为的休药期为28天天,牛肌注牛肌注和和内服内服的休药期分别为的休药期分别为28天和天和21天。天。奶牛奶牛用药后的弃用药后的弃乳期为乳期为4天。主要经天。主要经胆汁和肾排泄胆汁和肾排泄。l猪猪、牛牛用药后用药后1442天天,肝肝、肾肾和和注射部位注射部位的母药的母药残留在总残留中占残留在总残留中占很低很低的百分比的百分比,同时同时肌肉肌肉和和脂脂肪肪的残留量低于检测方法的测定限。的残留量低于检测方

28、法的测定限。猪皮中含猪皮中含相当高的母药残留相当高的母药残留,而且降解和消除都比牛快而且降解和消除都比牛快,残残留量相应亦低。留量相应亦低。二、样品处理二、样品处理l常用的磺胺类药物常用的磺胺类药物,除少数外除少数外,一般具有以下的基本结构一般具有以下的基本结构:磺酰胺基其化学性质可从四部分结构上表现出来其化学性质可从四部分结构上表现出来,即即:磺酰胺基磺酰胺基( SO2NHR)、芳伯氨基芳伯氨基( NH2)、芳环、芳环、N1及及N4上的取代基。上的取代基。(R=H),两性化合物两性化合物,可溶于酸或碱溶液。可溶于酸或碱溶液。磺酰氨基的磺酰氨基的酸性酸性表现在表现在N1上的活泼氢原子上的活泼氢

29、原子,其酸其酸性的大小取决于性的大小取决于N1上的上的取代基取代基R。R的吸电性的吸电性越大越大,则其酸性越强。则其酸性越强。化学性质化学性质l本类药物本类药物水溶性较低水溶性较低,易溶于极性有机溶剂易溶于极性有机溶剂如乙醇、丙酮、如乙醇、丙酮、乙腈、氯仿和二氯甲烷乙腈、氯仿和二氯甲烷,难溶于非极性有机溶剂难溶于非极性有机溶剂。l由于磺胺药具有酸碱两性由于磺胺药具有酸碱两性,通过调节溶液的通过调节溶液的pH值值(pH79),可以使磺胺药呈不同状态可以使磺胺药呈不同状态,即即中性分子中性分子还是还是离子离子分子分子,从而改变水相和有机相的分配系数。从而改变水相和有机相的分配系数。l例如例如,磺胺

30、的中性分子磺胺的中性分子,在二氯甲烷等有机溶剂中分配系在二氯甲烷等有机溶剂中分配系数大数大;离子态分子离子态分子,则水性溶液中分配系数大。则水性溶液中分配系数大。l生物样品通过生物样品通过多次液多次液-液萃取液萃取,可达到净化的目的。可达到净化的目的。1、提取、提取l液体样品液体样品(如牛奶如牛奶)可用水稀释过滤后可用水稀释过滤后,荧光直接检测荧光直接检测,亦可亦可用水性缓冲液或氯化钠溶液稀释用水性缓冲液或氯化钠溶液稀释,再进行净化处理。再进行净化处理。l蜂蜜样品蜂蜜样品可用水或水性缓冲液稀释。可用水或水性缓冲液稀释。l组织样品组织样品(如肌肉、肾脏、肝脏如肌肉、肾脏、肝脏)的预处理相对复杂些

31、的预处理相对复杂些,一一般采取均质、液般采取均质、液-液萃取或固相萃取净化等步骤。液萃取或固相萃取净化等步骤。l液液-液萃取操作烦琐液萃取操作烦琐,而蛋白沉淀后直接进样而蛋白沉淀后直接进样,虽操作简便、虽操作简便、并具有较高的回收率并具有较高的回收率,但对色谱柱的损害较为严重。但对色谱柱的损害较为严重。溶剂提取溶剂提取l溶剂提取溶剂提取时时,应尽可能使组织中应尽可能使组织中结合态结合态的残留物溶解的残留物溶解,并并且除去大部分的蛋白质。且除去大部分的蛋白质。l一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮或混合溶剂等甲烷、丙酮或混合溶

32、剂等极性溶剂极性溶剂进行提取。进行提取。l二氯甲烷中加入二氯甲烷中加入离子对试剂离子对试剂四丁基铵四丁基铵(pH10),对鱼肉和动对鱼肉和动物组织的提取物组织的提取,发现磺胺二甲氧嘧啶和奥美普林的提取率发现磺胺二甲氧嘧啶和奥美普林的提取率很高。很高。l另外另外,提取过程中加入提取过程中加入无水硫酸钠无水硫酸钠可脱去组织样品中的水可脱去组织样品中的水分分,有助于样品的充分提取。有助于样品的充分提取。2、净化、净化l初提取液中含大量的内源性干扰杂质初提取液中含大量的内源性干扰杂质,在痕量分析时会干在痕量分析时会干扰组分的测定扰组分的测定,因此还需要净化处理。因此还需要净化处理。l净化方法净化方法有

33、液有液-液萃取、固相萃取、基质固相分散、在液萃取、固相萃取、基质固相分散、在线痕量富集、液相色谱、在线透析和超临界流体萃取等。线痕量富集、液相色谱、在线透析和超临界流体萃取等。l有时为了获得高的净化效果有时为了获得高的净化效果,几种方法相结合应用。几种方法相结合应用。液液-液萃取液萃取l液液-液萃取液萃取尽管操作烦琐、耗费溶剂尽管操作烦琐、耗费溶剂,但在所有净化方法但在所有净化方法中应用最广。中应用最广。l通过通过调节调节样液的样液的pH值值,使磺胺类药物有选择性地在有机使磺胺类药物有选择性地在有机相与水相之间进行分配。相与水相之间进行分配。l例如例如,有机相提取液中的磺胺类药物可以被强酸溶液

34、或碱有机相提取液中的磺胺类药物可以被强酸溶液或碱性溶液抽提性溶液抽提,若将水相提取液调节若将水相提取液调节pH至至5.15.6,可用二氯可用二氯甲烷或乙酸乙酯进行再抽提。甲烷或乙酸乙酯进行再抽提。l离子对提取法离子对提取法亦有应用亦有应用,例如例如,水相提取液调节水相提取液调节pH至至1011,加入四丁基铵离子对试剂加入四丁基铵离子对试剂,形成磺胺类离子对形成磺胺类离子对,可以可以被二氯甲烷提取。被二氯甲烷提取。l用用正己烷正己烷或或乙醚乙醚进行液进行液-液萃取液萃取,可以可以脱脂肪脱脂肪。固相萃取固相萃取l由于甲氧苄啶常和其他磺胺药物同时使用由于甲氧苄啶常和其他磺胺药物同时使用,而它们具有不

35、而它们具有不同的同的pKa和溶剂亲和力和溶剂亲和力,难以在给定的难以在给定的pH值和溶剂系统值和溶剂系统中同时提取中同时提取,宜采用宜采用固相萃取法固相萃取法(SPE)。l常用的常用的SPE柱柱,如如C18和和C8、硅胶柱、离子交换柱、硅胶柱、离子交换柱、Florisil柱和碱性氧化铝柱等。柱和碱性氧化铝柱等。l该法操作较为简便、并对生物样品具有较高的该法操作较为简便、并对生物样品具有较高的“净化净化”能力能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可将几种小可提高方法的提取回收率和精密度。亦可将几种小柱串联应用柱串联应用,可获得更高的净化效果。可获得更高的净化效果。l基质固相分散法基质固相分散法

36、目前只使用目前只使用C18吸附剂吸附剂,该方法简便、提该方法简便、提取率和净化能力均高取率和净化能力均高,已应用于鱼肉、牛肉、猪肉和牛奶已应用于鱼肉、牛肉、猪肉和牛奶样品的预处理。样品的预处理。柱切换技术柱切换技术l在线痕量富集技术在线痕量富集技术可分离可分离/净化牛奶样品中净化牛奶样品中9种磺胺种磺胺类药物：类药物：l磺胺类药物在预富集柱磺胺类药物在预富集柱RP-C18(10m)中被保留浓缩中被保留浓缩,干扰杂质用淋洗剂洗去后干扰杂质用淋洗剂洗去后,预柱中的磺胺类药物再用预柱中的磺胺类药物再用洗脱液洗脱洗脱液洗脱,进入分析柱中分离。进入分析柱中分离。l有研究者将有研究者将TSK凝胶渗透柱和凝

37、胶渗透柱和PLRP-S预富集柱串预富集柱串联使用联使用,用于净化猪组织中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺用于净化猪组织中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑和甲氧苄啶。甲恶唑和甲氧苄啶。在线透析在线透析l采取采取在线透析、富集的方法在线透析、富集的方法,可测定动物源食品可测定动物源食品(肌肉、牛奶和蛋肌肉、牛奶和蛋)中的中的13种磺胺类药物：种磺胺类药物：l利用纤维素膜选择性渗过分析物利用纤维素膜选择性渗过分析物,到达预富集柱到达预富集柱(C18、XAD-2或或XAD-4),干扰杂质用淋洗剂洗去干扰杂质用淋洗剂洗去,浓缩后的分析物被洗脱后浓缩后的分析物被洗脱后,进入分析柱分离。进入分析柱分离。超临界流体萃取超临

38、界流体萃取l超临界流体萃取法超临界流体萃取法被用于猪肾脏样品中甲氧苄被用于猪肾脏样品中甲氧苄啶和啶和3种类固醇激素的提取分离。种类固醇激素的提取分离。lCO2提取时提取时,分析物被保留在柱的进样端分析物被保留在柱的进样端,大部分大部分内源性干扰物被洗去后内源性干扰物被洗去后,分析物和一些极性干扰分析物和一些极性干扰物用加入改性剂的物用加入改性剂的CO2洗脱。洗脱。三、分析方法三、分析方法l生物样品中磺胺类药物的分析生物样品中磺胺类药物的分析,光谱法光谱法(分光光度分光光度法、荧光光谱法法、荧光光谱法)和和色谱法色谱法（薄层色谱、气相色（薄层色谱、气相色谱、液相色谱、超临界流体色谱）具有灵敏、谱

39、、液相色谱、超临界流体色谱）具有灵敏、快速、方便等优点。快速、方便等优点。l例如：分光光度法测定牛组织中的磺胺甲嘧啶，例如：分光光度法测定牛组织中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑，奶中的乙酰磺胺、蜂蜜中的磺胺噻唑，奶中的乙酰磺胺、 N-乙酰乙酰磺胺二甲嘧啶；磺胺二甲嘧啶；l薄层色谱法测定动物组织、猪肝、奶中的磺胺薄层色谱法测定动物组织、猪肝、奶中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。1、光谱法、光谱法l光谱法主要用于样品中光谱法主要用于样品中个别磺胺类药物个别磺胺类药物的分析的分析,最常用的最常用的方法为方法为重氮化重氮化-偶合反应分光光度法偶合反应分光光度法。l无无N4取代

40、基的磺胺类药物取代基的磺胺类药物,或或N4为酰氨基的磺胺类药物为酰氨基的磺胺类药物,经水解经水解,在在酸性介质酸性介质中经中经重氮化重氮化后后,可在可在碱性碱性中与酚类中与酚类(如如-萘酚、麝香草酚萘酚、麝香草酚)偶合偶合,在在中性中性中与变色酸偶合中与变色酸偶合,或在或在弱弱酸性酸性中与胺类偶合呈色中与胺类偶合呈色,于空白校正下于空白校正下,在一定波长处测在一定波长处测其吸收度。与标准品对照其吸收度。与标准品对照,即可测定其含量。即可测定其含量。l最常应用的是酸性偶合试剂最常应用的是酸性偶合试剂,如如N-(1-萘基萘基)乙二胺乙二胺(Bratton Marshall方法方法),测定波长随组分

41、的不同略有不测定波长随组分的不同略有不同同,一般为一般为540545nm,已应用于牛组织和奶中的磺胺二已应用于牛组织和奶中的磺胺二甲嘧啶检测、蜂蜜中的磺胺噻唑检测。甲嘧啶检测、蜂蜜中的磺胺噻唑检测。l也有应用也有应用1-(-二乙氨基二乙氨基-乙基乙基-氨基氨基)萘萘,优点为偶合形成的优点为偶合形成的偶氮染料是水溶性的偶氮染料是水溶性的,且其吸收系数也较大。这两种偶合且其吸收系数也较大。这两种偶合试剂遇亚硝酸都能变色试剂遇亚硝酸都能变色,所以所以,经重氮化后经重氮化后,应以氨基磺酸应以氨基磺酸盐将剩余的亚硝酸分解除去。盐将剩余的亚硝酸分解除去。l光谱法选择性差光谱法选择性差,但可作为一种但可作为

42、一种筛选法筛选法应用应用,如牛奶中磺如牛奶中磺胺醋酰和磺胺脒啶的筛选测定。胺醋酰和磺胺脒啶的筛选测定。2、薄层色谱法、薄层色谱法l薄层色谱薄层色谱(TLC)经常作为样品筛选方法。经常作为样品筛选方法。l经薄层色谱分离后的磺胺类药物经薄层色谱分离后的磺胺类药物,可按两种方法进行定量可按两种方法进行定量分析：分析：洗脱定量法洗脱定量法和和薄层扫描定量法薄层扫描定量法。l洗脱定量法：洗脱定量法：从板上洗脱后从板上洗脱后,可按分光光度法可按分光光度法,或与荧光或与荧光胺、对二甲氨基苯甲醛反应后的比色法胺、对二甲氨基苯甲醛反应后的比色法,或重氮化或重氮化-偶合偶合后的比色法进行。其中后的比色法进行。其中

43、,以以重氮化重氮化-偶合法偶合法最好。最好。l但与实际相比但与实际相比,测得值尚低测得值尚低5%15%。结果偏低的主要原。结果偏低的主要原因是薄层色谱条件不稳定因是薄层色谱条件不稳定,吸附剂可能部分损失。板上洗吸附剂可能部分损失。板上洗脱后重氮化脱后重氮化-偶合法如下偶合法如下:l刮下的薄层用刮下的薄层用1mol/L HCl 10mL提取提取,所得提取所得提取液先加液先加0.1%NaNO2液液1mL,5min后后,再加再加0.5%氨氨基磺酸铵液基磺酸铵液1mL,强烈振摇后强烈振摇后,加入加入0.1% N, N-乙乙基基-N (1-萘基萘基)乙二胺草酸盐溶液乙二胺草酸盐溶液1mL,10min后后

44、,用用3cm的吸收池的吸收池,以同法所得的试剂空白为对照以同法所得的试剂空白为对照,于于546mm处处(SMP、SIZ、ST的的max)或或542nm处处为为SM2 、SPZ(磺胺苯吡唑）的磺胺苯吡唑）的max进行测定。进行测定。薄层扫描定量法薄层扫描定量法l薄层扫描法（薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品的质量检查的方法。的质量检查

45、的方法。l随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，薄层扫描法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提薄层扫描法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提高。高。l与高效液相色谱法相比，具有多通道效应，可同时平行分离与高效液相色谱法相比，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。 l应用应用TLC紫外分光光度法进行磺胺类药物定量紫外分光光度法进行

46、磺胺类药物定量分析时分析时,有有7%11%的损失。的损失。l如用无黏合剂的硅胶如用无黏合剂的硅胶,以以0.1mol/L NaOH调糊制调糊制板板,可以获得较好的回收率。可以获得较好的回收率。lTLC的优点是设备简单、可以同时在多块板上的优点是设备简单、可以同时在多块板上点样点样,处理大量样品时间短处理大量样品时间短,适合饲料、组织、体适合饲料、组织、体液样品的筛选分析。液样品的筛选分析。3、气相色谱法、气相色谱法l气相色谱法气相色谱法(GC)具有高的灵敏度和选择性具有高的灵敏度和选择性,但由于磺胺类但由于磺胺类药物药物难挥发难挥发, 测定时需要测定时需要衍生化衍生化。l一般用一般用重氮甲烷重氮

47、甲烷甲基化甲基化,或甲基化后再用或甲基化后再用N-甲基甲基-N-三甲基三甲基硅烷基三氟乙酰胺硅烷基三氟乙酰胺(MSTFA)进行进行硅烷化硅烷化或或N-甲基双甲基双(三氟三氟乙酰胺乙酰胺)(MBTFA)乙酰化乙酰化,以增加挥发性以增加挥发性,改善色谱特性改善色谱特性(热热稳定性、降低极性稳定性、降低极性),氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器测定。测定。l除了甲基化外除了甲基化外,也可利用也可利用水解法水解法将磺胺类药物水解成相应将磺胺类药物水解成相应的的挥发性胺类挥发性胺类,继之以继之以GC法测定法测定,l也可与适宜的也可与适宜的卤化试剂卤化试剂反应反应,生成相应的生成相应的衍生物衍生物,如三

48、氟乙如三氟乙酰化或七氟丁酰化衍生物等酰化或七氟丁酰化衍生物等,以以电子捕获检测器电子捕获检测器测定。测定。GC分离柱分离柱l磺胺类药物的分离柱可用磺胺类药物的分离柱可用填充柱填充柱和和石英毛细管石英毛细管柱柱,通常毛细管柱通常毛细管柱(DB-5)分离效果更好。分离效果更好。l样品确证分析时样品确证分析时,一般用一般用质谱检测器质谱检测器测定测定,离子源离子源采用采用化学电离化学电离和和电子轰击电子轰击接口。接口。l多数磺胺类药物含有多数磺胺类药物含有对氨基苯磺酰基对氨基苯磺酰基结构部分结构部分,它们的结构差异只是它们的结构差异只是N1取代基取代基的不同的不同,所以本类所以本类药物的质谱有许多共

49、有的特征峰药物的质谱有许多共有的特征峰,如如m/z 56、l40、108、92、65和和39等碎片离子峰。等碎片离子峰。4、超临界色谱法、超临界色谱法lRamsey等用超临界流体色谱法测定猪肾组织中等用超临界流体色谱法测定猪肾组织中的甲氧苄啶和三种类固醇激素的甲氧苄啶和三种类固醇激素,分析柱为分析柱为Spherisorb 5氨基键合柱氨基键合柱,含甲醇的含甲醇的CO2作流动相作流动相,热喷雾电离串联质谱检测器测定热喷雾电离串联质谱检测器测定,检测限约检测限约10mg/kg,对于组织和奶中对于组织和奶中g/kg级残留量的检测级残留量的检测,灵敏度不够。灵敏度不够。5、高效液相色谱法、高效液相色谱

50、法l20世纪世纪80年代以来年代以来,普遍采用普遍采用反相色谱法反相色谱法,使用使用C18、C8和苯和苯基柱基柱,尤以尤以C18应用最广应用最广,以甲醇以甲醇(或乙腈或乙腈)-水水(含醋酸或偏磷含醋酸或偏磷酸酸)系统为流动相系统为流动相,可分离检测数种磺胺类药物及其代谢物可分离检测数种磺胺类药物及其代谢物,样品可用甲醇或碱性缓冲液溶解制备。样品可用甲醇或碱性缓冲液溶解制备。l流动相流动相中加入适量戊磺酸、己磺酸和辛磺酸离子对试剂中加入适量戊磺酸、己磺酸和辛磺酸离子对试剂,可以改变磺胺类药物的保留时间和改善峰形。可以改变磺胺类药物的保留时间和改善峰形。lHPLC的的洗脱方式洗脱方式,一般采用等度

51、洗脱一般采用等度洗脱,若需同时检测数种若需同时检测数种磺胺类药物或多种代谢物磺胺类药物或多种代谢物,可采用梯度洗脱可采用梯度洗脱,通过改变流动通过改变流动相流速或配比相流速或配比,实现在较短的时间内对生物样品中混合组实现在较短的时间内对生物样品中混合组分或代谢物的分离。分或代谢物的分离。l由于甲氧苄啶分子结构中不含磺酰胺结构由于甲氧苄啶分子结构中不含磺酰胺结构,其碱性较其他其碱性较其他磺胺类药物强磺胺类药物强,在在HPLC分离检测时分离检测时,在在ODS柱上会产生柱上会产生一定的拖尾现象一定的拖尾现象,可采用反相离子对色谱法可采用反相离子对色谱法,以十二烷基以十二烷基磺酸或四丁基铵盐作为反离子

52、磺酸或四丁基铵盐作为反离子,也可使用扫尾剂三乙胺改也可使用扫尾剂三乙胺改善其拖尾现象。但离子对色谱法对色谱柱有一定的损害善其拖尾现象。但离子对色谱法对色谱柱有一定的损害作用作用,应予注意。应予注意。l有些用通常的有些用通常的HPLC法难以分离的磺胺类药物法难以分离的磺胺类药物,使用使用-环糊环糊精化学键合固定相很容易达到分离。精化学键合固定相很容易达到分离。l其分离原理其分离原理,是基于当磺胺药物分子接近或透入到是基于当磺胺药物分子接近或透入到-环糊环糊精疏水腔内时可形成包合物精疏水腔内时可形成包合物,改变了磺胺类药物分子的某改变了磺胺类药物分子的某些理化性质。包合物的稳定性与磺胺类药物分子和

53、些理化性质。包合物的稳定性与磺胺类药物分子和-环糊环糊精分子的大小有关精分子的大小有关,与与-环糊精作用强的磺胺类药物洗脱环糊精作用强的磺胺类药物洗脱较难较难,有较长的保留时间有较长的保留时间;与与-环糊精作用弱的磺胺类药物环糊精作用弱的磺胺类药物洗脱容易洗脱容易,有较短的保留时间有较短的保留时间,据此据此,可将磺胺类药物分离。可将磺胺类药物分离。l本法选择的流动相为磷酸盐缓冲液本法选择的流动相为磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇甲醇(85+15),可分离可分离7种磺胺类药物的混合物。种磺胺类药物的混合物。紫外检测器紫外检测器l磺胺类药物在磺胺类药物在250290nm波长区间有强的紫外吸收波长区

54、间有强的紫外吸收,因此因此HPLC的在线检测的在线检测,一般采用紫外检测一般采用紫外检测。l为提高检测灵敏度为提高检测灵敏度,可使用可使用对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛(DMAB) 柱后衍生化柱后衍生化,于于450nm处紫外处紫外-可见光检测可见光检测,已应用于蛋、奶和肌肉组织中已应用于蛋、奶和肌肉组织中13种磺胺类药物的测种磺胺类药物的测定定,以及动物组织中以及动物组织中6种磺胺类药物的测定。种磺胺类药物的测定。荧光检测器荧光检测器l磺胺类药物本身具有磺胺类药物本身具有弱的荧光弱的荧光特性特性,但荧光检测时还但荧光检测时还需要需要荧光衍生化荧光衍生化。l常用的荧光衍生剂有常用的荧光衍生剂有

55、邻苯二甲醛邻苯二甲醛(OPA)、荧胺荧胺和和巯巯基乙醇基乙醇等。等。l磺胺类药物与磺胺类药物与OPA或其衍生物或其衍生物(如如4-羟基羟基-邻苯二甲邻苯二甲醛醛)在酸性介质中反应呈现蓝色荧光在酸性介质中反应呈现蓝色荧光,检出量可达检出量可达1 10-9810-8mol/mL的浓度范围。的浓度范围。l荧胺荧胺作为荧光衍生剂作为荧光衍生剂,可选择性地用于具有脂肪可选择性地用于具有脂肪族伯胺基团药物共存时芳伯胺药物的微量测定族伯胺基团药物共存时芳伯胺药物的微量测定,其检测限量可达其检测限量可达0.810-9mol/mL。l此外此外,也有人采用也有人采用2,6二氨基吡啶二氨基吡啶作为荧光衍生剂作为荧光

56、衍生剂,其检出量可达其检出量可达10-9 10-10mol/mL。l衍生化方式有柱前衍生化和柱后衍生化。衍生化方式有柱前衍生化和柱后衍生化。电化学检测器电化学检测器l亦可使用电化学检测器亦可使用电化学检测器,但在尿中甲氧苄啶代谢但在尿中甲氧苄啶代谢物的测定中物的测定中,与紫外检测比较与紫外检测比较,电化学检测器的检电化学检测器的检测灵敏度并无显著提高测灵敏度并无显著提高,且不能同时检测甲氧苄且不能同时检测甲氧苄啶。啶。l若需同时检测甲氧苄啶若需同时检测甲氧苄啶,可通过提高工作电位实可通过提高工作电位实现现,但此时检测灵敏度将显著下降。但此时检测灵敏度将显著下降。例子例子1lHorie等报道了蜂

57、蜜中等报道了蜂蜜中10种磺胺类药物的种磺胺类药物的LC-UV测定方法。测定方法。l5g蜂蜜样品中加入蜂蜜样品中加入50mL 30%氯化钠溶液氯化钠溶液,用二氯甲烷提取用二氯甲烷提取,提取液中加入无水硫酸钠脱水提取液中加入无水硫酸钠脱水,过过Sep-Pak Florisil固相萃固相萃取柱取柱,用用10mL乙腈乙腈-二氯甲烷二氯甲烷(2+8)淋洗淋洗,用用10mL甲醇甲醇-二氯二氯甲烷甲烷(2+8)洗脱洗脱,浓缩至干浓缩至干,用用1mL流动相溶解流动相溶解,进样。进样。l色谱柱为色谱柱为LiChrosphere RP-18e(25cm,5m),以以0.05mol/L 磷酸二氢钠磷酸二氢钠-乙腈乙

58、腈(2+1)作流动相作流动相,流速流速0.5mL/min,275nm处处紫外检测紫外检测,能检测到蜂蜜中磺胺类药物浓度能检测到蜂蜜中磺胺类药物浓度50g/kg。标准品和蜂蜜样品色谱图标准品和蜂蜜样品色谱图1一磺胺噻唑一磺胺噻唑;2一磺胺嘧啶一磺胺嘧啶;3一磺胺甲嘧啶一磺胺甲嘧啶;4一磺胺甲氧哒嗪一磺胺甲氧哒嗪; 5一磺胺二甲嘧啶一磺胺二甲嘧啶;6-磺胺间甲氧嘧啶磺胺间甲氧嘧啶;7一磺胺氯达嗪一磺胺氯达嗪;8一磺胺甲蟋唑一磺胺甲蟋唑;9一磺胺喹嗯啉一磺胺喹嗯啉;10一磺胺二甲氧嘧啶一磺胺二甲氧嘧啶例子例子2lSimeonido等报道了柱前衍生化离子对色谱法测定鸡肉等报道了柱前衍生化离子对色谱法测

59、定鸡肉中中4种磺胺类药物。种磺胺类药物。l3g组织样品中加入组织样品中加入30mL氯仿氯仿,均质均质,离心后上清液过滤离心后上清液过滤,取取10mL滤液加入滤液加入1mL 3mol/L盐酸提取盐酸提取,用荧胺衍生化用荧胺衍生化,色谱色谱柱为柱为Ncleosil 120 C18柱柱(25cm,5m),以以0.02mol/L磷酸盐磷酸盐(pH4)-乙腈乙腈(66+34)含含20mmol/L辛磺酸钠作流动相辛磺酸钠作流动相,流速流速1.2mL/min,荧光检测荧光检测,激发波长激发波长405nm,发射波长发射波长495nm。l在上述条件下在上述条件下,检测限检测限:磺胺嘧啶磺胺嘧啶3g/kg、磺胺二

60、甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶4g/kg、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶9g/kg、磺胺喹恶啉、磺胺喹恶啉40g/kg。标准品和鸡肉样品色谱图标准品和鸡肉样品色谱图1一磺胺嘧啶一磺胺嘧啶10g/kg; 2一磺胺二甲嘧啶一磺胺二甲嘧啶20g/kg;3一磺胺二甲氧嘧啶一磺胺二甲氧嘧啶30g/kg; 4一磺胺喹恶啉一磺胺喹恶啉100g/kgA A磺胺类药物标准品磺胺类药物标准品B B空白肌肉空白肌肉C C空白添加样空白添加样例子例子3lLe Bolaire等采用基质固相分散技术等采用基质固相分散技术LC法分析肌肉组织中法分析肌肉组织中8种磺胺类药物和种磺胺类药物和6种其他药物。种其他药物。l0.5g样品中加入

61、样品中加入C18填料填料,混匀混匀,装入装入10mL小柱中小柱中,用正己烷用正己烷淋洗淋洗,用用8mL二氯甲烷洗脱二氯甲烷洗脱,浓缩至干浓缩至干,用用0.25mL 0.01mol/L醋酸铵醋酸铵(pH5.2)-乙腈乙腈-甲醇甲醇(86+10+4)溶解。溶解。l色谱柱为色谱柱为ODS柱柱(25cm,5m),流动相为流动相为0.01mol/L醋酸盐醋酸盐(pH5.2)和乙腈和乙腈-甲醇甲醇(70+30),梯度淋洗梯度淋洗,流速流速1mL/min,275nm和和365nm处紫外检测。处紫外检测。l在上述条件下在上述条件下,能检测到肌肉组织中药物浓度能检测到肌肉组织中药物浓度3.566g/kg。例子例

62、子4lWen等采用固相微萃取等采用固相微萃取(SPME)-液相色谱法测定牛奶中液相色谱法测定牛奶中5种种磺胺类药物残留。磺胺类药物残留。l聚聚(甲基丙烯酸甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯乙二醇二甲基丙烯酸酯)毛细管整体柱作为萃毛细管整体柱作为萃取介质取介质,实验优化了影响萃取效率的参数。实验优化了影响萃取效率的参数。l样品先用乙醇提取样品先用乙醇提取,再用磷酸盐缓冲液稀释再用磷酸盐缓冲液稀释,离心后将样品溶离心后将样品溶液直接注入液直接注入SPME装置中装置中,在线在线LC分离分离,V检测。浓度在检测。浓度在205000ng/mL(磺胺醋酰钠磺胺醋酰钠1005000ng/mL)范围内范围内,峰

63、面积峰面积与浓度的线性相关系数与浓度的线性相关系数(R2)0.998。l磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶钠和磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺间甲氧嘧啶钠和磺胺醋酰钠的检测限分别为磺胺醋酰钠的检测限分别为2.0ng/mL, 2.8ng/mL, 1.7ng/mL, 2.5ng/mL和和22ng/mL。批内和批间的重复性也显示良好。批内和批间的重复性也显示良好,相相对标准偏差分别对标准偏差分别 10.0%和和9.94%。例子例子5lGehring等采用等采用LC-APCI-MS法分析鱼组织磺胺法分析鱼组织磺胺嘧啶：嘧啶：l样品用乙腈提取样品用乙腈提取, 二氯甲烷液二氯甲烷液-液分配液分配,丙磺酸交丙磺酸交换柱和换柱和C18固相萃取柱净化固相萃取柱净化,分析柱为分析柱为Inertsil ODS-2柱柱,以乙腈以乙腈-2%醋酸醋酸(20+80)作流动相作流动相,流速流速lmL/min。