《SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量学习教案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量学习教案（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、会计学1SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定聚丙烯酰胺凝胶电泳测定(cdng)蛋蛋白质分子量白质分子量第一页，共33页。 SDS- SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳技术是动物聚丙稀酰胺凝胶电泳技术是动物聚丙稀酰胺凝胶电泳技术是动物聚丙稀酰胺凝胶电泳技术是动物生物化学生物化学生物化学生物化学(shn w hu xu)(shn w hu xu)实验技术实验技术实验技术实验技术教学中一个重要实验之一。教学中一个重要实验之一。教学中一个重要实验之一。教学中一个重要实验之一。第1页/共32页第二页，共33页。 能够带动生化实验技术综合型实验项能够带动生化实验技术综合型实验项能够带动生化实验技术综合型实验项能够带动生化
2、实验技术综合型实验项目的开设。目的开设。目的开设。目的开设。 如：蛋白质盐析如：蛋白质盐析如：蛋白质盐析如：蛋白质盐析(yn x)(yn x)沉淀提取沉淀提取沉淀提取沉淀提取 葡葡葡葡聚糖凝胶层析分离聚糖凝胶层析分离聚糖凝胶层析分离聚糖凝胶层析分离 DEAE- DEAE-纤维素分离提纤维素分离提纤维素分离提纤维素分离提纯蛋白质纯蛋白质纯蛋白质纯蛋白质 蛋白质纯度鉴定、蛋白质分子蛋白质纯度鉴定、蛋白质分子蛋白质纯度鉴定、蛋白质分子蛋白质纯度鉴定、蛋白质分子量测定等。量测定等。量测定等。量测定等。第2页/共32页第三页，共33页。一、实验一、实验(shyn)(shyn)目的目的通 过 该 实 验
3、使 学 生 掌 握SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理；掌握该技术的操作方法（基础性很强，使用(shyng)范围宽阔；运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定。第3页/共32页第四页，共33页。二、实验二、实验(shyn)(shyn)原理原理 n n带带电电质质点点在在电电场场中中向向带带有有异异相相电电荷荷的的电电极极移移动动，这这种种现现象象称称为为电电泳。泳。n n电电泳泳分分类类：移移动动界界面面电电泳泳、区区带带电泳等。电泳等。n n区区带带电电泳泳 是是在在半半固固相相或或胶胶状状介介质质 上上 加加 一一 个个 点点 或或 一一 薄薄 层层 样样 品品(yngpn)(yn
4、gpn)溶溶液液，然然后后加加电电场场，分分子子在在支支持持介介质质上上或或支支持持介介质质中中迁迁移。移。 第4页/共32页第五页，共33页。 区带电泳使用区带电泳使用区带电泳使用区带电泳使用(shyng)(shyng)(shyng)(shyng)不同的支持介质，有滤不同的支持介质，有滤不同的支持介质，有滤不同的支持介质，有滤纸、纤维素粉、聚氯乙烯树脂、淀粉凝胶、琼脂凝胶、纸、纤维素粉、聚氯乙烯树脂、淀粉凝胶、琼脂凝胶、纸、纤维素粉、聚氯乙烯树脂、淀粉凝胶、琼脂凝胶、纸、纤维素粉、聚氯乙烯树脂、淀粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（醋酸纤
5、维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（PAGEPAGEPAGEPAGE）和琼）和琼）和琼）和琼脂糖凝胶。脂糖凝胶。脂糖凝胶。脂糖凝胶。第5页/共32页第六页，共33页。 （一）分类（一）分类（一）分类（一）分类 PAGEPAGEPAGEPAGE根根根根据据据据其其其其有有有有无无无无浓浓浓浓缩缩缩缩效效效效应应应应，分分分分为为为为连连连连续续续续系系系系统统统统和和和和不不不不连续系统两大类：连续系统两大类：连续系统两大类：连续系统两大类： 1. 1. 1. 1. 连连连连续续续续系系系系统统统统：电电电电泳泳泳泳体体体体系系系系中中中中缓缓缓缓冲冲冲冲液液液液p
6、HpHpHpH值值值值及及及及凝凝凝凝胶胶胶胶浓浓浓浓度度度度相相相相同同同同，带带带带电电电电颗颗颗颗粒粒粒粒在在在在电电电电场场场场作作作作用用用用(zuyng)(zuyng)(zuyng)(zuyng)下下下下，主主主主要要要要靠靠靠靠电电电电荷荷荷荷和和和和分子筛效应。分子筛效应。分子筛效应。分子筛效应。 第6页/共32页第七页，共33页。 2.2.不不连连续续系系统统：由由于于缓缓冲冲液液离离子子成成分分、pHpH、凝凝胶胶浓浓度度及及电电位位梯梯度度的的不不连连续续性性，带带电电颗颗粒粒在在电电场场中中泳泳动动不不仅仅(bjn)(bjn)有有电电荷荷效效应应，分分子子筛筛效效应应，
7、还还具具有有浓浓缩缩效效应应，因因而而其其分分离离条条带清晰度及分辨率均较前者佳。带清晰度及分辨率均较前者佳。第7页/共32页第八页，共33页。 （二）特点（二）特点（二）特点（二）特点(tdin)(tdin)(tdin)(tdin)： SDS- SDS- SDS- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进聚丙烯酰胺凝胶系统中引进聚丙烯酰胺凝胶系统中引进聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDSSDSSDSSDS（十二（十二（十二（十二烷基磺酸钠）。烷基磺酸钠）。烷基磺酸钠）。烷基磺酸钠）。 第8页/共32页第九页，共
8、33页。 蛋蛋白白质质在在一一定定浓浓度度的的含含有有强强还还原原剂剂的的SDSSDS溶溶液液中中，与与SDSSDS分分子子按按比比例例结结合合，形形成成带带负电荷的负电荷的SDS-SDS-蛋白质复合物。蛋白质复合物。 蛋蛋白白质质丧丧失失了了原原有有的的电电荷荷状状态态形形成成仅仅保保持持原原有有分分子子大大小小(dxio)(dxio)为为特特征征的的负负离离子子团团块块，降降低低或或消消除除了了各各种种蛋蛋白白质质分分子子之之间间天天然然的的电电荷荷差差异异，因因此此在在进行电泳时，进行电泳时，第9页/共32页第十页，共33页。蛋白质分子移速度蛋白质分子移速度蛋白质分子移速度蛋白质分子移速
9、度(sd)(sd)(sd)(sd)取决于分子大小。取决于分子大小。取决于分子大小。取决于分子大小。当分子量在当分子量在当分子量在当分子量在15000KD15000KD15000KD15000KD到到到到200000KD200000KD200000KD200000KD之间时，蛋之间时，蛋之间时，蛋之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系。白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系。白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系。白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系。合下式：合下式：合下式：合下式： ，式中，式中，式中，式中 将已知分子量的标准蛋白质的迁移率将已知分子量的标准蛋白质的迁移率将已知分子量的标准
10、蛋白质的迁移率将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。第10页/共32页第十一页，共33页。图1 标准(biozhn)蛋白质与待测样品电泳图谱
11、图2 电泳迁移率与logMW之间的关系(gun x) 94 00062 00043 00031 00020 10014 400胶槽123注：胶槽1 标准蛋白(dnbi)；胶槽2、3 样品蛋白(dnbi)得到同行专家赞第11页/共32页第十二页，共33页。 采采用用SDS-SDS-聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳法法测测蛋蛋白白质质分分子子量量时时，必必须须完完全全打打开开蛋蛋白白质质之之间间的的二二硫硫键键，使使蛋蛋白白质质分分子子被被解解聚聚，SDSSDS才才能能定定量量地地结结合合到到亚亚基基上上。因因此此在在用用SDSSDS处处理理样样品品同同时时用用巯巯基基乙乙醇醇处处理理。巯巯基
12、基乙乙醇醇是是一一种种强强还还原原剂剂，它它使使被被还还原原的的二二硫硫键键不不易易(b (b y)y)再再氧氧化化，从从而而使使很很多多不不溶溶性性蛋蛋白白质质溶溶解解而与而与SDSSDS定量结合。定量结合。第12页/共32页第十三页，共33页。 三、三、 实验试剂实验试剂(shj)(shj)和器材和器材 材料 实验试剂 1.低分子量标准蛋白试剂盒: 兔磷酸化酶B MW=97,400 牛血清(xuqng)白蛋白 MW=66,200 兔肌动蛋白 MW=43,000 牛碳酸酐酶 MW=31,000 胰蛋白酶抑制剂 MW=20,100 鸡蛋清溶菌酶 MW=14,400 开封后溶于200l蒸馏水，置
13、-20保存，使用前室温融化，沸水浴中加热3-5分钟后上样。 样品1：称3mg样品1，加2 ml蒸馏水溶解。第13页/共32页第十四页，共33页。 2. 30%丙烯酰胺（Acr）：称Acr30g，甲叉双丙烯酰胺 （Bis），加蒸馏水至100ml，过滤后置棕色(zngs)瓶中 3. 10%SDS（十二烷基磺酸钠） Tris-HCl缓冲液：称取（PH计）第14页/共32页第十五页，共33页。 （7 7）10%10%过硫酸铵过硫酸铵过硫酸铵过硫酸铵(AP)(AP) （8 8）TEMEDTEMED（四甲基乙二胺）（四甲基乙二胺）（四甲基乙二胺）（四甲基乙二胺） （9 9）样品溶解液：）样品溶解液：）样品
14、溶解液：）样品溶解液：SDSSDS（100mg100mg）+ +巯基乙醇（）巯基乙醇（）巯基乙醇（）巯基乙醇（）+ + 溴酚蓝（溴酚蓝（溴酚蓝（溴酚蓝（2mg2mg）+ +甘油（甘油（甘油（甘油（2g2g） +0.05mol/L pH8.0Tris- +0.05mol/L pH8.0Tris- HCl HCl（2ml2ml），最后定容至），最后定容至），最后定容至），最后定容至10ml10ml。 （1010）固定）固定）固定）固定(gdng)(gdng)液：取液：取液：取液：取50%50%甲醇甲醇甲醇甲醇454ml454ml，冰乙酸，冰乙酸，冰乙酸，冰乙酸46ml46ml混匀。混匀。混匀。混匀
15、。 （1111）染色液：称取考马斯亮蓝，加上述固定）染色液：称取考马斯亮蓝，加上述固定）染色液：称取考马斯亮蓝，加上述固定）染色液：称取考马斯亮蓝，加上述固定(gdng)(gdng)液液液液 250ml 250ml， 过滤后备用。过滤后备用。过滤后备用。过滤后备用。 （1212）脱色液：冰乙酸）脱色液：冰乙酸）脱色液：冰乙酸）脱色液：冰乙酸75ml75ml，甲醇，甲醇，甲醇，甲醇50ml50ml，加蒸馏水定容至，加蒸馏水定容至，加蒸馏水定容至，加蒸馏水定容至1000ml1000ml。 （1313）电极缓冲液（内含）电极缓冲液（内含）电极缓冲液（内含）电极缓冲液（内含0.1%SDS0.1%SDS
16、，甘氨酸缓冲液）：称，甘氨酸缓冲液）：称，甘氨酸缓冲液）：称，甘氨酸缓冲液）：称，甘甘甘甘 氨酸，加入氨酸，加入氨酸，加入氨酸，加入SDS1gSDS1g，加蒸馏水使其溶解后定容至，加蒸馏水使其溶解后定容至，加蒸馏水使其溶解后定容至，加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml1000ml。 第15页/共32页第十六页，共33页。实验实验(shyn)(shyn)器材器材n n 垂直垂直(chuzh)板电泳装置板电泳装置n n直直流流稳稳压压电电源源电电泳泳厚厚胶胶浓浓度度后后要要做做8各各小小时时，薄薄胶胶5各各小时）小时）n n 电泳仪电泳仪n n 标标准准型型酸酸度度计计（TLD80-2B）n n
17、离心机等离心机等第16页/共32页第十七页，共33页。 四、实验过程四、实验过程四、实验过程四、实验过程 如：免疫球蛋白如：免疫球蛋白如：免疫球蛋白如：免疫球蛋白G G G G 分子量的测定分子量的测定分子量的测定分子量的测定 （一）血清（一）血清（一）血清（一）血清-球蛋白的提取球蛋白的提取球蛋白的提取球蛋白的提取 硫酸胺盐析沉淀法硫酸胺盐析沉淀法硫酸胺盐析沉淀法硫酸胺盐析沉淀法 （二）（二）（二）（二） - - - -球蛋白脱盐纯化球蛋白脱盐纯化球蛋白脱盐纯化球蛋白脱盐纯化 葡聚糖凝胶过滤（柱层析法）除去硫酸葡聚糖凝胶过滤（柱层析法）除去硫酸葡聚糖凝胶过滤（柱层析法）除去硫酸葡聚糖凝胶过滤
18、（柱层析法）除去硫酸胺，得到胺，得到胺，得到胺，得到(d do)-(d do)-(d do)-(d do)-球蛋白（去年完成的球蛋白（去年完成的球蛋白（去年完成的球蛋白（去年完成的基金项目）基金项目）基金项目）基金项目） （三）纯化免疫球蛋白（三）纯化免疫球蛋白（三）纯化免疫球蛋白（三）纯化免疫球蛋白G G G G DEAE- DEAE- DEAE- DEAE-离子交换纤维素法纯化免疫球蛋白离子交换纤维素法纯化免疫球蛋白离子交换纤维素法纯化免疫球蛋白离子交换纤维素法纯化免疫球蛋白G G G G。 （四）（四）（四）（四） SDS- SDS- SDS- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶
19、电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定血液免疫球蛋白测定血液免疫球蛋白测定血液免疫球蛋白测定血液免疫球蛋白G G G G的分子量（的分子量（的分子量（的分子量（ 连续四个连续四个连续四个连续四个单项实验）。单项实验）。单项实验）。单项实验）。 第17页/共32页第十八页，共33页。 （1）制胶（简单叙述）（双层胶，摸索胶浓度） A.将玻璃板用蒸馏水洗净晾干, 准备2个干净的锥形瓶。把玻璃板在灌胶支架上固定好。 B.按比例配好分离胶，溶液(rngy)立即倾入制胶模板中(1 5模板)，加少许蒸馏水，待胶凝固后，倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干，按比例配好浓缩胶，连续平稳加入浓缩胶至离边缘
20、5mm处，样梳需一次平稳插入，静置40分钟，待模板中的胶定型后，轻轻取出梳形样品槽模具，梳口处不得有气泡，拔出样梳后，在上槽内加入缓冲液。 第18页/共32页第十九页，共33页。 C.拔出样梳后,在上槽内加入(jir)缓冲液, D.加样（摸索加样量） 取10l标准蛋白溶解液于EP管内，再加入(jir)10l 2倍样品缓冲液，上样量为20l。 取10l样品溶液，再加入(jir)10l 2倍样品缓冲液，上样量分别为5l 和10l。 E.用微量注射器距槽底三分之一处进样,加样前,样品在沸水中加热3分钟，去掉亚稳态聚合。第19页/共32页第二十页，共33页。 F.电泳槽中加入缓冲液，接通(ji tn)
21、电源，进行电泳，开始电流恒定在8mA，（电流、电压）当进入分离胶后改为16mA，溴酚蓝距凝胶边缘约5mm时，停止电泳。 G.凝胶板剥离与染色 电泳结束后，撬开玻璃板，将凝胶板做好标记后放在大培养皿内，加入染色液，染色 过夜。 H.脱色 染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色 。剥胶时要小心,保持胶完好无损,染色要充分。第20页/共32页第二十一页，共33页。图1 标准(biozhn)蛋白质与待测样品电泳图谱 图2 电泳迁移率与logMW之间的关系(gun x) 五、实验结果(ji gu)分析94 00062 00043 00031 00020 10014 400胶槽123注：胶槽1 标
22、准蛋白；胶槽2、3 样品蛋白第21页/共32页第二十二页，共33页。六、分析六、分析(fnx)(fnx)计计算算绘制标准曲线：按下式计算绘制标准曲线：按下式计算绘制标准曲线：按下式计算绘制标准曲线：按下式计算(j sun)(j sun) 电泳迁移率电泳迁移率电泳迁移率电泳迁移率 = = 样品迁移距离样品迁移距离样品迁移距离样品迁移距离/ /溴酚篮迁移距离溴酚篮迁移距离溴酚篮迁移距离溴酚篮迁移距离 以每个蛋白标准的分子量对数对它的相对迁以每个蛋白标准的分子量对数对它的相对迁以每个蛋白标准的分子量对数对它的相对迁以每个蛋白标准的分子量对数对它的相对迁移率作图得标准曲线，量出未知蛋白的迁移率即移率作
23、图得标准曲线，量出未知蛋白的迁移率即移率作图得标准曲线，量出未知蛋白的迁移率即移率作图得标准曲线，量出未知蛋白的迁移率即可测出其分于量，这样的标难曲线只对同一块凝可测出其分于量，这样的标难曲线只对同一块凝可测出其分于量，这样的标难曲线只对同一块凝可测出其分于量，这样的标难曲线只对同一块凝胶上的样品的分子量测定才具有可靠性。胶上的样品的分子量测定才具有可靠性。胶上的样品的分子量测定才具有可靠性。胶上的样品的分子量测定才具有可靠性。第22页/共32页第二十三页，共33页。 标准蛋白分子量（标准试剂盒）：标准蛋白分子量（标准试剂盒）：标准蛋白分子量（标准试剂盒）：标准蛋白分子量（标准试剂盒）： 97
24、400kD 97400kD、66200kD66200kD、43000kD43000kD、 31000kD31000kD、20100kD20100kD、14400kD14400kD。 采用不连续采用不连续采用不连续采用不连续(linx)SDS-PAGE(linx)SDS-PAGE电泳法电泳法电泳法电泳法对所分离纯化的蛋白质进行纯度鉴定，发对所分离纯化的蛋白质进行纯度鉴定，发对所分离纯化的蛋白质进行纯度鉴定，发对所分离纯化的蛋白质进行纯度鉴定，发现图中电泳图谱可以清晰的看到两条蛋白现图中电泳图谱可以清晰的看到两条蛋白现图中电泳图谱可以清晰的看到两条蛋白现图中电泳图谱可以清晰的看到两条蛋白带。带。带
25、。带。第23页/共32页第二十四页，共33页。 两条蛋白带代表两条蛋白带代表两条蛋白带代表两条蛋白带代表(dibio)(dibio)绵羊免疫球蛋绵羊免疫球蛋绵羊免疫球蛋绵羊免疫球蛋白白白白GG的重链和轻链。的重链和轻链。的重链和轻链。的重链和轻链。 计算分析结果表明：计算分析结果表明：计算分析结果表明：计算分析结果表明： 绵羊血清绵羊血清绵羊血清绵羊血清lgGlgG重链和轻链的分子量分别重链和轻链的分子量分别重链和轻链的分子量分别重链和轻链的分子量分别为为为为5000050000和和和和28000Kd28000Kd。一般说来，当蛋白质。一般说来，当蛋白质。一般说来，当蛋白质。一般说来，当蛋白质
26、的分子量在的分子量在的分子量在的分子量在200000200000至至至至15000 kD 15000 kD 之间时，电之间时，电之间时，电之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系泳迁移率与分子量的对数呈线性关系泳迁移率与分子量的对数呈线性关系泳迁移率与分子量的对数呈线性关系 。实。实。实。实验结果各谱带所代表验结果各谱带所代表验结果各谱带所代表验结果各谱带所代表(dibio)(dibio)的成分的分的成分的分的成分的分的成分的分子量的范围均在此之间。用子量的范围均在此之间。用子量的范围均在此之间。用子量的范围均在此之间。用SDS-PAGESDS-PAGE垂垂垂垂直板电泳测得绵羊血清具有一定的
27、可信度直板电泳测得绵羊血清具有一定的可信度直板电泳测得绵羊血清具有一定的可信度直板电泳测得绵羊血清具有一定的可信度 。 第24页/共32页第二十五页，共33页。 七、思考题七、思考题n n在不连续体系SDS-PAGE中,当分离胶加完后,需在其上加一层水,为什么?n n在不连续体系SDS-PAGE中,分离胶与浓缩胶中均含有TEMED和AP,试述其作用?n n样品液为何在加样前需在沸水(fi shu)中加热几分钟?第25页/共32页第二十六页，共33页。 十二、达到预期目标十二、达到预期目标十二、达到预期目标十二、达到预期目标 1. SDS- 1. SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳技术是聚丙稀酰胺凝胶电
28、泳技术是聚丙稀酰胺凝胶电泳技术是聚丙稀酰胺凝胶电泳技术是动物生物化学实验技术教学动物生物化学实验技术教学动物生物化学实验技术教学动物生物化学实验技术教学(jio xu)(jio xu)中一个综合性实验项目，中一个综合性实验项目，中一个综合性实验项目，中一个综合性实验项目， 且是一个较高且是一个较高且是一个较高且是一个较高水平的一个实验项目。水平的一个实验项目。水平的一个实验项目。水平的一个实验项目。 第26页/共32页第二十七页，共33页。 蛋白质盐析沉淀提取蛋白质盐析沉淀提取(tq) 凝胶层析凝胶层析分离（上年基金项目已完成）分离（上年基金项目已完成） DEAE-纤纤维素分离提纯蛋白质维素分
29、离提纯蛋白质 蛋白质分子量测定、蛋白质分子量测定、生物分子纯度鉴定等综合项目（五个单项实生物分子纯度鉴定等综合项目（五个单项实验项目）。验项目）。第27页/共32页第二十八页，共33页。 2. 2. 该项目的完成对我们课程的建设起到了促进该项目的完成对我们课程的建设起到了促进该项目的完成对我们课程的建设起到了促进该项目的完成对我们课程的建设起到了促进发展的作用，达到发展的作用，达到发展的作用，达到发展的作用，达到(d do)(d do)了我们预期目标。了我们预期目标。了我们预期目标。了我们预期目标。第28页/共32页第二十九页，共33页。 3. 3. 该实验该实验该实验该实验(shyn)(sh
30、yn)项目的开设，使学生掌握项目的开设，使学生掌握项目的开设，使学生掌握项目的开设，使学生掌握了利用聚丙稀酰胺凝胶电泳技术分离蛋白质了利用聚丙稀酰胺凝胶电泳技术分离蛋白质了利用聚丙稀酰胺凝胶电泳技术分离蛋白质了利用聚丙稀酰胺凝胶电泳技术分离蛋白质 、SDSPAGESDSPAGE测定蛋白质分子量的基本理论测定蛋白质分子量的基本理论测定蛋白质分子量的基本理论测定蛋白质分子量的基本理论及实验及实验及实验及实验(shyn)(shyn)技术。技术。技术。技术。 第29页/共32页第三十页，共33页。 4. 通过对生物大分子的分离、纯化、鉴定等过程通过对生物大分子的分离、纯化、鉴定等过程的学习，使学生在综
31、合性实验的学习，使学生在综合性实验(shyn)技术方面技术方面 有了有了一个系统的认识及动手能力一个系统的认识及动手能力, 为在现代分子生物学技为在现代分子生物学技术等手段方面的运用打下了良好的基础。术等手段方面的运用打下了良好的基础。第30页/共32页第三十一页，共33页。 5.“SDS 5.“SDS 聚丙稀酰胺凝胶电泳法聚丙稀酰胺凝胶电泳法聚丙稀酰胺凝胶电泳法聚丙稀酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量测定蛋白质分子量测定蛋白质分子量测定蛋白质分子量” ”一实验的开设达到了一实验的开设达到了一实验的开设达到了一实验的开设达到了与国内同类院校相当的较高水平。与国内同类院校相当的较高水平。与国内同类院
32、校相当的较高水平。与国内同类院校相当的较高水平。 对本科生的实验教学、本科生的论文对本科生的实验教学、本科生的论文对本科生的实验教学、本科生的论文对本科生的实验教学、本科生的论文设计、研究生的高级生化实验等方面都充设计、研究生的高级生化实验等方面都充设计、研究生的高级生化实验等方面都充设计、研究生的高级生化实验等方面都充实实实实(chngsh)(chngsh)了内容。了内容。了内容。了内容。 第31页/共32页第三十二页，共33页。内容(nirng)总结会计学。因此在用SDS处理样品同时用巯基乙醇处理。E.用微量注射器距槽底三分之一处进样,加样前,样品在沸水中加热(ji r)3分钟，去掉亚稳态聚合。剥胶时要小心,保持胶完好无损,染色要充分。七、思考题。在不连续体系SDS-PAGE中,分离胶与浓缩胶中均含有TEMED和AP,试述其作用第三十三页，共33页。
