《生物化学实验课件：实验八 底物浓度对酶活性的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物化学实验课件：实验八 底物浓度对酶活性的影响（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 酶的动力学性质分析，是酶学研究的重要方面。 测定Km 和Vmax，特别是测定Km，是酶学研究的基本内容之一，Km是酶的一个基本的特性常数，它包含着酶与底物结合和解离的性质，特别是同一种酶能够作用于几种不同的底物时，米氏常数Km往往可以反映出酶与各种底物的亲和力强弱，Km值越大，说明酶与底物的亲和力越弱，反之，Km值越小，酶与底物的亲和力越强。 2. 底物浓度对酶活性的影响实验原理Michaelis-Menten Kinetics实验原理实验原理Lineweaver-Burk Kinetics实验原理（双倒数作图法）蔗糖酶的准备酶粉溶于10ml20ml蒸馏水，离心10,000rpm离心10分钟
2、后去掉不溶物。酶活力预试12（对照）照）10%蔗糖溶液蔗糖溶液ml0.600.60H2O1.11.1pH5.0醋酸醋酸缓冲液冲液ml0.20.225水浴中保温水浴中保温3min二硝基水二硝基水杨酸酸试剂0.5ml稀稀释后的蔗糖后的蔗糖酶酶溶液溶液ml0.100.1025水浴水浴5min二硝基水二硝基水杨酸酸试剂0.5ml0.1mol/LNaOH溶液溶液ml2.52.5沸水浴煮沸水浴煮5min取出后经自来水冷却取出后经自来水冷却3min，以，以标准曲线的标准曲线的“0”管调零点管调零点，于于520nm处测光密度值。测得的处测光密度值。测得的A520nm值在值在1.0-1.8之间。之间。底物浓度与
3、酶促反应速度 管号管号 试剂 1 2 3 4 5 6 710%蔗糖溶液蔗糖溶液ml0.040.060.080.100.200.400.60H2O1.661.641.621.601.501.301.10 pH5.0醋酸醋酸缓冲液，冲液，ml0.20.20.20.20.20.20.225预热预热3分钟分钟加入加入0.1ml稀稀释后的后的酶酶液液25准确反准确反应5min，迅速加入，迅速加入0.5ml二硝基水二硝基水杨酸溶液，加酸溶液，加0.1mol/L的的NaOH溶液溶液2.5ml混匀，沸水浴混匀，沸水浴5min，自来水冷却，自来水冷却3min，以，以标准曲准曲线的的”0”管管调0，520nm测OD值。结果处理 管号结果1234567OD520 葡萄糖产量，mgv =葡萄糖产量101ml酶在单位时间内的产量(mg)S=10%V1000/2342 (mmol/L)1/S1/vv代表生成产物葡萄糖的速率（5min单位时间内内1ml酶液反应生成的葡萄糖的量）；S=10%V1000/2342： S代表底物蔗糖的摩尔浓度；V代表每只试管中加入的底物蔗糖的体积；2指的是反应的总体积是2ml；342是蔗糖的分子量；10%指的是100ml的溶液中蔗糖的量是10g；1000是将反应的总体积换算为L，这样计算出来的底物浓度为mmol/L。思思 考考 题题Km值的含义及测定的方法。
