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1、专题专题2 2 细胞工程细胞工程1动动物物细细胞胞工工程程概念概念常用常用技术技术应用细胞学的方法，按照人们的应用细胞学的方法，按照人们的需要和预定的设计，有目的需要和预定的设计，有目的、有、有计划地保存、改变动物细胞和创计划地保存、改变动物细胞和创造新的动物细胞，进而培育成新造新的动物细胞，进而培育成新的物种或者品种的一门科学技术。的物种或者品种的一门科学技术。动物细胞培养（基础）动物细胞培养（基础）动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体动物体细胞克隆技术动物体细胞克隆技术2一动物细胞培养一动物细胞培养1.1.动物细胞培养条件动物细胞培养条件（1 1）营养成分：培养液的主要成分有葡萄糖
2、）营养成分：培养液的主要成分有葡萄糖、氨、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。基酸、无机盐、维生素和动物血清等。（2 2）气体环境）气体环境O O ：细胞呼吸消耗：细胞呼吸消耗COCO : :调节调节pHpH值值（3 3）温度和）温度和pHpH：哺乳动物细胞培养环境温度控制：哺乳动物细胞培养环境温度控制在在36.536.537.537.5，Ph7.2Ph7.27.47.4。 3动物细胞的培养过程 幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养养单个细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程
3、技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础剪碎组织剪碎组织的目的？的目的？胰蛋白酶处胰蛋白酶处理的目的？理的目的？4动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液10代细胞代细胞5050代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎细细胞株胞株细胞系细胞系遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变2.2.动物细胞动物细胞培养过程培养过程5有关概念n n原代培养原代培养：经过滤：经过滤、离心后将动物再接种到离心后将动物再接种到无菌的培养液中，在适宜的条件下进行静止无菌的培养液中，在适
4、宜的条件下进行静止或慢速转动培养，这个过程成为传代培养。或慢速转动培养，这个过程成为传代培养。n n传代培养传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。培养瓶中继续培养，称为传代培养。6有关概念有关概念细胞株：细胞株：传代培养的细胞一般传至传代培养的细胞一般传至1010代左右代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到存活到40504050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞系：细胞株
5、传代至细胞株传代至5050代后又出现细胞生代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别： 细胞株传代在细胞株传代在40504050代内，遗传物质没有改变；细胞系无限传代代内，遗传物质没有改变；细胞系无限传代下去，遗传物质改变。下去，遗传物质改变。7有关概念细胞贴壁：细胞贴壁：细胞贴壁：细胞贴壁： 培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，培养液中
6、分散的动物细胞，置于适宜的条件下，培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，能够分裂，这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴能够分裂，这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴能够分裂，这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴能够分裂，这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴壁生长。壁生长。壁生长。壁生长。细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。会停止分裂增殖的现象。会停止分裂增殖的现象。会停止分裂增殖的
7、现象。8相关问题相关问题1.1.为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官和组织为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官和组织做动物细胞培养材料？做动物细胞培养材料？胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛2.2.为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 分散成单个细胞便于物质交换，使营养物质吸分散成单个细胞便于物质交换，使营养物质吸收及代谢废物排出更容易，利于细胞生长和繁殖收及代谢废物排出更容易，利于细胞生长和繁殖3.3.为什么用胰蛋白酶处理？为什么用胰蛋白酶处理？在动物组织间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，在动物组
8、织间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，它们将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组它们将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官，而弹性纤维易被胰蛋白酶催化分解，从织和器官，而弹性纤维易被胰蛋白酶催化分解，从而使细胞分离开。而使细胞分离开。9相关问题相关问题4.4.培养的细胞为何贴壁生长？培养的细胞为何贴壁生长？大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在固定大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在固定的表面生长和分裂的表面生长和分裂5.5.动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成生物个体？成生物个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发
9、不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体育成新的动物个体10二二 动物体细胞克隆技术动物体细胞克隆技术1.1.概念：是将动物的一个细胞的细胞核移概念：是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵细胞中，使其入一个已经去掉细胞核的卵细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎始终发育为动物个体。胚胎始终发育为动物个体。11单克隆抗体制备流程单克隆抗体制备流程 英国科学家米尔斯坦和德国英国科学家米尔斯坦和德国科学家选用小鼠体内的科学家选用小鼠体内的B B淋巴细淋巴细胞和一种营养缺陷型的骨髓瘤细胞和一种营养缺陷型的骨髓瘤细胞作为
10、实验材料利用聚乙二醇为胞作为实验材料利用聚乙二醇为融合剂，使两种细胞发生融合。融合剂，使两种细胞发生融合。然后利用只有杂交瘤细胞才能生然后利用只有杂交瘤细胞才能生长的选择培养液来筛选处理过的长的选择培养液来筛选处理过的细胞群体。骨髓瘤细胞在选择培细胞群体。骨髓瘤细胞在选择培养液中停止生长，养液中停止生长，B B淋巴细胞在淋巴细胞在体外培养也只能存活数天，因此体外培养也只能存活数天，因此只有杂交瘤细胞才可以大量生长只有杂交瘤细胞才可以大量生长、繁殖。利用这种方法培育得到的繁殖。利用这种方法培育得到的杂交瘤细胞不但可以像肿瘤细胞杂交瘤细胞不但可以像肿瘤细胞那样无休止、快速地进行分裂增那样无休止、快
11、速地进行分裂增殖而且能像殖而且能像B B淋巴细胞一样分泌淋巴细胞一样分泌大量特异性抗体。通过杂交瘤细大量特异性抗体。通过杂交瘤细胞培养得到的这些特异性抗体就胞培养得到的这些特异性抗体就是所谓的单克隆抗体。是所谓的单克隆抗体。12问题问题1 1 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴细胞融合？淋巴细胞融合？细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活易成活问题问题2 2 骨髓瘤细胞是癌细胞吗？骨髓瘤细胞是癌细胞吗？有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，而且具有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，而且具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说瘤细胞不等于癌细胞。说瘤细胞不等于癌细胞。问题问题3 3 整个制备过程为何要经过两次筛选？整个制备过程为何要经过两次筛选？第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细需在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。异性抗体的细胞群。13
