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1、动物免疫学实验动物免疫学实验免疫血清学反应的一般特点免疫血清学反应的一般特点特异性与交叉性特异性与交叉性特异性与交叉性特异性与交叉性抗原和抗体的结合为弱能量的非共价健结合抗原和抗体的结合为弱能量的非共价健结合抗原和抗体的结合为弱能量的非共价健结合抗原和抗体的结合为弱能量的非共价健结合结合温度应在结合温度应在结合温度应在结合温度应在0000 40404040范围内范围内范围内范围内,pH,pH,pH,pH在在在在4 4 4 49 9 9 9范围内范围内范围内范围内抗原抗体反应的阶段性抗原抗体反应的阶段性抗原抗体反应的阶段性抗原抗体反应的阶段性 第一阶段：无可见反应。第一阶段：无可见反应。第一阶段
2、：无可见反应。第一阶段：无可见反应。 第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等。第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等。第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等。第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等。带现象带现象带现象带现象： 前带现象前带现象前带现象前带现象 抗体过多；抗体过多；抗体过多；抗体过多； 后带现象后带现象后带现象后带现象 抗原过多抗原过多抗原过多抗原过多 实验一实验一 凝集反应凝集反应 抗原、抗体的比例适当抗原、抗体的比例适当抗原、抗体的比例与形成免疫复合物的大小抗原、抗体的比例与形成免疫复合物的大小前前带带现现象象后后带带现现象象免疫血清学
3、反应的影响因素免疫血清学反应的影响因素1. 1.电解质电解质电解质电解质 2. 2.温度温度温度温度 3. 3.酸碱度酸碱度酸碱度酸碱度目的意义：目的意义： 熟悉玻板凝集试验和试管凝集试验的操作熟悉玻板凝集试验和试管凝集试验的操作技术。技术。 掌握凝集反应中阴性和阳性结果的判定。掌握凝集反应中阴性和阳性结果的判定。基本原理：基本原理： 细菌等颗粒性抗原与特异性抗体结合后，细菌等颗粒性抗原与特异性抗体结合后，在有电解质的情况下，会出现肉眼可见的凝集在有电解质的情况下，会出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。直接凝集反应可分为玻片块，称为凝集反应。直接凝集反应可分为玻片凝集与试管凝集。凝集试验是疾病
4、诊断及体内凝集与试管凝集。凝集试验是疾病诊断及体内抗体水平测定的常用方法。抗体水平测定的常用方法。凝凝集集试试验验可可根根据据抗抗原原的的性性质质、反反应应的的方方式式分分为为直直接接凝凝集集试试验验 ( (简简称称凝凝集集试试验验) )和间接凝集试验。和间接凝集试验。凝凝集集试试验验直接凝集试验直接凝集试验间接凝集试验间接凝集试验试管法试管法玻片法玻片法间接凝集试验间接凝集试验反向间接凝集试验反向间接凝集试验分类分类:玻片法玻片法玻片法为一种定性试验。此法简便快速，玻片法为一种定性试验。此法简便快速，玻片法为一种定性试验。此法简便快速，玻片法为一种定性试验。此法简便快速，适用于新分得细菌的鉴
5、定或分型。也可用已适用于新分得细菌的鉴定或分型。也可用已适用于新分得细菌的鉴定或分型。也可用已适用于新分得细菌的鉴定或分型。也可用已知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存在相应抗体。在相应抗体。在相应抗体。在相应抗体。 试管法试管法 为一种定量试验，用已知抗原以检测待测为一种定量试验，用已知抗原以检测待测为一种定量试验，用已知抗原以检测待测为一种定量试验，用已知抗原以检测待测血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量，血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量，血清中是否存在相应抗体和
6、测定该抗体的含量，血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量，以协助临床诊断或供流行病学调查。以协助临床诊断或供流行病学调查。以协助临床诊断或供流行病学调查。以协助临床诊断或供流行病学调查。器材及试剂器材及试剂:抗原和血清：布氏杆菌凝集抗原、抗原和血清：布氏杆菌凝集抗原、抗原和血清：布氏杆菌凝集抗原、抗原和血清：布氏杆菌凝集抗原、 布氏杆菌标准阳性血清、布氏杆菌标准阳性血清、布氏杆菌标准阳性血清、布氏杆菌标准阳性血清、 阴性血清、待检血清阴性血清、待检血清阴性血清、待检血清阴性血清、待检血清生理盐水、玻片、试管、加液枪、接种环等。生理盐水、玻片、试管、加液枪、接种环等。生理盐水、玻片、试管、加液
7、枪、接种环等。生理盐水、玻片、试管、加液枪、接种环等。实验步骤实验步骤: :一、虎红平板凝集试验：一、虎红平板凝集试验：1. 材料准备材料准备1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清。抗原、标准阳性血清、阴性血清。1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。1.3 洁净的玻璃板，其上划分成洁净的玻璃板，其上划分成4 cm2的方格。的方格。1.4 吸管或分装器，适于滴加吸管或分装器，适于滴加0.03 ml。1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。牙签或火柴杆，供搅拌用。2.操作方法操作方法2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应将玻
8、璃板上各格标记受检血清号，然后加相应 血清血清0.03 mL。2.2 在受检血清旁滴加抗原在受检血清旁滴加抗原0.03 m L。2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。每次试验应设阴、阳性血清对照。3. 判定判定3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。被检血清进行判定。3.2 受检血清在受检血清在4 min内出现肉眼可见凝集现象者内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性判为阳性(十十)，无凝集现象，呈均匀粉红色者，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性判为阴性(一一)
9、。玻板凝集与试管凝集的关系玻板凝集与试管凝集的关系 玻板凝集玻板凝集 80l 40l 20l 10l 相当于试管凝集相当于试管凝集 1：25 1：50 1：100 1：200二、试管凝集试验：二、试管凝集试验：1. 1.每份血清用每份血清用每份血清用每份血清用4 4支试管，别取对照管支试管，别取对照管支试管，别取对照管支试管，别取对照管3 3支，共支，共支，共支，共7 7支。支。支。支。2. 2.各各各各管管管管按按按按下下下下表表表表所所所所示示示示加加加加入入入入0.5%0.5%石石石石炭炭炭炭酸酸酸酸生生生生理理理理盐盐盐盐水水水水，后后后后加加加加0.2ml0.2ml被被被被检检检检血
10、血血血清清清清至至至至第第第第一一一一管管管管中中中中，混混混混匀匀匀匀，吸吸吸吸出出出出1.5ml1.5ml弃弃弃弃去去去去，再再再再吸吸吸吸0.5ml0.5ml至至至至第第第第二二二二管管管管，混混混混匀匀匀匀，吸吸吸吸0.5ml0.5ml至至至至第第第第三三三三管管管管，依依依依次次次次至至至至第第第第四四四四管管管管，混混混混匀匀匀匀，吸吸吸吸弃弃弃弃0.5ml0.5ml，第第第第五五五五管管管管中中中中不不不不加加加加待待待待测测测测血血血血清清清清，第第第第六六六六管管管管中中中中加加加加1:251:25稀稀稀稀释释释释的的的的布布布布氏氏氏氏杆菌阳性血清杆菌阳性血清杆菌阳性血清杆
11、菌阳性血清0.5ml0.5ml，第七管中加第七管中加第七管中加第七管中加1:251:25稀释的阴性血清稀释的阴性血清稀释的阴性血清稀释的阴性血清0.5ml0.5ml。3. 3. 各各各各管管管管加加加加入入入入2020倍倍倍倍稀稀稀稀释释释释的的的的抗抗抗抗原原原原后后后后，七七七七管管管管同同同同时时时时混混混混匀匀匀匀，3737 ，4-10h4-10h，取出后室温取出后室温取出后室温取出后室温18-24h18-24h，观察并记录结果；观察并记录结果；观察并记录结果；观察并记录结果；结果判定：结果判定：结果判定：结果判定：+：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，沉淀：液体完全透明，菌
12、体完全被凝集呈伞状沉于管底，沉淀：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，沉淀：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，沉淀 物呈片状、块状或颗粒状，即物呈片状、块状或颗粒状，即物呈片状、块状或颗粒状，即物呈片状、块状或颗粒状，即100%100%凝集凝集凝集凝集+：液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，即：液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，即：液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，即：液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，即75%75%凝集凝集凝集凝集+：液体不甚透明，管底有明显凝集沉淀，振荡时有块状或小：液体不甚透明，管底有明显凝集沉淀，振荡时有块状或小：液体不甚透明，管
13、底有明显凝集沉淀，振荡时有块状或小：液体不甚透明，管底有明显凝集沉淀，振荡时有块状或小 片絮状物，即片絮状物，即片絮状物，即片絮状物，即50%50%凝集凝集凝集凝集+ +：液液液液体体体体透透透透明明明明度度度度不不不不显显显显，有有有有不不不不甚甚甚甚显显显显著著著著的的的的沉沉沉沉淀淀淀淀或或或或仅仅仅仅有有有有沉沉沉沉淀淀淀淀的的的的痕痕痕痕迹迹迹迹，即即即即25%25%凝集凝集凝集凝集- -：液体不透明，管底无凝集。：液体不透明，管底无凝集。：液体不透明，管底无凝集。：液体不透明，管底无凝集。 确确确确定定定定血血血血清清清清凝凝凝凝集集集集价价价价时时时时，应应应应该该该该出出出出现
14、现现现+以以以以上上上上凝凝凝凝集集集集现现现现象象象象的的的的最最最最高高高高稀稀稀稀释释释释度为准。度为准。度为准。度为准。判定标准：判定标准：判定标准：判定标准： 牛、马和骆驼凝集价牛、马和骆驼凝集价牛、马和骆驼凝集价牛、马和骆驼凝集价1 1：100100以上以上以上以上 猪、山羊、绵羊和狗猪、山羊、绵羊和狗猪、山羊、绵羊和狗猪、山羊、绵羊和狗1 1：5050以为上以为上以为上以为上 牛、马和骆驼牛、马和骆驼牛、马和骆驼牛、马和骆驼1 1：5050，猪、羊等，猪、羊等，猪、羊等，猪、羊等1 1：2525为可疑。为可疑。为可疑。为可疑。思考题思考题 何为凝集试验？有哪些类型？何为凝集试验？有哪些类型？ 影响凝集试验的因素有哪些？影响凝集试验的因素有哪些？
