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1、战丹黑龙江药检所分析方法的验证和确认Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望可靠的检验结果可靠的检验结果方法验证方法验证仪器校准仪器校准培训培训3内容：内容： 一、法规要求一、法规要求 二、分析方法验证二、分析方法验证 三、分析方法确认三、分析方法确认 四、分析方法验证和确认总结四、分析方法验证和确认总结41 1、法规要求：新版、法规要求：新版GMPGMP（20102010年年 修订）修订）第二百二十三条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少第二百二十三条物料和不同生产阶段产品
2、的检验应当至少符合以下要求：符合以下要求：（一）企业应当确保药品按照注册批准的方法进行全项检验；（一）企业应当确保药品按照注册批准的方法进行全项检验；（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证验证：1.采用新的检验方法；采用新的检验方法；2.检验方法需变更的；检验方法需变更的；3.采用采用中华人民共和国药典中华人民共和国药典及其他法定标准未收载的检及其他法定标准未收载的检验方法；验方法；4.法规规定的其他需要验证的检验方法。法规规定的其他需要验证的检验方法。（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进（三）对不需要进行验证的检验方法，
3、企业应当对检验方法进行行确认确认，以确保检验数据准确、可靠；，以确保检验数据准确、可靠；51 1、法规要求：中国药典（、法规要求：中国药典（20102010年年 版）凡例版）凡例检验方法和限度检验方法和限度二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时仍以本版药典规定的方法为准。仍以本版药典规定的方法为准。61 1、法规要求：中国药典（、法规要求：中国药典
4、（20102010年年 版）凡例版）凡例检验方法和限度检验方法和限度二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时仍以本版药典规定的方法为准。仍以本版药典规定的方法为准。1 1、法规要求：、法规要求：分析方法确认或验证相关指南分析方法确认或验证相关指南机构或组织机构或组织 文件名称文件名称 美国药典（美国药典（USP） Validation of comp
5、endial procedures方法验证方法验证 Verification of compendial procedures方法确认方法确认人用药品注册技术要求国人用药品注册技术要求国际协调会（际协调会（ICH） Q2（R1）Validation of Analyt8ical ProceduresQ2（R1）分析方法验证）分析方法验证 中国药典中国药典2010年版年版 一部附录一部附录“中药质量标准分析方法中药质量标准分析方法验证指导原则验证指导原则”二部附录二部附录“药品质量标准分析方法药品质量标准分析方法验证指导原则验证指导原则” 。 8内容：内容： 一、法规要求一、法规要求 二、分析方
6、法验证二、分析方法验证 三、分析方法确认三、分析方法确认 四、分析方法验证和确认总结四、分析方法验证和确认总结9二、分析方法验证二、分析方法验证1 1、分析方法验证的定义、分析方法验证的定义2 2、分析方法验证的目的、分析方法验证的目的3 3、分析方法验证范围、分析方法验证范围4 4、分析方法验证的时机、分析方法验证的时机5 5、需验证的分析方法类型、需验证的分析方法类型6 6、分析方法验证的具体内容、分析方法验证的具体内容7 7、验证检测项目小结、验证检测项目小结8 8）分析方法验证的方式和步骤）分析方法验证的方式和步骤9 9）分析方法验证常见问题）分析方法验证常见问题 10二、分析方法验证
7、二、分析方法验证1 1、分析方法验证的定义：、分析方法验证的定义：是根据检测项目的要求，预先设置一是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。能否符合检测项目的要求。2 2、分析方法验证的目的：、分析方法验证的目的：1 1）证明采用的分析方法是科学、合理，）证明采用的分析方法是科学、合理，2 2）证明分析方法能有效控制药品的内在质量。）证明分析方法能有效控制药品的内在质量。 验证过程和结果均应记载在标准起草或修订说明中。验证过程和结果均应记载在标准起草或修订说明中。二、分
8、析方法验证二、分析方法验证p3 3、分析方法验证范围、分析方法验证范围p适用范围适用范围化学药品的理化分析方法和仪器分析方法的验证与确认化学药品的理化分析方法和仪器分析方法的验证与确认清洁验证方法的验证清洁验证方法的验证p不适用不适用化学药品的微生物方法化学药品的微生物方法生物制品分析方法验证生物制品分析方法验证4 4、分析方法验证的时机、分析方法验证的时机1 1）建立新的药品质量标准；）建立新的药品质量标准；2 2）药品生产工艺变更；）药品生产工艺变更；3 3）制剂的组分变更；）制剂的组分变更；4 4）对原分析方法进行修订时。）对原分析方法进行修订时。 方法验证理由、过程和结果均应记载在药品
9、标方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草说明或修订说明中。准起草说明或修订说明中。二、分析方法验证二、分析方法验证二、分析方法验证二、分析方法验证5 5、需验证的分析方法类型、需验证的分析方法类型1 1）鉴别试验）鉴别试验2 2）杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法），）杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法），3 3）原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分（如防腐）原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分（如防腐剂等）的定量测定含量测定剂等）的定量测定含量测定4 4）化学药品）化学药品/ /中药制剂中其他需控制成分中药制剂中其他需控制成分( (如残留物、添加如残留物、添加剂等
10、）的测定剂等）的测定5 5）制剂溶出度、释放度等检查）制剂溶出度、释放度等检查6 6）原料药粒度检测）原料药粒度检测 -1 1）专属性）专属性2 2）线性）线性3 3）范围）范围4 4）准确性）准确性5 5）精密度）精密度6 6）检测限）检测限7 7）定量限）定量限8 8）耐用性）耐用性9 9）系统适用性）系统适用性 6 6、分析方法验证的具体内容、分析方法验证的具体内容根据根据检测的类型检测的类型采用的技术采用的技术检测方法检测方法确定具体方法拟订验证的内容确定具体方法拟订验证的内容二、分析方法验证二、分析方法验证1 1）专属性）专属性p 鉴别、杂质和含量测定的方法学验证中应进行专属性鉴别、
11、杂质和含量测定的方法学验证中应进行专属性研究，证明专属性所采用的方法取决于分析方法的预定检研究，证明专属性所采用的方法取决于分析方法的预定检测对象。测对象。 一种分析方法不太可能对某一特定的被分析物具有专一种分析方法不太可能对某一特定的被分析物具有专属性属性( (完全辨别完全辨别) )，在此情况下，建议采用两种或两种以上，在此情况下，建议采用两种或两种以上的分析方法以达到所需的辨别水平。的分析方法以达到所需的辨别水平。 1 1）专属性专属性p鉴别鉴别 合适的鉴别实验应能区别出可能存在结构相似的化合适的鉴别实验应能区别出可能存在结构相似的化合物。可以通过与已知参比物比较，从含有被分析物的样合物。
12、可以通过与已知参比物比较，从含有被分析物的样品中得到的正结果和不含被分析物的样品中得到的负结果品中得到的正结果和不含被分析物的样品中得到的负结果来确定。此外，也可以采用与被测物结构相似或相关的物来确定。此外，也可以采用与被测物结构相似或相关的物质进行鉴别实验。对于这些可能会有潜在干扰的物质的选质进行鉴别实验。对于这些可能会有潜在干扰的物质的选择应当基于对这些干扰的物质做出合理的科学评判。择应当基于对这些干扰的物质做出合理的科学评判。 1 1）专属性专属性 含量测定和杂质检测含量测定和杂质检测 对于色谱方法来说，应当用具有代表性的色谱图来证对于色谱方法来说，应当用具有代表性的色谱图来证明专属性，
13、并在图上适当地标出每一种成分，其他分离技明专属性，并在图上适当地标出每一种成分，其他分离技术也应当有相似的考虑。应当在适合的程度上研究关键的术也应当有相似的考虑。应当在适合的程度上研究关键的色谱分离度。对于关键的分离度，能够通过两个洗脱最靠色谱分离度。对于关键的分离度，能够通过两个洗脱最靠近的化合物之间的分辨率来证明方法的专属性。近的化合物之间的分辨率来证明方法的专属性。 当用非专属性方法做含量测定时，应当采用其他辅助当用非专属性方法做含量测定时，应当采用其他辅助性的分析方法来证明整体的专属性，例如：当为了放行而性的分析方法来证明整体的专属性，例如：当为了放行而采用滴定法测定原料药含量时，可以
14、合并采用这种含量测采用滴定法测定原料药含量时，可以合并采用这种含量测定方法以及一种适当的杂质检查方法。定方法以及一种适当的杂质检查方法。 1 1）专属性专属性常用的试验方法常用的试验方法: : 空白阴性对照试验空白阴性对照试验 比较同一分析系统对照品与供试品相应色谱峰的比较同一分析系统对照品与供试品相应色谱峰的吸收光谱吸收光谱 色谱色谱- -质谱联用验证待测成分质谱联用验证待测成分2 2）线性）线性 线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关系的程度。浓度直接呈正比关系的程度。试验方法试验方法制备至少包含制备至少包含5 5个
15、浓度（梯度浓度）的对照品溶液，分别进样个浓度（梯度浓度）的对照品溶液，分别进样测定测定以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性线性最小二乘法进行线性回归最小二乘法进行线性回归 数据要求：数据要求： 应列出回归方程、相关系数和线性图应列出回归方程、相关系数和线性图 3 3）范围）范围 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 确认方法是通过把含有被测物的样品在范围确认方法是通过把含有被测物的样品在范围的两个极端和范围内
16、进行测试，考察是否可达到的两个极端和范围内进行测试，考察是否可达到精密度、准确度的线性的要求。精密度、准确度的线性的要求。3 3）范围）范围实验项目实验项目限度限度范围范围含量测定含量测定标示量标示量90-110%90-110%测试浓度测试浓度80-120%80-120%杂质检查杂质检查限度值限度值限度值的限度值的50-120%50-120%溶出度溶出度限度值限度值限度值的限度值的20% 20% 释放度释放度1 1小时后小时后20%20%，2424小时后达到小时后达到90%90%， 应为标示量的应为标示量的0-110%0-110%。 含量均匀度含量均匀度测试浓度测试浓度测试浓度的测试浓度的70
17、-130% 70-130% 3 3）范围（中药和复方制剂）范围（中药和复方制剂）含量限度有含量限度有上下限上下限的，一般设定范围低限为含量限度下限的的，一般设定范围低限为含量限度下限的50507070，范围的高限为含量限度上限的范围的高限为含量限度上限的130130150150。含量限度含量限度仅有低限仅有低限的，一般设定范围为含量限度的的，一般设定范围为含量限度的50507070至含量限度的至含量限度的2 25 5倍倍以上。以上。以以标示量规定标示量规定含量限度的，可参照化学药，含量限度的，可参照化学药， 一般设定范围为一般设定范围为标示量的标示量的8080120120。 中药含量限度的确定
18、中药含量限度的确定 含量限度应根据中药制剂实测结果与原料药材的含量含量限度应根据中药制剂实测结果与原料药材的含量情况确定。尽可能多的测定数据才有足够的代表性，至少情况确定。尽可能多的测定数据才有足够的代表性，至少应有应有1010批以上样品与原料药材数据为依据，一般原粉入药批以上样品与原料药材数据为依据，一般原粉入药的转移率要求在的转移率要求在90%90%以上。以上。 有毒成分及中西药复方制剂中化学药品的含量应规定有毒成分及中西药复方制剂中化学药品的含量应规定上下限，上下限幅度应根据测试方法、品种情况、转移率上下限，上下限幅度应根据测试方法、品种情况、转移率及理论值确定，一般应在及理论值确定，一
19、般应在5%5%20%20%之间，并在安全有之间，并在安全有效范围内，制定上下限应有充分依据。效范围内，制定上下限应有充分依据。4 4）准确度）准确度 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率度，一般用回收率(%)(%)表示。表示。 a. a. 以以经经典典方方法法的的测测定定值值作作为为真真值值，建建立立方方法法的的测测定定数据与之比较（该法适用于化学药品）数据与之比较（该法适用于化学药品） b. b. 以以加加入入对对照照品品测测定定的的回回收收率率表表示示，一一般般有有空空白白回回收收（制制剂剂空空白白）和和加加样样回回收
20、收测测定定的的方方法法（中中药药材材、复复方方制制剂等）剂等） 4）准确度准确度 回收试验：回收试验： 加样回收试验：加样回收试验： 4 4）准确度）准确度 原料药原料药用已知纯度的被分析物用已知纯度的被分析物( (如参比物质如参比物质) )进行测定进行测定用提出的分析方法的检测结果与第二种成熟的分析方法的用提出的分析方法的检测结果与第二种成熟的分析方法的检测结果做比较，而后者的准确性是有规定的和检测结果做比较，而后者的准确性是有规定的和( (或或) )经确经确定的。定的。准确性可以在精密度、线性和专属性建立后，推论而得准确性可以在精密度、线性和专属性建立后，推论而得. .4 4）准确度）准确
21、度 制剂制剂用该分析方法测定药物制剂成分与添加的已知量被分析原用该分析方法测定药物制剂成分与添加的已知量被分析原料药的混合物料药的混合物? ?如在不能获得制剂所有成分的样品时，可以将已知量的被如在不能获得制剂所有成分的样品时，可以将已知量的被分析物加入到制剂中，或者将测得的结果与另一种已鉴定分析物加入到制剂中，或者将测得的结果与另一种已鉴定分析方法的分析结果进行比较，而后者的准确性是有规定分析方法的分析结果进行比较，而后者的准确性是有规定的和（或的和（或) )经确定的。经确定的。 在精密度、线性和专属性建立后，可以推断准确性。在精密度、线性和专属性建立后，可以推断准确性。4 4）准确度）准确度
22、- -杂质的定量测定杂质的定量测定应当通过用已知量杂质加强样品应当通过用已知量杂质加强样品( (原料药制剂原料药制剂) )检测信号检测信号的方式来评价准确性。的方式来评价准确性。 在不能获得特定杂质和（或）降解产物样品的情况下，在不能获得特定杂质和（或）降解产物样品的情况下，可以考虑与另一种成熟的方法所测得的结果做比较。可以可以考虑与另一种成熟的方法所测得的结果做比较。可以使用原料药的响应因子。如药典方法或经过验证的方法。使用原料药的响应因子。如药典方法或经过验证的方法。 应当明确如何确定每个单一杂质或总杂质：如：所有应当明确如何确定每个单一杂质或总杂质：如：所有成分相对于主摹被分析物的重量重
23、量首分比或峰面积百成分相对于主摹被分析物的重量重量首分比或峰面积百分比。分比。 某成分含量测定回收率某成分含量测定回收率1 1编号编号样品含样品含量量(mg)(mg)加入对加入对照品的照品的量量(mg)(mg)测得测得总量总量回收率回收率(%)(%)平均回平均回收率收率(%)(%)RSD(%)RSD(%)1 188188193093018531853104.52104.5297.2297.223.713.712 28778771785178597.6397.633 38758751764176495.5995.594 48848841767176794.9594.955 58838831773
24、177395.795.76 68788781761176194.9594.95某成分回收率某成分回收率2 2编号编号样品含样品含量量(mg)(mg)加入对加入对照品的照品的量量(mg)(mg)测得测得总量总量回收率回收率(%)(%)平均回平均回收率收率(%)(%)RSD(%)RSD(%)1 188188193093018531853104.52104.522 28778771785178597.6397.6399.25 99.25 4.71 4.71 3 38758751764176495.5995.597 7881881 4654651341134198.9298.928 888288213
25、40134098.4998.4997.797.71.791.799 98838831328132895.795.71 10 0885885 139513952240224097.1397.131 11 18848842254225498.2198.2197.5197.510.620.621 12 28818812237223797.297.2 进行统计分析，结果平均回收率为进行统计分析，结果平均回收率为98.1598.15，RSD=2.65%RSD=2.65%。某成分含量测定回收率某成分含量测定回收率3 3编号编号样品含量样品含量(mg)(mg)加入对照加入对照品的量品的量(mg)(mg)测得
26、测得总量总量回收率回收率(%)(%)平均回收平均回收率率(%)(%)RSD(%)RSD(%)1 188188118531853104.52104.522 28778779309301785178597.6397.6399.25 99.25 4.71 4.71 3 38758751764176495.5995.59131322822845345396.9896.98141422822823223245345396.9896.9897.9997.991.781.7815152292294614611001001616132213222656265695.6395.63171713211321139
27、513952640264094.5594.5595.0395.030.580.581818131913192643264394.9194.91 进行统计分析，结果平均回收率为进行统计分析，结果平均回收率为97.4297.42，RSD=3.13%RSD=3.13%。5 5）精密度）精密度 精精密密度度系系指指在在规规定定的的测测试试条条件件下下，同同一一个个均均匀匀供供试试品品，经经多多次次取取样样测测定定所所得得结结果果之之间间的的接接近近程程度度。精精密密度度一一般般用用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。重复性重复性 中间精密度中间精密度 重现性重现性 5
28、5）精密度）精密度-验证方法验证方法名称名称定义定义验证方法验证方法重复性重复性在相同条件下，由一个在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。的精密度称为重复性。在规定的线性范围内至少测定在规定的线性范围内至少测定9次次(例如例如3种浓度每种浓度种浓度每种浓度3次次)，或在，或在100的实的实验浓度下，至少测定验浓度下，至少测定6次。次。 中间中间精密度精密度在同一个实验室，不同在同一个实验室，不同时间由不同分析人员时间由不同分析人员, ,用不同设备测定结果之用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间间的精密度，称为中间精密度。精密度。应根据方法使用的环境而
29、定，确定随机应根据方法使用的环境而定，确定随机事件对分析方法精密度的影响。事件对分析方法精密度的影响。变动因素为：不同日期变动因素为：不同日期 不同分析人员不同分析人员 不同设备不同设备重现性重现性在不同实验室由不同分在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的析人员测定结果之间的精密度精密度 通过实验室之间的检测来评价；通过实验室之间的检测来评价；如果方法需要标准化如收载到药典中的如果方法需要标准化如收载到药典中的方法，则应考虑重现性。这些资料不是方法，则应考虑重现性。这些资料不是申请上市文档的三部分。申请上市文档的三部分。协作标定协作标定 能力验证能力验证 药品标准的实验药品标准的实验复核复核
30、6）检出限（检出限（Limit of DetectionLimit of Detection，LOD)LOD) 检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。 a.a.非仪器分析目视法非仪器分析目视法 通通过过对对一一系系列列含含有有已已知知浓浓度度分分析析物物的的样样品品进进行行分分析析，以以确确定定能够被可靠测定的分析物的最低浓度。能够被可靠测定的分析物的最低浓度。 b. b.仪器法（信噪比法）仪器法（信噪比法） 该方法仅适用于出现基线噪音的分析方法。信噪比的确定是该方法仅适用于出现基线噪音的分析方法。信噪比的确定是通过比较含已知低浓度被分析物样品
31、与空白样品的测试信号，确通过比较含已知低浓度被分析物样品与空白样品的测试信号，确定被分析物可以靠被检测到的最小浓度。通常信噪比为定被分析物可以靠被检测到的最小浓度。通常信噪比为3 3：1 1或或2 2：1 1时，检测限可以被接受。时，检测限可以被接受。 6）检出限（检出限（Limit of DetectionLimit of Detection，LOD)LOD) 检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。 c.c.响应值的标准差和斜率响应值的标准差和斜率检测限检测限(DL)(DL)可以表达为：可以表达为：DL=3.3 /SDL=3.3 /S式中，式
32、中，为响应值的标准差；为响应值的标准差；S S为校正曲线的斜率。为校正曲线的斜率。斜率斜率s s可从被分析物的校正曲线来估算，而可从被分析物的校正曲线来估算，而值可值可 由由多种途径估算。例如：多种途径估算。例如：基于空白的标准差基于空白的标准差基于校正曲线基于校正曲线6 6）检出限（）检出限（Limit of DetectionLimit of Detection，LOD)LOD)p数据要求数据要求应当提供检测限和测定检测限的方法应当提供检测限和测定检测限的方法如果方法采用目测法和信噪比法，应提供测试图谱如果方法采用目测法和信噪比法，应提供测试图谱如果通过计算或外推法得到检测限的估算值，可对
33、如果通过计算或外推法得到检测限的估算值，可对一系列或等于检测限样品的独立分析来验证这一估一系列或等于检测限样品的独立分析来验证这一估算值。算值。7 7）定量限（）定量限（Limit of Quantitative, LOQLimit of Quantitative, LOQ）p定定义义：定定量量限限系系指指供供试试品品中中被被测测成成分分能能被被定定量量测测定定的的最最低低量量，其其测测定定结结果果应应具具一一定定准准确确度度和和精精密密度度。杂杂质质和和降降解解产产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。物用定量测定方法研究时，应确定定量限。 p 试验方法：试验方法：目测法：目测法：信噪比法：
34、以信噪比信噪比法：以信噪比10:110:1时的浓度时的浓度( (或量或量) )进样测定进样测定, ,重重复测定的响应值应满足精密度要求。复测定的响应值应满足精密度要求。基于响应值的标准差和斜率基于响应值的标准差和斜率8 8）耐用性）耐用性定定义义：耐耐用用性性系系指指在在测测定定条条件件有有小小的的变变动动时时，测测定定结结果果不不受受影影响响的承受程度的承受程度。 耐耐用用性性进进行行评评估估应应当当在在研研制制阶阶段段就就加加以以考考虑虑，它它取取决决于于所所研研究究的的分分析析方方法法类类型型。应应表表明明在在对对方方法法参参数数进进行行有有意意改改变变后后，分分析析方法依然可靠方法依然
35、可靠 如如果果测测定定的的结结果果表表明明该该方方法法对对分分析析条条件件的的变变化化是是敏敏感感的的，那那么么这这些些分分析析条条件件就就应应适适当当地地加加以以控控制制或或在在方方法法中中预预先先提提出出告告诫诫。因因此此应应当当对对耐耐用用性性进进行行评评估估，并并建建立立一一系系列列的的系系统统适适用用性性参参数数( (如如分分离离度度实实验验) )，以以确确保保该该分分析析方方法法在在任任何何时时候候都都可可以以保保持持有有效效性。性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。 8 8）耐用性）耐用性-考察因素考察因素p分析溶液的稳定性分析溶液的
36、稳定性p样品的提取次数、时间样品的提取次数、时间p液相色谱方法液相色谱方法 流动相流动相pHpH值变化的影响值变化的影响 流动相组分变化的影响；流动相组分变化的影响； 不同色谱柱不同色谱柱( (不同的批号和或供应商不同的批号和或供应商) )； 温度；温度； 流速。流速。8 8）耐用性）耐用性-考察因素考察因素p气相色谱方法：气相色谱方法： 不同色谱柱不同色谱柱( (不同的批号和或供应商不同的批号和或供应商) )； 温度温度 流速流速 固定相固定相 不同类型的载体不同类型的载体 8 8）耐用性）耐用性-考察因素考察因素p薄层色谱法：薄层色谱法： 不同品牌的薄层板不同品牌的薄层板点样方式点样方式薄
37、层展开时温度及相对湿度的变化薄层展开时温度及相对湿度的变化8 8）耐用性：）耐用性：试验示例试验示例-不同柱温比较不同柱温比较 柱温柱温分离度分离度测定的平均含量测定的平均含量（mg/g）RSD%204.25.72304.15.690.30403.25.728）耐用性）耐用性试验示例试验示例-不同检测波长的比较不同检测波长的比较 检测波长检测波长分离度分离度测定的平均含量（测定的平均含量（mg/g）RSD%260nm4.15.68270nm4.15.690.57280nm4.15.638 8）耐用性）耐用性试验示例试验示例- -流动相组成比例变化比较流动相组成比例变化比较流动相流动相分离度分离
38、度测定的平均含量（测定的平均含量（mg/g）RSD%甲醇甲醇-水（水（22：78）4.35.75甲醇甲醇-水（水（27：73）4.15.692.64甲醇甲醇-水（水（32：68）2.15.98 8 8）耐用性）耐用性-试验示例试验示例 某含量测定提取条件选择某含量测定提取条件选择选择选择50ml50ml甲醇超声提取甲醇超声提取4040分钟分钟9 9）系统适用性试验）系统适用性试验 系统适用性实验是许多分析方法的组成部分，系统适用性实验是许多分析方法的组成部分，这些实验的基本概念是要把由分析设备、电子仪这些实验的基本概念是要把由分析设备、电子仪器、实验操作和被分析样品所组成的完整系统进器、实验操
39、作和被分析样品所组成的完整系统进行整体评估。对于特定方法的系统适应性参数的行整体评估。对于特定方法的系统适应性参数的建立依赖于被验证方法的类型。进一步信息可参建立依赖于被验证方法的类型。进一步信息可参考药典。考药典。二、分析方法验证二、分析方法验证7 7、验证检测项目小结、验证检测项目小结1 1、鉴别、鉴别 鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用于鉴别的分析方法要求具有较强的质，用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性。专属性。2 2、杂质检查（限度试验、定量试验）、杂质检查（限度试验、定量试验） 杂质检查主要用于控制主成分以外
40、的杂质，如有机杂质、杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂质等。无机杂质等。 杂质检查要准确反应供试品的纯度特性，可分为限度试验杂质检查要准确反应供试品的纯度特性，可分为限度试验和定量试验两种情况。用于限度试验的分析方法验证侧重专属和定量试验两种情况。用于限度试验的分析方法验证侧重专属性和检测限。用于定量试验的分析方法验证强调性和检测限。用于定量试验的分析方法验证强调专属性、准确专属性、准确度和定量限。度和定量限。 3 3、定量测定、定量测定 定量测定包括含量测定、制剂的溶出度（释放度）测定量测定包括含量测定、制剂的溶出度（释放度）测定等，由于此类项目对准确性要求较高，故所采
41、用的分析定等，由于此类项目对准确性要求较高，故所采用的分析方法要求具有一定的方法要求具有一定的专属性、准确度和线性专属性、准确度和线性。4 4、其他特定检测项目、其他特定检测项目。 其他特定检测项目包括粒径分布、旋光度、分子量分其他特定检测项目包括粒径分布、旋光度、分子量分布等，由于这些检测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量布等，由于这些检测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量测定等有所不同，对于这些项目的分析方法验证应有不同测定等有所不同，对于这些项目的分析方法验证应有不同的要求。的要求。二、分析方法验证二、分析方法验证7 7、验证检测项目小结、验证检测项目小结需验证项目注意：注意：- -表示通常
42、不需要做的项目：表示通常不需要做的项目：+ +表示通常需要做的项目。表示通常需要做的项目。假如已做了重现性（见术语表），就不需再做中间精密度；假如已做了重现性（见术语表），就不需再做中间精密度；分析方法缺乏专属性，可以由其他分析方法来补充；分析方法缺乏专属性，可以由其他分析方法来补充；有些情况下可能需要。有些情况下可能需要。项目内容项目内容鉴别鉴别杂质测定杂质测定含量测定及溶出含量测定及溶出量测定量测定定量定量限度限度准确度准确度+精密度精密度+重复性重复性+中间精密度中间精密度+专属性专属性检测限检测限定量限定量限线性线性范围范围耐用性耐用性8 8）分析方法验证的方式和步骤）分析方法验证的方
43、式和步骤分析方法应给出完成每个分析试验所需的详细步骤。分析方法应给出完成每个分析试验所需的详细步骤。可能包括供试品、对照品和试剂的配制和制备；可能包括供试品、对照品和试剂的配制和制备；仪器的使用说明；仪器的使用说明；标准曲线的绘制；标准曲线的绘制；计算公式的使用等信息，计算公式的使用等信息，当然，分析方法的内容不仅限于上述信息。当然，分析方法的内容不仅限于上述信息。在实际工作中，可以对实验工作进行充分的设计，使在实际工作中，可以对实验工作进行充分的设计，使得可以同时考察多个适当的验证项目，提供分析方法科学的、得可以同时考察多个适当的验证项目，提供分析方法科学的、综合的能力情况，比如：专属性、线
44、性、范围、准确度和精密综合的能力情况，比如：专属性、线性、范围、准确度和精密度等度等。二、分析方法验证二、分析方法验证9 9）分析方法验证常见问题）分析方法验证常见问题药味的选择问题药味的选择问题供试品溶液制备考察不全面供试品溶液制备考察不全面 对照品溶液浓度与供试品不匹配对照品溶液浓度与供试品不匹配标准曲线的制备标准曲线的制备 样品测定不在线性范围之内取样、范围样品测定不在线性范围之内取样、范围太小、单位等问题太小、单位等问题色谱条件的选择色谱条件的选择 应详述理由并附相关图谱应详述理由并附相关图谱方法改变后应与原方法作比较方法改变后应与原方法作比较对照品溶液的制备对照品溶液的制备 对照品称
45、量难以达到精密称定的要求对照品称量难以达到精密称定的要求回收率测定问题回收率测定问题9 9）分析方法验证常见问题）分析方法验证常见问题耐用性考察问题耐用性考察问题特殊剂型如分散片建议研究建立主要成分的溶出度检查方特殊剂型如分散片建议研究建立主要成分的溶出度检查方法法 ，限度的制定有时不能照搬二部药典，限度的制定有时不能照搬二部药典单味制剂单味制剂 应作辅料空白样品，进行空白对照试验应作辅料空白样品，进行空白对照试验正文正文 不规范不规范 53内容：内容： 一、法规要求一、法规要求 二、分析方法验证二、分析方法验证 三、分析方法确认三、分析方法确认 四、分析方法验证和确认总结四、分析方法验证和确
46、认总结三、分析方法确认三、分析方法确认分析方法确认分析方法确认 一个阐述通过已验证方法进行产品测试的条件确实适合一个阐述通过已验证方法进行产品测试的条件确实适合于该验证方法的过程于该验证方法的过程p适用范围适用范围 物料和产品中不需要进行验证的检验方法以及药典方法和物料和产品中不需要进行验证的检验方法以及药典方法和其他已验证的法定标准。通过方法确认来证明在本实验室条件其他已验证的法定标准。通过方法确认来证明在本实验室条件下的适用性。下的适用性。p不适用于：不适用于： 日常检验一般理化方法。如干燥失重、炽灼残渣。日常检验一般理化方法。如干燥失重、炽灼残渣。 分析方法的验证通常在产品的研发阶段已经
47、进行。分析方法的验证通常在产品的研发阶段已经进行。 应关注不同实验室之间方法转移时的确认。应关注不同实验室之间方法转移时的确认。5555三、分析方法确认三、分析方法确认采用药典规定的检验方法需要确认的目的：采用药典规定的检验方法需要确认的目的： 在于提供第一次使用实验室的人员、设备和试剂进行法在于提供第一次使用实验室的人员、设备和试剂进行法定分析方法确认时得到可接受结果的基本信息。定分析方法确认时得到可接受结果的基本信息。 确认包括所选择的方法性能参数，如那些在确认包括所选择的方法性能参数，如那些在USPUSP中中描述的，是产生相关数据而不是重复验证过程。描述的，是产生相关数据而不是重复验证过
48、程。 方法使用者应有相当的经验、知识并经过培训能够按照方法使用者应有相当的经验、知识并经过培训能够按照书面的法定方法进行操作。由使用者进行方法确认可以提供书面的法定方法进行操作。由使用者进行方法确认可以提供法定方法能够适合相应的测试目的的信心。法定方法能够适合相应的测试目的的信心。 尽管缺认法定方法在真实条件下使用时的适应性不需要尽管缺认法定方法在真实条件下使用时的适应性不需要进行完整的再验证过程，列在进行完整的再验证过程，列在表表2 2中的一些分析参数可中的一些分析参数可以在确认过程中使用。特定方法的确认仅需要对被认为适宜以在确认过程中使用。特定方法的确认仅需要对被认为适宜的参数进行评估。的
49、参数进行评估。56法定方法确认法定方法确认 除非有迹象显示法定方法不适应各论下测试除非有迹象显示法定方法不适应各论下测试要求，一些基本的常规方法不需要做验证。基本要求，一些基本的常规方法不需要做验证。基本法定分析方法包括但不限于：干燥失重、炽灼残法定分析方法包括但不限于：干燥失重、炽灼残渣、各种化学检测如酸度检测，简单的仪器分析渣、各种化学检测如酸度检测，简单的仪器分析如用如用pHpH值测试仪测定值测试仪测定pHpH值。药典建议，对于首次值。药典建议，对于首次使用药典方法进行常规检测的实验，应考虑到任使用药典方法进行常规检测的实验，应考虑到任何新的或不同的样品或溶液的处理要求。何新的或不同的样
50、品或溶液的处理要求。三、分析方法确认三、分析方法确认比对比对人员人员仪器仪器实验室间比对实验室间比对确认方式确认方式检验项目确认检验项目确认鉴别鉴别-专属性专属性杂质杂质专属性、精专属性、精密度、定量限密度、定量限含量含量准确度、专准确度、专属性属性58原料药检测方法示例原料药检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别IR, UV IR, UV HPLC HPLC Purity testPurity test检查检查 Loss on dryingLoss on drying干燥失重干燥失重, , residue on ignition, residue on
51、ignition, 炽炽灼残渣灼残渣Heavy metalsHeavy metals重金属重金属pHpHRelated substancesRelated substances有关物有关物质质Assay Assay 含量测定含量测定TitrimetryTitrimetry滴定法滴定法HPLCHPLC内容内容验证验证确认确认准确度准确度NoNo精密度精密度NoNo专属性专属性YesMaybe检测限检测限NoNo定量限定量限NoNo线性线性NoNo范围范围NoNo59原料药检测方法示例原料药检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别IR, UV IR, UV HP
52、LC HPLC Purity testPurity test检查检查 Loss on dryingLoss on drying干燥失重干燥失重, , residue on ignition, residue on ignition, 炽炽灼残渣灼残渣Heavy metalsHeavy metals重金属重金属pHpHRelated substancesRelated substances有关物有关物质质Assay Assay 含量测定含量测定TitrimetryTitrimetry滴定法滴定法HPLCHPLC内容内容验证验证确认确认准确度准确度NoNo精密度精密度NoNo专属性专属性YesNo
53、检测限检测限YesNo定量限定量限NoNo线性线性NoNo范围范围NoNo60原料药检测方法示例原料药检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别IR, UV IR, UV HPLC HPLC Purity testPurity test检查检查Loss on dryingLoss on drying干燥失重干燥失重, , residue on ignition, residue on ignition, 炽炽灼残渣灼残渣Heavy metalsHeavy metals重金属重金属pHpHRelated substancesRelated substances有
54、关物有关物质质Assay Assay 含量测定含量测定TitrimetryTitrimetry滴定法滴定法HPLCHPLC内容内容验证验证确认确认准确度准确度YesNo精密度精密度YesMaybe专属性专属性YesYes检测限检测限NoNo定量限定量限YesYes线性线性YesNo范围范围YesNo61原料药检测方法示例原料药检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别IR, UV IR, UV HPLC HPLC Purity testPurity test检查检查Loss on dryingLoss on drying干燥失重干燥失重, , residue
55、on ignition, residue on ignition, 炽炽灼残渣灼残渣Heavy metalsHeavy metals重金属重金属pHpHRelated substancesRelated substances有关物有关物质质Assay Assay 含量测定含量测定TitrimetryTitrimetry滴定法滴定法HPLCHPLC内容内容验证验证确认确认准确度准确度YesNo精密度精密度YesMaybe专属性专属性YesNo检测限检测限NoNo定量限定量限NoNo线性线性YesNo范围范围YesNo62原料药检测方法示例原料药检测方法示例IdentificationIdenti
56、fication鉴别鉴别IR, UV IR, UV HPLC HPLC Purity testPurity test检查检查 Loss on dryingLoss on drying干燥失重干燥失重, , residue on ignition, residue on ignition, 炽炽灼残渣灼残渣Heavy metalsHeavy metals重金属重金属pHpHRelated substancesRelated substances有关物有关物质质Assay Assay 含量测定含量测定TitrimetryTitrimetry滴定法滴定法HPLCHPLC内容内容验证验证确认确认准确度
57、准确度YesNo精密度精密度YesMaybe专属性专属性YesMaybe检测限检测限NoNo定量限定量限NoNo线性线性YesNo范围范围YesNo63制剂检测方法示例制剂检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别HPLC HPLC Purity testPurity test检查检查 Particle in injectionsParticle in injectionsUniformityUniformityDissolutionDissolutionImpurities:Impurities:杂质杂质related substancesrelated s
58、ubstancesresidual solventsresidual solventsAssay Assay 含量测定含量测定内容内容验证验证确认确认准确度准确度NoNo精密度精密度NoNo专属性专属性YesYes检测限检测限NoNo定量限定量限NoNo线性线性NoNo范围范围NoNo64制剂检测方法示例制剂检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别HPLC HPLC Purity testPurity test检查检查 Particle in injectionsParticle in injectionsUniformityUniformityDissol
59、utionDissolutionImpurities:Impurities:杂质杂质related substancesrelated substancesresidual solventsresidual solventsAssay Assay 含量测定含量测定内容内容验证验证确认确认准确度准确度MaybeMaybe精密度精密度YesYes专属性专属性MaybeYes检测限检测限MaybeNo定量限定量限MaybeMaybe线性线性MaybeNo范围范围MaybeNo65制剂检测方法示例制剂检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别HPLC HPLC Pur
60、ity testPurity test检查检查 Particle in injectionsParticle in injectionsUniformityUniformityDissolutionDissolutionImpurities:Impurities:杂质杂质related substancesrelated substancesresidual solventsresidual solventsAssay Assay 含量测定含量测定内容内容验证验证确认确认准确度准确度YesMaybe精密度精密度YesYes专属性专属性YesYes检测限检测限NoNo定量限定量限YesYes线性
61、线性YesNo范围范围YesNo66制剂检测方法示例制剂检测方法示例IdentificationIdentification鉴别鉴别HPLC HPLC Purity testPurity test检查检查 Particle in injectionsParticle in injectionsUniformityUniformityDissolutionDissolutionImpurities:Impurities:杂质杂质related substancesrelated substancesresidual solventsresidual solventsAssay Assay 含量测
62、定含量测定内容内容验证验证确认确认准确度准确度YesMaybe精密度精密度YesYes专属性专属性YesYes检测限检测限NoNo定量限定量限NoNo线性线性YesNo范围范围YesNo67* 如果缺少指导书可能影响检测结果，实验室应具有所如果缺少指导书可能影响检测结果，实验室应具有所有相关设备的使用和操作指导书以及处置、准备检测物有相关设备的使用和操作指导书以及处置、准备检测物品的指导书，或者二者兼有。所有与实验室工作有关的品的指导书，或者二者兼有。所有与实验室工作有关的指导书、标准、手册和参考资料应保持现行有效并易于指导书、标准、手册和参考资料应保持现行有效并易于员工取阅。员工取阅。68内
63、容：内容： 一、法规要求一、法规要求 二、分析方法验证二、分析方法验证 三、分析方法确认三、分析方法确认 四、分析方法验证和确认总结四、分析方法验证和确认总结 四、分析方法的验证、确认及方法转移总结四、分析方法的验证、确认及方法转移总结内容内容 适用范围适用范围 目的目的 发起时机发起时机 方法方法验证验证 1、采用新的检验方法；、采用新的检验方法；2、检验方法需变更的；、检验方法需变更的；3、采用、采用中华人民共务药中华人民共务药典典及其他法定标准未载的及其他法定标准未载的检验方法；检验方法；4、法规规定的其他需要验、法规规定的其他需要验证的检验方法证的检验方法 证明采用的方法证明采用的方法
64、适合相应检测要适合相应检测要求求 1、建立质量标准、建立质量标准时；时；2、在药品生产工、在药品生产工艺变更、制剂的艺变更、制剂的组分变更、原分组分变更、原分析方法修订时析方法修订时 方法方法确认确认 1、不需要进行验证的检验、不需要进行验证的检验方法；方法；2、药典方法和其他法定方、药典方法和其他法定方法法 确认方法在本实确认方法在本实验室条件下的适验室条件下的适用性用性 在实验室批准使在实验室批准使用该方法前用该方法前 方法方法转移转移 将分析方法由将分析方法由A实验室转移实验室转移到到B实验室实验室确认采用的方法确认采用的方法在在B实验室条件实验室条件下的适用性下的适用性 在在B实验室批准实验室批准使用该方法前使用该方法前 70谢谢！谢谢！
