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1、实验三实验三 血球计数板的使用及酵母血球计数板的使用及酵母菌的直接计数菌的直接计数微生物血球计数板直接计数法一、目的要求一、目的要求二、基本原因：二、基本原因： 此法是利用血球计数板在显微镜下直接此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，的个体数目，然后推算出含菌数，包括死活包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。在内。 这样得出结果往往偏高。这种方法常用这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢子。于形态个体较大的菌体或孢子。计数
2、板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为央的一大格作为计数用，称为计数室计数室。计数室计数室刻度有刻度有2 2种：一种是种：一种是2525中格中格X16X16小格，而另一小格，而另一种为种为1616中格中格X25X25小格，它们都是由小格，它们都是由400400个小格组成。个小格组成。每个大方格边长为每个大方格边长为1mm1mm，则每个大方格面积为，则
3、每个大方格面积为1 1X X1=1mm1=1mm2 2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为度为0.1mm,0.1mm,所以每个计数室的体积为所以每个计数室的体积为0.1 0.1 X X 1 1 X X 1=0.11=0.1mmmm3 3, ,每个大格有每个大格有400400个小格，所以每个小方格个小格，所以每个小方格体积为体积为0.1/400=1/4000mm0.1/400=1/4000mm3 3=1/4000,000ml=1/4000,000ml。血球计数板的分区与分格血球计数板的分区与分格例一例一 例二例二1大格大格=16中格中格 1大格大格=25中
4、格中格 =16 X 25小格小格 =25 X 16小格小格 =400小格小格 =400小格小格 *#三、材料与仪器：1、待测样品：酵母菌悬液、待测样品：酵母菌悬液2、显微镜，血球计数板，接种环、显微镜，血球计数板，接种环,盖玻片等。盖玻片等。四、方法与步骤:1 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。盖玻片。2 2、取稀释到一定程度（、取稀释到一定程度（510510个酵母个酵母/ /小格）小格）酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到
5、小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。四、方法与步骤:3 3、如用、如用16 16 X X 2525计数板，只计四个角上中方计数板，只计四个角上中方格的菌数。若是格的菌数。若是25 25 X X 16 16的计数板，除计数四的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数菌数。每个样品重复计数2323次。计数时应不次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左
6、方线上的菌体。线及左方线上的菌体。5、计数方法：、计数方法：样品中菌数样品中菌数/ml=每小格平均菌数每小格平均菌数 x 4000 ,000x 稀释倍数，本实验采用稀释倍数，本实验采用25 x 16规格，规格，要求数这些方格中的全部小格即要求数这些方格中的全部小格即80个小格。个小格。设：每个中方格的菌数为设：每个中方格的菌数为A，则，则每小格平均菌数每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 A1+A2+A3+A4+A5样品中的菌数样品中的菌数/ml= X 4000,000 X 稀释稀释倍数倍数 80 结果记录：微生物名称 总菌数 个/ml第一个中格第二个中格第三个中格第四个中格第五个中格第一次测定第二次测定平均四、测定注意事项:1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。2、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。五、思考题：1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造成误差？2、血球计数板测定原理是什么？它有哪些优点？
