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1、上海生物沪教版2017等级考动物细胞工程植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程植物体植物体细胞杂交细胞杂交/细胞融合细胞融合技术技术植物组织培养技术植物组织培养技术1、动物组织和细胞培养技术、动物组织和细胞培养技术 2、动物细胞融合技术、动物细胞融合技术3、动物细胞核移植技术、动物细胞核移植技术4、动物胚胎移植技术、动物胚胎移植技术5、干细胞技术、干细胞技术细胞工程类型细胞工程类型 6、动物克隆技术、动物克隆技术3. 应用应用 （1 1）培养健康细胞，用于临床治疗）培养健康细胞，用于临床治疗如：皮肤移植如：皮肤移植（2 2）生产蛋白质等生物制品）生产蛋白质等生物制品如：病毒疫苗、抗体
2、、酶等如：病毒疫苗、抗体、酶等（3 3）细胞的生理、药理、病理研究）细胞的生理、药理、病理研究如：体外培养的癌细胞进行如：体外培养的癌细胞进行 实验，提取抗癌药物实验，提取抗癌药物 4. 条件条件（1）无菌环境）无菌环境（2）营养）营养:（3）温度和）温度和PH（4）有氧环境）有氧环境 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清动物血清二、动物细胞融合二、动物细胞融合思考：动物正常的生命活动中有思考：动物正常的生命活动中有细胞融合的过程吗？细胞融合的过程吗？受精作用受精作用细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞生物法生物法物理法物理法化学法化学法灭活的仙台病毒灭活的
3、仙台病毒电刺激等电刺激等聚乙二醇聚乙二醇三、单克隆抗体三、单克隆抗体 （动物细胞融合最有价值的成就）（动物细胞融合最有价值的成就）B淋巴细胞特点淋巴细胞特点:骨髓瘤细胞特点骨髓瘤细胞特点:能产生特异性抗体能产生特异性抗体,但不能在体外无限增殖但不能在体外无限增殖能无限增殖能无限增殖,但不能但不能产生特异性抗体产生特异性抗体杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既能产生单一抗体，既能产生单一抗体，又能在体外无限增殖又能在体外无限增殖1、单克隆抗体单克隆抗体(可特异性消灭某种抗原可特异性消灭某种抗原)制备过程制备过程 注射注射某一种某一种抗原抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融
4、合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选能产生特定抗体的能产生特定抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞体外培养体外培养单克隆抗体单克隆抗体为什么要注射某抗原？为什么要注射某抗原？为获得能产生某特异为获得能产生某特异性抗体的性抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞为什么筛选为什么筛选？细？细胞融合后培养胞融合后培养液中有几种细胞？液中有几种细胞？BBBB瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤因为老鼠体内不可能只因为老鼠体内不可能只有一种有一种B淋巴细胞淋巴细胞2、单克隆抗体的单克隆抗体的概念：概念：由单个杂交瘤细胞增殖产生的由单个杂交瘤细胞增殖产生的杂交瘤细胞群持续分泌的杂交瘤细胞群持续分泌的成分成分单一单一的的特异性特
5、异性抗体。抗体。3、单克隆抗体的单克隆抗体的特点：特点：特异性强；灵敏度高（纯度高）特异性强；灵敏度高（纯度高）4、单克隆抗体的单克隆抗体的应用：应用：用于疾病的诊断和治疗用于疾病的诊断和治疗如：如：鉴定和区分各种抗原；鉴定和区分各种抗原； 制成制成“生物导弹生物导弹(单克隆抗体单克隆抗体+药物药物)”， 治疗癌症。治疗癌症。1.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞
6、小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，该细过程，该细胞继承胞继承_的遗传特性，的遗传特性，既能既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_制备单克隆抗体制
7、备单克隆抗体B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC不能不能没有预先注射某一种抗原没有预先注射某一种抗原四、细胞核移植四、细胞核移植1 1、概念、概念将一种细胞的细胞核移植另一种将一种细胞的细胞核移植另一种去核的细胞中的技术。去核的细胞中的技术。 2 2、过程、过程体细胞核体细胞核去核卵细胞去核卵细胞移植移植重组细胞重组细胞组织培养组织培养胚胎移植胚胎移植幼体幼体如何把细胞核移植到去核卵细胞中呢？如何把细胞核移植到去核卵细胞
8、中呢？P106P106：显微注射法显微注射法3 3、应用、应用创造出无性杂交的生物新品种。创造出无性杂交的生物新品种。如：克隆羊、牛如：克隆羊、牛如：鲤鲫核质杂交鱼如：鲤鲫核质杂交鱼四、细胞核移植四、细胞核移植1.1.概念：概念：将动物的受精卵或早期胚胎移植到将动物的受精卵或早期胚胎移植到母体子宫内，使之继续妊娠发育成新个体母体子宫内，使之继续妊娠发育成新个体的技术的技术. .2 2、过程、过程动物动物排卵排卵体外受精体外受精胚胎胚胎母体子宫母体子宫新个体新个体培育培育移植移植超数排卵技术：超数排卵技术：五五. .动物胚胎移植动物胚胎移植注射促注射促激素激素3. 3. 意义意义1)1)增加一生
9、繁殖的后代数量增加一生繁殖的后代数量2)2)保存品种资源和濒危物种保存品种资源和濒危物种胚胎分割移植：胚胎分割移植：采用机械方法将早期胚胎切割成采用机械方法将早期胚胎切割成2 2等份等份, ,4 4等份或等份或8 8等份等等份等, ,经移植获得同卵双胎经移植获得同卵双胎或多胎的技术或多胎的技术. .五五. .动物胚胎移植动物胚胎移植1.1.概念概念: :具有自我更新和增殖、分化能力的细胞具有自我更新和增殖、分化能力的细胞. .2.2.形态形态: :圆形或椭圆形圆形或椭圆形3.3.特点特点: :体积小体积小, ,核质比大核质比大. .4.4.类型类型胚胎干细胞胚胎干细胞成体干细胞成体干细胞多能干
10、细胞多能干细胞单能干细胞单能干细胞如如: :造血干细胞造血干细胞如如: :神经干细胞神经干细胞六六. . 干细胞技术干细胞技术是是胚胎干细胞胚胎干细胞早期胚胎早期胚胎具有全能性，具有全能性，胚胎干细胞胚胎干细胞不同的培养条件不同的培养条件分化成不同分化成不同类型的细胞类型的细胞5.5.应用应用(1)(1)治疗人类的某些顽症治疗人类的某些顽症(2)(2)培育出人造组织器官，用于器官移植培育出人造组织器官，用于器官移植(3)(3)是研究体外细胞分化的理想材料是研究体外细胞分化的理想材料六六. . 干细胞技术干细胞技术卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核
11、移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠动动物物克克隆隆过过程程融合后的细胞融合后的细胞动物组织细动物组织细胞培养技术胞培养技术细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞或获得细胞或细胞产物细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物葡萄糖、动物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较
12、项目5 5、植物组织培养和动物组织细胞培养的比较、植物组织培养和动物组织细胞培养的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！26
