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1、分子生物学分子生物学在白血病中的应用在白血病中的应用2016-3-8融合基因实验室融合基因实验室 一、白血病相关基因改变的常见类型一、白血病相关基因改变的常见类型融合基因融合基因基因突变基因突变基因表达异常基因表达异常1.融合基因：融合基因： 所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾相连置于同一套调控序列（包括启动子、增相连置于同一套调控序列（包括启动子、增强子、核糖强子、核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。 概概 念念 Chr 9Chr 22ABLBCRBCR-ABL融合基因融
2、合基因2.基因突变：基因突变：错义突变（点突变）错义突变（点突变）插入突变插入突变缺失突变缺失突变移码突变移码突变错义突变（点突变）：错义突变（点突变）：DNA分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起的突变。的突变。如：如：JAK2V617FJAK2基因基因mRNA水平（水平（cDNA水平）：第水平）：第1849位点位点G突变为突变为T蛋白水平：第蛋白水平：第617位氨基酸位点由缬氨酸（位氨基酸位点由缬氨酸（V）突变）突变为笨丙氨酸（为笨丙氨酸（F）插入突变：插入突变：较长片段的较长片段的DNA的插入而发生突变，但不改变的插入而发生突变，但不
3、改变阅读框阅读框如：如：NOTCH1H1590-L1592insFGPNOTCH1基因基因mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）：c.47754776ins(TGGGCC) 蛋白水平：蛋白水平：H1590-L1592insFGP缺失突变：缺失突变：较长片段的较长片段的DNA的缺失而发生突变的缺失而发生突变，但不改变，但不改变阅读框阅读框如：如：JAK2N542-E543del JAK2基因基因mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）：c.1624-1629del6bp蛋白水平：蛋白水平：N542-E543缺失缺失N、E氨基酸氨基酸移码突变：移码突变：DNA片段中某一位点插入或丢失一个或几
4、个（非片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非3或或3的倍数的倍数碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生错位的一种突变。错位的一种突变。 如：如：CALRL367fs(46)突变突变CALR基因基因mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）：c.1179_1230del52bp蛋白水平：第蛋白水平：第367位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，在位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，在367位点起后的位点起后的46位氨基酸终止。位氨基酸终止。 癌基因或抑癌基因表达异常 如： WT1定量3、基因表达异常、基因表达异常二、白血病基因检测的临床意义
5、二、白血病基因检测的临床意义1、 辅助诊断2、 指导治疗3、 评估预后4、 微小病变残留检测三、白血病相关基因分类三、白血病相关基因分类BCR-ABLFLT3-ITDJAK2V617FC-KITPML-RARaNPM1RUNX1AML1-ETODNMT3ATET2ASXL1/ASXL2IDH1/IDH2SF3B1SRSF2U2AF1 Class 1 增增 殖殖Class 2 分分 化化Class 3 表观遗传表观遗传Class 4 剪切因子剪切因子四、白血病相关常见基因四、白血病相关常见基因AML CMLMPNALLCLLMDSAML相相 关关 基基 因因 异异 常常融合基因：融合基因：1、P
6、ML-RARa:95%AML-M3分为三型分为三型L型、型、S型、型、V型型PLZF-RARaNPM1-RARa2、AML1-ETO:40%AML-M2(主要为主要为M2b)3、CBF-MYH11：90%AML-M4Eo4、MLL-AF17MLL-AF6AML-M4/M5MLL-AF9AML相相 关关 基基 因因 异异 常常基因突变：基因突变：FLT3-ITDNPM1（A/B/D型）型）c-KitIDH1IDH2ASXL2NRASKRASP53DNMT3A基因定量分析：基因定量分析：WT1定量定量FLT3-ITD：AML-M3中发生频率较高中发生频率较高c-Kit： 50%AML1-ETO阳性
7、阳性AMLCBF-MYH11阳性阳性AMLASXL2：AML1-ETO阳性阳性AMLCML相相 关关 基基 因因 异异 常常BCR-ABL : 95%CML CML特异 marker 亚型： cDNA Protein b3a2、b2a2型 P210 e19a2型 P230 e1a2型 P190MPN相相 关关 基基 因因 异异 常常PV、ET、PMF的诊断的诊断BCR-ABL排除早期慢粒排除早期慢粒PV:JAK2V617FJKA2exon12ET：JAK2V617FMPLCALRPMF:JAK2V617FMPLCALRBCR-ABLJAK2V617FMPLCALRJAK2exon12MDS相相
8、 关关 基基 因因 异异 常常WT1定量定量DNMT3ATET2ASXL1SF3B1SRSF2RUNX1SF3B1：主要见于：主要见于50-70% 环形铁粒幼增多性贫血环形铁粒幼增多性贫血SRSF2 ：主要见于：主要见于CMMLALL相相 关关 基基 因因 异异 常常BCR-ABL:35%成人成人ALLTEL-AML1:儿童儿童ALL预后好预后好E2A-PBX1：预后不好：预后不好MLL-AF4：婴幼儿多见婴幼儿多见NOTCH1：预后好预后好FBXW7：预后不好预后不好PTENNRASKRASB-ALLT-ALLCLL相相 关关 基基 因因 异异 常常P53NOTCH1NOTCH1：见于见于B系或系或T系系CLL在在CLL中为预后不好指标中为预后不好指标五、检测方法介绍：五、检测方法介绍：1、RT-PCR2、PCR3、PCR-测序测序4、RQ-PCR六、结果报告单分析：六、结果报告单分析：Thank you !
