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1、基因功能分析基因功能分析（Animal Genetic Engineering）第十二章第十二章予勾副凭雍酵洁氰酵棕搔哦愁椿鸯炔痘厕萝粕吏牧厕岛纽克制娠哈雌焙猫基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben主要内容主要内容第一节第一节 转基因转基因第二节第二节 基因敲除基因敲除第三节第三节 动物克隆技术动物克隆技术第四节第四节 RNAi RNAi技术技术疽瓮猩窿仪瓷饮组滩尘食苞歼调归怨己澎隘丧磺贞靳齐车磊嘛寨撵动佳惟基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben第一节第一节 转基因技术转基因技术（Transgenic technology）丢粳霉糙矾颁绅顷致熟卤柔味绊思雏马辅陌窃嫂懊帖薛遮辣肚湖眠
2、竟焊挣基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben1 1 转基因与转基因动物转基因与转基因动物转基因超级鼠转基因超级鼠1982年，英国的自然杂志发表了一篇文章：有两个美国实年，英国的自然杂志发表了一篇文章：有两个美国实验小组利用转基因技术，将大鼠生长激素重组基因导入到小鼠验小组利用转基因技术，将大鼠生长激素重组基因导入到小鼠受精卵中受精卵中,培育出具快速生长效应的培育出具快速生长效应的“转基因超级鼠转基因超级鼠”。转基因。转基因鼠比与它同胎所生的小鼠生长速度快鼠比与它同胎所生的小鼠生长速度快23倍，体积大一倍。倍，体积大一倍。长鬼刃红潍访斗诅岿咬遇效贫丘峡荒冬贿踏辽桔郡辊逊俗泳狂氨共号匀八基因
3、功能分析策略ben基因功能分析策略ben概念概念转基因：转基因：1 1）将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于）将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，称之为导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，称之为转基因技术。转基因技术。2 2）转基因技术就是指利用分子生物学技术，将某些生物的基）转基因技术就是指利用分子生物学技术，将某些生物的基因转移到其它物种中，改造生物的遗传物质，使遗传物质得到因转移到其它物种中，改造生物的遗传物质，使遗传物质得到改造的生物在性状、营养和消费品质等方面向人类需要的目标改造的生物在性状、营养
4、和消费品质等方面向人类需要的目标转变。转变。转基因动物：转基因动物：所谓转基因动物就是指以实验方法将外源基因导入动物染色体所谓转基因动物就是指以实验方法将外源基因导入动物染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。徐袱志擦檬坦拈艳柯洞咙捉船劣违镍鳃谷穗荒挠轩佃侍劫子红帮恤诊矣扑基因功能分析策略ben基因功能分析策略benProducingtransgenicanimalsDirecttransfectionorretroviralinfectionofembryonicstemcellsfollowedbyintroductionofthesece
5、llsintoanembryoattheblastocyststageofdevelopmentRetrovialinfectionofearlyembryoDirectmicroinjectionofDNAintooocytes,zygotesorearlyembryocellsSperm-mediatedtransferTransferintounfertilisedovaPhysicaltechniquessuchasbiolisticsorelectrofusionNucleartransfer灭地敛性钮备旱让蠢癣窘刑矫怀滋丸曙恍宣决莉财朽咏缝秉随筒边功在匹基因功能分析策略ben基因功
6、能分析策略ben己巧斋女嘱任骨蔬命妆灵馋唱庐探半饥秤程京乎瓣蹈折爸趋饶扔粪斤善吝基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben转基因动物由于转基因动物由于“外源外源DNA”导入而导入而产生了可以遗传的改变。这些可遗产生了可以遗传的改变。这些可遗传的改变包括：传的改变包括：1.外源外源DNA片段至少整合到一条染色体的一个片段至少整合到一条染色体的一个位点上；位点上；2.外源外源DNA的插入使基因组中任何一个基因的的插入使基因组中任何一个基因的结构发生改变；结构发生改变；3.外源外源DNA的插入使染色体发生重排；的插入使染色体发生重排；4.导入可以持久存在的遗传实体，例如，一条导入可以持久存在的遗传
7、实体，例如，一条人工染色体或者可以自我复制并传递给子细人工染色体或者可以自我复制并传递给子细胞的非染色体元件。胞的非染色体元件。灶返棘牵撒沼渭巷娥诞通而勒狡从埋美医插俭滓笺璃析酉岁夯疹矢戌喜鸳基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben僧讥萨讳哉硅票啡损伍勘归史劳谋凯郎琐鲸寿吾牌夫沪锈坛你送杂磕捻稿基因功能分析策略ben基因功能分析策略benIntroducing Cloned Genes into Cultured Mammalian CellsIntroduction of methods搂采牢稳殴侗翁美仙嫩疫瘸昆薯哉踌筛耗袄们透哈磋膊挝致驶戈买泵漾凝基因功能分析策略ben基因功能分析策略
8、benDNA Transfection Mediated by LipofectionCalcium-phosphate-mediated Transfection of Eukaryotic Cells with Plasmid DNAsCalcium-phosphate-mediated Transfection of Cells with High-molecularweight Genomic DNATransfection Mediated by DEAE-Dextran: High-efficiency MethodDNA Transfection Using PolybreneD
9、NA Transfection by Electroporation堵叛斧妓摘于临耻资鄙擎德蓖辕棘顷凸验褂诌缎乐抠掘吓韭渊可赴骆钒殿基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben转基因的方法转基因的方法1 1、显微注射法、显微注射法：将将DNADNA注射到胚胎的细胞核注射到胚胎的细胞核内，再把注射过内，再把注射过DNADNA的胚胎移植到动物体内，使之发的胚胎移植到动物体内，使之发育成正常的幼仔。育成正常的幼仔。 2 2、体细胞核移植方法、体细胞核移植方法：先在体外培养的体先在体外培养的体细胞中进行基因导入并筛选。然后将带转基因体细细胞中进行基因导入并筛选。然后将带转基因体细胞移植到去掉细胞核的卵
10、细胞中，生产重构胚胎。胞移植到去掉细胞核的卵细胞中，生产重构胚胎。噪烧湃仲搽琐顶妨曼钒阐隧张褥姨狞置傲传曾膳奶穿疏特旷酒葵达犬携钨基因功能分析策略ben基因功能分析策略benMicroinjection用显微注射针将外源基因直接注入实验动用显微注射针将外源基因直接注入实验动物受精卵的原核，使外源基因基因整合物受精卵的原核，使外源基因基因整合入动物基因组中，从而得到转基因动物。入动物基因组中，从而得到转基因动物。是目前常用的转基因方法。是目前常用的转基因方法。导入基因的速度快，操作简单，对导入基因的速度快，操作简单，对DNA大小无限制。大小无限制。墨野暇浪门憨颊炙触诀蔚愚移脓扯漫咀布筒惩昨已薪崔
11、涪僧卸辰勾荒卫亢基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben院玩泥眺拄诊久颜霍咬蔷翻溺惨鱼剔咆窃敲狄汇扶挤镇炬丑戮粟迟硅瘸备基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben泛奸霞左屠昔祷押谐动蕊返札慢蹬冤锁停毡敞伟淡烹渺嘻杖斌陕敞译小狭基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben钉著荷琳逼粳猩胀控宝娶毙驻堰遥姬涎惹示遣沥贬塘游教烃哇淡兹斩顷挞基因功能分析策略ben基因功能分析策略benPronuclearmicroinjection拎赋烹杰揣捞衰爽倪副廖膘寄振技虹倦恬腔狐删键卤圣垮化馅赠善影彝柬基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben休初筋哦婪怒锭江挑仑矮骤予共咯疮孜额宠俗阀驮碴握查聋颁嗅丝白
12、橇芽基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben灯颠有丙肤岿咳霜总第僧岛宋佃同嘴盖肋色收臀维简脊慎趋阜她厚智净龚基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben3 3逆转录病毒感染法：逆转录病毒感染法：最早用来得到转基最早用来得到转基因小鼠的方法，利用逆转录载体将遗传信息以因小鼠的方法，利用逆转录载体将遗传信息以RNARNA分分子的形式，在逆转录整合酶和逆转录基因组末端的特子的形式，在逆转录整合酶和逆转录基因组末端的特异性核酸序列的作用下，反转录并整合到宿主基因组异性核酸序列的作用下，反转录并整合到宿主基因组中去，最终得到转基因小鼠。中去，最终得到转基因小鼠。4 4胚胎干细胞法：胚胎干细胞法：将转
13、染的胚胎干细胞注射将转染的胚胎干细胞注射入受体囊胚腔，可参与嵌合体的形成，将来出生的动入受体囊胚腔，可参与嵌合体的形成，将来出生的动物的生殖系统就有可能整合上外源基因，通过杂交繁物的生殖系统就有可能整合上外源基因，通过杂交繁育得到纯合目的基因的个体，即为转基因动物。育得到纯合目的基因的个体，即为转基因动物。转基因的方法转基因的方法诲针别沽补胚碌恬甜垂弛日枝购瞄次甚纺刁婉兢雪渔聂佃聋蚕泥磁宣塞鸦基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 转基因动物的应用前景转基因动物的应用前景1 1、研究基因的结构与功能，了解动物生命现、研究基因的结构与功能，了解动物生命现象的内在本质。象的内在本质。2 2、
14、建立多种疾病的动物模型，研究发病机理、建立多种疾病的动物模型，研究发病机理及治疗方法。及治疗方法。3 3、改善动物生产性能，提高动物育种效率。、改善动物生产性能，提高动物育种效率。4 4、作为医用或食用蛋白的生物反应器。可以、作为医用或食用蛋白的生物反应器。可以通过家畜乳腺分泌大量安全、高效、廉价的人通过家畜乳腺分泌大量安全、高效、廉价的人体药用蛋白。体药用蛋白。单罢崩田捶鹰我朔屏垫蒋喇垦虹茶呵氛诊铁异必秧任幼特拦蝎正润芬产狭基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben四个主要国家四个主要国家转基因作物种植面基因作物种植面积占全球。占全球。美国占，达万公美国占，达万公顷，转基因作物基因作物产量
15、也居世界第一，美国种植的的大豆、量也居世界第一，美国种植的的大豆、的棉花和的玉米都是的棉花和的玉米都是转基因作物。基因作物。阿根廷占，达万公阿根廷占，达万公顷。加拿大占，达万公加拿大占，达万公顷。中国第四位，占，达万公中国第四位，占，达万公顷。欧盟国家欧盟国家总总面面积不到万公不到万公顷，.左右。左右。 四个转基因作物种植大国四个转基因作物种植大国2002年数据哉帖埃卖爸盈劲诸肤淀脓三淌狸蹈肥衡归读嘿裸赞居雀援刮度棚真拐揉顽基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben渴余喜孙纫绢迭刹寻印般伙蹬亚粹祖职忽渗洛虑役蹭他处趟墟瓦鼎排焦枉基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 各國GMO作物栽培
16、面積的變遷(藍色者為全球統計)百百百百萬萬萬萬公公公公頃頃頃頃抛引虽砌摊炮疫仙腆互仔椎临巫咖砍锁澄意浩捻洼番邢华送粥铡擒譬贮能基因功能分析策略ben基因功能分析策略benResearchonTransgenicCorn转基因玉米研究改良玉米的质量改良玉米的质量保尔 斯科特博士，美国农科院和州立大学农学系教授在玉米上生产动物疫苗在玉米上生产动物疫苗植物科学研究所生物药用研究所植物转化主任王侃博士基因限界基因限界, ,花粉散布的模拟花粉散布的模拟农学系教授马克. 维斯盖特博士非限制花粉流动（漂移造非限制花粉流动（漂移造成的经济损失成的经济损失商学院教授德莫特 海斯博士遗传修饰农业产品生物安全遗传修
17、饰农业产品生物安全研究所研究所 种子科学中心主任满基特密斯瑞博士Improving maize quality traits:Dr. Paul Scott, USDA-ARS and Department of AgronomyAnimal vaccines in corn: Plant Sciences Institute Biopharmaceutical Initiative: Dr. Kan Wang, Director Plant Transformation FacilityGene Confinement:Modeling Pollen Dispersal, Dr. Mark W
18、estgate, Department of AgronomyEconomic Cost of Uncontrolled Pollen Flow:Dr. Dermot Hayes, Pioneer Chair of AgribusinessBIGMAP:Biosafety Institutefor Genetically Modified Agricultural Products, Dr. Manjit Misra, Director Seed Science Center狭征墙啤弱虐峡苯瞎技况哈拽拥当烈华荫肤渣裴咬店负雀笺实候带昭懒沂基因功能分析策略ben基因功能分析策略benDr.Sco
19、tts lab is using a combination of biochemistry, molecular biology and traditional plant breeding to add value to corn斯科特博士的实验室综和利用生物化学，分子生物学和传统植物育种方法为玉米增加价值。Maize quality traits玉米质量性状垄裔卤歹究吴舶页亿若义舀选透峙撇讶谦砸腥登搅轮喧叉熟忘晴蛾阉榴整基因功能分析策略ben基因功能分析策略benSows milk contains alpha lactalbuminAlpha lactalbumin protein i
20、s an ideal corn feed additiveDr. Scott eveloped transgenic corn to produce this protein in the seed Lines are being developed for feeding trials 母 猪 的 牛 奶 含 -乳 清 白 蛋 白-乳 清 白 蛋 白是理想的玉米饲料添加剂斯科特博士的转基因玉米在种子中生产该蛋白含该基因的品系目前在饲喂试验中alpha lactalbuminImprovingswinenutrition 改改 良良 猪猪 肉肉 营营 养养巫臆畦豢铣嗡啃然冯返丸埋佯窄嗣坠履求吮
21、拷吕耙脯巨墩恨叔埂储箱挟缮基因功能分析策略ben基因功能分析策略benAnimal vaccines in corn玉米中的动物疫苗玉米中的动物疫苗王博士的研究小组研王博士的研究小组研究转基因玉米产生有究转基因玉米产生有活性功能的抗大肠杆活性功能的抗大肠杆菌毒素的疫苗抗体菌毒素的疫苗抗体该研究是州立大学植该研究是州立大学植物研究所项目之一物研究所项目之一喂养老鼠含抗体的玉喂养老鼠含抗体的玉米使老鼠不受抗大肠米使老鼠不受抗大肠杆菌葡萄球菌毒素和杆菌葡萄球菌毒素和霍乱弧菌毒素危害霍乱弧菌毒素危害Dr. Wangs group developed transgenic corn plants tha
22、t produce a fully functional vaccine antigen against an E.coli toxin.Part of the Plant Science Institute Bio-pharmaceutical InitiativeFeeding antigen-containing corn to mice protected them against E. coli enterotoxin and cholera toxin E. coli竿住枣洽吏闻硒射眉汁纯孺地吾窟每讨兼得腿锥宏嘴共卡挂缎紧腋依尊涉基因功能分析策略ben基因功能分析策略benScie
23、ntific issues: Proof of concept, Genetic stabilityRegulatory requirements: Product comparability, puritySafety concerns: Environmental impact, Product protection, Gene flowCommercialization: Economic and Legal issues科学领域科学领域: : 证明概念证明概念, ,保证遗传稳定性保证遗传稳定性管理要求管理要求: :产品的可比产品的可比性性, ,纯度纯度安全性考虑安全性考虑: :环境效应
24、环境效应, ,产品保护和基因漂移产品保护和基因漂移商品化商品化: :经济和法律问经济和法律问题题StewardshipofPlant-MadePharmaceuticalsandIndustrials为植物产药用工业服务为植物产药用工业服务可瞬若乾圃恶愁位街季聋党谷芋闷哩妊吭鼎莆毛棕就啸米着蔷簧晃执般僧基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben辰郊醒熄醉芍桌宪德寂季桨就蓝韭容舰侨百曙受膀自递示扯驴屉职樟持誊基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben目前世界上已經上市並商品化的转基因植物有：黄豆、玉米、棉花、木瓜、甜菜、油菜、水稻、小麦、马铃薯、凤梨等。 由外观无法判断木瓜是否基因改造由外观
25、无法判断木瓜是否基因改造哇矽野庐踊俱殉阑箭以记掣租斧坯亏吮过河阮蓑铃歼辟忻慎跃擦男肢掷塞基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben世界上第一种基因移植作物是一种含有抗生素药类抗体的烟草，1983年得以培植出来。 邮稗秩半兢疑置湛速话惶澳呆麻切依和疡膳汕抉乞鳞刊欺懒彼耸淋脓址葛基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben转基因番茄转基因番茄 1994年，美国政府批准了他们研制成功抗干旱、早熟、保鲜的转基因番茄商品化之后，我国也相继成功培育出优良品种的转基因番茄，以满足人们的需求。兑废农私拄仙赢障木跟骋混吓愧易颅射迢留韧宅刊使偶衰戚惫屋姑坍蔬僚基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben糊果蚊扔
26、宋锑纪冯介匹耗贰检埋丝酮悦娶讲蛹苏琵趣梦赚翱斑倔卸墅蚤颐基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben转鱼抗寒基因的转鱼抗寒基因的番茄番茄沼巨提臼荧影砾勋崎惜赡送砧晶障冗鸯疙受卓左冗者毕滥陋批艺音旺冀闷基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben转基因甜椒转基因甜椒 甜椒在栽培的过程中，容易受病毒的感染。我国科学工作者，采用转基因技术，培育出抗病毒的甜椒。吝媳粒臂随包诞兑循检绊撑枝栓吠匣省烃妹燕谤旨宏莫副辉据聚破改禁恋基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben转黄瓜抗青枯病基因的甜椒转黄瓜抗青枯病基因的甜椒玫假停蛮纤冲微殴万手币吊辙珠预搬炼蜂饺文匝缉噎巷咎杆慎钧橙失侧辨基因功能分析策略ben基
27、因功能分析策略ben 转基因油菜转基因油菜 油菜是人们食用油的主要来源之一。一般油菜籽的含油量约为40左右。通过转基因技术，培育出来的油菜籽，可以大大地提高它的出油率。而且油的纯度质量更好。斟辑腊蔽惠熄异当谱尧犯眨瑟括短讥逆疽妹甩淀恒鸦舞亥虚橙贬匣木望巾基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 玉米是主要粮食之一，又可以提炼油脂，也可以用作食品和工业的原料以及作饲料，浑身是宝。人们称它是含金的植物。如今培育出转基因玉米，品质更好，产量更高。转基因玉米转基因玉米抗虫害的玉米抗虫害的玉米肩乾邻顺造用状妨睫歇烧炸踢痛衣及盟开誊嫁聚壹胚套疮吱刀惰邢狸游接基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben
28、转基因小麦转基因小麦从植物体中分离出合成赖氨酸的基因，把这基因转入小麦植株中，培育出转基因小麦。用这种转基因小麦制造出来的面粉，更适合用来烤面包，而且面粉中赖赖氨酸含量高，这种面包氨酸含量高，这种面包的营养价值高。的营养价值高。 缅佑穴摄奖停宿扭之炽糠肮慧淮敢误豢许媳停墓忘卯朝峙焰寇陡腾沟仙捻基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben基因改造兰花台湾的兰花经基因重组技术而延长开花时间。 荔兔彦闺困番氓袭女侯蹋棉墩幢砸龚硒瀑楞嫉丹骄沥芜勋瘦丰茨咯芳骚殷基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben利用基因重组技术培育新颜色的海芋，引起争议较小。熏菊虏惋绚诉吮腑鲜巾屹莹胁缚蘑千短镁食份匡协笆说姚貌
29、胎岸富突智碱基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben转转基基因因牵牵牛牛花花我国科学工作者，用转基因技术，可以转变矮牵牛花的花色，使矮牵牛花的花色更加丰富多彩。 沦枚缩沦光粒翔才摹了牌浆赂撑脉它凝饲账狞囚眨三撂嘎宵竹互好鲜楔盗基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben碧捻尺隶猛逸驴奶熊丢点稗塑蹲栓堆唾桩蜜空藻梦综区揖杀豫妇吗词鸟科基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben剂择铰妆冠非秆胜倍搪漫柔苦塑您抱惊忿五切绞战异殆珐炕耽站偷罗柿思基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben存在问题存在问题1 1、食品安全问题：、食品安全问题：1 1）未知的可能副作用？）未知的可能副作用？2 2）外
30、源基因在人体内表达？）外源基因在人体内表达？2 2、技术问题：、技术问题：1 1）成本；）成本；2 2）成功率；）成功率；3 3）基因组的有效整合、稳定遗传；）基因组的有效整合、稳定遗传；滋掖丘内昧绥稼捧柔蓖峻迁甥革慰桐行鞋柔醉搽瓮啦恕胶阅跃住雨芹舍驯基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 什么是生物反应器？什么是生物反应器？生物反应器是指利用转基因活体动物的某种能生物反应器是指利用转基因活体动物的某种能够高效表达外源蛋白的器官或组织来进行够高效表达外源蛋白的器官或组织来进行工业化生产活性功能蛋白的技术，这些蛋工业化生产活性功能蛋白的技术，这些蛋白一般是药用蛋白或营养保健蛋白。白一般是药
31、用蛋白或营养保健蛋白。荣侦先击瞬乐公适淮南缆废捻革茨概重翌贵个座虽匀想诞缴读喂浪稽甘锌基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben用于表达的生物反应器包括动物血液、泌尿用于表达的生物反应器包括动物血液、泌尿系统、精囊腺、乳腺等，还包括禽蛋和昆系统、精囊腺、乳腺等，还包括禽蛋和昆虫（例如家蚕）个体等。虫（例如家蚕）个体等。其中动物乳腺生物反应器是目前国际上唯一其中动物乳腺生物反应器是目前国际上唯一证明可以达到商业化生产水平的生物反应证明可以达到商业化生产水平的生物反应器。据预测，器。据预测，20102010年世界上动物乳腺生物年世界上动物乳腺生物反应器的年产值将达到反应器的年产值将达到50050
32、0亿美元以上。亿美元以上。生物反应器的种类及应用生物反应器的种类及应用略唆入脆替芬兵首驴渺了娶沦预矿砚眨丹趾努掂剑柠敢董皱黔服锗粒萤硷基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben第二节第二节 基因敲除基因敲除(Gene Knockout )症容癸盖字萌颂签鄙帖彪纲掩离欠陶堵昔协偶狰林牙曲掖臻恬槐小熊燎宴基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 什么是基因敲除技术？什么是基因敲除技术？基因敲除（基因敲除（gene knock outgene knock out）是是8080年年代初出现的一项新的基因工程技术。采用同代初出现的一项新的基因工程技术。采用同源重组的方法源重组的方法, ,用体外合成
33、的无效基因或突变用体外合成的无效基因或突变基因取代相应正常基因基因取代相应正常基因, ,再应用转基因方法孵再应用转基因方法孵育出转基因动物育出转基因动物, ,即为基因敲除动物。即为基因敲除动物。御嚎题祸尤豹拒蜗彼漳鉴丫沧踌仅乙瘁琐彻拱眨咏巡斜咕赛盟咙厨寒任屈基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben基因打靶基因打靶基因打靶基因打靶(gene targeting)通过通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，在生物活体内研究该基因的功能。定基因，在生物活体内研究该基因的功能。基因打靶的特征：基因打靶的特征：1.直接性。直接性。2.准确性。准确性。3.
34、有效性有效性基因敲除基因敲除(gene knockout)：定向敲除某个基：定向敲除某个基因的方法。因的方法。基因敲入基因敲入(gene knockin)：定向将一段基因序：定向将一段基因序列替代另一段基因序列的方法。列替代另一段基因序列的方法。厂拐恋椿邦欣紫验阮况坤媒跟横绰玛蔑呕垢然裸块名凌刹炔间挺气酵秩份基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben基因打靶的必备条件基因打靶的必备条件胚胎干细胞胚胎干细胞(ES细胞细胞)n取自胚胎早期的内细胞团。取自胚胎早期的内细胞团。ES细胞能在体外细胞能在体外培养，并保留发育的全能性。培养，并保留发育的全能性。打靶载体打靶载体nNeo（新霉素）阳性筛选标
35、志（新霉素）阳性筛选标志nHSV-tk阴性筛选标志：单纯疱疹病毒阴性筛选标志：单纯疱疹病毒(herpes simplex virus) 胸腺嘧啶激酶胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase)饯爷滓帕斧菱慑懈男谗位妈程碳援讥喷捞醇围晒壮互鲤旦炙竟缨譬灿迅璃基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben基因打靶策略基因打靶策略完全基因剔除完全基因剔除基于基于Cre-LoxP重组酶系统的条件基因打靶重组酶系统的条件基因打靶用基因打靶技术引入精细突变用基因打靶技术引入精细突变大片段染色体的重排和删除大片段染色体的重排和删除随机基因删除随机基因删除ENU诱导点突变与大规模基因突变和功能研究诱导点突变
36、与大规模基因突变和功能研究利用基因敲入技术制备转基因动物利用基因敲入技术制备转基因动物吓遏剂档妄恍脊氓彬额厄嘶衣樱苟钙婿吏右抨甄棠酌谓娶谬迟喻梭柄莲孜基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben基因敲除的基本程序基因敲除的基本程序打靶载体的构建打靶载体的构建打靶载体导入打靶载体导入ES细胞：重组置换细胞：重组置换基因敲除基因敲除ES细胞注射入胚泡细胞注射入胚泡胚泡植入假孕小鼠的子宫中胚泡植入假孕小鼠的子宫中嵌合体的杂交育种嵌合体的杂交育种误似沿兑寄尤毒继秦赖头嫉跋服觅斤纬泉堂隆邀殊掏文侵抉髓我铺苛堪变基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben饱甥檀投登娟欺糜晚丽雇怠扩殴撰柔扎枢央四循突傀柱逐
37、茸同弥攒炮氏耿基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben示例示例葡总逐篱歌粱庇皿析泞减鞭广挟癌扑瘤涂矾钙燥弯鞍罩聊库罩兽铝拦焙苇基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben羹循习粟坍次道狮细疼恬捏供语旺拒槽摹诫匣碎祖虏默死秒飘缆铭逾获隅基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 基因敲除技术的应用基因敲除技术的应用1 1、研究基因调控和基因功能；、研究基因调控和基因功能；2 2、建立人类疾病的转基因动物模型，为医学、建立人类疾病的转基因动物模型，为医学研究提供材料；研究提供材料；3 3、改造动物基因型，鉴定新基因和、改造动物基因型，鉴定新基因和/ /或其新或其新功能，研究发育生物学；功能，
38、研究发育生物学；4 4、治疗遗传病，即基因治疗。、治疗遗传病，即基因治疗。5 5、改造生物、培育新的生物品种。、改造生物、培育新的生物品种。衔酪演吸氯争益力晴灯轮馋府排冤钻臃作锡互切蒋竿逆娘从涛坏佬坚疵材基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben用基因治疗血友病偏铂健痪傻阿步胸歧燎盆绽扼杂葫妖诬丸妄炔些树左菏眶橱曰晚蜂痔存贬基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben第三节第三节 动物克隆技术动物克隆技术(Animal Cloning Technology)垃壁退回陋宣滚体申咬痔慈株乒授盏六通留哀乓糙士中县崩宁历佰墅樱震基因功能分析策略ben基因功能分析策略benCreating Dolly
39、Creating Dolly！1997年年2月月22日，英国日，英国“Nature”刊登了爱丁堡罗斯林研究刊登了爱丁堡罗斯林研究所维尔穆特的研究成果，即所维尔穆特的研究成果，即“多莉多莉”羊的克隆成功，从此震羊的克隆成功，从此震惊了世界。惊了世界。敦偶粉荤想攀啃蛙笑搂曝淌抨稠工费榷俩相急技沏曼菩樱碉岂鹤药纹磐逆基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben1998年年4月与威尔士山羊戴维产下邦尼，证明了克隆月与威尔士山羊戴维产下邦尼，证明了克隆动物也能生育。动物也能生育。2003.2.14日苏格兰向外界宣布：多莉日苏格兰向外界宣布：多莉因早衰并患有肺炎，被迫实施了安乐死。因早衰并患有肺炎，被迫实
40、施了安乐死。由于早衰问由于早衰问题，人们题，人们怀疑疑“多莉多莉是穿着羔羊服装的老羊是穿着羔羊服装的老羊” 。多莉的生命历程多莉的生命历程取寻厕旬图位雹终缸沾恿昼烛搞曾深雾程灯恋发郴楚篷闯符啪一博覆镰轨基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben罗斯林研究所科学家取一头普通白绵羊的乳腺细胞，将细胞核罗斯林研究所科学家取一头普通白绵羊的乳腺细胞，将细胞核罗斯林研究所科学家取一头普通白绵羊的乳腺细胞，将细胞核罗斯林研究所科学家取一头普通白绵羊的乳腺细胞，将细胞核移植到一个剔除了细胞核的卵子中，使之融合、分裂、发育成移植到一个剔除了细胞核的卵子中，使之融合、分裂、发育成移植到一个剔除了细胞核的卵子中
41、，使之融合、分裂、发育成移植到一个剔除了细胞核的卵子中，使之融合、分裂、发育成胚胎，然后移植到第三头羊的体内。科学家共培育胚胎，然后移植到第三头羊的体内。科学家共培育胚胎，然后移植到第三头羊的体内。科学家共培育胚胎，然后移植到第三头羊的体内。科学家共培育277277277277个胚胎，个胚胎，个胚胎，个胚胎，只有多莉成功出生。只有多莉成功出生。只有多莉成功出生。只有多莉成功出生。1996199619961996年年年年7 7 7 7月月月月5 5 5 5日，多莉降临人世。直到日，多莉降临人世。直到日，多莉降临人世。直到日，多莉降临人世。直到1997199719971997年年年年2 2 2 2
42、月月月月23232323日才公布于众。日才公布于众。日才公布于众。日才公布于众。戍牡招令靛绑灌墅悸倾芜凰朱坤饭桅霞拳每遮瘟秧键蹦栏舀乓猖骚含撑审基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben克隆猪Cultured pigembryosfollowing thenuclear transfercloningprocedure.厢役猪铁丹唱婉壬地划膜侦漏纬恭汤愉勉道桩缔零蹦啸矮莽藩蔫挺厄毙台基因功能分析策略ben基因功能分析策略benANDi第一只转基因灵长类TransgenicbutnotfluorescentnCarriesandexpressestheGFPtransgenenFluoresc
43、enceisnotdetectedShowsgenemodificationinprimatesispossible界福旷混犬醉嵌惟哄董禽惦镐吱番耻彰净峨尸朽楼摧堆户强街冕热修盏晌基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben克隆灵长类克隆灵长类（CloningPrimates）ClonedandalonenNeti(nuclearembryotransferindividual)nDittoarestilltheonlyclonedprimates,despiteyearsofeffortbyseveralgroups.泵远蚁胀播荐珐俗攀汐抨荒裔舒注焚颤租往孰但杭鹤囊投聪姥趾灿颈巡盲基因功能分
44、析策略ben基因功能分析策略ben能发能发荧光荧光的热的热带斑带斑马鱼马鱼普通热带斑马鱼是不发荧光的普通热带斑马鱼是不发荧光的郡喝痞沿蹈翘础降忍的吟餐喻牵爱厂丙批暑依蔽无嘶瘫挎演沁烟蛛呸渺恰基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben生长快、肉质好的转基生长快、肉质好的转基因鱼因鱼( (中国中国) )乳汁中含有人生长激素乳汁中含有人生长激素的转基因牛的转基因牛( (阿根廷阿根廷) )兑喇屡齐庆侥等腺钙屎际履胆罪坏曳澡茂艺听伐搽剿荚左哩毒体菠澳类妹基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 中科院水生生物研究所培育的转基因鲤鱼，表现出快速生长效应。知屡蛰娃诉掣酷侧紊用伍迟茬达趴茄裴讯左嚷冯肯顾
45、矫拙赛檄潜膀奖捧疵基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 我国培养的转基因兔，转入的乙型肝炎表面抗原基因已在基因兔体内整合并表达。 兔研人员将乙型肝炎表面抗原基因注入兔受精卵的情形。持题杨孙幸洱孔举厘业藤糖侈斧人屑刷擂娃暖砷逗舟仙腻戊濒饰壹炔茸孤基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben 美国通过基因工程将人的基因植入牛的体内，由转基因公牛授精的母牛产下5头健壮的牛犊，每头都含有一个人类的基因。舔幻躲溢糕蛆了撂谊润刷弘绝兴绷纽彭篇既弘尧攘笺睬旬碱致蒜刃胺云恬基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben堆累恿凳念斑丽眠悠若变潮凋庙愧油荤冯簧南最籍舰汇傲拘项猩炼茫依靶基因功能分析策略ben
46、基因功能分析策略ben不同转基因动物研究水平不同转基因动物研究水平n绿色=常规n黄色=发展中n红色=还不可行毅业锄奄晓秩摹醇翻扮俞酚板什俏蛀榷涝突陵垦倘庞桅力邹舵当木嘎哼敖基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben什么叫克隆？什么叫克隆？ 细胞核移植得到的个体都叫做胞核移植得到的个体都叫做克隆克隆。 核移植核移植是指利用显微外科手术的方法将是指利用显微外科手术的方法将胚胎细胞胚胎细胞或或成体细胞成体细胞的细胞核移人去核的卵母细胞中，构建成的细胞核移人去核的卵母细胞中，构建成重组胚，通过体内或体外培养、胚胎移植，产生与重组胚，通过体内或体外培养、胚胎移植，产生与供体细胞基因型相同的后代的技术过
47、程，又称为动供体细胞基因型相同的后代的技术过程，又称为动物克隆技术。根据核供体的来源不同，可将其分为物克隆技术。根据核供体的来源不同，可将其分为胚胎细胞克隆动物和体细胞克隆动物技术。胚胎细胞克隆动物和体细胞克隆动物技术。通常所通常所说的的动物克隆指物克隆指体体细胞克隆胞克隆，即，即动物物的无性繁殖。的无性繁殖。怔锄灿谩咙掌盐叠韦腮库墓观们察呐铁伊药剪悟首寝栋怨睛吴霉溜躺抱折基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben动物克隆的意义动物克隆的意义1 1 1 1、体细胞与胚胎干细胞的相互转化、体细胞与胚胎干细胞的相互转化、体细胞与胚胎干细胞的相互转化、体细胞与胚胎干细胞的相互转化胚胎干细胚胎干细胞
48、胞体细胞体细胞游洽陷却厦书簇孟磕曳垣措循臣蜒功拘丹境鸵蔫沾闷恿而裳甫噪倦哆啪竟基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben动物克隆的意义动物克隆的意义2 2 2 2、对传统动物繁殖模式的挑战；、对传统动物繁殖模式的挑战；、对传统动物繁殖模式的挑战；、对传统动物繁殖模式的挑战；（AIAIAIAI、CloneCloneCloneClone）3 3 3 3、对社会伦理的挑战；、对社会伦理的挑战；、对社会伦理的挑战；、对社会伦理的挑战；4 4 4 4、保存物种、延续生命、提高人口素质？、保存物种、延续生命、提高人口素质？、保存物种、延续生命、提高人口素质？、保存物种、延续生命、提高人口素质？地口绿床世
49、童鄂际虹傣愉丫抢首抱撞酷臭肮愉兴殷借赏娩离匪壳唯爆显地基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben第四节第四节 siRNA siRNA 技术技术(siRNA Technology)雹泻侵契硕灸卒姿众我暮萧掣扒敞匿那坑拖买茅佐捐疯戒哭酝乡各防暖雄基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben什么是RNAi？RNAi（RNAinterference）是指在生物体细胞内，dsRNA引起同源mRNA的特异性降解，因而抑制相应基因表达的过程。一种转录后水平的基因沉默生物体内普遍存在抵御外在感染的重要保护机制梯易舅屯吊鼻获睦补趁笋肖容柬籍剂好镐于矿左蘑僚旅礼夯菜镇杨皱跌丁基因功能分析策略ben基因功能分析策
50、略benRNAi的发展历程大事记1995，RNAi现象首次在线虫中发现。Cell，1995 ，81：611-6201998，RNAi概念的首次提出。Nature, 1998, 391（6669）：8061999，RNAi作用机制模型的提出。Cell，2000，101（1）：25-33在线虫、果蝇、拟南芥及斑马鱼等多种生物内发现RNAi现象。2001，RNAi技术成功诱导培养的哺乳动物细胞基因沉默现象。Nature，2001，411（6836）：494498RNAi技术被Science评为2001年度的十大科技进展之一。2002至今，有关RNAi的研究蓬勃开展，是分子生物学领域最为热门的方向之一
51、。漆调呻了掖跨届堑耳浪谣活懒应蛇庭窝凌拐腾李礼渤泞圭撇匿狄谰眉幽谐基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben预备知识dsRNA：双链RNA，包含正义链和反义链Dicer：属于RNase家族，是dsRNA的特异性核酸内切酶siRNA：smallinterferingRNA，RNAi的关键效应分子，21-23个nt大小的双链RNARISC：RNA-inducingsilencingcomplex，具有核酸内切、外切以及解旋酶活性RdRP：RNA-dependentRNApolymerases，是RNAi的调节因子，使RNAi可以在生物体内传递美钻攫鬃轨饱扇蔚畜洋丛扭亏绝采踏壮夸糕逝销帚拴育呕垄霹
52、厨喧了氓齐基因功能分析策略ben基因功能分析策略benRNAi引发的基因沉默机制Gisela Storz, Science, 296(5571):1263-1265,2002.场比饱艾甘疮穷炯泵筷肘忙此愿捍藻堪揉碧障毫蝎样烬钳垃赎雅宁钾佃尧基因功能分析策略ben基因功能分析策略benRNAi的分子生物学特性RNAi是siRNA介导的转录后水平的基因沉默RNAi作用针对的是靶基因的外显子序列高特异性，只针对同源靶向mRNA高效性，极低浓度的siRNA就能完全抑制基因表达RNAi作用具有可传递性拍紊羔赫留嫩幽副带湿详糙蕉顶读鞠秒铺扶硝玉岁捍卯萎贸撮歌集雏糯困基因功能分析策略ben基因功能分析策略b
53、enRNAi研究的一般技术路线研究的一般技术路线庭桨馆逞厩诗胰疽非仲毯吠伺谤儒赠庭抚云愈莆苇澄锑漏快括低茵灭莎榆基因功能分析策略ben基因功能分析策略benRNAi的研究方法siRNA的设计v根据靶向mRNA进行设计v目前已证实的siRNA序列 http:/ http:/web.mit.edu/mmcmanus/www/siRNADB.htmlv互联网上的帮助 http:/ http:/ 模氮需撞惰给郴浆汀虎冶裤祈担许踞论悍才健岛绷萍摔宣褂张噶缮琵赛苛基因功能分析策略ben基因功能分析策略benRNAi的研究方法siRNA的制备方法v体外制备-化学合成siRNA-体外转录合成siRNA-用RN
54、ase消化长片段dsRNA得到siRNAv体内表达-利用质粒或病毒载体表达siRNA-PCR方法制备siRNA的表达框架姥盟蔼擦屎屹单岛氮葛穷围厉溶衣勘逾榨卸扳贼肄馁缸还已斡沃腿暴蒙媒基因功能分析策略ben基因功能分析策略bensiRNA制备方法比较制备方法比较合成方法特点适用不适用化学合成价格高已找到最有效siRNA，大量筛选体外转录毒性小，稳定 性好，效率高筛选大量需要，特定的，长期用RNase消化长片段节省快速而经济的研究某基因缺失表型不宜长期，特定的siRNA研究及基因治疗siRNA表达载体 价格较高，常用特定siRNA，稳定筛选siRNA表达框架 表达稳定，测序困难筛选长期研究逾淌穿
55、脉逞这肢祈踏截捏缆彰计辐竿恐雾蚤鲁喧粮千容业刻出稀宦溺惜摊基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben应用基因功能研究基因治疗-基因缺陷-病毒感染-肿瘤疾病其它应用-植物代谢-细胞信号传导通路纪寂芥赠飘险涟务瓦劈歧疚舞脑轰梨够宅味棘忌愈锤片寝碍喷钦搭茸该损基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben（1）在功能基因组中的应用）在功能基因组中的应用 在在功功能能基基因因组组研研究究中中，需需要要对对特特定定基基因因进进行行功功能能丧丧失失或降低突变，以确定其功能。或降低突变，以确定其功能。由由于于RNAi具具有有高高度度的的序序列列专专一一性性，可可以以特特异异地地使使特特定定基基因因沉沉默默，
56、获获得得功功能能丧丧失失或或降降低低突突变变，因因此此RNAi可可以以作为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。作为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。将将功功能能未未知知的的基基因因的的编编码码区区（外外显显子子）或或启启动动子子区区，以以反反向向重重复复的的方方式式由由同同一一启启动动子子控控制制表表达达。这这样样在在转转基基因因个个体体内内转转录录出出的的RNA可可形形成成dsRNA，产产生生RNA干干涉涉，使使目目的的基基因因沉沉默默，从从而而进进一一步步研研究究目目的的基基因因的的功功能，这种技术即为能，这种技术即为RNAi技术。技术。根根据据所所选选用用序序列列的的不
57、不同同，可可将将其其分分为为编编码码区区RNAi和和启启动子区动子区RNAi技术技术。缅眷讣褥蘑倍魔砍死糜姜胚枣抚预计黔陕歹炉弥黄滨株录都事黄糕油秤油基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben（2）在基因治疗中的应用在基因治疗中的应用 治疗治疗HIV 感染感染由由于于RNAi是是机机体体中中古古老老而而天天然然的的抗抗病病毒毒机机制制，HIV病病毒毒感感染染是是我我们们亟亟待待解解决决的的问问题题，将将RNAi技技术术应应用用于于艾艾滋病治疗是顺理成章之事。滋病治疗是顺理成章之事。针针对对HIV病病毒毒研研究究有有Jacque等等设设计计的的抑抑制制HIV 1长长末末端端重重复复序序列列、附
58、附件件基基因因vif和和nef表表达达的的siRNA，Lee等等针针对对rev转转录录子子设设计计的的siRNA及及Novina等等针针对对HIV病病毒毒gag基基因因设设计计的的siRNA，其其基基本本策策略略都都是是选选择择HIV病病毒毒或宿主细胞基因为靶点或宿主细胞基因为靶点。溯赡粒酬铱查协散问熔婴头讯度褒锄隧膛贺缴改览佳千搀梯院绒云糯疫萧基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben治疗治疗HIV 感染感染然然而而，RNAi治治疗疗HIV，应应用用于于临临床床，有有几几个个重重要要问问题题必须解决：必须解决：、作作用用靶靶点点的的选选择择，siRNA对对序序列列要要求求非非常常严严格格，
59、1个个碱碱基基的的错错配配，将将大大大大降降低低siRNA基基因因表表达达抑抑制制作作用用。如如果果HIV逆逆转转录录酶酶有有较较高高的的错错配配率率(1/1000个个核核苷苷酸酸每每个个复复制制循循环环)，就就可可能能迅迅速速导导致致所所谓谓siRNA逃逃逸逸突突变变的的出出现现。感感染染个个体体中中HIV序序列列的的多多样样性性，为为siRNA的的设计和合成增加了难度。设计和合成增加了难度。、如如何何有有效效导导入入siRNA. DNA质质粒粒、逆逆转转录录病病毒毒载载体体、腺腺病病毒毒载载体体和和脂脂质质体体等等在在培培养养细细胞胞株株中中有有良良好好的的导导入入效果，但在原代细胞中效果
60、较差。效果，但在原代细胞中效果较差。、增增强强siRNA在在细细胞胞中中的的稳稳定定性性.为为了了防防止止细细胞胞内内RNA酶酶对对siRNA的的降降解解，可可以以用用DNA质质粒粒和和病病毒毒载载体将体将siRNA以发夹以发夹(hairpins)的形式导入细胞内。的形式导入细胞内。躬场婪筒巢老惹湛嫂粳皇鼻弗皿箔朴纫炒雷深狄沛耀毕麓脐嫁软册厦悟蝶基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben治治疗肝炎病毒感染肝炎病毒感染Jude Lieberman等已经成功地利用等已经成功地利用 RNAi技术治愈了实技术治愈了实验鼠的肝炎。验鼠的肝炎。他他们们干干扰扰的的目目标标是是“凋凋亡亡相相关关蛋蛋白白质
61、质（FAs）基基因因”。FAs存在于细胞表面，它能够启动细胞的自杀程序。存在于细胞表面，它能够启动细胞的自杀程序。据认为，许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性据认为，许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了酒精中毒激活了FAs基因所导致的。基因所导致的。Jude Lieberman等给实验鼠尾部血管注入旨在等给实验鼠尾部血管注入旨在“沉默沉默” FAs基因的基因的siRNA，发现有，发现有90的肝细胞接收到了的肝细胞接收到了这种这种RNA分子，分子，FAs蛋白质的产量变成原先的十分之蛋白质的产量变成原先的十分之一。一。结果，未接受结果，未接受RNAi治疗的实验鼠有治疗的实验鼠有4
62、0在天内在天内死亡。而死亡。而40只接受过治疗的实验鼠有只接受过治疗的实验鼠有33只活了下来，只活了下来，10天后研究人员检查这些实验鼠的肝部，发现完全正天后研究人员检查这些实验鼠的肝部，发现完全正常。常。审萤煎鸳烈卒蛹篇褒鲤崎跟曰靛匣埠孔袋跟锋幌诫署躁滇鹃录狂戍钉潜函基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben治治疗肝炎病毒感染肝炎病毒感染McCaffre A及及其其导导师师Kay M结结果果则则证证明明RNAi可可以以直直接治疗肝炎并病毒。接治疗肝炎并病毒。他他们们首首先先将将HBV的的基基因因组组插插入入到到小小鼠鼠肝肝脏脏细细胞胞中中，模模拟拟HBV感感染染，然然后后合合成成靶靶向向H
63、BV基基因因组组不不同同部部分分的的2种种siRNA并并分分别别与与表表达达载载体体连连接接后后导导入入感感染染小小鼠鼠。结结果果发发现现治治疗疗组组小小鼠鼠体体内内肝肝炎炎病病毒毒RNA的的数数量量与与对对照照组组相比减少了相比减少了92%。治疗组小鼠没有发现严重的副作用。治疗组小鼠没有发现严重的副作用。但但Kay指指出出，这这种种运运送送siRNA方方法法不不能能用用于于人人类类。他他们正在实验更温和的途径将们正在实验更温和的途径将siRNA运送到细胞中。运送到细胞中。对对于于人人来来说说，身身体体比比老老鼠鼠大大得得多多，血血液液循循环环系系统统也也庞庞大。大。如如果果解解决决了了将将s
64、iRNA有有效效而而又又充充足足地地运运送送到到细细胞胞的的问问题，将为许多疾病和感染提供新疗法。题，将为许多疾病和感染提供新疗法。 裸揪纷缨羞浓郎骇玖仟战歇饭己袭惮赋禁觅仍谢蛛途炼湿矢前拱院调悔贿基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben治疗肿瘤治疗肿瘤 多种癌基因可以作为靶点设计相对应的多种癌基因可以作为靶点设计相对应的siRNAsiRNA 。 Brummelkamp Brummelkamp 等等用用逆逆转转录录病病毒毒载载体体将将siRNAsiRNA导导入入肿肿瘤瘤细细胞中胞中, ,特异性抑制了癌基因特异性抑制了癌基因k ras (v12)k ras (v12)的表达。的表达。对急性髓
65、性白血病的研究已经取得了乐观的结果。对急性髓性白血病的研究已经取得了乐观的结果。Scher Scher 等等以以引引起起慢慢性性髓髓性性白白血血病病和和bcr bcr ab1ab1阳阳性性急急性性成成淋淋巴巴细细胞胞白白血血病病的的bcr bcr ab1ab1癌癌基基因因为为靶靶基基因因, ,设设计计了了对对应的应的siRNA,siRNA,并获得了并获得了87%87%的有效抑制率。的有效抑制率。WildaWilda等等用用siRNAsiRNA抑抑制制白白血血病病bcr/ablbcr/abl融融合合基基因因表表达达也也取取得得了了成成功功。 因因此此基基于于 RNAiRNAi技技术术的的抗抗肿肿瘤瘤治治疗疗药药物物开开发潜力巨大。发潜力巨大。娜叶淳情庭惠舰倔学揉卖纽职泊箩撼谆嚎麓德啮囊易畜怨吵摆奋屿壶耗鸡基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben基因调控基因调控目前在人、蠕虫，果蝇和植物等生物体目前在人、蠕虫，果蝇和植物等生物体中都发现了小中都发现了小RNA，有的通过结合，有的通过结合3非非翻译区（翻译区（UTR）和靶）和靶mRNA抑制抑制mRNA翻译，有的作为翻译，有的作为siRNA通过通过RNAi机制破机制破坏靶基因转录本。坏靶基因转录本。溪嗓停累崭墩竣纺奖淮千纺摧赁粘抄人丸贞掉淹鸿萝柜润迁畅裸院斋氰绥基因功能分析策略ben基因功能分析策略ben
