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1、ceRNA机制与研究方案介绍目录2ceRNA机制的生物学功能RNA转录本通过与编码RNA竞争性的结合microRNA，从而稀释掉细胞内游离microRNA的浓度，降低microRNA对编码RNA的抑制，进而提高目的基因的表达量6ceRNA的种类7ceRNA部分研究结果8ceRNA的国自然面上项目申请状况9ceRNA的课题申请状况10ceRNA的方案设计p ceRNA关系对的获取及基本qPCR分析；p ceRNA关系对中各成分与疾病相关性验证；p ceRNA关系对中的竞争性关系的验证；11ceRNA关系对的获取12ceRNA的验证试验（LncRNA为例）13实例分享一：p LncRNA pagb
2、c对miRNA的海绵调控作用促进胆囊肿瘤发生Wu X, Wang F, Li H, et al. LncRNAPAGBC acts as a microRNA sponge and promotes gallbladder tumorigenesisJ. Embo Reports, 2017.（IF 8.568）高通量高通量测序序+qPCR验证+LncRNA功能功能验证14文献一技术路线15目的LncRNA的确定p 高通量测序pLncRNA+miRNA测序：9对胆囊癌与癌旁组织p选取5条LncRNA在26对癌与癌旁组织进行qPCR验证p 构建lncRNA-PAGBC-mRNA的基因共表达模型
3、16目的LncRNA的确定验证LncRNA-PAGBC在大样本中的表达p在60个癌与癌旁组织中进行lncRNA-PAGBC表达量的统计分析，证明lncRNA-PAGBC与癌症的相关性17目的LncRNA的确定对77个病例进行关于lncRNA-PAGBC的生存分析对lncRNA-PAGBC进行两个细胞系中进行亚细胞定位18目的LncRNA的确定p在胆囊癌细胞系（GBC、NOZ）中进行lncRNA PAGBC 沉默，分析细胞增殖及裸鼠成瘤19目的LncRNA的确定p在胆囊癌细胞系中进行lncRNA PAGBC 过表达，分析癌细胞的迁移、侵袭和成瘤能力20LncRNAPAGBC的与miRNA关系对确
4、定p整合LncRNA与miRNA数据，预测出PAGBC的6条靶miRNAp选用双荧光素酶报告系统进行关系对验证（293T细胞、NOZ细胞） 21LncRNAPAGBC的靶基因确定p结合miR-133b、miR-511靶基因预测以及篇首的高通量数据，推测出靶基因SOX4 和PIK3R3p癌细胞中分别转入LncRNAPAGBC的突变体（分别针对miR-133b、miR-511结合位点）后，进行靶基因表达检测 22LncRNAPAGBC的目的基因确定癌细胞中分别转入LncRNAPAGBC的突变体、过表达+miRNA inhibitor、miRNA mimic，进行靶基因表达检测23结论1.通过高通量
5、测序发现与胆囊癌相关的特定LncRNA，经过在病例中的检测初步筛选出目的LncRNA；2.沉默、过表达LncRNA在体内及体外的功能试验，验证出LncRNAPAGBC与胆囊癌细胞的增殖有关系；3.通过生信分析从LncRNAPAGBC预测出6个靶miRNA中，通过体内、体外试验确定出其靶标miR-133b、miR-511；4.LncRNAPAGBC通过竞争性的与miR-133b、miR-511结合，促进SOX4 和PIK3R3表达升高，进而活化了AKT/mTOR通路；24plncRNA HOTAIR在肾癌细胞中通过miR-217调节HIF-1/ Axl信号途径p高通量高通量测序序+qPCR验证+
6、LncRNA功能功能验证Quan H, Ou L, Wei Z, et al. LncRNA HOTAIR regulates HIF-1/AXL signaling through inhibition of miR-217 in renal cell carcinomaJ. Cell Death & Disease, 2017, 8(5):e2772.（IF 5.965）实例分享二：25研究路线26p皮肤黑色素瘤中的竞争性内源RNA调控分子机制p高通量高通量测序序+qPCR验证+circRNA功能功能验证Xu S, Jing S, Sheng Y, et al. Integrative a
7、nalysis of competing endogenous RNA network focusing on long noncoding RNA associated with progression of cutaneous melanomaJ. Cancer Medicine, 2018(8 Suppl). （IF 3.362）实例分享三：27方案设计测序+qPCR：15W；IF：4分左右；功能试验：15-25W；IF：3-5分左右；测序+qPCR+功能试验：35-40W；IF：6-8分281.Salmena L, Poliseno L, Tay Y, et al. ceRNA hypothesis: The Rosetta Stone of a hidden RNA language?J. Cell, 2011, 146(3):353-8.2.Thomson D W, Dinger M E. Endogenous microRNA sponges: evidence and controversyJ. Nature Reviews Genetics, 2016, 17(5):272.参考文献29感谢聆听！欢迎交流学习！感谢聆听！欢迎交流学习！30谢谢大家！感谢您的观看！ 欢迎批评指导！201932ppt资料 欢迎批评指导！201933ppt资料
