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1、甾体激素类药物的分析4Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望激素激素（HormoneHormone，荷尔蒙），荷尔蒙） 是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官靶器官的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。糖尿病等。ABCD123456789101112
2、13141516171819 基本结构基本结构 概概 述述甾体激素甾体激素类药物均类药物均具有具有环戊环戊烷骈多氢烷骈多氢菲菲母核。母核。 分类分类甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素雄性激素孕激素孕激素雌激素雌激素蛋白同化激素蛋白同化激素 （一）肾上腺皮质激素（一）肾上腺皮质激素43酮基酮基（紫外吸收）（紫外吸收）天然天然皮质激素皮质激素：氢化可的松氢化可的松 母核有母核有21个碳原子个碳原子C17醇酮基醇酮基（还原性）（还原性）醋酸地塞米松醋酸地塞米松结构修饰结构修饰曲安息龙曲安息龙地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠提高结构稳定性提高结构稳定性增强抗炎作用增强抗炎作用
3、（二）雄性激素和蛋白同化激素（二）雄性激素和蛋白同化激素 天然雄性激素：天然雄性激素：睾酮睾酮 43酮基酮基4位位引入卤素或引入卤素或19位位去去甲基或将甲基或将A环环结构改造结构改造均明显均明显降低雄性降低雄性作用，作用，增加蛋白同化增加蛋白同化作用作用 母核有母核有19个碳原子个碳原子 A环中有环中有43酮基结构酮基结构结构修饰结构修饰增加脂溶性，制成油注射剂增加脂溶性，制成油注射剂可口服、延效可口服、延效丙酸睾酮丙酸睾酮甲睾酮甲睾酮增加位阻，难代谢氧化，增加位阻，难代谢氧化，稳定性增强稳定性增强可口服可口服蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙4-4-氯醋酸睾丸素氯醋酸睾丸素 母核
4、有母核有1818或或1919个碳原子个碳原子（三）孕激素（三）孕激素C17- -甲酮基甲酮基4 43 3酮酮基基天然孕激素：天然孕激素：黄体酮黄体酮 母核有母核有21个碳原子个碳原子 口服被迅速破坏失效，口服被迅速破坏失效，只能肌注只能肌注结构修饰结构修饰醋酸甲地孕酮（孕酮类孕激素）醋酸甲地孕酮（孕酮类孕激素）炔诺孕酮（睾酮类孕激素）炔诺孕酮（睾酮类孕激素）炔诺酮（睾酮类孕激素）炔诺酮（睾酮类孕激素）口服、长效口服、长效口服、长效，口服、长效，17-OH作成庚酸作成庚酸酯，注射一次可维持酯，注射一次可维持3个月个月（四）雌激素（四）雌激素 天然的雌性激素：天然的雌性激素：雌二醇雌二醇 母核有母
5、核有18个碳原子个碳原子 A环为苯环，环为苯环，C3位上有位上有酚羟基，酚羟基，C17位上有位上有-羟基羟基 结构不稳定，口服无效结构不稳定，口服无效结构修饰结构修饰 炔雌醇炔雌醇 戊酸雌二醇戊酸雌二醇 苯甲酸雌二醇苯甲酸雌二醇乙炔基引入，使乙炔基引入，使仲醇变叔醇，增仲醇变叔醇，增加空间位阻，阻加空间位阻，阻碍酶对药物的氧碍酶对药物的氧化代谢，化代谢，可口服可口服1717位羟基酯化，位羟基酯化，酯在体内缓慢水酯在体内缓慢水解，解，延效延效3 3位羟基酯化，位羟基酯化，酯在体内缓慢酯在体内缓慢水解，水解，延效延效可口服可口服高效高效长效长效人工合成代用品：人工合成代用品：非甾体化合物非甾体化合
6、物己烯雌二酚高效、长效高效、长效43酮酮C17醇醇酮基酮基C17羟基羟基C17甲酮基甲酮基A环为环为3OH苯环苯环肾上腺皮质肾上腺皮质激素激素+雄性与蛋白雄性与蛋白同化激素同化激素+雌性激素雌性激素+孕激素孕激素+鉴别反应鉴别反应UV、羰、羰基试剂、基试剂、氨基脲反氨基脲反应应还原性（碱还原性（碱性酒石酸酮、性酒石酸酮、氨制氨制AgNO3）可成酯可成酯与亚硝基铁氰与亚硝基铁氰化钠、间二硝化钠、间二硝基苯反应基苯反应UV、与、与重氮苯磺重氮苯磺酸盐反应酸盐反应二、特殊官能团与分析方法二、特殊官能团与分析方法第二节第二节 鉴别试验鉴别试验一、物理常数的测定一、物理常数的测定二、化学鉴别法二、化学鉴
7、别法三、制备衍生物测定熔点三、制备衍生物测定熔点四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法五、红外分光光度五、红外分光光度六、薄层色谱法六、薄层色谱法七、高效液相色谱法七、高效液相色谱法第二节第二节 鉴别试验鉴别试验二、化学鉴别法二、化学鉴别法（一）呈色反应（一）呈色反应（1）与强酸的呈色反应）与强酸的呈色反应强酸：强酸： H H2 2SOSO4 4、H H3 3POPO4 4、HClOHClO4 4、HClHCl原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与HSOHSO4 4- -作用呈色。作用呈色。显显 色色荧光荧光加水稀释加水稀释氢化可的松氢化可的松棕黄色至红色棕
8、黄色至红色 绿色绿色黄色至橙黄色黄色至橙黄色炔雌醇炔雌醇橙红橙红黄绿黄绿玫红玫红絮状絮状炔雌醚炔雌醚橙红橙红黄绿黄绿红色红色泼尼松泼尼松黄黄橙橙黄色渐变蓝绿色黄色渐变蓝绿色泼尼松龙泼尼松龙深红深红灰色灰色絮状絮状地塞米松地塞米松淡红棕色淡红棕色颜色消失颜色消失苯甲酸雌二醇苯甲酸雌二醇黄绿色黄绿色蓝色蓝色淡橙色淡橙色与硫酸显色反应与硫酸显色反应1、C3酮基和酮基和C20酮基酮基（1）与羰基试剂）与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼反应生成肼反应生成腙腙。(2)官能团的呈色反应官能团的呈色反应（2）与羟胺或氨基脲分别生成具有一定熔点的）与羟胺或氨基脲分别生成具有
9、一定熔点的肟肟或缩氨脲或缩氨脲。+ +HClHCl黄色黄色3 3，20-20-双腙双腙室温下长室温下长时间加热时间加热结论：结论：成腙反应中成腙反应中 C C2020酮基受酮基受C C1818甲基的甲基的空间位阻影响，反应较空间位阻影响，反应较慢，需加热或较长时间慢，需加热或较长时间放置，才完成反应。放置，才完成反应。 C C1111酮基受酮基受C C1818、C C1919位甲基位甲基甲基的阻碍，不发生反应。甲基的阻碍，不发生反应。 C C3 3酮基空间位阻最小，酮基空间位阻最小，最易起反应，室温下先生最易起反应，室温下先生成单腙。成单腙。2 2、C C1717醇酮基的呈色反应（醇酮基的呈色
10、反应（还原性还原性） 能与能与碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、试液（斐林试液）、氨制氨制AgNOAgNO3 3试液（多伦试液）、试液（多伦试液）、四氮唑盐四氮唑盐反应呈色。反应呈色。其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可用作层析法的显色剂，还可用于含量测定用作层析法的显色剂，还可用于含量测定. 适用：肾上腺皮质激素。适用：肾上腺皮质激素。 2Cu2+ + 4OH-+ Cu2O + H2O橙红色橙红色 2Ag+ + 2OH-+2Ag + CH+2Ag + CH3 3COOHCOOH黑色黑色醋酸去氧皮质酮醋酸去氧皮质酮+H2O+ CH3COOH+
11、OH-醋酸泼尼松醋酸泼尼松深红色的三苯甲鐕深红色的三苯甲鐕四氮唑盐四氮唑盐结论：结论： 三苯甲三苯甲鐕鐕于于490nm490nm处显示最大吸收，可用比处显示最大吸收，可用比色法测含量。色法测含量。 四氮唑盐反应还用于四氮唑盐反应还用于肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素类药物类药物中杂质中杂质“有关物质有关物质”检查的显色剂。检查的显色剂。 反应在碱性条件下（水解）进行。反应在碱性条件下（水解）进行。 适用：具有适用：具有甲酮基甲酮基或或活泼亚甲基活泼亚甲基的甾体激素类的甾体激素类药物。药物。3.3.甲酮基的呈色反应甲酮基的呈色反应 能与能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚
12、、芳香醛反反应呈色。应呈色。孕激素孕激素（1）甲酮基：）甲酮基：黄体酮专属性反应。黄体酮专属性反应。黄体酮黄体酮其他甾体其他甾体亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠蓝紫色蓝紫色淡橙色或不显色淡橙色或不显色结论：结论： 在碱性条件下进行。在碱性条件下进行。 与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普钠反应与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普钠反应。（2 2）亚甲基的反应：）亚甲基的反应：硫酸普拉睾酮硫酸普拉睾酮 乙醇乙醇间二硝基苯间二硝基苯氢氧化钠氢氧化钠紫红色紫红色 适用：雌激素类药物。适用：雌激素类药物。4.4.酚羟基的呈色反应酚羟基的呈色反应 能与能与重氮苯磺酸重氮苯磺酸发生偶合反应，生成发生偶合反应，生成红色
13、偶氮红色偶氮染料。染料。苯甲酸雌二醇苯甲酸雌二醇H+红色红色有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯5 5、卤元素的呈色反应、卤元素的呈色反应茜素氟蓝茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银呈蓝紫色呈蓝紫色 ClAgCl氯原子结合氯原子结合在母核环上在母核环上6、沉淀反应、沉淀反应（1）与碱性酒石酸铜（斐林试液）的沉淀反应）与碱性酒石酸铜（斐林试液）的沉淀反应（2 2）氨制）氨制AgNOAgNO3 3（多伦试液）的沉淀反应（多伦试液）的沉淀反应（3 3）与）与AgNOAgNO3 3的沉淀反应的沉淀反应 适用：含适用：含炔基炔基的甾体激素类药物（的甾体激素类药物（炔雌醇、炔诺酮炔雌醇、炔诺
14、酮）。）。 机理：机理：HNOHNO3 3+NaOH滴定，电位法指示终点（4）与）与HNO3-AgNO3的沉淀反应的沉淀反应 适用：甾体激素类药物适用：甾体激素类药物C C2121位上有氯原子取代，如丙酸位上有氯原子取代，如丙酸氯倍他索。氯倍他索。 机理：机理：有机氯原子有机氯原子水解水解加热加热无机氯原子无机氯原子结合在母核结合在母核环上的氯原子环上的氯原子氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 破坏破坏无机氯原子无机氯原子硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水
15、解产物来鉴别。来鉴别。7、水解产物的反应、水解产物的反应 适用：适用： 本类药物本类药物C3、C17或或C21位上羟基的酯位上羟基的酯 结果：结果： 醋酸酯醋酸酯水解后生成的醋酸可与乙醇反应，生成水解后生成的醋酸可与乙醇反应，生成有香气醋酸乙酯。有香气醋酸乙酯。 戊酸或己酸酯戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸或类水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，进行鉴别。己酸，进行鉴别。三、制备衍生物测熔点三、制备衍生物测熔点（二）酯的水解（二）酯的水解醇制醇制KOHKOH 水解水解m.p.为为150150 156（一）酯的生成（一）酯的生成 + KOH丙酸睾丸素丙酸睾丸素睾丸素睾丸素m.p.为为20120
16、1+m.p.m.p.约约182182（分解）（分解）（三）缩氨基脲的生成（三）缩氨基脲的生成苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙缩氨脲苯丙酸诺龙缩氨脲H H2 2NCONHNHNCONHNH2 2（四）酮肟的生成（四）酮肟的生成炔诺酮炔诺酮HONHHONH2 2炔诺酮肟炔诺酮肟m.p.m.p.约约195195（分解）（分解）醋酸泼尼松醋酸泼尼松-3-3-酮酮（五）（五）UV-ViSUV-ViS分光光度法分光光度法240nm240nm左右左右280nm左右左右苯环苯环其他共轭结构其他共轭结构原原 理理200-760nm200-760nm有特征吸收。有特征吸收。方方 法法可规定最大吸收波长、可规定最大吸
17、收波长、A A、吸收系数、吸收系数、A A大大/A/A小小。 示示 例例曲安息龙曲安息龙曲安息龙曲安息龙丙酸倍氯米松丙酸倍氯米松丙酸倍氯米松丙酸倍氯米松溶剂溶剂溶剂溶剂甲醇甲醇甲醇甲醇乙醇乙醇乙醇乙醇浓度浓度浓度浓度20g/ml20g/ml20g/ml20g/ml结果判断结果判断结果判断结果判断在在在在238nm238nm处处处处有最大吸收有最大吸收有最大吸收有最大吸收在在在在239nm239nm处有最大吸收，处有最大吸收，处有最大吸收，处有最大吸收，A A为为为为 0.570.570.600.60，在，在，在，在239nm239nm与与与与263nm 263nm 处的吸收度比值为处的吸收度比
18、值为处的吸收度比值为处的吸收度比值为2.252.252.452.45结构特征：结构特征： 酚羟基酚羟基 C C17 17 OHOH C C17 17 乙炔基乙炔基eg1:炔雌醇炔雌醇（六）（六）IR法法原料药原料药1505cm-13505cm-13300cm-11590cm-13610cm-1酚羟基酚羟基醇羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动苯环的骨架振动eg2：黄体酮：黄体酮-3-3-酮酮结构特征：结构特征：C C1717- -酮基酮基1700cm-1 C=O20位酮基位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H双键双键七、七、TLC法法八、八、HPLC应用
19、应用甾体激素类药物原料与甾体激素类药物原料与制剂的鉴别制剂的鉴别甾体激素类药物原料与制剂甾体激素类药物原料与制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）软膏、醋酸氟轻松软膏）方法方法对照品法对照品法对照品法对照品法结果结果判断判断要求供试品溶液所显主要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同照品溶液的主斑点相同要求在含量测定项下记录的要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的色谱图中，供试品峰的tR与与对照品峰的对照品峰的tR一致一致第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查 杂质来源：杂质来源：原料、中间体、异构体、降解产物以
20、原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。及试剂和溶剂。一、有关物质的检查一、有关物质的检查 其他甾体：其他甾体：有些杂质与该有些杂质与该甾体激素药物结构类似甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，素类药物的质量控制中，“其他甾体其他甾体”的限度检查显的限度检查显得很重要。得很重要。检查方法：检查方法：（具有一定分离能力）（具有一定分离能力）u判定方法：规定杂质斑点数目判定方法：规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色 1 1、TLCTLC法（自身对照法）法（自身对照法）egeg：氢化
21、可的松中其他甾体的检查：氢化可的松中其他甾体的检查 供试液：本品供试液：本品+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 浓度：浓度：3.0mg/ml3.0mg/ml 对照液：供试液（对照液：供试液（3.0mg/ml3.0mg/ml）+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 60g/ml 60g/ml 层析：供试液层析：供试液 对照液对照液 点样、展开、斑点检出。点样、展开、斑点检出。 判断：供试液如显杂质斑点，不得多于判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3 3个，其颜色与对照液的主个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。斑点比较，不得更深。2 2、HPLCHPLC法（法（自身对照
22、法自身对照法）图图A A中峰中峰1 1面积的四分之三面积的四分之三u判定方法：判定方法： 规定杂质峰数目规定杂质峰数目 规定杂质峰面积规定杂质峰面积二、游离磷酸盐的检查二、游离磷酸盐的检查 方法：对照品比色法方法：对照品比色法 杂质来源：地塞米松磷酸钠生产过程中，由磷酸酯杂质来源：地塞米松磷酸钠生产过程中，由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。化时残存的过量磷酸盐。 结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。吸光度。吸光度。吸光度。740nm740nm7
23、40nm740nm 原理：供试液原理：供试液原理：供试液原理：供试液+ + + +钼酸铵钼酸铵钼酸铵钼酸铵+1-+1-+1-+1-氨基氨基氨基氨基-2-2-2-2-萘酚萘酚萘酚萘酚-4-4-4-4-磺酸磺酸磺酸磺酸 钼蓝钼蓝钼蓝钼蓝三、有机溶剂残留量的检查三、有机溶剂残留量的检查egeg：地塞米松磷酸钠：地塞米松磷酸钠 方法：方法：方法：方法：GCGCGCGC色谱法色谱法色谱法色谱法 杂质来源：地塞米松磷酸钠生产中，使用大量杂质来源：地塞米松磷酸钠生产中，使用大量甲醇和丙酮。甲醇和丙酮。 结果判断：不得出现结果判断：不得出现结果判断：不得出现结果判断：不得出现甲醇峰，甲醇含量甲醇峰，甲醇含量0
24、.30.3 丙酮规定不得过丙酮规定不得过5.0%5.0%四、四、硒的检查硒的检查氧瓶燃烧氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定二氨基萘比色法测定 杂质来源：地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激杂质来源：地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激素类药物，在生产中使用二氧化硒素类药物，在生产中使用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢工艺，脱氢工艺，药物可能引入杂质硒。药物可能引入杂质硒。 方法：方法：方法：方法：药物药物 结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度液的吸光
25、度液的吸光度液的吸光度（0.0050.0050.010.01） 。378nm378nm378nm378nm五、雌酮五、雌酮六、乙炔基六、乙炔基第四节第四节 含量测定含量测定 常用方法常用方法容量法容量法比色法比色法紫外分光光度法紫外分光光度法荧光法荧光法气相色谱法气相色谱法高效液相色谱高效液相色谱四氮唑盐比色法四氮唑盐比色法异烟肼比色法异烟肼比色法铁铁-酚试剂比色法酚试剂比色法一、一、HPLCHPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用方法：方法：RPRPHPLCHPLC（内标法）（内标法） 测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。测定对象：甾体
26、激素类药物的原料和制剂。测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。egegegeg：黄体酮的含量测定：黄体酮的含量测定：黄体酮的含量测定：黄体酮的含量测定色谱条件：固定相色谱条件：固定相色谱条件：固定相色谱条件：固定相 ODS ODS ODS ODS，检测波长，检测波长，检测波长，检测波长254nm254nm254nm254nm 流动相流动相流动相流动相 甲醇甲醇甲醇甲醇- - - -水（水（水（水（65:3565:3565:3565:35） 内标物内标物内标物内标物 己烯雌酚己烯雌酚己烯雌酚己烯雌酚系统适用性试验：系统适用性试验：系统适用性试验：系统适用性试验：n1000n1000n1000n1
27、000，R R R R符合规定。符合规定。符合规定。符合规定。测定样品：黄体酮原料、注射液。测定样品：黄体酮原料、注射液。测定样品：黄体酮原料、注射液。测定样品：黄体酮原料、注射液。定量方法：内标法定量方法：内标法定量方法：内标法定量方法：内标法 内标内标内标内标-1-1-1-1二、二、UV-ViSUV-ViS分光光度法分光光度法1 1、-3-3-酮酮 240nm 240nm（）2 2、苯环、苯环 280nm 280nm（） 雌激素雌激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素（一）（一）UVUV分光光度法分光光度法缺点：缺点：专属性不强专属性不强示
28、例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查示例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查示例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查示例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查（1 1 1 1）配制供试液，取）配制供试液，取）配制供试液，取）配制供试液，取10101010片分别进行测定片分别进行测定片分别进行测定片分别进行测定（2 2 2 2）测定：）测定：）测定：）测定：240nm240nm240nm240nm（3 3 3 3）计算）计算）计算）计算（二）（二） 比色法比色法有色甲瓒有色甲瓒四氮唑盐四氮唑盐醇酮基醇酮基- - - -1717COH -1、 四氮唑盐比色法四氮唑盐比色法（1 1）原理：肾上腺皮质激素类）原理：肾
29、上腺皮质激素类C C1717-醇酮基强醇酮基强还原性。还原性。H氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红蓝四氮唑（蓝四氮唑（BT）525 nm2525氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵对照液对照液供试液供试液ATTC4045暗暗（2 2）方法：对照品法）方法：对照品法（3 3）影响因素）影响因素A. A. 基团对反应速度的影响基团对反应速度的影响C C1111= O= OC C1111OHOHC C2121OHOH未酯化未酯化C C2121-OH-OH酯化酯化B B、溶剂和水分的影响、溶剂和水分的影响 以无水乙醇为溶剂，水含量大时，呈色减慢，以无水乙醇为溶剂，水含量大时，呈色减
30、慢，不超过不超过5对结果没有影响。对结果没有影响。C C、O O2 2与光线的影响与光线的影响避光、隔绝空气、快速、充避光、隔绝空气、快速、充N2D D、碱的种类及加入顺序、碱的种类及加入顺序以氢氧化四甲基铵的结果最佳以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：加入顺序：皮质激素溶液皮质激素溶液四氮唑盐四氮唑盐碱试液碱试液E. E. 温度与时间温度与时间室温（室温（2525）反应）反应404045 min45 minF. F. 干扰物的影响干扰物的影响 油膏、冷霜等制剂含聚乙二醇、丙二醇、油膏、冷霜等制剂含聚乙二醇、丙二醇、羊毛脂对羊毛脂对BTBT的显色反应有干扰，要先分离后的显色反应有干扰，要先分离
31、后测定。测定。（1 1） 原理原理异烟腙（黄）异烟腙（黄）HCl420nm420nm2 2、异烟肼比色法、异烟肼比色法C C3 3- -酮基酮基+ +异烟肼异烟肼H2O肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素 雄性激素雄性激素蛋白同化激素蛋白同化激素孕激素孕激素（2 2）方法：）方法：对照品法对照品法6060异烟肼异烟肼无水甲醇无水甲醇对照液对照液供试液供试液A暗暗60（3 3）影响因素）影响因素A.A.反应速度（反应专属性）反应速度（反应专属性） C3=OC17= O 、C20= O C11= O 不反应不反应B. 溶剂的选择溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐受溶解度的影响受溶解度的影响无水甲醇无水甲醇
32、无水乙醇无水乙醇对试剂的稳定性好对试剂的稳定性好呈色强度较无水乙醇中高呈色强度较无水乙醇中高对植物油的溶解度小对植物油的溶解度小C.C.水分、温度、水分、温度、O O2 2与光线的影响与光线的影响 含水量含水量腙水解腙水解A% O O2 2与光线对反应的影响不大与光线对反应的影响不大 t D.D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸的种类和浓度及异烟肼的浓度 酸酸: :异烟肼异烟肼 = 2:1 = 2:1盐酸浓度盐酸浓度盐酸浓度盐酸浓度0.0074mol/L0.0074mol/L0.0074mol/L0.0074mol/L最大最大A A异烟肼浓度异烟肼浓度异烟肼浓度异烟肼浓度0.00365mol/L
33、0.00365mol/L0.00365mol/L0.00365mol/L（1 1）原理）原理max=4653、Kober反应比色法反应比色法桃桃红红黄色黄色雌激素雌激素2 2OH乙醇乙醇- -4 42 2SOHmax=515雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚maxmax=465=465maxmax=515=515(NHNH4 4) )2 2FeFe(SO(SO4 4) )2 2 + H+ H2 2SOSO4 4 + H+ H2 2O O2 2 + + 苯酚苯酚 铁酚试剂铁酚试剂 Iron-phenol ReagentIron-phenol Reagent 铁盐的作用铁盐的作用 加快黄色产物的形成、转化
34、加快黄色产物的形成、转化 加强红色产物的稳定性加强红色产物的稳定性 酚的作用酚的作用 加快红色产物的形成加快红色产物的形成 消除反应产生的荧光消除反应产生的荧光练习与思考练习与思考AA型题型题 1. 1. 醋酸地塞米松的鉴别方法是醋酸地塞米松的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.B.水解反应水解反应 C.C.柯柏反应柯柏反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应E.E.双缩脲反应双缩脲反应BB型题型题 A.A.亚硝基铁氰化钠反应亚硝基铁氰化钠反应 B.Vitali B.Vitali反应反应 C.Kedde C.Kedde反应反应 D. D.绿奎宁绿奎宁(thalle
35、iaqllin)(thalleiaqllin)反应反应 E. E.碱试酒石酸铜试液的反应碱试酒石酸铜试液的反应 1. 1. 黄体酮黄体酮 2. 2. 醋酸地塞米松醋酸地塞米松 3. 3. 地高辛地高辛 4. 4. 硫酸奎宁硫酸奎宁AECD简答题：简答题：1 1、简述异烟肼比色法测定甾体类激素药、简述异烟肼比色法测定甾体类激素药物含量的原理及注意事项？物含量的原理及注意事项？2 2、简述四氮唑比色法中的注意事项。、简述四氮唑比色法中的注意事项。3 3、甾体类激素药物可能含有哪些特殊杂、甾体类激素药物可能含有哪些特殊杂质？各采用什么方法检查？质？各采用什么方法检查？4 4、甾体类激素药物有哪些鉴别方法？、甾体类激素药物有哪些鉴别方法？
