《分子生物学实验课：8脂质体转染》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子生物学实验课：8脂质体转染（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、脂质体转染脂质体转染原理 半乳糖苷酶（-gal）表达比较转染试转染试剂家族剂家族 LIPOFECTAMINE2000LIPOFECTAMINE2000提供对大多数细胞最高的转染活性在含血清时的效果无可匹敌对常用于蛋白表达的细胞系非常适合建议使用96孔板进行高通量应用 LIPOFECTAMINE PLUSLIPOFECTAMINE PLUS对于多数贴壁细胞的转染效率较高使用方便，不需要对DNA和阳离子脂质体试剂的量进行优化同LIPOFECTAMINE相比，仅需要使用一半量的DNA和阳离子脂质体试剂LIPOFECTAMINELIPOFECTAMINE已证实可以对多数贴壁细胞进行高效转染DMRIE-
2、CDMRIE-C对于悬浮细胞，如淋巴细胞的DNA转染表现出超乎寻常的效果建议用于RNA的转染OLIGOFECTAMINEOLIGOFECTAMINE专门针对寡聚核苷酸的转染CELLFECTINCELLFECTIN在昆虫细胞的转染中表现出色LIPOFECTINLIPOFECTIN对内皮细胞的转染效率较高用于寡聚核苷酸的转染效果已证实293FECTIN293FECTIN专门针对293细胞的转染对293细胞的转染表现出最佳效果图1. 使用LIPOFECTAMINE 2000获得高转染效率 细胞在含有血清的生长培养基中铺板，第2天使用LIPOFECTAMINE 2000在24孔板中转染（BE(2)C细
3、胞不使用血清）pCMVSPORT-gal。加入复合物后24小时使用X-gal对细胞染色。根据LIPOFECTAMINE 2000剂量-反应曲线确定最佳点。脂质体转染步骤脂质体转染步骤1.培养好的细胞接种24孔细胞孔板，37的CO2培养箱培养，待细胞密度为8090%，约24h。2. 待转染质粒与脂质体混合物制备：A液：转染质粒0.8ug稀释至无血清F12培养基中50ul，混匀，室温放置5min；B液：脂质体2ul稀释至50ul无血清F12培养基中，混匀，室温放置5min；A、B液混匀，室温放置30min，该混合液在30min6h内稳定。3. 取出细胞孔板，弃培养液，用hanks液洗涤2次，待用。4. 到时间后，将混合物导入细胞中，加入0.4ml无血清DMEM培养基，37的CO2培养箱培养，6-8小时后可换10%胎牛血清DMEM培养液（根据不同的细胞选择，不换液可能对细胞毒性较大，细胞死亡率较高）。5.24小时后荧光显微镜观察荧光情况。6.拍照记录合适的细胞荧光结果。 荧荧 光光 显显 微微 镜镜 技技 术术
