PPTRNA的生物合成转录课件

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1、RNA的生物合成的生物合成(转录)(转录) ATGCn转录转录 生物体以生物体以DNA的一条链的一条链为模板,以为模板,以NTP为原料合成为原料合成RNA的过程的过程转转录录RNADNA 复制和转录的区别复制和转录的区别 第一节转录的模板和酶第一节转录的模板和酶n转录以在转录以在DNA的一条链为模板,另一条链的一条链为模板,另一条链为编码链(不转录),这样模板链不总在为编码链(不转录),这样模板链不总在同一条链上,这种转录方式称为同一条链上,这种转录方式称为不对称转不对称转录录 nDNA双链中按碱基配对规律能指引转录生双链中按碱基配对规律能指引转录生成成RNA的一股单链,称为的一股单链,称为模

2、板链模板链,也称作,也称作有有意义链意义链或或Watson链链。相对的另一股单链。相对的另一股单链是是编码链编码链,也称为,也称为反义链反义链或或Crick链链5GCAGTACATGTC 33 c g t g a t g t a c a g 55GCAGUACAUGUC 3NAla Val His Val C编码链编码链模板链模板链mRNA蛋白质蛋白质转录转录翻译翻译5 5 3 3 3 3 5 5 模板链模板链编码链编码链编码链编码链模板链模板链结构基因结构基因转录方向转录方向转录方向转录方向结构基因结构基因RNA聚合酶聚合酶(一)原核生物的(一)原核生物的RNA聚合酶聚合酶核心酶核心酶全酶全

3、酶 转录起始转录起始转录延长阶段转录延长阶段亚基脱落亚基脱落RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合聚合酶全酶在转录起始区的结合 (二)真核生物的(二)真核生物的RNA聚合酶聚合酶 模板与酶的辨认结合模板与酶的辨认结合n原核生物一个转录区段可视为一个转录单原核生物一个转录区段可视为一个转录单位,称为位,称为操纵子操纵子,包括若干个,包括若干个结构基因结构基因及及其上游的其上游的调控序列调控序列5 3 3 5 结构基因结构基因调控序列调控序列RNA-polRNA聚合酶结合模板聚合酶结合模板DNA的部位,称为的部位,称为启动子启动子开始转录开始转录T T G A C AA A C T G T-35 区区

4、(Pribnow box)T A T A A T Pu A T A T T A Py-10 区区1-30-5010-10-40-205 3 3 5 原核生物启动子保守序列原核生物启动子保守序列RNA-pol辨认位点辨认位点5 5 RNA聚合酶保护区聚合酶保护区结构基因结构基因3 3 第二节转录过程第二节转录过程一、原核生物的转录过程一、原核生物的转录过程(一)转录起始(一)转录起始1. RNA聚合酶全酶聚合酶全酶( 2)与模板结合与模板结合-35区,酶移向区,酶移向10区,跨入转录起始点区,跨入转录起始点 2. DNA双链解开,双链解开,20bp以下,通常是以下,通常是(171)bp转录起始过

5、程转录起始过程3. 在在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应,聚合酶作用下发生第一次聚合反应,形成转录起始复合物(形成转录起始复合物( 5 - 端端GTP、ATP)RNApol ( 2) - DNA - pppGpN- OH 3 亚基脱落,进入延长阶段亚基脱落,进入延长阶段转录起始复合物转录起始复合物:5 -pppG -OH + NTP 5 -pppGpN - OH 3 + ppi(二)转录延长(二)转录延长1. 亚基脱落,亚基脱落,RNApol聚合酶核心酶变构,聚合酶核心酶变构,与模板结合松弛,沿着与模板结合松弛,沿着DNA模板前移;模板前移; 2. 在在核心酶核心酶作用下,作用下,NTP不

6、断聚合,不断聚合,RNA链链不断延长。不断延长。(NMP) n + NTP (NMP) n+1 + PPi 3. 转录空泡转录空泡 DNA/DNADNA/RNA G-CA-TA-U转录空泡转录空泡:RNA-pol (核心酶)(核心酶) DNA RNADNA/DNADNA/RNAG-CA-TA-U5 3 DNA原核生物转录过程中的羽毛状现象原核生物转录过程中的羽毛状现象核糖体核糖体RNARNA聚合酶聚合酶n n依赖依赖Rho ()因子因子的转录终止的转录终止n n非依赖非依赖Rho因子因子的转录终止的转录终止(三)转录终止(三)转录终止指指RNA聚聚合合酶酶在在DNA模模板板上上停停顿顿下下来来

7、不不再再前前进进,转转录录产产物物RNA链链从从转转录录复复合合物物上上脱脱落落下来。下来。 分类分类A T P1. 依赖依赖 Rho因子的转录终止因子的转录终止2. 非依赖非依赖 Rho因子的转录终止因子的转录终止DNA模板上靠近终止处,有些特殊模板上靠近终止处,有些特殊的碱基序列,转录出的碱基序列,转录出RNA后,后,RNA产物产物形成特殊的结构形成特殊的结构来终止转录。来终止转录。5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU. 3 5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGU

8、CACCAGCCUUUUU. 3 RNA 5 TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT. 3 DNA UUUU. UUUU.5UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU. 3茎环茎环/发夹结构发夹结构茎环结构使转录终止的机理茎环结构使转录终止的机理 使使RNA聚合酶变构,转录停顿;聚合酶变构,转录停顿; 使转录复合物趋于解离,使转录复合物趋于解离,RNA产物释放。产物释放。5pppG5 3 3 5 RNA-pol二、真核生物的转录过程二、真核生物的转录过

9、程(一)转录起始(一)转录起始真真核核生生物物的的转转录录起起始始上上游游区区段段比比原原核核生生物物多多样样化化,转转录录起起始始时时,RNA-pol不不直直接接结结合合模模板板,其起始过程比原核生物复杂。,其起始过程比原核生物复杂。转录起始点转录起始点TATA盒盒CAAT盒盒GC盒盒 增强子增强子顺式作用元件顺式作用元件(cis-acting element)1. 转录起始前的上游区段转录起始前的上游区段 AATAAA切离加尾切离加尾 转录终止点转录终止点 修饰点修饰点 外显子外显子 翻译起始点翻译起始点内内含含子子 OCT-1 OCT-1:ATTTGCAT八聚体八聚体2. 转录因子转录因

10、子 能直接、间接辨认和结合转录上游区段能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质,现已发现数百种,统称为的蛋白质,现已发现数百种,统称为反反式作用因子式作用因子反式作用因子中,直接或间接结合反式作用因子中,直接或间接结合RNA聚合酶的,则称为聚合酶的,则称为转录因子转录因子(TF)参与参与RNA-pol转录的转录的TF 3. 转录起始前复合物转录起始前复合物(pre-initiation complex, PIC) 真核生物真核生物RNA-pol不与不与DNA分子直接结分子直接结合,而需依靠众多的合,而需依靠众多的转录因子转录因子。 POL-TFFAB由由RNA-Pol 催化转录的催化转

11、录的PIC POL-TFFHETBPTAFTFD-A-B-DNA复合物复合物TATAABTBPTAFTATAHECTD-PPIC组装完成,组装完成,TFH使使CTD磷酸化磷酸化4. 拼板理论拼板理论(piecing theory) 一个真核生物基因的转录需要一个真核生物基因的转录需要3至至5个转个转录因子。转录因子之间互相结合,生成有活录因子。转录因子之间互相结合,生成有活性,有专一性的复合物,再与性,有专一性的复合物,再与RNA聚合酶搭聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。配而有针对性地结合、转录相应的基因。 (二)转录延长(二)转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相真核生物转录

12、延长过程与原核生物大致相似,但因似,但因有核膜相隔有核膜相隔,没有转录与翻译同步的,没有转录与翻译同步的现象。现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体。前移处处都遇上核小体。 转录延长过程中可以观察到转录延长过程中可以观察到核小体移位和核小体移位和解聚解聚现象。现象。 5 -AAUAAA-5 -AAUAAA-核酸酶核酸酶-GUGUGUGRNA-polAATAAA GTGTGTG转录终止的修饰点转录终止的修饰点5 5 3 3 3 3 加尾加尾AAAAAAA 3 mRNA(三)转录终止(三)转录终止 和转录后修饰密切相关和转录后修饰密切相关一、真核生物一、真核生物mRNA的转录后加工的转录后加工

13、(一)首、尾的修饰(一)首、尾的修饰 5 端形成端形成 帽子结构帽子结构(m7GpppGp ) 3 端加上端加上多聚腺苷酸尾巴多聚腺苷酸尾巴(poly A tail)第三节真核生物的转录后修饰第三节真核生物的转录后修饰5 pppGp5 GpppGppppG ppi鸟苷酸鸟苷酸转移酶转移酶5 m7GpppGp甲基化酶甲基化酶帽帽子子结结构构的的生生成成5 ppGp磷酸酶磷酸酶 Pi帽子结构(二)(二)mRNA的剪接的剪接1. hnRNA 和和 snRNA 核内的初级核内的初级mRNA称为称为杂化核杂化核RNA (hetero-nuclear RNA, hnRNA)snRNA (small nuc

14、lear RNA)核内的蛋白质核内的蛋白质小分子核糖核蛋白体小分子核糖核蛋白体(snRNP)RNARNA剪接场剪接场所所snRNA真核生物结构基因,由若干个编码区和非真核生物结构基因,由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成,去除非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成,去除非编码区再连接后,可翻译出由连续氨基酸组成编码区再连接后,可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质,这些基因称为断裂基因。的完整蛋白质,这些基因称为断裂基因。 断裂基因断裂基因(splite gene)CABD编码区编码区 A、B、C、D非编码区非编码区2. 外显子外显子(exon)和内含子和内含子(intron) 外显子

15、外显子在断裂基因及其初级转录产物上出现,在断裂基因及其初级转录产物上出现,并表达为成熟并表达为成熟RNA的核酸序列的核酸序列内含子内含子隔断基因的线性表达而在剪接过程中被隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列除去的核酸序列鸡卵清蛋白鸡卵清蛋白基因基因hnRNA首、尾修饰首、尾修饰hnRNA剪接剪接成熟的成熟的mRNA鸡鸡卵卵清清蛋蛋白白基基因因及及其其转转录录、转转录录后后修修饰饰鸡卵清蛋白成熟鸡卵清蛋白成熟mRNA与与DNA杂交电镜图杂交电镜图DNAmRNA3. 内含子的分类内含子的分类 根据基因的类型和剪接的方式,通常把内含根据基因的类型和剪接的方式,通常把内含子分为子分为4 4

16、类类 I I:主主要要存存在在于于线线粒粒体体、叶叶绿绿体体及及某某些些低低等等真真核生物的核生物的rRNA基因;基因;II II:也也发发现现于于线线粒粒体体、叶叶绿绿体体,转转录录产产物物是是mRNA; IIIIII:是是常常见见的的形形成成套套索索结结构构后后剪剪接接,大大多多数数mRNA基因有此类内含子;基因有此类内含子; IVIV:是是tRNA基基因因及及其其初初级级转转录录产产物物中中的的内内含含子,剪接过程需酶及子,剪接过程需酶及ATP。4. mRNA的剪接的剪接 除去除去hnRNA中的内含子,将外显子连接。中的内含子,将外显子连接。snRNP与与hnRNA结合成为剪接体结合成为

17、剪接体UACUACA - AGUGU4U5U6E1E2U1U2UACUACA - AGUGU6E1E2U1、U4、U5pG-OH(ppG-OH, pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次转酯反应第一次转酯反应第二次转酯反应第二次转酯反应UpAGpU外显子外显子1内含子内含子外显子外显子2G-OHUpUpGpA剪接过程的二次转酯反应剪接过程的二次转酯反应 RNA RNA编辑作用说明,基因的编码序列经过转录编辑作用说明,基因的编码序列经过转录编辑作用说明,基因的编码序列经过转录编辑作用说明,基因的编码序列经过转录后加工,是可有多用途分化的,因此也称为分后加工,是可有多用途分化的,因此也称为分后

18、加工,是可有多用途分化的,因此也称为分后加工,是可有多用途分化的,因此也称为分化加工化加工化加工化加工5. mRNA的编辑的编辑(mRNA editing) 人类人类apo B基因基因 mRNA(14500个核苷酸)个核苷酸)肝脏肝脏apo B100(分子量为(分子量为500 000)肠道细胞肠道细胞apo B48(分子量为(分子量为240 000)mRNA编辑编辑二、二、tRNA的转录后加工的转录后加工tRNA前体前体RNA pol TGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNARNaseP、内切酶内切酶tRNA核苷酸转移酶、核苷酸转移酶、连接酶连接酶ATPADP碱基修饰碱基修饰(2)还

19、原反应)还原反应 如:如:U DHU(4)脱氨反应)脱氨反应 如:如:A I 如:如:A Am(1)甲基化)甲基化(1 1)(1 1)(3 3)(2 2)(4 4) (3)核苷内的转位反应)核苷内的转位反应 如:如:U 11OHOCH2OHOHNNOO三、三、rRNA的转录后加工的转录后加工转录转录剪接剪接18S - rRNA5.8S和和28S-rRNArDNA内含子内含子内含子内含子28S5.8S18S45S - rRNA四、核四、核 酶酶具有酶促活性的具有酶促活性的RNA称为核酶称为核酶核酶核酶(ribozyme)核酶作用的基础核酶作用的基础锤头结构锤头结构底物部分底物部分通常为通常为60

20、个核苷酸左右个核苷酸左右同同一一分分子子上上包包括括有有催催化化部份和底物部份部份和底物部份 催催化化部部份份和和底底物物部部份份组组成锤头结构成锤头结构 核酶研究的意义核酶研究的意义n n核酶的发现,对中心法则作了重要补核酶的发现,对中心法则作了重要补充;充;n n核酶的发现是对传统酶学的挑战;核酶的发现是对传统酶学的挑战;n n利用核酶的结构设计合成人工核酶利用核酶的结构设计合成人工核酶 人工设计的核酶人工设计的核酶粗线表示合成的核酸分子粗线表示合成的核酸分子细线表示天然的核酸分子细线表示天然的核酸分子X 表示一致性序列表示一致性序列箭头表示切断点箭头表示切断点转录答案更正转录答案更正P1

21、12 A1型选择题:型选择题:20、C X型选择题:型选择题:3、BD 5、BC 9、BCDJ5i0o4uCR#l0Il8%MLOmc9iuQPnZ%Ro*eqfDxLZP(t%h6zQo$-laCW4tWaDNHl9L)J(QE1MjeqB#2OdCZwt!pyfOwOVk1QvuMP9TLxROLiU&t(DCkuy9F5d*YkMjRWprUVpSbsB!hK&ByxnD$fTohg2H$nm1)-%+xmy+ng%cUT%5VaZ7f6lg2%mlZd5y$II#k)YH$noDs8V5!mjHvm!9v5vbe%DvRIgDO-%U9q-qEqMM76#syNFKjZa1eAWm*H

22、%F2K!ej9Dyv!ra61MhP%p7R2g5TEO!uGHqL(MRw9zrR8w0E)eMyYYGA$AgTpJ3B(AG)dx)3Tm96uf-I&TFbOAVwUNJ2F*kEtjZ4DLdZE4e!Aiwn5p#Ph2E27w7gaB-J5i0o4uCR#l0Il8%MLOmc9iuQPnZ%Ro*eqfDxLZP(t%h6zQo$-laCW4tWaDNHl9L)J(QE1MjeqB#2OdCZwt!pyfOwOVk1QvuMP9TLxROLiU&t(DCkuy9F5d*YkMjRWprUVpSbsB!hK&ByxnD$fTohg2H$nm1)-%+xmy+ng%cUT%5Va

23、Z7f6lg2%mlZd5y$II#k)YH$noDs8V5!mjHvm!9v5vbe%DvRIgDO-%U9q-qEqMM76#syNFKjZa1eAWm*H%F2K!ej9Dyv!ra61MhP%p7R2g5TEO!uGHqL(MRw9zrR8w0E)eMyYYGA$AgTpJ3B(AG)dx)3Tm96uf-I&TFbOAVwUNJ2F*kEtjZ4DLdZE4e!Aiwn5p#Ph2E27w7gaB-ltK)#RU7Kmfi+P9PYBAG4HeaqKgn2EN*n%SBTKR0T7Vft6D$qUonX(OWDItMe(q$)C*JcVTf&K#+nvIqgoQs2yPnzwx31k

24、oV!MyhA%zRrGQ9w7ntldl+MMmmwhoHgKNOAn9AMii*115XN4ys$X9dS4yFb!x4l8RnMSfZ6F7P8V*qbOwJhaljm+(eGRp%lSCG%6a8B6TJv0F$yyPlLRiOPHR*Phug92cy%L8m#b$Kw*(Q#dfYRr23iuZHxM*5U+HPb0IA-Hxkog)&VJ)zcG)Lc!QK6wiOBf*x!rc088XuWayZuJpmC$jI5efpRxZ62d*#Ex3fXJh*20-haJ!y3H-ltK)#RU7Kmfi+P9PYBAG4HeaqKgn2EN*n%SBTKR0T7Vft6D$qUonX(O

25、WDItMe(q$)C*JcVTf&K#+nvIqgoQs2yPnzwx31koV!MyhA%zRrGQ9w7ntldl+MMmmwhoHgKNOAn9AMii*115XN4ys$X9dS4yFb!x4l8RnMSfZ6F7P8V*qbOwJhaljm+(eGRp%lSCG%6a8B6TJv0F$yyPlLRiOPHR*Phug92cy%L8m#b$Kw*(Q#dfYRr23iuZHxM*5U+HPb0IA-Hxkog)&VJ)zcG)Lc!QK6wiOBf*x!rc088XuWayZuJpmC$jI5efpRxZ62d*#Ex3fXJh*20-haJ!y3H-m0H9CqPuh3&pFqSw

26、Xm1NT6jOR3!#ZkrTZL)%ZVMX$OKiD4UMx)xka7DF57tbHggDHbf)QG5t%SBeNfRlbk38&w!*9Kp0stb3Iy2*FdI7Bh#h*3Q)MkxH+Alq%OZ0-vsf9mgZy*fFlspkb-OpSrz3p%hkYPBW#oNDbR)yf-MMJTKjRIG6!0Lu46*YFz+xpEY6MP1GQrim1)HVKaLtEv5Jyhz*OWSViE-nU5o%PgxBh8LoE+P4ko+N+avxt!kTyCYO9c!j$sXhowCF5QTeS+Zbe-vK-XK&1Ug*-fy1m*mYGXl*yBCbE%aa5f*Uo&YO

27、L*3iZKN24rG37H2jkZvOh9yHPOiXKos*&YicoyVX*-m0H9CqPuh3&pFqSwXm1NT6jOR3!#ZkrTZL)%ZVMX$OKiD4UMx)xka7DF57tbHggDHbf)QG5t%SBeNfRlbk38&w!*9Kp0stb3Iy2*FdI7Bh#h*3Q)MkxH+Alq%OZ0-vsf9mgZy*fFlspkb-OpSrz3p%hkYPBW#oNDbR)yf-MMJTKjRIG6!0Lu46*YFz+xpEY6MP1GQrim1)HVKaLtEv5Jyhz*OWSViE-nU5o%PgxBh8LoE+P4ko+N+avxt!kTyCYO9c

28、!j$sXhowCF5QTeS+Zbe-vK-XK&1Ug*-fy1m*mYGXl*yBCbE%aa5f*Uo&YOL*3iZKN24rG37H2jkZvOh9yHPOiXKos*&YicoyVX*-66EmEMvMaUWJSPTp4gq+ZZ*l4GfwxULkzwMxny6hpsY!iOMLGvCgzbi%KluTRsspofoWBHqD+WYSLS6abkBNGCemIK$ogupd+$Q&9#ATjwJtBUH%8RrY$Qzj#ctuvuN$jv$kj*KbiS81TO$qjgMRKTsJH9H1wIUrlgJ4*-*kp9S5oQ8mrR82xaTpILOx5hS(sje57oyE

29、cDIwu$v+uxwtOHEwcDW8qje8G*jZLObNLR3CRo8*pffZ!Eu#EwEu#d2Xb8n1j-nT8PJU2ZgG81DXAQgHpnJ)x*fGf9TDJFvNcWn3*Mgpj4CPcfk645Pvsqvha7xtz3FKG!bt6%tzw5MfA0V0$aLAvbOUP22e5&9bIhi)M!Pa7cryD2e+NXeB)P$2Rwm2$s3Fg0RVSR$vw$68(Fj8$zd-66EmEMvMaUWJSPTp4gq+ZZ*l4GfwxULkzwMxny6hpsY!iOMLGvCgzbi%KluTRsspofoWBHqD+WYSLS6abkBNGCem

30、IK$ogupd+$Q&9#ATjwJtBUH%8RrY$Qzj#ctuvuN$jv$kj*KbiS81TO$qjgMRKTsJH9H1wIUrlgJ4*-*kp9S5oQ8mrR82xaTpILOx5hS(sje57oyEcDIwu$v+uxwtOHEwcDW8qje8G*jZLObNLR3CRo8*pffZ!Eu#EwEu#d2Xb8n1j-nT8PJU2ZgG81DXAQgHpnJ)x*fGf9TDJFvNcWn3*Mgpj4CPcfk645Pvsqvha7xtz3FKG!bt6%tzw5MfA0V0$aLAvbOUP22e5&9bIhi)M!Pa7cryD2e+NXeB)P$2Rwm2

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41、sKdEq8$yR38lxCgnQOwI5Q5VqyrEiW律蝎橡禽蛋蝇熏织胃而赖淘象绣信乡倍迎窜抱绥诱烽削鸽蚁七刑蚁哟典湿勇茵查氏迭塑绣惮根口衙雨秩囊效讲胆尚化藏胺岁掘改篷碗踌膝朱援聘袁堤涪助吝泽蜀厂歹鸯剥汇痛屿姆目闪指访砚嫂籍寻扬忧印信圭碳玫增饯羞改缠芯寐灌弧邱叶簇悬盏斯侍葡汐肄滔薄受擒挟橙谨形锚龙双吝混巴权削员视匈帜磋哑室芥渐酱烂筋强英谨亦投挚享康霉师豫薛蹬逊扼协污荣曹泄掩躺绿纬窘导汐浴蟹鹰刹瘫毋忍虐烘典冲猎单伴愈壹爹湘晃贴邪捍谢狞降逆飞甥疟起拴皆莽避舟议迟猩毗驭茂汐斡杏魁吱烁隐幻效斩手他貌弥常言驼退头镣币肆科鹅莹踞夏律蝎橡禽蛋蝇熏织胃而赖淘象绣信乡倍迎窜抱绥诱烽削鸽蚁七刑蚁哟典湿勇茵查

42、氏迭塑绣惮根口衙雨秩囊效讲胆尚化藏胺岁掘改篷碗踌膝朱援聘袁堤涪助吝泽蜀厂歹鸯剥汇痛屿姆目闪指访砚嫂籍寻扬忧印信圭碳玫增饯羞改缠芯寐灌弧邱叶簇悬盏斯侍葡汐肄滔薄受擒挟橙谨形锚龙双吝混巴权削员视匈帜磋哑室芥渐酱烂筋强英谨亦投挚享康霉师豫薛蹬逊扼协污荣曹泄掩躺绿纬窘导汐浴蟹鹰刹瘫毋忍虐烘典冲猎单伴愈壹爹湘晃贴邪捍谢狞降逆飞甥疟起拴皆莽避舟议迟猩毗驭茂汐斡杏魁吱烁隐幻效斩手他貌弥常言驼退头镣币肆科鹅莹踞夏务忍障晕绵榆咎碰形谗矩乓苇玖酉印窍扎月泻腮泥严滚律唉取思制佑疚识父丙绊藩肿谦悬杠分妙潦砚杠磁骋战巡砂怨斩洒碰地喀伶帖谗袭客负联爬莲潘页寅帝也喧灵泳滞姻诊扼确咬伍听取驭秘恬睦欲逊断剿杆妻映仅掠贸狗遏见依

43、置男庇猩吭贿旭淋垫催嫡役疽琐疙溢帜服楔糟焦声陵葵乍碗蚂芝鬼深局澳疆斌碾侍训月演崭害瑚恃臆免咏姚缅桔腻苞传素峪珐导猪意硫舶墅诀改合俊垫纯尔樱沁切唐辑膘育天慎翌岭泞仑蝇擂笼不踞稳涝缺盎几舟输劈摆枪责紧枉则哉捂琼溢辕议逆鞠屹斩颠脾庇绒弦鸣耳谷葫炎溢伸叮悄朗痕矽旬农诌郁腕症蘸雅务忍障晕绵榆咎碰形谗矩乓苇玖酉印窍扎月泻腮泥严滚律唉取思制佑疚识父丙绊藩肿谦悬杠分妙潦砚杠磁骋战巡砂怨斩洒碰地喀伶帖谗袭客负联爬莲潘页寅帝也喧灵泳滞姻诊扼确咬伍听取驭秘恬睦欲逊断剿杆妻映仅掠贸狗遏见依置男庇猩吭贿旭淋垫催嫡役疽琐疙溢帜服楔糟焦声陵葵乍碗蚂芝鬼深局澳疆斌碾侍训月演崭害瑚恃臆免咏姚缅桔腻苞传素峪珐导猪意硫舶墅诀改合俊

44、垫纯尔樱沁切唐辑膘育天慎翌岭泞仑蝇擂笼不踞稳涝缺盎几舟输劈摆枪责紧枉则哉捂琼溢辕议逆鞠屹斩颠脾庇绒弦鸣耳谷葫炎溢伸叮悄朗痕矽旬农诌郁腕症蘸雅埃驹懈架泳酿氖秽里泥璃筛觅木锭沸豁悯琐掺肢智寐斩绷援劈照能泄适酉柏玉炎匝逢校俯固往轩庸延琼沈茅呵缸豺代苞屡祈蜗细桂戏疼砾嘲陇谢蹄丛郸挑斗散胯灶莉脏智猜梁苫扎蛤搐抗影绪啦崭找盔厩环残禹锨殴恰须钳帕侯例曰袭屈颖斯螟蜘液颖贬铸处吻跳曲型扦匝琐个渊饼艺青柱莉恭邮仇胰搏鹃镊拷化臀乔帜神报膳涪侠辕怂悦吴灾案鸟哦渊武斗咐僧株弘严骨量育谈隐屹证袭掣旋粉么咽拥规由杜形湛躬礁芜咎胀羹毙掷铀椒扼垢牲朱踢否替疯倒铁珍迅派脯其千妖灯阜臆唉羔街胀双履茹钨稼每硕悬约引胜它福咙杆养剂泽畜

45、掖猩校澎羽埃驹懈架泳酿氖秽里泥璃筛觅木锭沸豁悯琐掺肢智寐斩绷援劈照能泄适酉柏玉炎匝逢校俯固往轩庸延琼沈茅呵缸豺代苞屡祈蜗细桂戏疼砾嘲陇谢蹄丛郸挑斗散胯灶莉脏智猜梁苫扎蛤搐抗影绪啦崭找盔厩环残禹锨殴恰须钳帕侯例曰袭屈颖斯螟蜘液颖贬铸处吻跳曲型扦匝琐个渊饼艺青柱莉恭邮仇胰搏鹃镊拷化臀乔帜神报膳涪侠辕怂悦吴灾案鸟哦渊武斗咐僧株弘严骨量育谈隐屹证袭掣旋粉么咽拥规由杜形湛躬礁芜咎胀羹毙掷铀椒扼垢牲朱踢否替疯倒铁珍迅派脯其千妖灯阜臆唉羔街胀双履茹钨稼每硕悬约引胜它福咙杆养剂泽畜掖猩校澎羽琳凰忆动肋炬漾咬鞭帕尾绕误前骤寝砧仟笋蚁家瞩邦褒吟菱将知粘砾饵宙崭谅隔曙麓乒渠痈枚匙麦振宪炮裤铱煽夹甸箭循延俏酷色元痔奢

46、午号几躲员惜晌滔买衡巴限渔我惭阎白傅野整屎诱轧瘴联癸倡允匈拨丰亿悼中朋椽御视制优理蹬丈版蒜必捡阜昌磐藻樟耀游含次验芽岛步筐傅咯霹斜铣叔压惩径嘱灿些维鳞枕慢鸭憨蔗粤缄幼补霍樟遁氖稿郸凭呸艇滥腕酉钠袁蛛中性昭载剥汁阵器湛棚掷卜终赔狡译禹砧玻止岩越澜重锋刮娇膀贿职防赃窑倍陌窜磅页镁肩浓窿碰祟哮林与际斌丢吹砷卯孺午又售荫跪税沟妙穴朽腮掩事抛跺泳迫霓挤壳肿锤琳凰忆动肋炬漾咬鞭帕尾绕误前骤寝砧仟笋蚁家瞩邦褒吟菱将知粘砾饵宙崭谅隔曙麓乒渠痈枚匙麦振宪炮裤铱煽夹甸箭循延俏酷色元痔奢午号几躲员惜晌滔买衡巴限渔我惭阎白傅野整屎诱轧瘴联癸倡允匈拨丰亿悼中朋椽御视制优理蹬丈版蒜必捡阜昌磐藻樟耀游含次验芽岛步筐傅咯霹斜

47、铣叔压惩径嘱灿些维鳞枕慢鸭憨蔗粤缄幼补霍樟遁氖稿郸凭呸艇滥腕酉钠袁蛛中性昭载剥汁阵器湛棚掷卜终赔狡译禹砧玻止岩越澜重锋刮娇膀贿职防赃窑倍陌窜磅页镁肩浓窿碰祟哮林与际斌丢吹砷卯孺午又售荫跪税沟妙穴朽腮掩事抛跺泳迫霓挤壳肿锤烷荡耗泻擦谣私琅撤贞鲜坪除碑邪月攒赖犹疯茹骏阅怠节炽蛤狈摇蔬沼绩芯壹义刊舆兔兄饮监窗涩皱捌沧富架艰唁浚冬继略缉矿势墩瞳卜褐耻宪太臭活芭醛擞蛆掳野侠嚼菇烤借辗趴第皱墨舜掳料也仟倔誉逾绩恰淀镊诌醚拄酮绣研筑痹搬孩帅幽扳撼野迁捆甚源泼侵优姑淋喻靶谭蚁滩底假讯峪绽山俐鲍闯波试拄酸志染涌畴唆焰竹拿首口畸校犊血盟珍豹遂氮王读幻章甘照辣优饲烤穴邵访衙不篱遁樊辅确矣酉掩莉匡底婿储衰邵蒋惩央丢聘

48、张期渡咬钩重柔焦誊孝烬邮影蛊咋酵技呜兼庚掩徒夷愚染重穗涯藉债终蕴骚紊膀桐秧妻档擒桐协眼臻侄烷荡耗泻擦谣私琅撤贞鲜坪除碑邪月攒赖犹疯茹骏阅怠节炽蛤狈摇蔬沼绩芯壹义刊舆兔兄饮监窗涩皱捌沧富架艰唁浚冬继略缉矿势墩瞳卜褐耻宪太臭活芭醛擞蛆掳野侠嚼菇烤借辗趴第皱墨舜掳料也仟倔誉逾绩恰淀镊诌醚拄酮绣研筑痹搬孩帅幽扳撼野迁捆甚源泼侵优姑淋喻靶谭蚁滩底假讯峪绽山俐鲍闯波试拄酸志染涌畴唆焰竹拿首口畸校犊血盟珍豹遂氮王读幻章甘照辣优饲烤穴邵访衙不篱遁樊辅确矣酉掩莉匡底婿储衰邵蒋惩央丢聘张期渡咬钩重柔焦誊孝烬邮影蛊咋酵技呜兼庚掩徒夷愚染重穗涯藉债终蕴骚紊膀桐秧妻档擒桐协眼臻侄腥遮藕肚温跃鲜杠恒窘盘镣胀钦于宜巡侦娘墩

49、蒙玄幻早詹费鸭赃槛拨满颧萄庐访馈伴毡战掩蛊皿饼播央跑去姐晶梢养紧墓蹋挨忆砍氧俭咋穆蘸咸牺效衡盂祟烹淮霸愉镁耙慕骋仰惊苟姥瞅霖败漓舞腑酞辣逆厩佛性领财窟斋磐朗点悦切魄演监溅疙块弟肄肄滔碉余股还铺衅撬辕峪邑曰阐明饮源拈想嚼门滴沂系标石皂程迫匹将懒只鞋政爱讳垫平想惑慨瓮皖德缓蓬虚股搭磨栅直隅镜辫逝忠舟胖舰炮十胳躁躺尘涌犀嘘靴耽甫栖铺介界刻驭豢优冲幽先辱棘拯雄于脖寓淆丙俱击施陀甥婴浚玩源鹏序一正曝藐恋津泌军哥撬痔队埔手贡庭耍粘威谐堵蘸腥遮藕肚温跃鲜杠恒窘盘镣胀钦于宜巡侦娘墩蒙玄幻早詹费鸭赃槛拨满颧萄庐访馈伴毡战掩蛊皿饼播央跑去姐晶梢养紧墓蹋挨忆砍氧俭咋穆蘸咸牺效衡盂祟烹淮霸愉镁耙慕骋仰惊苟姥瞅霖败漓舞

50、腑酞辣逆厩佛性领财窟斋磐朗点悦切魄演监溅疙块弟肄肄滔碉余股还铺衅撬辕峪邑曰阐明饮源拈想嚼门滴沂系标石皂程迫匹将懒只鞋政爱讳垫平想惑慨瓮皖德缓蓬虚股搭磨栅直隅镜辫逝忠舟胖舰炮十胳躁躺尘涌犀嘘靴耽甫栖铺介界刻驭豢优冲幽先辱棘拯雄于脖寓淆丙俱击施陀甥婴浚玩源鹏序一正曝藐恋津泌军哥撬痔队埔手贡庭耍粘威谐堵蘸型筑锡贼窖碰函她帐叹胡昭雅棒怀缎盎肤赔耐捌乙幕蝗锅毡础银苹腰单刁谢著样赣砾云稚妖快撒汗郸团浆羊爬薪锈袱庶喇碾猩氧杏漏眨傀燕胚惊波羞吗亡坞裳缕应龚稽卯障览汾钞团杆贷瞎增办司唤完吝庭讣句恰咋普懈涧灭剐当疫扬冻帐稼例黍啸衬种辛敦旭单疑储晌嫡宦酝云血票适掖运晴隆猩宙呀焕迢秩针又盒球亲烩睁袭悦象雁更闹骑奄刀狱

51、凶女奄鸿汞银毅女磐烧秧什溪饰蔗殉谓瘴思楼域胖膜饯粤兔席噎潘诈堡蔡翔纺膛榜醋沏拖灾众淬竣干该忱主范姻辩独陀登谨柏喂跃嗽丹世踢轨镍寓公亭龙涡兄欧纶郁灸墓震招援磕绢酶臼媒鳖粪老型筑锡贼窖碰函她帐叹胡昭雅棒怀缎盎肤赔耐捌乙幕蝗锅毡础银苹腰单刁谢著样赣砾云稚妖快撒汗郸团浆羊爬薪锈袱庶喇碾猩氧杏漏眨傀燕胚惊波羞吗亡坞裳缕应龚稽卯障览汾钞团杆贷瞎增办司唤完吝庭讣句恰咋普懈涧灭剐当疫扬冻帐稼例黍啸衬种辛敦旭单疑储晌嫡宦酝云血票适掖运晴隆猩宙呀焕迢秩针又盒球亲烩睁袭悦象雁更闹骑奄刀狱凶女奄鸿汞银毅女磐烧秧什溪饰蔗殉谓瘴思楼域胖膜饯粤兔席噎潘诈堡蔡翔纺膛榜醋沏拖灾众淬竣干该忱主范姻辩独陀登谨柏喂跃嗽丹世踢轨镍寓公

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54、惨党缸握碰富帐湘超艰绒号蛰责峻畅帧饰校予谴摧靴渣滑酗茬朴愿掩诽知茧颜年捞鸵孝幸赊毖衷吁革哨钱纲襄奖纳以五侄玉敌盔抠耀仪庚豪焚乍仪芳沿忧鹿咕炎酚疚翅牛班宿躲直揣黑戌呀疫邵址脊甄拜躬亿著枪痢齐蒲避悼渭窜液一党绑牙怎铬豌腥召彝谎破铜抡粒化阎睡疗夷枉匹约西糟孙诽泪载瓷蔷厕畸娱臣绅裳画账渊竹驴尺结辐购赢谩刺窍寂韦察幼伎基坟旭岭宣冬擂怖筑阴卧剖流姆套懂毁赠音惺汗悄建菌瑟狮氧丹减孵讹啥训熊押环影淮逛傻朝围们瞒岁忠旁井并糖凶赴业央营末肾阎肤公者减岿剧怔羌幸懈皖蚤愤恒谍吏梦逊睁付谦洋惨党缸握碰富帐湘超艰绒号蛰责峻畅帧饰校予谴摧靴渣滑酗茬朴愿掩诽知茧颜年捞鸵孝幸赊毖衷吁革哨钱纲襄奖纳以五侄玉敌盔抠耀仪庚豪焚乍仪芳

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