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1、2013-20142013-2014学年度实验专题复习学年度实验专题复习培养基的配制称量溶化调pH分装包扎灭菌（高压蒸汽灭菌）接种固体培养基平板划线（接种环）、稀释涂布（玻璃刮刀）液体培养基用接种环蘸取菌液（扩大培养）培养 固体培养基倒置，37恒温培养箱，24h左右液体培养基空气浴或水浴培养箱（摇床），震荡培养固体培养基单菌落液体培养基培养液变浑浊观察 废弃菌种和培养基灭菌后丢弃 微生物培养的基本程序一、光学显微镜操作技术（制片、染色、观察）1.实验目的：观察细胞或细胞器的形态、显微结构（如有丝分裂、线粒体、叶绿体）观察细胞的活性或生理变化（如细胞质流动、质壁分离及复原）观察细胞内特定物质的分
2、布（如DNA、RNA的分布、脂肪的鉴定）微生物的计数（探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化）2.实验原理：结构本身有颜色、易观察，不染色（+变化原理）（如观察叶绿体、细胞质流动、质壁分离及复原）结构本身无颜色、不易观察，需染色观察细胞的活性或生理变化活体染色（如观察线粒体健那绿B；观察液泡中性红）观察静态结构或细胞内特定物质的分布染色（如DNA、RNA的分布、脂肪的鉴定、有丝分裂）（3）在可计量空间内计数微生物的数量统计。2.实验原理：3.材料用具：材料：易获得、易处理、易观察用具和试剂（据此可以推测实验原理）（据此可以推测实验原理）4.方法步骤：取材制片观察预处理时间部位方法 撕、切、涂、
3、挑、剪观察漂洗盖片取材展平滴水染色实验实验材料预处理材料预处理取材部位及方法取材部位及方法 花生种子浸泡切花生子叶薄片撕取洋葱鳞片叶内表皮刮取口腔上皮细胞刮取口腔上皮细胞黑藻光下、温暖条件下培养剪取取黑藻叶片观察植物细胞的质壁分离及复原组织中脂肪的检测DNA和RNA的分布观察叶绿体和胞质环流观察线粒体观察细胞有丝分裂剪取根尖撕取洋葱鳞片叶外表皮水培洋葱或大蒜等实验实验染色试剂染色试剂染色现象及原理染色现象及原理 组织中蛋白质检测组织中还原糖检测DNA粗提取和鉴定亚硝酸盐的定量测定苏丹或甲基绿、派洛宁龙胆紫或醋酸洋红双缩脲试剂斐林或本尼迪特二苯胺对氨基苯磺酸、 N-1-萘基乙二胺溶液、 乙酸玫瑰
4、红色蓝色还原Cu（OH）2为砖红色Cu2O碱性条件下，紫色染色体被碱性染料着色橘黄色或红色，亲脂蓝绿色、红色，竞争结合组织中脂肪的检测DNA和RNA的分布细胞的有丝分裂观察线粒体健那绿专一性活细胞染料，蓝绿5.临时临时装片制作装片制作擦擦滴滴取取展展盖盖染染2024/7/29he9临时装片的制作方法以下制片方法分别用于什么实验？切片法整体装片法涂片法压片法撕片法2024/7/29he106.显微观察的一般方法：显微观察的一般方法： 显微镜结构显微镜结构: :机械结构、光学结构机械结构、光学结构 凹面、平面反光镜、遮光器、通光孔凹面、平面反光镜、遮光器、通光孔 物镜、目镜镜头长短与放大倍数物镜、
5、目镜镜头长短与放大倍数he12 显微镜取放显微镜取放 显微观察：（低倍显微观察：（低倍高倍）高倍） 低倍显微镜观察：低倍显微镜观察： 调光调光调焦（粗、细）调焦（粗、细）调物象位置调物象位置2024/7/29he14普通显微镜的一般操作程序普通显微镜的一般操作程序低倍镜低倍镜高倍镜高倍镜把装片放在载物台上，使材把装片放在载物台上，使材料对准通光孔，压上压片夹料对准通光孔，压上压片夹转动粗准焦螺旋下降镜筒，转动粗准焦螺旋下降镜筒，使低倍物镜接近装片切勿触及使低倍物镜接近装片切勿触及左眼注视目镜中，转动粗准左眼注视目镜中，转动粗准焦螺旋，慢慢上升镜筒，直到焦螺旋，慢慢上升镜筒，直到视野中出现物象为
6、止视野中出现物象为止 转动细准焦螺旋，使视野中转动细准焦螺旋，使视野中物象清淅物象清淅 在低倍镜下看清物象，在低倍镜下看清物象，要把目标移到视野中央；要把目标移到视野中央； 转动转换器，使高倍物转动转换器，使高倍物镜对准通光孔；镜对准通光孔；顺时针或逆时针转动细顺时针或逆时针转动细准焦螺旋，直到调清物象准焦螺旋，直到调清物象为止为止 改用凹面反光镜，增加改用凹面反光镜，增加视野光亮度视野光亮度2024/7/29he15问题：问题： 低倍镜和高倍镜光亮度差异及调节低倍镜和高倍镜光亮度差异及调节无色透明结构的观察无色透明结构的观察手动装片的方向和视野中物象移动方向的关手动装片的方向和视野中物象移动
7、方向的关系系低倍物镜转换为高倍物镜的操作低倍物镜转换为高倍物镜的操作 （4）成像）成像问题问题倒像倒像-移片移片放大倍率放大倍率-目目物物 视野直径与放大倍率成反比野直径与放大倍率成反比 放大倍数越大，放大倍数越大，视野亮度越小野亮度越小2024/7/29he17苏丹染色结果2024/7/29181猪脂肪细胞苏丹染色染色10分钟分钟 实验步骤实验步骤2024/7/29he23水培促水培促根长至根长至1cm育根育根鉴鉴别别分分裂裂相相绘出生物图绘出生物图观察观察10%盐酸盐酸1015min解离解离1011或或1516时时剪根剪根用清水反用清水反复冲洗复冲洗23次次漂洗漂洗龙胆紫染龙胆紫染液液30
8、秒秒染色染色盖盖片片后后缓缓挤挤压压、轻轻扣击扣击压片压片 用显微镜观察根尖分生组织用显微镜观察根尖分生组织 细胞的有丝分裂细胞的有丝分裂质壁分离及复原实验现象2024/7/29he242024/7/29he252024/7/29he26保卫细胞气孔（2005全国）植物叶片表皮上分布着大量的气孔，气孔结构如图所示。当组成气孔的细胞（保卫细胞）吸水后，会膨胀变形，气孔开启。反之细胞失水收缩，气孔关闭。请根据所给的材料和用具，设计一个实验，证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验材料与主要用具 、实验步骤、预测实验结果并做出解释。2.实验原理?1.实验目的?3.材料用具:4.方法步骤:取材:观察
9、：制片:处理:再观察:菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等。用镊子撕取菠菜叶下表皮 载玻片上滴一滴清水，将下表皮平展放入清水中，盖上盖玻片，制成临时装片。将临时装片放在显微镜的载物台上，先在低倍镜下找到气孔，移到视野中央，再用高倍镜进行观察，记录观察到的气孔状态。在盖玻片的一侧滴上浓盐水，在另一侧用吸水纸引流，反复多次 。连续观察气孔的变化，并作记录。 质壁分离及其复原实验的应用5.预期实验结果(现象)及解释： 在清水中气孔开启: 因为当细胞液浓度大于细胞外溶液的浓度时，保卫细胞吸水膨胀变形，气孔开启。在浓盐水中气孔关闭: 因为当细胞液浓度小于细胞外溶液的浓度时，保卫细胞失水收缩，气孔关闭。 气孔具有开启和关闭的功能6.实验结论: 具备验证简单生物学事实的能力，能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。（2010新课标卷）若要在普通显微镜下观察到质壁分离、RNA和脂肪，下列四组材料中应选择的一组是 A水稻胚乳和花生子叶B天竺葵叶和水稻胚乳C紫色洋葱和花生子叶D天竺葵叶和紫色洋葱
