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1、By LauraBy Laura检测检测系系统的方法学的方法学性能性能验证新疆医科大学新疆医科大学临临床医学院床医学院检验检验系系 张张朝霞朝霞 教授教授1a教学目的与要求教学要求：教学要求：掌握：掌握：定性定性试验和定量和定量试验方法学方法学评评价价的主要指的主要指标标，定量，定量试验的性能的性能验证方法。方法。熟悉：熟悉：定性定性试验评评价的内容和方法价的内容和方法了解：了解：检测检测系系统评统评价的基本步价的基本步骤骤2a1.1.测测量量误误差：差：测测量量结结果果减去被减去被测测量的量的真真值值的差，的差，简简称称误误差。差。2.2.随机随机误误差：差：测测量量结结果与在重复条件下，果
2、与在重复条件下，对对同一被同一被测测量量进进行无限多次行无限多次测测量所得量所得结结果的平均果的平均值值之差。之差。3.3.系系统误统误差：在重复性条件下，差：在重复性条件下，对对同一被同一被测测量量进进行无限多行无限多次次测测量所得量所得结结果的平均果的平均值值与被与被测测量的真量的真值值之差称之差称为为系系统统误误差。亦称差。亦称为为正确度正确度复复习习基基础础知知识识3a4 4、正确度：、正确度：检测结检测结果离真果离真值值的偏移程度的偏移程度5 5、精密度：、精密度：表示表示测测量量结结果中随机果中随机误误差大小的程差大小的程度。度。6 6、准确度：、准确度： 准确度是准确度是测测量量
3、结结果中果中系系统误统误差（正确度）差（正确度）与与随机随机误误差（精密度）差（精密度）的的综综合合。4a定量定量试验方法的方法的验证和确和确认试验二二. .更改更改检测系系统的确的确认试验 准确度（准确度（EP9EP9） 精密度（精密度（EP5EP5） 可可报告范告范围（EP6-P2EP6-P2） 参考区参考区间（C28-C28-A2A2） 分析灵敏度（分析灵敏度（ EP17-AEP17-A） 线性范性范围（EP6-AEP6-A） 分析特异性分析特异性( (包括干包括干扰物物质）（）（ EP7-PEP7-P）5a一一. .未更改未更改检测系系统的的验证1 1、精密度（批内、批、精密度（批内、
4、批间）2 2、准确度（、准确度（标准物准物质、标准方法、方法准方法、方法学比学比对）3 3、可、可报告范告范围（验证最大稀最大稀释倍数）倍数）4 4、参考区、参考区间（检测2020个正常个正常样本本验证）定量定量试验方法的方法的验证和确和确认试验6a精密度精密度评评价价 一一 二二 三三第一节 定量检测系统的性能评价 正确度正确度评评价价线线性范性范围围和可和可报报告范告范围围的的评评价价7a第8页测测定系定系统统方法学方法学操作程序操作程序校准品校准品仪仪器器试剂试剂配方配方和来源和来源一、一、测测定系定系统统的关的关键键要素要素8a二、二、评评价的基本步价的基本步骤骤 1. 确定方法的确定
5、方法的质质量目量目标标，总总允允许误许误差差 2. 选选定定评评价指价指标标有量有量值值溯源的配套溯源的配套检测检测系系统统，正确度、精正确度、精密度、可密度、可报报告范告范围围、参考区、参考区间验证间验证。 不配套的不配套的检测检测系系统统：线线性范性范围围、回收和干、回收和干扰试验扰试验 3. 收集收集评评价的价的实验实验数据数据 4. 判断方法的判断方法的临临床可接收性床可接收性熟悉熟悉9a三、三、评评价文件（价文件（1 1）EP5-AEP5-A：临临床化学床化学设备设备操作精密度操作精密度评评价价 核准指南核准指南EP6-AEP6-A：定量分析方法的：定量分析方法的线线性性评评价：价：
6、EP7-PEP7-P：临临床化学床化学实验实验干干扰扰 ，用于干，用于干扰扰物物对检测结对检测结果影果影响的定性。响的定性。 EP9-AEP9-A：用病人：用病人标标本本进进行方法学比行方法学比较较和偏倚和偏倚评评估估 ，主要主要用于用于检测检测两种两种临临床方法或床方法或设备间设备间的偏倚。的偏倚。10a评评价文件（价文件（2）EP10-AEP10-A：定量：定量实验实验室方法的初步室方法的初步评评价价EP14-AEP14-A：基：基质质效效应应的的评评价价 EP15-AEP15-A：精密度和准确度性能的：精密度和准确度性能的应应用用EP21-PEP21-P（NEWNEW）：）：临临床床实验
7、实验方法方法总总分析分析误误差的差的评评估估11a1.1.批内方案批内方案2.2.批批间间方案方案3.EP3.EP方案（方案（EP5-EP5-，EP15EP15A A）四、四、评评价方法价方法（一）精密度（一）精密度评评价价试验试验12a5 5方案方案1.1.试验样试验样品品 一般一般选择选择2 2个，一个在参考区个，一个在参考区间间附近，另一个附近，另一个为为异常异常值值2. 2. 批内精密度批内精密度评评价：即一个价：即一个样样品重复品重复测测定定2020次，次，计计算出均算出均值值，标标准准差和差和变变异系数。异系数。 3.3.总总精精密密度度评评价价：用用2 2个个样样品品每每天天测测
8、定定2 2批批，批批间间测测定定间间隔隔不不得得少少于于2h2h，每每批批平平行行测测定定2 2份份，至至少少共共测测定定2020天天，8080个个数数据据。每每对对结结果果间间的的差差（共共4040个个）代代表表批批内内差差；2 2批批均均值值之之间间的的差差（共共2020个个）代代表表批批间间差差；每每天天4 4个个结结果果的的均均值值（共共2020个个）代代表表日日间间差差。每每批批测测定定至至少少做做一一个个质质控。控。 13a1.1.用有量用有量值值溯源的参考物溯源的参考物质进质进行行测测定定2.2.使用决定性方法或参考方法使用决定性方法或参考方法3.3.与具有量与具有量值值溯源溯源
9、检测检测系系统进统进行比行比对对（1 1）EPEP方案（方案（EP9-EP9-，EP15EP15A A） （2 2）简简易比易比对对方案方案（二）正确度（二）正确度评评价价试验试验14a(1) EP15(1) EP15A A方案方案应应来源于健康人或患者，无明来源于健康人或患者，无明显显干干扰扰因素。因素。全部全部标标本在整个本在整个线线性范性范围围内均内均匀分布，匀分布，标标本至少本至少20例。例。 标标本要求本要求15a测测定方法定方法注意：注意：1 1，可一天，但不超，可一天，但不超过过4 4小小时时内。内。2.2.可可3-43-4天（但尽可能短）。天（但尽可能短）。3.3.每个每个标标
10、本只需本只需测测定定1 1。4.二种方法都有室内二种方法都有室内质质控控16a计计算偏移算偏移1.1.偏移偏移 2. 2.相相对对偏移偏移 3. 3.平均偏移平均偏移 4. 4.相相对对平均偏移平均偏移 5. 5.与与质质量要求比量要求比较较17a 1. 1.选择选择高、中、低高、中、低浓浓度五份度五份样样本同本同时时用各用各台台仪仪器按常器按常规样规样本本测测定的方法，定的方法，测测定其定其各各项项参数，每份参数，每份样样本本测测定定2 2次，求其均次，求其均值值。(2) 简简易比易比对对方法方法18a3.3.计计算与核算与核对标对标准准1 1 计计算：按算：按PTPT计计算方法算方法计计算
11、偏倚。算偏倚。 PT PT计计算公式：（确定算公式：（确定仪仪器器测测定定值值- -比比对仪对仪器器测测定定值值）/ /确定确定仪仪器器测测定定值值1001002 2 标标准：准： 偏移偏倚保持所有偏移偏倚保持所有标标本本结结果差异在果差异在CLIA88CLIA88允允许误许误差的差的1/41/4内内19a检验检验科比科比对记录对记录20a1.1.确定确定测测量的量的线线性范性范围围和和临床上可能出床上可能出现的范的范围。2.2.取取线线性范性范围围内的高内的高值标值标本，用稀本，用稀释释液稀液稀释释，最低，最低预预期期值值在在线线性低限。性低限。3.3.计计算回收率：在可接受范。算回收率：在
12、可接受范。（三）（三）临临床可床可报报告范告范围围21a最大稀最大稀释释倍数倍数测测定定 稀稀稀稀释释释释倍数倍数倍数倍数预预预预期期期期值值值值实测值实测值实测值实测值回收率回收率回收率回收率1 1 1 1：5 5 5 51 1 1 1：101010101 1 1 1：202020201 1 1 1：4040404022a4.4.可可报报告范告范围计围计算：算：（1 1）上限）上限为线为线性范性范围围上上线线稀稀释释倍数倍数（2 2）下限）下限为线为线性范性范围围低限低限23a第第二二节节 定性定性检测检测系系统统的性能的性能验证 一、一、验证的内容的内容（掌握）（掌握）: : （1 1）敏
13、感性敏感性 （2 2）特异性特异性 （3 3）正）正确度确度 （4 4）符合性）符合性 （5 5）精密度）精密度(Precision)(Precision) （6 6）CUTOFFCUTOFF值验证24a二、定性二、定性临床床应用与分用与分类1 1、定性、定性测定的定的临床床应用用免疫学免疫学测定：感染性疾病、定：感染性疾病、肿瘤瘤标志物志物核酸和基因核酸和基因检测微生物微生物检验细胞学胞学检验寄生虫寄生虫检验验25a2 2、定性、定性实验的的临床分床分类筛查实验：如便潜血、：如便潜血、TPTP诊断断实验：如微生物学培养与：如微生物学培养与细菌菌鉴定定确确认实验：对以上已做出的以上已做出的检验
14、结果果进行行验证和和确确认26a三、三、验证目的和目的和时机（熟悉）机（熟悉）: :1.1.目的：目的：（1 1）评价各定性价各定性检测参数是否参数是否满足足临床床检测和和认可可组织的要求的要求. . （2 2）验证厂家提供的厂家提供的试剂参数能在本参数能在本实验室得到重室得到重现. .27a几个重要概念及几个重要概念及计算公式的回算公式的回顾: :1.1.敏感性敏感性: :将将实际患病者患病者正确正确诊断断为阳性的百分率。阳性的百分率。 计算公式算公式为：真阳性：真阳性/ /（真阳性（真阳性+ +假阴性）假阴性）X 100% X 100% . .2.2.特异性特异性 : :指将指将实际无病者
15、无病者检测为阴性的百分率阴性的百分率。 计算公式算公式为：真阴性：真阴性/( /( 真阴性真阴性+ +假阳性）假阳性） X 100% . X 100% . 28a 阳性阳性结果的可靠性（果的可靠性（预示示值）：）：即即测定定为阳性的阳性的标本本实际上上为阳性的可能性。阳性的可能性。=真阳性真阳性/ /（真阳性（真阳性+ +假阳性）假阳性）100%100% 阴性阴性结果的可靠性（果的可靠性（预示示值）：）： 则为一份一份给出阴性出阴性结果的果的样本本实际上上为阴性的可靠性。阴性的可靠性。= = 真阴性真阴性/ /（真阴性（真阴性+ +假阴性）假阴性）100%100%29a（一）准确度（一）准确度
16、验证: :1 .1 .样本的本的临床床诊断已知（敏感性、特异性）断已知（敏感性、特异性） 室室间质评材料材料 ( (卫生部生部) ) 厂商提供的已厂商提供的已赋值的参考材料的参考材料 用参考方法或决定方法定用参考方法或决定方法定值的材料（或的材料（或金金标准准诊断的断的标本）。本）。 30a选取取4040份（份（2020份）份）样本本, ,最好阴阳性各半最好阴阳性各半随机盲法重新分号随机盲法重新分号检测样本本将所有将所有检测结果果汇总填表填表计算算评价性能指价性能指标31a32a敏感度敏感度 = 100%= 100%A A/ /（A+CA+C） 特异性特异性 = 100%= 100%D D/
17、/（B+DB+D） 相关相关样本的患病率本的患病率 = 100%= 100%（A+CA+C）/N/N阳性阳性结果果预测值（PVPPVP） = 100%= 100%A A/ /（A+BA+B） 阴性阴性结果果预测值 （PVNPVN）= 100%= 100%D D/ /（C+DC+D） 方法效率（正确率）方法效率（正确率） = 100%= 100%（A+DA+D）/N/N33a2 2 . .样本的本的临床床诊断未知（符合性）断未知（符合性）同一同一项目不同目不同检测方法或方法或仪器的比器的比对适用范适用范围: :一个一个项目有两种以上的方法或者两台目有两种以上的方法或者两台以上的以上的仪器器( (
18、包括同一型号的包括同一型号的仪器器) )同同时检测, ,需要需要进行一致性比行一致性比对. .34a选取取4040份（份（2020份）份）样本本, ,最好阴阳性各半最好阴阳性各半随机每随机每8 8（4 4）份分成一）份分成一组两种方法两种方法( (或两台或两台仪器器) )每天平行每天平行检测一一组样本本将所有将所有检测结果果汇总评价符合率价符合率35a36a阳性符合率阳性符合率 = 100% = 100% a a/(a+c)/(a+c)阴性符合率阴性符合率 = 100% = 100% d d/(b+d)/(b+d)总符合率符合率 = 100% (a+d)/n37a更更换批号的批号的简易比易比对
19、： 新新鲜患者血清阴性患者血清阴性2 2例，阳性例，阳性3 3例，阳性包含有例，阳性包含有S/COS/CO高、中、低高、中、低值，用新旧批号，用新旧批号试剂检测。低低值避开避开“灰区灰区”夹心法：心法：S/COS/CO低低值1.21.23 3竞争法：争法：S/COS/CO低低值0.40.40.60.6判断判断标准：符合率准：符合率为100%100%为可接受。可接受。38a二二. .精密度精密度验证: :1.1.批内精密度批内精密度: :同一份同一份样本在同一批次内平行重复本在同一批次内平行重复检测2020次次. .然后然后计算均算均值,SD,SD和和CV.CV.2.2.批批间精密度精密度: :
20、同一份同一份样本本连续检测2020天天, ,每天平行每天平行检测双孔双孔. .然后然后计算均算均值,SD,SD和和CV.CV.注意注意:1.:1.用用S/COS/CO比比值进行行统计计算算. . 2. 2.最好最好选择临界界值, ,或弱阳性或弱阳性样本本. .判断判断标准准: ELISA: ELISA批内批内CV CV 10%10%，批，批间20%20%39a补充：自充：自动加加样针的携的携带污染率的染率的验证1 1、取、取强阳性阳性样品和一阴性品和一阴性样品，按品，按l l（阳）、（阳）、2 2（阳）、（阳）、3 3（阴）、（阴）、4 4（阴）、（阴）、5 5 （阴）的（阴）的顺序序测定。定
21、。2 2、计算携算携带污染程度：染程度：携携带污染率染率= 3= 3（阴）一（阴）一5 5（阴）（阴）/2/2（阳）一（阳）一5 5（阴）（阴）100100（用（用检测的的ODOD值计算）。算）。3 3、符合厂商、符合厂商标准准40a小 结本章本章节节主要主要分分别介介绍绍定量定量试验和定和定性性实验实验方法学方法学评评价的主要指价的主要指标标，评评价的内价的内容容和和和和步步骤骤。41a思考思考题题1 1、何何谓定量定量试验，何，何谓定性定性试验。 2 2、定量和定性定量和定性试验方法方法评评价指价指标标有哪些？各解有哪些？各解决哪些决哪些误误差差类类型？型？ 4 4、定量定量试验和定性和定性试验评评价精密度和正确度价精密度和正确度实实验验的方法的方法包括哪些？包括哪些？ 5 5、系、系统误统误差、随机差、随机误误差、差、检测检测系系统统的概念。的概念。42a43a
