高效液相色谱法1课件

《高效液相色谱法1课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱法1课件（46页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、 第四章第四章 高效液相色谱法高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography高效液相色谱法(1)课件高效液相色谱法(1)课件 本章本章要求要求 了解高效液相色谱法的优缺点了解高效液相色谱法的优缺点 了解高效液相色谱仪的结构了解高效液相色谱仪的结构 掌握常用检测器的原理及应用范围掌握常用检测器的原理及应用范围高效液相色谱法(1)课件定义：以液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法定义：以液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC）：）：20世纪世纪60年代末年代末70年代年代技术：技术：高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器

2、高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器特点：速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化特点：速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化一一、 概述概述4.1 高效液相色谱法简介高效液相色谱法简介高效液相色谱法(1)课件1高效液相色谱法与经典液相色谱法比较高效液相色谱法与经典液相色谱法比较 高高速速：HPLC分分离离效效率率高高，速速度度快快，一一次次几几分分钟钟和和几几十十分分钟钟就可完成。色谱柱的寿命长，可达两年以上。就可完成。色谱柱的寿命长，可达两年以上。 高高效效：HPLC高高压压(26 MPa)下下操操作作，填填料料颗颗粒粒小小(250 m)，规规则则均均匀匀的的固固定定相相，传传质质阻阻力力小小，柱

3、柱效效高高(N=400060000 块块/m)，分离效率高。，分离效率高。 高高灵灵敏敏度度：现现代代高高效效液液相相色色谱谱仪仪普普遍遍配配有有高高灵灵敏敏度度检检测测器器，使使分分析析灵灵敏敏度度比比经经典典色色谱谱有有大大提提高高（紫紫外外检检测测器器最最小小检检测测限可达限可达10-9 g；荧光检测器最小检测限可达；荧光检测器最小检测限可达10-1110-13 g。 高高自自动动化化：HPLC进进样样量量小小(XX0 L)。带带有有自自动动进进样样装装置置和和工作站。工作站。高效液相色谱法(1)课件2高效液相色谱法与气相色谱法的比较高效液相色谱法与气相色谱法的比较 适用范围适用范围 G

4、C适适用用于于沸沸点点低低、热热稳稳定定性性好好、中中小小分分子子量量的的化化合合物物，HPLC不不受受此此种种限限制制。气气相相色色谱谱一一般般都都在在较较高高温温度度下下进进行行，而高效液相色谱法则经常可在而高效液相色谱法则经常可在室温条件室温条件下工作。下工作。 流动相流动相 GC流流动动相相仅仅运运载载样样品品，不不起起分分离离作作用用，但但无无毒毒，易易于于处处理理。而而HPLC流流动动相相除除了了运运载载样样品品外外，还还有有分分离离作作用用，可可改改变变流流动动相相组组成成，进进行行有有效效的的分分离离。但但流流动动相相一一般般有有毒毒，费费用高。用高。高效液相色谱法(1)课件

5、色谱柱色谱柱 GC柱柱很很长长，特特别别是是毛毛细细管管柱柱可可长长至至几几十十米米至至上上百百米米，柱柱效效很很高高(理理论论塔塔板板数数N=104106)。HPLC柱柱较较短短，一一般般为为1525 cm，柱效，柱效(理论塔板数理论塔板数N=103104)，低于，低于GC柱。柱。 检测器检测器 与与GC相比，相比，HPLC检测器种类较多。检测器种类较多。 制备色谱制备色谱 GC难难以以制制备备样样品品，因因为为进进样样量量小小，难难以以收收集集或或被被破破坏坏。HPLC可进行制备，即制备色谱。可进行制备，即制备色谱。高效液相色谱法(1)课件一一高效液相色谱仪的结构高效液相色谱仪的结构 4.

6、2 高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱法(1)课件一般一般分为分为4个主要个主要部分：部分：高压输液系统、进样系统、分高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度洗此外还配有辅助装置：如梯度洗脱、自动进样及数据处理等。脱、自动进样及数据处理等。工作过程如下：工作过程如下： 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入

7、色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。 高效液相色谱法(1)课件数据分析系统输液系统输液系统进样系统进样系统分离系统分离系统检测系统检测系统HPLC的系统组成的系统组成数据处理系统数据处理系统高效液相色谱法(1)课件1. 高压输液系统：高压输液系统： 一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。成，其中高压输液泵是核心部件。高压泵应满足如下要求：高压泵应满足

8、如下要求：流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围。流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围。能抗溶剂的腐蚀，耐酸、耐碱。能抗溶剂的腐蚀，耐酸、耐碱。有较高的输送压力。一般分离，有较高的输送压力。一般分离，6.0104 Pa压力；高效分离，压力；高效分离，要求达到要求达到1.53.0107 Pa的压力或更高。的压力或更高。 泵的死体积要小，便于迅速更换溶剂和进行梯度淋洗。泵的死体积要小，便于迅速更换溶剂和进行梯度淋洗。高效液相色谱法(1)课件常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种: : 恒恒流流泵泵 是是在在一一定定操操作作条条件件下下，输输出出流流量量恒恒定定，与与色谱

9、柱引起阻力变化无关。色谱柱引起阻力变化无关。 恒恒压压泵泵 能能保保持持输输出出压压力力恒恒定定，其其流流量量随随色色谱谱系系统统阻力而变化，保留时间的重现性差。阻力而变化，保留时间的重现性差。 目前恒流泵正逐渐取代恒压泵，恒流泵又称机械泵目前恒流泵正逐渐取代恒压泵，恒流泵又称机械泵，又分，又分机械注射泵和机械往复泵机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的是两种，应用最多的是机械往复泵机械往复泵。高效液相色谱法(1)课件高效液相色谱法(1)课件梯度洗脱装置梯度洗脱装置在液相色谱中，改变流动相可以改善分离效果。因在液相色谱中，改变流动相可以改善分离效果。因在液相色谱中，改变流动相可以改善分离效果。

10、因在液相色谱中，改变流动相可以改善分离效果。因 此在分离复杂混合物时，按照一定的程序连续改变此在分离复杂混合物时，按照一定的程序连续改变此在分离复杂混合物时，按照一定的程序连续改变此在分离复杂混合物时，按照一定的程序连续改变 流动相的组成，可提高分离效率和加快分析速度。流动相的组成，可提高分离效率和加快分析速度。流动相的组成，可提高分离效率和加快分析速度。流动相的组成，可提高分离效率和加快分析速度。梯度洗脱装置就是为此目的而设置的一种装置。梯度洗脱装置就是为此目的而设置的一种装置。梯度洗脱装置就是为此目的而设置的一种装置。梯度洗脱装置就是为此目的而设置的一种装置。梯度洗脱装置有两类：梯度洗脱装

11、置有两类：梯度洗脱装置有两类：梯度洗脱装置有两类：低压梯度：常压下预先按一定的程序将溶剂混合后低压梯度：常压下预先按一定的程序将溶剂混合后低压梯度：常压下预先按一定的程序将溶剂混合后低压梯度：常压下预先按一定的程序将溶剂混合后 再用泵输出色谱柱；再用泵输出色谱柱；再用泵输出色谱柱；再用泵输出色谱柱；高压梯度：将溶剂用高压泵增压后输入色谱系统梯高压梯度：将溶剂用高压泵增压后输入色谱系统梯高压梯度：将溶剂用高压泵增压后输入色谱系统梯高压梯度：将溶剂用高压泵增压后输入色谱系统梯 度混合室，加以混合后送入色谱柱。度混合室，加以混合后送入色谱柱。度混合室，加以混合后送入色谱柱。度混合室，加以混合后送入色

12、谱柱。 高效液相色谱法(1)课件 高效液相色谱法(1)课件在分离过程中，使流动相的在分离过程中，使流动相的组成、极性、组成、极性、pH等等按一定程序连续变化，使样品中各组分能在按一定程序连续变化，使样品中各组分能在最最佳条件下佳条件下出峰，保留时间短、拥挤不堪甚至重出峰，保留时间短、拥挤不堪甚至重叠的组分和保留时间过长而峰形扁平的组分获叠的组分和保留时间过长而峰形扁平的组分获得很好的分离。得很好的分离。通通过过逐逐渐渐改改变变流流动动相相的的组组成成增增加加洗洗脱脱能能力力，梯梯度度洗洗脱脱装装置置将将两两种种或或三三种种、四四种种溶溶剂剂按按一一定定比比例例混合进行二元或三元、四元梯度洗脱。

13、混合进行二元或三元、四元梯度洗脱。高效液相色谱法(1)课件梯度洗脱的优点：梯度洗脱的优点： 改善峰形；改善峰形； 提高柱效；提高柱效； 减少分析时间；减少分析时间；使强烈滞留的组分不容易残留在柱上，保持良好的柱性能使强烈滞留的组分不容易残留在柱上，保持良好的柱性能（但进行下次分析时，更换流动相达到平衡时间长）。（但进行下次分析时，更换流动相达到平衡时间长）。 梯度洗脱梯度洗脱与气相色谱的与气相色谱的程序升温程序升温十分类似，两者的目的相十分类似，两者的目的相同，不同的是程序升温是通过同，不同的是程序升温是通过改变柱温改变柱温，而液相色谱的梯，而液相色谱的梯度洗脱是度洗脱是通过改变流动相的组成、

14、极性、通过改变流动相的组成、极性、pH来达到来达到改变改变k的目的的目的。高效液相色谱法(1)课件在高效液相色谱中，常用的进样方式：在高效液相色谱中，常用的进样方式：高高压压阀阀进进样样：优优点点是是能能用用于于高高压压，适适于于大大体体积积进进样样，重重现现性性好好；缺缺点点是是进进样样阀阀进进样样时时需需排排掉掉一一部部分分试试样样，不不同同的的进进样样量需用不同的量需用不同的定量管定量管，同时峰的扩展也比注射进样大。，同时峰的扩展也比注射进样大。微微量量注注射射器器进进样样：也也可可由由微微量量注注射射器器注注入入取取样样环环少少量量样样品品，即即采采用用较较大大体体积积取取样样环环而而

15、进进少少量量试试样样，进进样样量量由由注注射射器器控控制，试样不充满取样环，只填充一部分体积。制，试样不充满取样环，只填充一部分体积。2. 进样系统进样系统高效液相色谱法(1)课件3. 分离系统分离系统-色谱柱色谱柱 色色谱谱柱柱是是液液相相色色谱谱的的心心脏脏部部件件，它它包包括括柱柱管管与与固固定定相相两两部部分分。柱柱管管材材料料有有玻玻璃璃、不不锈锈钢钢、铝铝、铜铜及及内内衬衬光光滑滑的的聚聚合合材材料料的的其其它它金金属属。玻玻璃璃管管耐耐压压有有限限，故故金金属属管管用用得得较较多多。一一般般色色谱谱柱柱长长1530 cm，内内径径为为45 mm，凝凝胶胶色色谱谱柱柱内内径径312

16、 mm，制制备备柱柱内内径径较较大大，可达可达25 mm 以上。以上。高效液相色谱法(1)课件 固定相固定相 表面多孔固定相表面多孔固定相 全多孔微粒固定相全多孔微粒固定相直径直径210 m，孔径，孔径2100 nm， 比表面积比表面积x00 x0m2/g。现在最广泛采用的填料是全多孔微粒硅胶现在最广泛采用的填料是全多孔微粒硅胶12 m直径直径1025 m高效液相色谱法(1)课件 化学键合固定相化学键合固定相 化学键合相色谱柱化学键合相色谱柱 虽然可将固定液机械地涂附在上述表面多孔硅胶或虽然可将固定液机械地涂附在上述表面多孔硅胶或全多孔硅胶上作固定相，但有许多缺点，因此现在多全多孔硅胶上作固定

17、相，但有许多缺点，因此现在多采用化学键合固定相。采用化学键合固定相。化学键合固定相是在表面多孔化学键合固定相是在表面多孔或全多孔硅胶表面上利用化学反应法通过化学键把有或全多孔硅胶表面上利用化学反应法通过化学键把有机分子结合在载体表面。机分子结合在载体表面。 键合类型：键合类型： 疏水基团：如疏水基团：如C8、C18； 极性基团：极性基团：如丙氨基如丙氨基(-C3H6NH2)、氰乙基、氰乙基(-C2H4CN)；高效液相色谱法(1)课件 离子交换基团，如阴离子交换（离子交换基团，如阴离子交换（-NR3Cl）、阳离子）、阳离子（-SO3H）；键合途径：）；键合途径： SiOC 键型键型 SiOSiC

18、 键型键型 (最常用最常用) SiC 键型键型高效液相色谱法(1)课件 流动相流动相 正相色谱正相色谱 极性：流动相极性：流动相固定相固定相 反相色谱反相色谱 极性：流动相极性：流动相固定相固定相a 流动相纯度要高，与流动相纯度要高，与固定相不相溶固定相不相溶，不发生不发生化学反应化学反应b 价格便宜，毒性小，易于纯化价格便宜，毒性小，易于纯化c 对试样溶解度适宜，不发生沉淀对试样溶解度适宜，不发生沉淀d 粘度小粘度小e 与检测器匹配与检测器匹配极性顺序：水极性顺序：水乙腈乙腈甲醇甲醇四氢呋喃四氢呋喃环己烷环己烷煤油煤油高效液相色谱法(1)课件4. 检测系统检测系统 在液相色谱中，有两种基本类

19、型的检测器在液相色谱中，有两种基本类型的检测器: 溶溶质质性性检检测测器器：仅仅对对被被分分离离组组分分的的物物理理或或化化学学特特性性有有响响应应，有有紫紫外外UVD、荧荧光光FD、二二极极管管阵阵列列检检测测器器DAD等。等。 总总体体检检测测器器：对对试试样样和和洗洗脱脱液液总总的的物物理理或或化化学学性性质质有有响响应应，有有示示差差折折光光检检测测器器RID、电电化化学学检检测测器器ECD、蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器ELSD和质谱检测器和质谱检测器MSD等。等。 P65，表，表4-3高效液相色谱法(1)课件药典中的液相色谱检测器药典中的液相色谱检测器高效液相色谱法(1)课件常用

20、的检测器常用的检测器:(1) 紫外光度检测器：紫外光度检测器：是一种选择性浓度检测器，仅是一种选择性浓度检测器，仅对那些在紫外波长有吸收的物质有响应。对那些在紫外波长有吸收的物质有响应。 作用原理：基于待测试样对特定波长的紫外光有选择作用原理：基于待测试样对特定波长的紫外光有选择性的吸收，试样浓度与吸光度的关系服从比尔定律。性的吸收，试样浓度与吸光度的关系服从比尔定律。 结构：结构：1低压汞灯低压汞灯 2透镜透镜 3遮光板遮光板 4测量池测量池 5参比池参比池 6紫外滤光片紫外滤光片 7双紫外光敏电阻双紫外光敏电阻高效液相色谱法(1)课件现在多数采用氘灯作为紫外光源现在多数采用氘灯作为紫外光源

21、 灯灯流动池流动池 光电二极管光电二极管RS 样品入口样品入口Hg 254Zn 214Cd 229D2 可变可变UV 检测检测器器To amplifier高效液相色谱法(1)课件优点：灵敏度高（最小检测度优点：灵敏度高（最小检测度109 g/mL），对温度和），对温度和流速不敏感，可用于流速不敏感，可用于梯度洗脱梯度洗脱；缺点：只能用于对紫外光有吸收组分的测定，溶剂的选缺点：只能用于对紫外光有吸收组分的测定，溶剂的选择受限制。择受限制。 在高效液相色谱中应用最广，约占在高效液相色谱中应用最广，约占70%。适于梯度。适于梯度洗脱，对流动相速度变化不敏感，流动相组成的变化对洗脱，对流动相速度变化不

22、敏感，流动相组成的变化对检测器响应几乎无影响。检测器响应几乎无影响。 对于在紫外对于在紫外-可见光区无强吸收的组分，需要经过可见光区无强吸收的组分，需要经过衍生化，才可以用紫外检测器，如糖类衍生化，才可以用紫外检测器，如糖类、氨基酸氨基酸、类脂类脂化物化物。不能用在紫外不能用在紫外-可见光有吸收的溶剂作流动相。可见光有吸收的溶剂作流动相。高效液相色谱法(1)课件溶溶剂剂透过波长下限透过波长下限溶溶剂剂透过波长下限透过波长下限水水180n-庚烷庚烷197甲醇甲醇210环乙胺环乙胺200n-丙醇二酸丙醇二酸205四氯化碳四氯化碳265乙腈乙腈190氯仿氯仿245THF230苯苯280丙酮丙酮330

23、甲苯甲苯285乙酸甲酯乙酸甲酯260二氯甲烷二氯甲烷232乙酸乙酯乙酸乙酯260四氯乙烯四氯乙烯280硝基甲烷硝基甲烷3801,2-二氯乙烷二氯乙烷225常用溶剂透过波长限：常用溶剂透过波长限：高效液相色谱法(1)课件(2) 光二极管阵列检测器：光二极管阵列检测器： 是是一一种种更更为为先先进进的的检检测测器器。从从氘氘灯灯辐辐射射通通过过移移动动部部件件（光光闸闸），直直接接通通过过吸吸收收池池、狭狭缝缝、光光栅栅，分分光光后后分分别别照照射射约约千千个个二二极极管管阵阵列列检检测测器器上上，约约10 ms给给出出一一次次信信号号，保保证证保保留留时时间间极极短短的的色色谱谱组组分分的的光光

24、谱谱图图不不失失真真。因因此此数数据据重重现现性性好好，灵灵敏敏度度高高，适适于痕量分析于痕量分析。 P66 图图4.10所示所示高效液相色谱法(1)课件 光电二极管阵列光电二极管阵列检测检测器器 氘灯氘灯 棱镜棱镜池子池子 全息光栅全息光栅二极管阵列二极管阵列512 Diodes190 - 950 nm高效液相色谱法(1)课件优点：优点：获得吸收值是保留时间和波长函数的类似于等获得吸收值是保留时间和波长函数的类似于等高线的三维图；由于获得多种信息，使每一个组分在高线的三维图；由于获得多种信息，使每一个组分在整个波长范围内的光谱信息大大增加，及时得出每一整个波长范围内的光谱信息大大增加，及时得

25、出每一组分的色谱图相应的光谱数据，确定最佳选择性和灵组分的色谱图相应的光谱数据，确定最佳选择性和灵敏度的波长；可以与色谱工作站联用，对每一个峰从敏度的波长；可以与色谱工作站联用，对每一个峰从程序库中进行检索来确定该化合物。程序库中进行检索来确定该化合物。高效液相色谱法(1)课件例如：菲的三维谱图如下例如：菲的三维谱图如下高效液相色谱法(1)课件 荧光检测器：荧光检测器：是是利利用用某某些些试试样样具具有有荧荧光光特特性性来来检检验验的的。许许多多有有机机化化合合物物具具有有天天然然荧荧光光活活性性，其其中中带带有有芳芳香香基基团团的的化化合合物物具具有有荧荧光光活活性很强。一定条件下，荧光强度

26、与物质浓度成正比。性很强。一定条件下，荧光强度与物质浓度成正比。荧荧光光检检测测器器是是一一种种选选择择性性检检测测器器，适适合合于于含含有有-共共轭轭体体系系的的大大分分子子、结结构构复复杂杂的的化化合合物物，如如稠稠环环芳芳烃烃、甾甾族族化化合合物物、酶酶、氨氨基基酸酸、维维生生素素、色色素素、蛋蛋白白质质等等物物质质的的测测定定。最最小小检测限可达检测限可达10-11 10-13 g，可以用，可以用梯度洗脱梯度洗脱。高效液相色谱法(1)课件(4) 示差折光检测器：示差折光检测器： 是一种中等灵敏度是一种中等灵敏度(106 g /mL)的通用型检测器。的通用型检测器。是利用纯流动相和含有待

27、测组分的流动相之间折射率的是利用纯流动相和含有待测组分的流动相之间折射率的差别进行检测的。差别进行检测的。可可分分为为三三类类：反反射射式式；折折射射式式（偏偏振振式式）和和干干涉涉式式。常常用前两种。用前两种。优点：灵敏度适宜，操作简便是一种通用型的检测器；优点：灵敏度适宜，操作简便是一种通用型的检测器；缺点：对温度变化敏感，缺点：对温度变化敏感，不能用于梯度洗脱不能用于梯度洗脱。应用范围：聚合物应用范围：聚合物, , 糖。还用于分析以紫外检测和荧光糖。还用于分析以紫外检测和荧光检测器无法检测的样品。检测器无法检测的样品。高效液相色谱法(1)课件(5) 蒸发光散射检测器（蒸发光散射检测器（E

28、LSD） 结构结构高效液相色谱法(1)课件 ELSD是是90年年代代研研制制的的，是是利利用用在在一一定定条条件件下下粒粒子子的的数数量量不不变变，光光散射强度正比于散射强度正比于由溶质浓度决定的粒子的大小而进行测量的。由溶质浓度决定的粒子的大小而进行测量的。 ELSD原原理理是是基基于于光光线线通通过过微微小小的的粒粒子子时时产产生生光光散散射射现现象象。由由色色谱谱柱柱分分离离的的组组分分随随流流动动相相进进入入雾雾化化器器中中被被高高速速的的载载气气流流（氮氮气气或或空空气气）喷喷成成一一种种薄薄雾雾，进进入入蒸蒸发发器器后后蒸蒸发发成成蒸蒸气气，再再被被光光阱阱捕捕集集，以以防防止止反

29、反射射。蒸蒸气气态态的的溶溶剂剂通通过过光光路路后后，光光线线反反射射到到检检测测器器后后被被记记录录成成基基线线。云云雾雾状状溶溶质质颗颗粒粒通通过过光光路路时时，使使光光线线散散射射后后被被光光电电倍倍增增管管收收集集得到得到样品信号样品信号。 ELSD是是示示差差折折光光检检测测器器的的新新型型替替代代品品，样样品品主主要要用用于于不不产产生生荧荧光光和和又又无无紫紫外外吸吸收收的的有有机机物物如如糖糖类类、高高级级脂脂肪肪酸酸、磷磷脂脂、甘甘油油三三酯酯、维维生生素素、甾甾类类皂皂苷苷等等物物质质的的测测定定。对对梯梯度度洗洗脱脱和和流流动动相相系系统统温温度度变变化不敏感；化不敏感；

30、可用于梯度洗脱可用于梯度洗脱。高效液相色谱法(1)课件ELSD的优缺点：的优缺点： 通用性强，灵敏度高。通用性强，灵敏度高。 对流动相系统温度变化不敏感，可进行梯度洗脱。对流动相系统温度变化不敏感，可进行梯度洗脱。 响应因子具有一致性。响应值仅取决于光束中溶质颗粒的大小和响应因子具有一致性。响应值仅取决于光束中溶质颗粒的大小和数量，检测器对有的物质几乎具有相同的响应因子。数量，检测器对有的物质几乎具有相同的响应因子。 可消除流动相和杂质的干扰，提高分辩率。用于磷脂、皂甙、糖、可消除流动相和杂质的干扰，提高分辩率。用于磷脂、皂甙、糖、聚合物、树脂等无紫外吸收或紫外吸收系数小的化合物检测。聚合物、

31、树脂等无紫外吸收或紫外吸收系数小的化合物检测。 便于应用质谱分析。因为蒸发光散射质量检测器与质谱条件的要便于应用质谱分析。因为蒸发光散射质量检测器与质谱条件的要求是一致的。求是一致的。 受样品组分和流动相挥发性因素限制。要求样品组分应是非挥发受样品组分和流动相挥发性因素限制。要求样品组分应是非挥发性或半挥发性的，而流动相应是挥发性溶剂。性或半挥发性的，而流动相应是挥发性溶剂。 对某些样品线性范围窄，有时不呈现线性关系，定量分析复杂。对某些样品线性范围窄，有时不呈现线性关系，定量分析复杂。高效液相色谱法(1)课件 电化学检测器：电化学检测器：安培检测器：安培检测器：由三电极系统与恒电位仪相连接。

32、工作电极为玻璃或石墨电极，由三电极系统与恒电位仪相连接。工作电极为玻璃或石墨电极，辅助电极是铂丝；从柱后流出物进入反应池，在工作电极表面发生氧化辅助电极是铂丝；从柱后流出物进入反应池，在工作电极表面发生氧化或还原反应，两电极之间有电流通过，电流大小与被测物浓度成正比。或还原反应，两电极之间有电流通过，电流大小与被测物浓度成正比。只能检测电化学活性物质。该检测器选择性好，灵敏度高。如：对肾上只能检测电化学活性物质。该检测器选择性好，灵敏度高。如：对肾上腺素和去甲肾上腺素，检测限达腺素和去甲肾上腺素，检测限达10-12g。极谱检测器：极谱检测器： 基基于于被被测测组组分分可可在在电电极极上上发发生

33、生氧氧化化还还原原反反应应而而设设计计的的一一种种检检测测器器。可可用用于于测测定定具具有有极极谱谱活活性性的的物物质质，如如药药物物、维维生生素素、有有机机酸酸、苯苯胺胺等等。它它的的灵敏度高，适于痕量分析。灵敏度高，适于痕量分析。电电导导检检测测器器：主主要要用用于于离离子子色色谱谱。原原理理是是基基于于物物质质在在某某些些介介质质中中电电离离后后所所产产生生电电导导变变化化来来测测定定电电离离物物质质的的含含量量。电电导导检检测测器器对对pH 7时时不不够够灵灵敏敏，受温度影响较大。受温度影响较大。 P65表表6-3高效液相色谱法(1)课件5. 附属系统附属系统 包包括括脱脱气气、梯梯度

34、度洗洗脱脱、恒恒温温、自自动动进进样样、馏馏分分收收集集以以及及数数据据处处理理等等装装置置。其其中中脱脱气气和和梯梯度度洗洗脱脱装装置置是是高高压压液相色谱仪中尤为重要的附属装置。液相色谱仪中尤为重要的附属装置。 脱脱气气的的目目的的：是是为为了了防防止止流流动动相相从从高高压压柱柱内内流流出出，释释放放出出气气泡泡进进入入检检测测器器而而使使噪噪声声剧剧增增，甚甚至至不不能能正正常常检检测测；溶溶解解在在溶溶剂剂中中的的气气体体进进入入色色谱谱柱柱时时，可可能能与与流流动动相相或或固固定定相相发发生生化化学学反反应应；溶溶解解气气体体还还会会引引起起某某样样品品的氧化降解，带来误差。通常办

35、法是把气泡排出。的氧化降解，带来误差。通常办法是把气泡排出。高效液相色谱法(1)课件 常用方法：常用方法： 低压脱气，电磁搅拌，水泵抽真空，加热。低压脱气，电磁搅拌，水泵抽真空，加热。 以以He脱气，脱气，He在液体中溶解度最小。在液体中溶解度最小。 超声波脱气。超声波脱气。 在线真空脱气。在线真空脱气。 由于塑料膜管线由于塑料膜管线的膜可让气体透过液的膜可让气体透过液体无法透过，所以通体无法透过，所以通过真空泵脱气降压实过真空泵脱气降压实现在线脱气。现在线脱气。高效液相色谱法(1)课件4.3 高效液相色谱的应用高效液相色谱的应用定性应用：保留时间、相对保留值、保留指数定性应用：保留时间、相对

36、保留值、保留指数定量应用：外标法、内标法、归一化法定量应用：外标法、内标法、归一化法联用技术：联用技术： HPLC-MS HPLC-MS-MSHPLC-PDADHPLC-IRHPLC-NMR高效液相色谱法(1)课件离子色谱法是色谱法的一个分支，是一种比较常用的分析技术。它离子色谱法是色谱法的一个分支，是一种比较常用的分析技术。它将色谱的将色谱的“高效高效”分离技术和离子的自动检测技术相结合的一种分分离技术和离子的自动检测技术相结合的一种分析技术。通常从离子交换柱中流出的各种离子可用电导检测器直接析技术。通常从离子交换柱中流出的各种离子可用电导检测器直接检测离子含量。检测离子含量。以双柱型离子色

37、谱仪测定水中以双柱型离子色谱仪测定水中F-为例：为例： 分离柱：分离柱： 低容量阴离子交换树脂；低容量阴离子交换树脂； 抑制柱：抑制柱： 强酸型阳离子交换树脂；强酸型阳离子交换树脂； 淋洗液：淋洗液： Na2CO3 NaHCO3或或 (NaOH)离子色谱法原理离子色谱法原理 试试样样溶溶液液与与强强电电解解质质淋淋洗洗液液一一起起，流流经经低低容容量量离离子子交交换换柱柱，待待测测离离子子顺顺次次流流入入抑抑制制柱柱，以以中中和和淋淋洗洗液液，电电导导显显著著降降低低，并并使使阴阴离离子子转转变变为为强强电电离离的的酸酸，进进入入电电导导检检测测器器进进行行检检测测。此此时时，待待测测离离子子的浓度在一定范围内与溶液的电导率成线性关系，可以定量分析。的浓度在一定范围内与溶液的电导率成线性关系，可以定量分析。离子色谱离子色谱高效液相色谱法(1)课件 计算机计算机积分仪积分仪记录仪记录仪贮液贮液器器样品注入样品注入泵泵分离柱分离柱抑制柱抑制柱电导池电导池高效液相色谱法(1)课件 用电导检测器分析阴离子用电导检测器分析阴离子高效液相色谱法(1)课件 本章本章要求要求 了解高效液相色谱法的优缺点了解高效液相色谱法的优缺点 了解高效液相色谱仪的结构了解高效液相色谱仪的结构 掌握常用检测器的原理及应用范围掌握常用检测器的原理及应用范围高效液相色谱法(1)课件