第十六章弯曲菌属与螺杆菌属

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1、第十六章弯曲菌属 与螺杆菌属第一节 弯曲菌属是一类呈逗点状或是一类呈逗点状或s 形的形的G- 菌，广泛分布菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物与人类的于动物界，其中有些可引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。对人腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病原菌。原菌。 该该菌菌借借助助于于鞭鞭毛毛和和外外膜膜蛋蛋白白与与空空肠肠上上皮皮细细胞胞结结合合，侵侵入入生生长长繁繁殖殖，产产生生肠肠毒毒素素、细细胞胞毒毒素和内毒素等物质，引起肠炎和肠道外

2、感染。素和内毒素等物质，引起肠炎和肠道外感染。 腹腹泻泻是是空空肠肠弯弯曲曲菌菌感感染染最最常常见见的的临临床床表表现现，转转为为粘粘液液脓脓血血样样便便，甚甚至至血血便便。有有发发热热腹腹痛痛、恶恶心心不不适适等等症症状状。可可在在1 1周周内内消消退退，2020患患者者症状可持续症状可持续1-31-3周。周。微生物特性微生物特性1.形态结构形态结构 G-菌体弯曲呈逗点。无芽孢有鞭菌体弯曲呈逗点。无芽孢有鞭 毛。运动活泼，呈投镖样为其特征。毛。运动活泼，呈投镖样为其特征。2.基因组及抗原成分基因组及抗原成分 基因组大小仅为大肠杆基因组大小仅为大肠杆 菌的菌的35； DNA的的G+C为为30-

3、38mol。 按按O抗原不同分为抗原不同分为65个血清型。个血清型。3.培养特征培养特征 为微需氧菌，最佳气体环境通常为微需氧菌，最佳气体环境通常 为含为含5氧气、氧气、10二氧化碳及二氧化碳及85氮气。氮气。4.抵抗力不强，在室温下可迅速死亡。对热抵抗力不强，在室温下可迅速死亡。对热 敏感，标本在敏感，标本在4冰箱可保存冰箱可保存3周。周。微生物检验微生物检验 1.粪便直接镜检，粪便直接镜检，G-呈弧形、呈投镖式运动。呈弧形、呈投镖式运动。2.核酸检测粪便弯曲菌核酸检测粪便弯曲菌flaA基因，体外扩增基因，体外扩增 空肠大肠弯曲菌为空肠大肠弯曲菌为13kb。3.分离培养分离培养 粪便等标本可

4、接种选择平板进行粪便等标本可接种选择平板进行 分离，置微氧环境培养。空肠大肠弯曲生分离，置微氧环境培养。空肠大肠弯曲生 长温度为长温度为43，培养，培养24h可观察为灰白湿润、可观察为灰白湿润、 扁平边缘不整的蔓延生长的菌落。扁平边缘不整的蔓延生长的菌落。 鉴定要点鉴定要点1.为氧化酶阳性，为氧化酶阳性，G-菌体弯曲或呈菌体弯曲或呈S型。型。2.萘啶酸、头孢噻吩敏感试验：空肠弯曲菌萘啶酸、头孢噻吩敏感试验：空肠弯曲菌 对萘啶酸敏感、噻吩耐药；胎儿弯曲菌对对萘啶酸敏感、噻吩耐药；胎儿弯曲菌对 萘啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。萘啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。3.3.马尿酸盐试验：有助于鉴定空肠弯曲菌空马尿

5、酸盐试验：有助于鉴定空肠弯曲菌空 肠亚种，凡试验阳性、在肠亚种，凡试验阳性、在4242条件下生长，条件下生长， 氧化酶阳性且与镜检形态相符者，即可报氧化酶阳性且与镜检形态相符者，即可报 告为空肠弯曲菌空肠亚种。告为空肠弯曲菌空肠亚种。4.4.醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性，醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性， 胎儿弯曲菌为阴性。胎儿弯曲菌为阴性。5.用用抗抗体体包包被被的的乳乳胶胶颗颗粒粒，遇遇到到相相应应的的弯弯曲曲菌菌时时便便可可出出现现反反应应。可可用用于于鉴鉴定定空空肠肠大大肠肠弯弯曲菌，具有高度敏感性和特异性。曲菌，具有高度敏感性和特异性。6.DNA探探针针：DNA-DNA杂杂交

6、交可可以以用用于于鉴鉴别别大大肠肠弯弯曲曲菌菌与与马马尿尿酸酸水水解解阴阴性性的的空空肠肠弯弯曲曲菌菌、区别空肠弯曲菌和其他的弯曲菌。区别空肠弯曲菌和其他的弯曲菌。第二节第二节 螺杆菌属螺杆菌属 n幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾病相关。和胃癌等疾病相关。nHP感染非常普遍，平均世界人口的感染非常普遍，平均世界人口的50被感被感染。染。 三、微生物特性三、微生物特性1.G-,细长弯曲呈螺形。一端或两端有多根带鞘细长弯曲呈螺形。一端或两端有多根带鞘 鞭毛，运动活泼有动力。鞭毛在定居中起锚鞭毛，运动活泼有动力。鞭毛在定居中起锚 住作用。住作

7、用。2.基基因因组组较较小小，约约167106bp，DNAG+C百百分分含量为含量为37mol，较重要的基因有脲酶基因较重要的基因有脲酶基因 urea、ureB、ureC，细细胞胞毒毒素素相相关关基基因因cagA， 空泡毒素基因空泡毒素基因vacA。脲酶基因定位在脲酶基因定位在DNA的的 42kb区段内。区段内。3. HP菌株间具有共同抗原。与空肠弯曲菌菌体菌株间具有共同抗原。与空肠弯曲菌菌体 外外膜膜蛋蛋白白无无交交叉叉免免疫疫反反应应，但但其其鞭鞭毛毛蛋蛋白白具具 有明显的交叉反应。有明显的交叉反应。3.3.培养特性培养特性1.HP为微需氧菌，在为微需氧菌，在5O2、10C02、 85N2

8、的中生长良好。最适温度为的中生长良好。最适温度为 37, 25不生长，不生长，42少数生长，少数生长， 此与弯曲菌属不同。此与弯曲菌属不同。2.HP对对湿湿度度(85%以以上上)要要求求较较高高，营营养养要要求求较较高高需需含含血血液液才才能能生生长长，常常用用血血琼琼脂脂培培养养基基,需需经经72h才才长长出出菌菌落落，故故在在培培养养基基中中添添加加多多粘粘菌菌素素B(250U/ L)、万万古古霉霉素素 (6mg L)、 两两 性性 霉霉 素素 (2mg L)、TMP(5mgL)等以抑制杂菌生长。等以抑制杂菌生长。3.HP的的菌菌落落形形态态为为圆圆形形孤孤立立的的小小菌菌落落，无色半透明

9、呈露滴状。无色半透明呈露滴状。4.理化性状理化性状nHP生化反应不活跃，不能利用糖类。生化反应不活跃，不能利用糖类。nHP具具有有大大量量高高活活力力的的胞胞外外脲脲酶酶，故故脲脲酶酶活活性性的测定可作为的测定可作为HP的快速诊断方法。的快速诊断方法。n还还能能产产生生氧氧化化酶酶、触触酶酶、碱碱性性磷磷酸酸酶酶、-谷谷氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和DNA酶等。酶等。 四、微生物检验四、微生物检验 1.分离培养分离培养 宜用选择培养基，需新鲜配制，宜用选择培养基，需新鲜配制， 倾注平皿后应密封保存于一定湿度的容器一倾注平皿后应密封保存于一定湿度的容器一 周内用完。注意将标

10、本的粘膜面在培养基上周内用完。注意将标本的粘膜面在培养基上 反复涂擦接种。反复涂擦接种。2培养在含有培养在含有5O2、10C02、85N2的微的微 需氧和需氧和98以上湿度的环境培养。以上湿度的环境培养。 3鉴定鉴定 根据形态和染色性根据形态和染色性, 菌落特征；菌落特征； 37 生长，生长，43、25不生长；氧化酶和过氧化不生长；氧化酶和过氧化 氢酶均阳性、脲酶强阳性；对萘啶酸耐药、氢酶均阳性、脲酶强阳性；对萘啶酸耐药、 头孢噻吩敏感；在头孢噻吩敏感；在1甘油和甘油和1胆盐中均不胆盐中均不 生长。生长。 4.4.快速脲酶试验快速脲酶试验是是种简便实用、快速敏感、较为准确可靠的种简便实用、快速

11、敏感、较为准确可靠的诊断方法。脲酶试剂由尿素、基质、酚红指示诊断方法。脲酶试剂由尿素、基质、酚红指示剂等组成剂等组成, , 将小块的活组织块放人装有尿素培将小块的活组织块放人装有尿素培养基瓶内，如培养基由黄变为红色为阳性，提养基瓶内，如培养基由黄变为红色为阳性，提示该菌脲酶已将尿素分解。示该菌脲酶已将尿素分解。 5.5.抗体检测抗体检测用血清学方法检测患者体内的抗用血清学方法检测患者体内的抗HP抗体抗体(IgG、IgM和和IgA)系最常用的无创伤性诊断系最常用的无创伤性诊断HP感染的感染的方法。方法。目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及酶联目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及酶联免疫吸附试验免

12、疫吸附试验(ELISA)等，而以等，而以ELISA应用最应用最为广泛，现有商品化的试剂盒，可用于检测患为广泛，现有商品化的试剂盒，可用于检测患者血清中者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体。的菌体抗体或脲酶抗体。6.6.1313C C或或1414C C标记尿素呼吸试验标记尿素呼吸试验 病人禁食一夜，进食用病人禁食一夜，进食用13c或或14c标记的尿标记的尿 素素，HP产产生生的的尿尿素素酶酶分分解解脲脲素素释释放放 CO2， 因此可测定病人呼吸中释放带有同位素因此可测定病人呼吸中释放带有同位素 的的CO2量，如量，如CO2含量超过标准，提示有含量超过标准，提示有 HP存在。存在。 该方法敏感性与特异性均好。该方法敏感性与特异性均好。