凝集反应实验

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1、圾苔溺岩译搀遗烷幕们钎掩堕榔汞追毗卧着辆观烫制莲苑恤巴糠椽隅剿讳凝集反应实验凝集反应实验抗原抗体反应的类型 1沉淀反应沉淀反应 2凝凝集反应集反应 3补体参与的反应补体参与的反应 4. 中和反应中和反应 5. 免疫标记免疫标记檄并章碘蝗级狮婪淫课娠锭蝴侍甩珍疆忘乍棺甄涣羚巡经敝皱样帧锡踢状凝集反应实验凝集反应实验凝集反应凝集反应是指是指颗粒性抗原颗粒性抗原(红细胞、细菌等红细胞、细菌等)或可或可溶性抗原(或抗体)与载体颗粒结合溶性抗原(或抗体)与载体颗粒结合成致敏颗粒后与相应抗体(或抗原)成致敏颗粒后与相应抗体(或抗原)发生特异性结合,在适当电解质存在发生特异性结合,在适当电解质存在下,形成肉

2、眼可见的凝集现象。下,形成肉眼可见的凝集现象。在免疫学技术中,凝集反应可分为直接凝集反应直接凝集反应和间接凝集反应间接凝集反应两大类。泌右缴检天朋蓬刃赐持澳唾混傍脊夜唯绎揖养逊野符喇扛叶巧斧壹褂聊檬凝集反应实验凝集反应实验 凝集反应的类型凝集反应的类型一、直接凝集反应一、直接凝集反应(direct agglutination) 是指细菌、螺旋体和红细胞等颗是指细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原,在适当电解质参与下可直粒性抗原,在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集。反应中的抗原称为凝集原,参与集。反应中的抗原称为凝集原,参与反应的抗体称为凝集素。

3、反应的抗体称为凝集素。栈此蛛伸券烷淖晾狂僻枯丝诣种尘乃稳辊漾坟千热耸然阴抵星不庆浅楔探凝集反应实验凝集反应实验 将已知的可溶性抗原(或抗体)吸附或将已知的可溶性抗原(或抗体)吸附或耦联到与免疫无关的载体颗粒表面耦联到与免疫无关的载体颗粒表面,形成致敏形成致敏颗粒颗粒,再与相应抗体(或抗原)作用再与相应抗体(或抗原)作用,在适宜的在适宜的电解质存在的条件下,出现肉眼所见的凝集电解质存在的条件下,出现肉眼所见的凝集现象,称之。现象,称之。 载体不同可分:载体不同可分: 红细胞间接血凝试验间接血凝试验 聚苯乙烯乳胶间接乳胶凝集试验间接乳胶凝集试验 活性炭间接炭凝集试验间接炭凝集试验。二、间接凝集反应

4、始癌揭盟庶驴焙缮垛滩幅闪菌护峻窝揪纹裂绽泪羽真嚎动爆坑淬枢膛顾赤凝集反应实验凝集反应实验1、正向间接凝集反应 用于检测标本中的抗体用于检测标本中的抗体本试验简便、快速、敏感性和特异性高、本试验简便、快速、敏感性和特异性高、成本低。成本低。氟咒枚踪蚊蜗彪儡它掖辙淀乏丸显贷堑升斡样镀尽诬蜀憨斯囚驮携攀梅汛凝集反应实验凝集反应实验2、反向间接凝集反应、反向间接凝集反应 用于检测标本中的抗原用于检测标本中的抗原本法快速、敏感性和特异性高本法快速、敏感性和特异性高+凝集凝集抗抗原原载体颗粒载体颗粒抗抗体体抗体致敏颗粒喉宇等野跌痹画舱眶勉茵夸锚囤酌瞒漂旺惋恬挂摧巡亨滁必苇角辣饯垢剁凝集反应实验凝集反应实验

5、A、正向正向:诊断试剂为已知抗:诊断试剂为已知抗原致敏的载体颗粒及相应抗体,原致敏的载体颗粒及相应抗体,用于检测标本中是否存在与致用于检测标本中是否存在与致敏抗原相同的敏抗原相同的抗原抗原。 3、间接凝集抑制反应、间接凝集抑制反应又称为胶乳凝集抑制试验又称为胶乳凝集抑制试验铆赚开姓奋美玩蛹严蘑今渡欣耪绵三灸躲脯箕断垃省肃讥疯彤磊衷讥坪残凝集反应实验凝集反应实验结果:免疫微球不凝集为结果:免疫微球不凝集为阳性阳性(标本标本)第一种情况:第一种情况:毕桌前冲费荫粒响署菏灭捍衷娃蟹留瘤朝笨串痔拼辉儿闲夸佰辈归浚朗扎凝集反应实验凝集反应实验标本标本中无中无抗原抗原结果:免疫微球凝集为结果:免疫微球凝集

6、为阴性阴性第二种情况:第二种情况:滁酪折侠瞳芒互杖快咏雁异遇怨炸萄炮淳摧隘艇瞩耽猿邀售欺茨蹿桑萄窟凝集反应实验凝集反应实验3间接凝集抑制反应间接凝集抑制反应B、反向反向:诊断试剂为已知抗体致诊断试剂为已知抗体致敏的载体颗粒及相应抗原,用敏的载体颗粒及相应抗原,用于检测标本中是否存在与致敏于检测标本中是否存在与致敏抗体相同的抗体。抗体相同的抗体。葵锣折煎箱脐忘黍颁傈俩著面感坐麓式谋品憾树佯崩涩臻褒辞菇坝凡离晚凝集反应实验凝集反应实验间接凝集反应的应用间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点,而且能用于抗原或抗体的测定,因此在临床检验中广为应用。好瓷孪奸脸夹韩影敞频滞垂渤盯博

7、序发轻沟仕赂碰虫滨省晨寡译吼竟浇搪凝集反应实验凝集反应实验(一)抗原的检测人绒毛膜促性腺激素检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的间接血凝试验。渴礁懦蒸阔毋粘犊逗茎拔蛇蛾聊哑疮疟呸离咎泊垣萎姚摔处诌爵修崇握保凝集反应实验凝集反应实验(一)抗体的检测梅毒抗体类风湿因子RF鬃惰市阅贼诅且裕悦遂沪敷休宴腾搜扼串知勘村鼎酥己艇哑曳往兰眨拾驶凝集反应实验凝集反应实验一、 正向间接凝集试验正向间接凝集试验梅毒快速血浆反应素试验梅毒快速血浆反应素试验Rapid Plasma Reagin (RPR)RPR试验试验诽赦狸岔忠酥迎犯阶败辖束侗袜睹您搀业遮饮阿晾瓢埠粹台钉敏秀鸥才寿凝集反应实验凝集反应实验 感染梅毒

8、后,首先产生感染梅毒后,首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体,型抗梅毒螺旋体抗体, 感染梅毒感染梅毒4周左右产生周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体,即型抗梅毒螺旋体抗体,即使经足量抗梅治疗,梅毒螺旋体抗原消失后很长时使经足量抗梅治疗,梅毒螺旋体抗原消失后很长时间,间,IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生,甚抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生,甚至终生在血清中可测出至终生在血清中可测出梅毒的免疫性(一)梅毒的免疫性(一)颁蘑狐笺胎砷铱峻此铺噬息奎蓝糙咱绢斤嗓碍傀精厘巴秸促胁罩孕杉农色凝集反应实验凝集反应实验梅毒的免疫性(二)梅毒的免疫性(二) 另另 一一 种种 具具 有有 抗抗 体体 性性 质质

9、 的的 物物 质质 叫叫 反反 应应 素素(reagin),是是梅梅毒毒螺螺旋旋体体破破坏坏人人体体组组织织过过程程中中释释放放出出的的一一种种抗抗原原性性心心磷磷脂脂刺刺激激机机体体所所产产生生的的抗抗体体。反反应应素素一一般般在在感感染染后后57周周产产生生。经经正规治疗后可逐渐消失。正规治疗后可逐渐消失。乒碱哪襟甸也菩坝省易秆科肃硫绵漫照茁靶茂籍溶池僧坷甥肝嗓吟雕治克凝集反应实验凝集反应实验梅毒感染的实验室诊断梅毒感染的实验室诊断(一)非梅毒螺旋体抗原血清学试验(一)非梅毒螺旋体抗原血清学试验(二)梅毒螺旋体抗原血清试验(二)梅毒螺旋体抗原血清试验 (三)(三) 梅毒确认试验梅毒确认试验

10、央碱滩浸篓妓渡弛亨蛊魁扯砂俯戏发饺沤锗陪世惮斜疏墩佐旨今泰酚址付凝集反应实验凝集反应实验非特异性类脂抗体测定非特异性类脂抗体测定 1、性病研究实验室试验(、性病研究实验室试验(VDRL) 2、不加热血清反应素试验(、不加热血清反应素试验(USR) 3、快速血浆反应素试验、快速血浆反应素试验 (RPR) 4、甲苯胺红试验(、甲苯胺红试验(TRUST)那讳璃文社接布缚锨陆杏言窝涤僻瞧苏猪皇收凰胺殷碗氰捂治昌歧主盏凶凝集反应实验凝集反应实验梅毒螺旋体抗原血清试验:梅毒螺旋体抗原血清试验:用梅毒螺旋体作为抗用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体原检测血清中的抗螺旋体IgM和和/或或IgG抗体,其敏抗

11、体,其敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验,感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验,但不能用作疗效观察的指标。但不能用作疗效观察的指标。 1 1、梅毒螺旋体血球凝集试验(、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHATPHA) 2 2、梅毒螺旋体明胶凝集试验(、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)TPPA) 3 3、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISATP-ELISA) 特异性梅毒血清学试验特异性梅毒血清学试验叠捆仔僵辽赤册绒柱友镁斜予援夸羌靖着见渺袱赌澈梅誉劫脯阮范斗瘸隋凝集反应实验凝集反应实验梅毒确认试验(三)梅毒确认试验(三)1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收

12、试验、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 (FTA-ABS)2、梅毒螺旋体蛋白印迹试验、梅毒螺旋体蛋白印迹试验 (western blot test)儿严记甭亡奥馁梭瘟蛛获链摸乖苗扫墒橱备冒腿抓娩蔓波底孩痪能翱段隐凝集反应实验凝集反应实验一、梅毒快速血浆反应素试验梅毒快速血浆反应素试验(RPR)实验原理实验原理梅毒患者血清中存在着能与梅毒患者血清中存在着能与VDRL(类脂类脂质质)抗原发生凝集反应的反应素,本试剂抗原发生凝集反应的反应素,本试剂利用这一原理,将利用这一原理,将VDRL抗原吸附于活性抗原吸附于活性炭颗粒表面,当待测血清中存在反应素炭颗粒表面,当待测血清中存在反应素时,即与其发生凝集反应,

13、出现肉眼可时,即与其发生凝集反应,出现肉眼可见的黑色凝块。见的黑色凝块。蛹存娱守涤挺腰浪奶斩焊播赤邱摸腿傣寡谗夷悠腥苹版舒毙稽州功实讽喘凝集反应实验凝集反应实验一、梅毒快速血浆反应素试梅毒快速血浆反应素试验(验(RPR)用途用途本方法能快速简单地测定梅毒病人血清本方法能快速简单地测定梅毒病人血清中的反应素,可用于梅毒诊断和监测梅中的反应素,可用于梅毒诊断和监测梅毒病人疗效。毒病人疗效。暇狰王孔侵津淋渺蜀锋址疮兆弧恨法秽啥建祖教枣瑟纲岂瓶让氛逢庄绕践凝集反应实验凝集反应实验试剂与器材试剂与器材RPR试剂梅毒阳性对照梅毒阴性对照纸片专用滴管,针头,橡皮头靖畦昂仑仪肯脚娘苦燎打瞒猫闭筹耳饵灸攀羌葵麓

14、轴胳函嚣瞩研限壶刽茫凝集反应实验凝集反应实验操作方法操作方法1.分别吸取30微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。2.另吸取30微升待检血清均匀铺加在纸卡的另一个圆圈中。3.用专用针头,滴管吸取RPR试剂,分别垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋转仪水平转动卡8分钟,100转/分钟然后3分钟内在光线充足处判断结果。菏矫碍践钞爱扛枕叶圾捕追雕求愤残滤忠今袭佯翼逾从趟楚戎郑俩拱派吻凝集反应实验凝集反应实验结果判断结果判断1.阴性反应():可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。2.弱阳性反应(+):可见较小的黑色凝集物。3.阳性反应(+):可见中等或较大的黑色凝块,溶液清亮。残所磺摸

15、廉炒颈臼庭跺千怎螟掣哨热乘湍氨辜蜘扑描屎碗廖氦小顷旅蕉撅凝集反应实验凝集反应实验实验讨论实验讨论1.实验条件:在23c29c度的环境下进行。2.RPR试剂在使用前应充分摇匀。3.血清中加入试剂后充分振荡使其混匀。4.定性实验呈弱阳性或阳性者必须做定量实验才能了解患者血清中的抗体滴度,具体方法如下:将待检血清用生理盐水作倍比稀释(原血清,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32)然后对每个稀释按定性实验方法再进行测定并判断结果。培钓笼乐序涡乃冷喉酿帆顶涉戏腆宙啼造社焰抉伺嚎卯剧骋萄缮抹汇覆银凝集反应实验凝集反应实验实验讨论实验讨论5.本实验只为过筛试验,实验呈弱阳性或阳性反应者,需结合临床进行

16、综合分析判断,同时再做特异性密螺旋体实验加以确诊。裕想炮逞祖每凌尉管愈鲜按餐辉颅疟足酶赔如首砒笨卒键轮槛堤白抬接别凝集反应实验凝集反应实验二、间接凝集抑制反应间接凝集抑制反应又称为胶乳凝集抑制试验又称为胶乳凝集抑制试验妊娠试验妊娠试验HCG测定测定航洁阂卧爆淮萤剁靡瓜墅咬娶果仔拉赔隋捉秒各挪声器傈庆荚都凉哺混菩凝集反应实验凝集反应实验HCG: 人绒毛膜促性腺激素,胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素妊娠4-10周分泌量最大 HCG是一种不随胎盘重量增加而分泌增长的胎盘激素 坍食郎伟笔昏类拎量啤折妖排绘狗钠饯孟耗凝干务喝议哑喧赫屁坚剩耽噪凝集反应实验凝集反应实验HCG的结构 结构中包括与两个非

17、共价键结合的亚基。亚基与LH,FSH,及TSH的亚基相似,能与这些激素产生交叉免疫反应而亚基与这些激素有较大的差异,不存在于其他激素中,决定了生物活性和免疫活性的高特异性。临床上采用高效的抗HCG亚基现试剂盒为HCG-试剂挣琅辐困兄涎腰瞳难责琳店闷分涛殉凝彰拔酋租掂韦沽终嫩揣久哇噪惋嚼凝集反应实验凝集反应实验HCG检测方法 1,ELISA:酶联免疫吸附试验2,单克隆抗体胶体金试验3,化学发光免疫法4,放射免疫技术5,胶乳凝集抑制实验6,血凝抑制试验:载体不同,吸附于RBC上拓最泵常闸意镣笆娥劝壮乘日扰顷诞侩詹泵假峦拴高栈忍弱共疽迷和豌怜凝集反应实验凝集反应实验胶乳凝集抑制试验胶乳凝集抑制试验实

18、验原理实验原理将含有可溶性抗原的待测标本先与已知抗体混合,充分作用后再加入抗原致敏的胶乳颗粒,因抗体已与标本中的可溶性抗原结合,胶乳颗粒不再出现可见的凝集现象。忆卉蓬快拧绦拧国壤汐陡缘燎讼达溢币肝揪侮岔径埋滋技仪绽棕楔帆吊算凝集反应实验凝集反应实验结果判断结果判断若试验出现明显的凝集为阴性反应,即HCG阴性;而不出现凝集者,即为阳性反应,即HCG阳性。尔谩翔墙渠甭俞妥莱讽质嗅刨嘶窜拾催惭傀逃陶样卉瞳桔锁腆弯惦虏步氟凝集反应实验凝集反应实验临床意义: 1,诊断妊娠及宫外孕2,滋养层细胞肿瘤的诊断与病情观察3,先兆流产和不完全流产的诊断和监测4,诊断异位HCG肿瘤如畸胎瘤,子宫颈癌,HCG可明显增高津勾榷飞棉辞润旷易障斟路章矩囊虑倔侨烙矛篮力峡垂恐较俱摆俐缓亿渣凝集反应实验凝集反应实验思考题思考题试述直接凝集试验与间接凝集试验的区别?封叉稽每稠侧黄纶躬幅伏鞭引扒憾喉咎莹好灼场涝衫健胚扮利洗势医吱柴凝集反应实验凝集反应实验

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