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1、平板划线试验平板划线试验相关基础理论细菌的培养相关基础理论细菌的培养一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细征。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外，掌握各种分离培养和接种的基本技养条件之外，掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环节。术，也是重要环节。 4、平板划线接种法、平板划线接种法 （2 2）灭菌接种环）灭菌接种环 点燃
2、酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2323次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。4、平板划线接种法、平板划线接种法 图图2-4 2-4 灭菌接种环灭菌接种环平板划线接种法平板划线接种法
3、 （3 3）取菌种）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰塞，将试管管口迅速通过火焰2323次进行灭菌。次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰口再次通过火焰2323次灭菌，塞好试管塞，放至次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。原来的位置。 平板划线接种法平板划线接种法 （4 4）分离划线
4、接种细菌（四区接种法）分离划线接种细菌（四区接种法）左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/101/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈面呈30403040度角，以腕力在平板表面行轻而快地度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。来回滑动动作。 旋转琼脂平
5、板旋转琼脂平板9090度，烧灼接种环，以杀灭环度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板（约占平板1/51/5），此视为二区。），此视为二区。平板划线接种法平板划线接种法 旋转琼脂平板旋转琼脂平板9090度，灼烧接种环灭菌并使之度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板平板1/41/4），此为三区。），此为三区。 旋转琼脂平板旋转琼脂平板9090度，接种环不必再灭菌，接度
6、，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。稀释的目的。 平板划线接种法平板划线接种法 四区划线四区划线平板划线接种法平板划线接种法平板划线接种法平板划线接种法 （5 5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，送进放，送进3737温箱培养。温箱培养。（6 6）培养）培养1824h1824h后将培养皿取出。观察琼脂平板后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。表面结构、透明度、颜色等性状。
