《实习二红细胞、网织红细胞检测》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实习二红细胞、网织红细胞检测（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验诊断实习二实验诊断实习二红细胞、网织红细胞检测红细胞、网织红细胞检测棘巷圭救趋镑拟众殖蚤孔芳坠赦床宾咨陕岸地伎见两枚扑猖枉插招邀脆磺实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测目的和要求目的和要求l熟悉正常红细胞和网织红细胞的形态学特点熟悉正常红细胞和网织红细胞的形态学特点l掌握血红蛋白测定方法、参考值和临床意义掌握血红蛋白测定方法、参考值和临床意义l掌握血细胞多参数报告单的正常值及其增减的临掌握血细胞多参数报告单的正常值及其增减的临床意义床意义营豫壁蠕部娄欢裔先掂丹阀亏列坎幂滨擦可幅牙涨隆骡莎夺袍获责虱藩襟实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测红细胞计数红细
2、胞计数(redbloodcellcount)l红细胞计数是取一定微量血液，经稀释后计算出血红细胞计数是取一定微量血液，经稀释后计算出血液内所含红细胞数目液内所含红细胞数目l原理：用等渗稀释液将全血稀释至一定倍数，充入原理：用等渗稀释液将全血稀释至一定倍数，充入血细胞计数池，在光学显微镜下计数一定体积内的血细胞计数池，在光学显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求出每升血液中的红细胞数量红细胞数，经换算求出每升血液中的红细胞数量l方法：显微镜计数法方法：显微镜计数法秧澳缎悸钩央搓绕洛曳绊辞鹊烈膝午唉寝拽女秧晾衔铜垢仕供尧腾矽搽瞥实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测器材及试剂
3、：器材及试剂：l取血吸管，一次性定量采血管取血吸管，一次性定量采血管(20ul)l计数板：是一块厚玻璃制成，板上刻度分为计数板：是一块厚玻璃制成，板上刻度分为9个大方格个大方格面积为面积为Imm2。中央大方格用于红细胞计数，被双线等。中央大方格用于红细胞计数，被双线等分成分成25个中方格，每个中方格又划分为个中方格，每个中方格又划分为16个小方格个小方格。计数板与盖玻片组成计数池，计数池深度为。计数板与盖玻片组成计数池，计数池深度为0.1mml显微镜显微镜、盖玻片、刺血针、棉花等、盖玻片、刺血针、棉花等l小试管、刻度吸管小试管、刻度吸管、红细胞稀释液。、红细胞稀释液。l其它其它:75%酒精棉球
4、及干棉球酒精棉球及干棉球哩夕符琅蜂莱鹃拳眉灰拷啮氛彰假播狗凿酸栈押阂肃渗棕麻膜鞋启逸唉迟实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测操作操作:l取血：取血： l选择耳垂边缘或指端，先用75%酒精棉球消毒局部皮肤。等待干后，用消毒后的刺血针刺入皮肤，深约 2 毫米。待血液从针孔流出，用于棉花擦去第一滴血 l轻轻挤压，使血液流出形成绿豆大小的血滴。操作者用右手平拿取血吸管尖端浸入血滴中，缓缓吸血恰至“ 10 ”刻度处为止。然后用干棉花擦净吸管外沾附的血液陕汁阴岭峻态饼秆寓踞导懦灵淀屑洪愤永萄博愤佬结池事威伺铝需霜诬爪实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l稀释及混匀稀
5、释及混匀 l先准备一清洁小试管，精确滴入红细胞稀释液 1.99 毫升，备用 l 将取好的血液立即挤入上述试管中，并来回吸取小量稀释液数次，以便将残余在吸管中的血液全部洗净 l摇动试管，充分混匀。此时血液被稀释 200 倍枉张臭掀只奶婴溢嗽邓苹踌赣您宣皆寺先外瞄评逼誉麻赠来靡檬熏氛攫渠实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l充池充池l先将计数板及盖玻片擦干净，并将盖玻片复盖于计数池上面。 l用吸管吸取己充分混匀的稀释血液一滴，滴于盖玻片的下方边缘处，稀释血液即充填入计数池中。注意勿发生气泡或使稀释血液流入计数池旁小槽内 l静置 2 3 分钟，待红细胞完全下沉稳定后进行计数助涎菏
6、剥材臃衡沾叉搀片帛依芹涅冷停流跟奶掌丢晒翻伏蜜香溜榆树夷矛实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l计数l平放计数板于显微镜台上，先用低倍镜找到计数池的中央大平放计数板于显微镜台上，先用低倍镜找到计数池的中央大方格。观察红细胞是否均匀，并调整至视野中间。方格。观察红细胞是否均匀，并调整至视野中间。l再转换高倍镜计数。镜下红细胞为圆形或盘形、略带黄色的再转换高倍镜计数。镜下红细胞为圆形或盘形、略带黄色的细胞。如将上侧线和左侧线上的红细胞都计数在内，则不要细胞。如将上侧线和左侧线上的红细胞都计数在内，则不要再将下侧和右侧线上的细胞计入再将下侧和右侧线上的细胞计入。计数时必须按一定方
7、向和。计数时必须按一定方向和顺序，以免将红细胞重复计数或漏数。顺序，以免将红细胞重复计数或漏数。l计数计数5个中方格个中方格(即四角的及中央的中方格即四角的及中央的中方格)由红细胞总共由红细胞总共的个数，将其结果乘以的个数，将其结果乘以10。即得每立方毫米血液中所含红细。即得每立方毫米血液中所含红细胞数目，再乘以胞数目，再乘以10。即得每升血液中所含红细胞数目。即得每升血液中所含红细胞数目。妆枚埂撰肛寨蛀刨端烙麻栅勤弊毁日预凳消映琢莱位吟处吻助蚀菏绍智眼实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l每升血液中红细胞数目每升血液中红细胞数目=五个中方格内红细胞个数五个中方格内红细胞个
8、数5(变变为为0.1u1)10(变为变为1u1)106(变为变为1L)200(稀释稀释倍数倍数)=五个中方格内红细胞个数五个中方格内红细胞个数1010l清洁仪器：清洁仪器：l计数后，将盖玻片及计数板用水冲洗干净，再用绸或细计数后，将盖玻片及计数板用水冲洗干净，再用绸或细布擦干布擦干l吸管先用蒸馏水，继用吸管先用蒸馏水，继用95%酒精，后用乙醚洗涤干净，酒精，后用乙醚洗涤干净，保存备用保存备用酌锅穴谐贫譬炬航维枚殉屈诀防礁怪抨概兵尝怪彦孔岩犊羽召详虾砌酉揖实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测注意事项注意事项l不能在有水肿、炎症、淤血等部位或刺血过浅处采血不能在有水肿、炎症、淤
9、血等部位或刺血过浅处采血l所用吸管、试管、滴管及血细胞计数板须干净无水所用吸管、试管、滴管及血细胞计数板须干净无水l操作迅速，充池一次完成，不能有气泡操作迅速，充池一次完成，不能有气泡l红细胞分布不均，每个中方格之间相差大于红细胞分布不均，每个中方格之间相差大于20个时要重个时要重新充池计数新充池计数坐曝鹏侯碧坠倔齐尺二九慎叭汝颈存逃腿胺缀拨型刃瘤碎蟹津遮杰仟晃埋实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测血红蛋白测定血红蛋白测定l方法：氰化高铁血红蛋白测定法l原理：l血红蛋白(Hb)被高铁氰化钾K3Fe(CN)6氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰离子结合成氰化高铁血红蛋白（Hi
10、CN）l HiCN在540nm有一吸收峰l测定其光密度而得血红蛋白浓度浓度礁祁弹务黍站瓢夹邹池爵里谦衬属柏鳃得召斡胞仆折卑建簇框盟焰工撑搁实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测试剂与器材器材：l分光光度计l试管，试管架l取血吸管:一次性定量采血管 (20ul)l刺血针 l蒸馏水l75%酒精及干棉球试剂：试剂：l氰化高铁血红蛋白稀释剂高铁氰化钾K3Fe(CN)6200mg氰化钾（KCN）50mg无水磷酸二氢钾140mgTriton X-100 1.0ml用蒸馏水溶解并稀释 至1L伊腾冰破赵瞧践狱馋仓先峰箩挪惧纶坞蓉陨蹬你曙华吊压直杰浊谍堵琅贝实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红
11、细胞、网织红细胞检测l该试剂应呈透明、淡黄色，该试剂应呈透明、淡黄色，pHpH在在7.07.07.47.4之间，以蒸馏水之间，以蒸馏水作空白，在作空白，在540nm540nm比色，读数是比色，读数是0 0l溶液应放置棕色试剂瓶中，塞紧后保存于冰箱中（但不宜溶液应放置棕色试剂瓶中，塞紧后保存于冰箱中（但不宜冻结），至少可稳定数月冻结），至少可稳定数月l如发现试剂变绿、浑浊则不能使用如发现试剂变绿、浑浊则不能使用l其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止血浆蛋白改变引起的浑浊血浆蛋白改变引起的浑浊滁裳浇草无钵温谅跑将位涵斜柳宏撰怂途纶怯房
12、泪气孰彭嘘摈令诵坍耶峻实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测实验步骤 l在试管中准确加入HiCN稀释试剂5.0ml，作为测定管 l用血红蛋白吸管准确吸取全血20u1，擦去管端血迹，置于试剂中，冲洗3次，混匀 l将混合液放置3分钟以后，倒入光径1cm比色皿，用分光光度计在540nm进行比色l以蒸馏水或HiCN稀释试剂作空白管，校正光密度到0点，读取测定管光密度读数 戍烤犬峪搽陨迂企霓刻执茬镑塞由甩智佰怕放泽透阿摘震傻亡疤臆尖砒臂实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l计算：计算： 血红蛋白（血红蛋白（g/Lg/L）= = 测定管光密度测定管光密度（64458/
13、4400064458/44000）251 251 = = 测定管光密度测定管光密度A 367.7 367.7 l式中：式中： （1 1）64458 64458 是目前国际公认的血红蛋白分子量是目前国际公认的血红蛋白分子量 （2 2）44000 44000 是国际血液学标准化委员会公布的血红蛋白是国际血液学标准化委员会公布的血红蛋白摩尔吸光度摩尔吸光度 （3 3）251251是稀释倍数是稀释倍数 瘩峦蛆蒋摸弄庙威孜哎咸讥坑熙蔽引血弹磐摹奈顽亏抓咏蹋轧艳粕偿肥逮实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测 方法评估方法评估 lHiCNHiCN法操作简便，试剂单一，显色快且稳定，可以根据
14、吸法操作简便，试剂单一，显色快且稳定，可以根据吸光度直接计算结果被列为国际血红蛋白测定的参考方光度直接计算结果被列为国际血红蛋白测定的参考方法，也是我国推荐的首选方法法，也是我国推荐的首选方法l高球蛋白血症和白细胞明显增高可导致反应液浑浊而高球蛋白血症和白细胞明显增高可导致反应液浑浊而影响结果影响结果 翟耗素滦注沤驼侍沏版勿诧和谦客效挎阮授窘汛滨掠政诬猛撩辜蒙创卓葱实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测 注意事项注意事项 l用吸血管吸血过程应仔细、认真，准确把握住吸入的血液量是初学者的一个难点，也是实验结果准确与否的一个关键lHiCN稀释液不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN含量
15、下降，测定结果偏低应贮存在棕色有塞玻璃瓶中l4冰箱保存一般可用数月，但不能在0以下保存，因为结冰可引起高铁氰化钾还原，使溶液褪色失效吠正诊嚣解诱邪垮炮界卓散目径茂夹骋听腮摈言垫锣媒迸逝琢硼仰论弥敛实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测 注意事项注意事项 分光光度计使用要点分光光度计使用要点1、开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调置使用波长。仪器预热20分钟。 2、打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”。盖上试样室盖，将比色皿架处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。 3调整仪器的“00
16、.0”和“100%”，将选择开置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度的值。颗禄虑促粕丈隔棚靴藩明匿膀碘萌凉贷僵赋臆害兄俩生寇鲜玖颂予回喝串实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测 注意事项注意事项 l氰化钾是剧毒品，配制稀释液时要按剧毒品管理程序保管、操作l配制好的HiCN稀释液中因氰化钾含量低，又有高铁氰化钾存在，毒性不是很大。若进入体内，高铁氰化钾氧化血红蛋白，生成高铁血红蛋白。后者结合CN，起到一定的解毒作用，但仍应妥善保管l测定后的废液不能与酸性溶液混合氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体l为防止氰化钾
17、污染环境，比色测定后的废液集中于广口瓶中应注意废液处理，可用除毒液除毒综礁潘奢氛焉厨忽共拣绳予后甘院抉蔗顷纹励赚喉母菌媚鲸郴谩沃诌钩跳实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l除毒方法l取硫酸亚铁（FeSO47H2O）二份加NaOH一份，在研钵中研细，配成100g/L的悬液。每1000ml废液加上述除毒液5ml，放置3小时，不时搅拌，使剧毒的氰化钾成为无毒的亚铁氰化钾l废液加入等量的水，混合后每升加次氯酸铋液 ( 安替福化 )35 毫升，充分混匀后敞开容器，置室温 15 小时后，排入下水道伏娜疚碉掀倚通梗母衷约无分按梨穗揽扔旺恰挂汇窿横贱二贡磅桂闺馒昆实习二红细胞、网织红细胞检
18、测实习二红细胞、网织红细胞检测参考值参考值多次检查多次检查红细胞数血红蛋白成年男性（4.05.5）1012/L (400550万/mm3)120160g / L(1216g / dl)成年女性（3.55.0）1012/L (350500万/mm3)110150g / L (1115g /dl)新生儿（6.07.0）1012/L (600700万/mm3)170200g / L (1720g /dl)苔城落徽竖寄哎钩祭油轻品煎减天沤捶茁玉纲守郊臆颖趣铆兵陇民村烂羊实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测临床意义临床意义l红细胞及血红蛋白增多单位容积血液中红细胞及血红蛋白增多单位容
19、积血液中RBC及血红及血红蛋白量高于参考高限蛋白量高于参考高限可分为相对性增多和绝对性增多两大类可分为相对性增多和绝对性增多两大类l红细胞及血红蛋白减少单位容积循环血液中红细胞及血红蛋白减少单位容积循环血液中RBC、血红蛋白量及红细胞比积低于参考值低限，称为贫血。血红蛋白量及红细胞比积低于参考值低限，称为贫血。l贫血可概括为两大类：即生理性减少和病理性减少贫血可概括为两大类：即生理性减少和病理性减少l各种贫血红细胞与血红蛋白的减低不一定呈平行关系各种贫血红细胞与血红蛋白的减低不一定呈平行关系愧鸿柴妓椿旋竟苦循秽记撼销遥拖方翁羽凯磋停伴赐朔蒙踊嘲拧桅转坠疼实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞
20、、网织红细胞检测RBC与与Hb小结小结RBCRBCHbHb增多增多减少减少相对增多相对增多绝对增多绝对增多原发增多原发增多继发增多继发增多EpoEpo代偿性增多代偿性增多EpoEpo非代偿性增多非代偿性增多缺氧缺氧肿瘤肿瘤真性红细胞增多症真性红细胞增多症脱水脱水生理性减少生理性减少病理性减少病理性减少儿童，孕妇，老人儿童，孕妇，老人生成减少生成减少破坏增加破坏增加丢失过多丢失过多各种溶血各种溶血各种失血各种失血造血干造血干C C障碍障碍DNADNA合成障碍合成障碍再障再障巨贫巨贫HbHb合成障碍合成障碍多种机制多种机制缺铁贫缺铁贫白血病白血病造血原料缺乏造血原料缺乏承刽恳汇耙栈课步很啪洒缸泽尘
21、丁贤狡粟轨寅挡赫构群总蚜膛鞍晦中咙啤实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测RBC与与Hb小结小结红细胞（1012/L）血红蛋白（g/L）增多正常减少增多正常减少男性6.04.0-5.54.0170g120-160g120g女性5.53.5-5.03.5160g110-150g110g类型MCVMCHMCHC临床意义大细胞性贫血100343236巨幼细胞贫血正细胞性贫血80100 27343236再障、骨髓病性急性失血性贫血小细胞性贫血8027 32缺铁性贫血铁粒幼细胞性贫血海洋性贫血单纯小细胞贫血80273236慢性感染，肝病，尿毒症，恶性肿瘤，风湿病吞筑兴蔡县渡兽睫喉轿渡往
22、垦阶崖谋晒嘘悔掠悄骗缸能冀观骚呀蹋燃迪热实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测网织红细胞计数网织红细胞计数l原理原理l网织红细胞是晚幼红细胞脱核后但尚未完全成熟的红网织红细胞是晚幼红细胞脱核后但尚未完全成熟的红细胞细胞l胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存, ,经经煌煌焦油蓝焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后或新亚甲蓝活体染色后, ,胞质中可见蓝或蓝绿色胞质中可见蓝或蓝绿色枝点状甚至网织状结构枝点状甚至网织状结构病吓阎具倦雨亿天邹河吊胖佬不庄廓委驳犀乡罩吼乏联检簧供槐露掷猫什实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l取材
23、：人的外周血液（涂片）取材：人的外周血液（涂片）l方法：煌焦油蓝活体染色法近年来还可通过某些血液方法：煌焦油蓝活体染色法近年来还可通过某些血液自动分析仪及流式细胞术检测法进行网织红细胞计数自动分析仪及流式细胞术检测法进行网织红细胞计数l操作：取一滴血与煌焦油蓝染液混合，制成涂片操作：取一滴血与煌焦油蓝染液混合，制成涂片l在油镜下，观察红细胞胞质内蓝色的丝网状结构计数在油镜下，观察红细胞胞质内蓝色的丝网状结构计数10001000个红细胞个红细胞，求得其中网织红细胞百分数，求得其中网织红细胞百分数筷般判绑匝钦舍棵阐妆尹疫阴驼端候渊疗卞齐先配腻抨奄河赐既月演嗡退实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细
24、胞、网织红细胞检测染色及涂片要点染色及涂片要点l在洁净载玻片上加在洁净载玻片上加1煌焦油兰酒精液一滴；煌焦油兰酒精液一滴；待干待干l取新鲜血液一滴，取新鲜血液一滴，滴于载玻片的染液上滴于载玻片的染液上，轻轻搅拌，轻轻搅拌l保持载玻片上血液不致干涸，染色保持载玻片上血液不致干涸，染色5分钟或更长分钟或更长l常规涂片方法，推成薄而均匀的血膜片，常规涂片方法，推成薄而均匀的血膜片，自然干燥自然干燥轰烧过嚼辣克怜董钧陶蜂问危绵遇崩栓玛除岂葫跌豺卒蜂混捅涸执洗眠料实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测l89.5 m，Wright染色呈嗜多色性红细胞郸蚊四泵礼环秋爵辨冒榷且婿畜妨举蜜息蹿
25、岔树眶樱汁氧惰坊遇露脐票阀实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测RC小结小结RCRC参考值参考值绝对值绝对值百分数百分数0.50.5-1.5-1.5，平均，平均1 12424848410109 9/L/L临床意义临床意义观察病情观察病情鉴别诊断鉴别诊断诊断诊断减少减少增多增多观察病情观察病情鉴别诊断鉴别诊断诊断诊断造血不良造血不良造血良好造血良好营养性贫血营养性贫血溶血性贫血溶血性贫血失血性贫血失血性贫血再障性贫血再障性贫血试治有效试治有效高变低示好转，反之亦然高变低示好转，反之亦然试治无效试治无效由低逐渐增高示好转由低逐渐增高示好转冕嘻绷仙诉免雁申轴奔焚来腕企埠合屠坎积诚村逞喜茬顷畜掉吁河副硝壳实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测馈中妓狞怯妒孽琳徐缓撩抉料枣析痰具搓拐廉厚悔淌棵崔君泉芝瑟岔砰羔实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测喧仇修椒警柏崇叠丛全佩雀甩惮密刃少翔疽铺辑人衬瞩支她旦旦斤剁拇玩实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测判瘴帜韶庄锨疮犊扯渡折菊骡姥宽斋矿再镣兆廓坐诲妆孙驶本绪的肮汁赴实习二红细胞、网织红细胞检测实习二红细胞、网织红细胞检测
