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1、受体的放射分析受体的放射分析-核医学与核药核医学与核药学教学、学习课件学教学、学习课件 1. 1. 概概 论论 受受体体: :细细胞胞表表面面或或亚亚细细胞胞组组分分中中的的一一种种分分子子，可可以以识识别别并并特特异异地地与与有有生生物物活活性性的的化化学学信信号号物物质质（配配基基）结结合合，从从而而激激活活或或启启动动一一系系列列生生化化反反应应，最最后后导导致致该该信信号号物物质质特特定定的的生生物物效效应应。迄迄今今为为止止，所所有有已已发发现现的的受受体体都都是是具具有有特特定定氨氨基基酸酸序序列列和和特特定定构构型型的的蛋蛋白白质质。每每一一种种受受体体在在细细胞胞上上都都有有特
2、特定定的的宏宏观观分分布和微观分布。布和微观分布。 四、受体与配基结合的特性 1 1、可饱和性（、可饱和性（satiabilitysatiability）：）：受体结合反应呈高受体结合反应呈高亲和性和低容量，而非特异结合则呈低亲和性和高容亲和性和低容量，而非特异结合则呈低亲和性和高容量，后者的剂量反应曲线不呈可饱和性。量，后者的剂量反应曲线不呈可饱和性。2 2、可逆性（、可逆性（reversibilityreversibility）：）：激素、递质和药物激素、递质和药物与特异性受体结合反应是可逆的，当受体周围的配基与特异性受体结合反应是可逆的，当受体周围的配基浓度降低，结合反应就逆向进行，即配
3、基受体复合物浓度降低，结合反应就逆向进行，即配基受体复合物很快解离，解离后的配基是原形，不起代谢变化，这很快解离，解离后的配基是原形，不起代谢变化，这跟酶与底物作用结果不同，底物经酶作用后变成代谢跟酶与底物作用结果不同，底物经酶作用后变成代谢产物。产物。 3 3、特异性和亲和性、特异性和亲和性 受受体体具具有有特特异异识识别别配配基基的的性性能能，因因此此只只有有严严格格构构型型和和构构象象的的配配基基分分子子才才能能选选择择性性地地与与受受体体结结合合。受受体体的的特特异异性性还还表表现现在在器器官官或或组组织织（靶靶器器官官）的的专专一一性性上上，如如雌雌激激素素对对子子宫宫、阴阴道道、乳
4、乳腺腺等等器器官官有有兴兴奋奋作作用用，这这是是因因为为这这些些器器官官上上雌雌激激素素受受体体的的数数量量明明显显高高于于非非靶靶器器官官。受受体体的的亲亲和和性性是是指指受受体体和和配配基基的的结结合合能能力力，受受体体亲亲和和性性高高就就说说明明受受体体和和配配基基结结合合的的牢牢固，不容易解离。固，不容易解离。4 4、与效应的一致性、与效应的一致性 受受体体的的主主要要功功能能是是介介导导配配基基的的生生物物效效应应，如如果果一一种种蛋蛋白白能能与与某某种种物物质质结结合合而而不不介介导导特特定定的的生生物物效效应应，那那么么这这种种蛋蛋白白不不能能称称之之为为受受体体。所所以以用用生
5、生物物效效应应作作为为观观察察受受体体和和配配基基性性质质的的标标准准是是十十分分必必要要的的。从从配配基基的的角角度度分分析析，有有的的是是阳阳性性效效应应，有有的的是是阴阴性性效效应应。阳阳性性效效应应就就是是配配基基与与受受体体结结合合后后引引起起阳阳性性生生理理效效应应，称称为为激激动动剂剂。阴阴性性效效应应就就是是配配基基与与受受体体结结合合后后不不但但不不引引起起阳阳性性生生理理效效应应，而而且且阻阻断断内内源源性性配配基基的的阳阳性性生生理理作作用用，称为称为拮抗剂或阻断剂拮抗剂或阻断剂。 五、受体的生理调节 正正常常生生理理状状态态下下的的受受体体处处在在一一个个不不断断合合成
6、成与与降降解解的的动动态态平平衡衡中中，但但其其数数量量和和亲亲和和性性也也会会因因疾疾病病、药物作用而发生变化。药物作用而发生变化。1、向下调节（、向下调节（down-regulation） 细细胞胞所所处处环环境境中中某某种种激激动动剂剂的的浓浓度度增增高高或或长长期期作作用用，其其结结果果使使相相应应受受体体的的数数量量减减少少，并并出出现现受受体体对对此此物物质质的的敏敏感感性性下下降降，或或耐耐受受性性增增高高等等现现象象，如如哮哮喘喘病病人人长长期期服服用用-激激动动剂剂产产生生的的耐耐受受性性增增高高，即药效减弱。即药效减弱。 2、向上调节（、向上调节（up-regulation
7、） 细细胞胞所所处处环环境境中中某某种种拮拮抗抗剂剂的的浓浓度度过过高高或或长长期期作作用用，结结果果会会使使受受体体数数量量增增高高，出出现现受受体体敏敏感感性性增增高高，表表现现为为增增敏敏，或或撤撤药药后后反反跳跳现现象象。如如高高血血压压病病人人长长期期服服用用心心得得安安时时对对儿儿茶茶酚酚胺胺增增敏敏，若若突突然然停停药药，可可出出现现血血压压升升高高的的反反跳跳现现象象。由由于于受受体体在在整整体体条条件件下下，随随机机体体状状态态变变化化，会会出出现现生生理理调调节节，因因此此对对受受体体数数量量和和亲亲和和性性测测定定就就成成为为研研究究病病理理变变化化和和评评价价药药效的重
8、要内容。效的重要内容。 六、受体与疾病 遗传缺陷与免疫异常为受体性疾病的常见原因遗传缺陷与免疫异常为受体性疾病的常见原因 1 1、基基因因突突变变致致使使受受体体异异常常，引引发发功功能能障障碍碍，绝绝大大多多数数是是功功能能降降低低或或完完全全丧丧失失，有有家家族族史史，病病情情严严重重。如如睾睾酮酮受受体体基基因因突突变变致致该该受受体缺陷引起睾丸完全雌性化病。体缺陷引起睾丸完全雌性化病。 2 2、机机体体对对受受体体产产生生自自身身抗抗体体，激激动动（如如GravesGraves综综合合症症患患者者产产生生TSHTSH受受体体抗抗体体，直直接接持持续续激激动动甲甲状状腺腺TSHTSH受受
9、体体）或或阻阻断断（如如重重症症肌肌无力患者产生无力患者产生N-AchN-Ach受体抗体，占领但不记得受体）受体。受体抗体，占领但不记得受体）受体。 3 3、某某些些病病有有受受体体异异常常，非非原原始始发发病病环环节节，为为发发病病重重要要环环节节，采采取取针针对对措措施施可可控控制制病病情情。甲甲亢亢用用肾肾上上腺腺素素阻阻断断剂剂，哮哮喘喘用用肾肾上上腺素激动剂。腺素激动剂。 4 4、受受体体与与肿肿瘤瘤：激激素素受受体体在在肿肿瘤瘤中中存存在在与与否否决决定定治治疗疗方方案案（乳乳腺腺癌癌 白血病）；某些受体基因可突变成为癌基因，引发肿瘤。白血病）；某些受体基因可突变成为癌基因，引发肿
10、瘤。2.2.受体配基结合反应的基本原理受体配基结合反应的基本原理 RBARBA的的基基本本原原理理与与IRMAIRMA基基本本相相同同，应应用用放放射射性性标标记记配配体体，在在一一定定条条件件下下与与受受体体（R R）结结合合成成配配体体与与受受体体复复合合物物（R R* *L L），分分离离并并测测定定R R* *L L的的放放射射性性，然然后后经经数数据据处处理理，可可测测得受体的亲和力和受体的数量。得受体的亲和力和受体的数量。 一、受体与配基相互结合的基本规律一、受体与配基相互结合的基本规律 （一）质量作用定律（一）质量作用定律（mass action lawmass action l
11、aw） 简简单单单单位位点点系系统统：指指对对某某种种受受体体而而言言，它它的的全全部部受受体体都都以以相相同同的的亲亲和和性性以以单单分分子子与与特特定定的的配配基基相相结结合合，而而且且不不表表现现明明显显的的正正负负协协同同作作用用，理理论论上上讲讲结结合合后后产产生的生物效应也应完全相同。这种系统称之为。生的生物效应也应完全相同。这种系统称之为。 有有时时，一一个个受受体体系系统统中中存存在在两两（多多）种种亚亚型型，但但所所用用配配基基无无选选择择性性，尽尽管管亚亚型型的的生生物物效效应应可可能能不不全全相相同同，结结合合反反应应却却表表现现出出完完全全相相同同的的特特征征，这这时时
12、，也也可可作为单位点系统来看待。作为单位点系统来看待。（二）复合物的浓度和配基浓度的关系：（二）复合物的浓度和配基浓度的关系： 可可以以看看出出，RLRL和和LT LT 并并非非线线性性关关系系，而而是是曲曲线线关关系系，对对一一定定数数量量（RTRT固固定定）和和一一定定亲亲和和力力（KDKD固固定定）的的受受体体来来说说，配配基基浓浓度度从从零零开开始始上上升升时时，复复合合物物浓浓度度先先是是上上升升很很快快，以以后后逐逐渐渐变变慢慢，最最后后绝绝大大多多数数受受体体都都变变为为复复合合物物，也也就就是是受受体体被被饱饱和和了了。这这就就是是饱饱和和曲曲线线 （saturation sa
13、turation curve)curve)（图（图9 91 1）。）。 曲线的高度曲线的高度主要反映受主要反映受体的数量多体的数量多少，曲线上少，曲线上升的快慢则升的快慢则主要反映受主要反映受体和配基的体和配基的亲和力。亲和力。 （三）非特异结合（三）非特异结合（non-specific bindingnon-specific binding，NSBNSB） 上上述述饱饱和和曲曲线线是是受受体体与与配配基基的的特特异异结结合合形形成成的的。这这种种结结合合的的特特点点是是低低容容量量和和高高亲亲和和力力，所所以以容容易易饱饱和和。但但是是，任任何何受受体体标标本本除除特特异异结结合合外外，还还
14、会会有有一一部部分分非非特特异异结结合合，当当分分离离特特异异结结合合的的复复合合物物测测量量放放射射性性时时，这这部部分分非非特特异异结结合合的的放放射射性性混混在在一一起起，测测到到的的是是总总放放射射性性（total total bindingbinding，TBTB），必必需需先先减减去去非非特特异异结结合合（NSBNSB），才才能能得得到到特特异异结结合合（specific specific bindingbinding，SBSB）的放射性。）的放射性。 NSBNSB主主要要来来自自杂杂蛋蛋白白，反反应应器器壁壁，分分离离材材料料的的吸吸附附，它它的的特特点点是是，容容量量很很大大，
15、而而亲亲和和力力低低，因因此此在在一一般般情情况况下下不不被被饱饱和和，也也就就是是随随着着配配基基浓浓度度的的升升高高，它它不不呈呈饱饱和和曲曲线线，而而是是一一条条上上升升的的直直线线（图图9 9l l）。另另外外，如如果果系系统统中中存存在在大大量量同同种种受受体体的的非非标标记记配配基基，则则放放射射性性的的SBSB被被非非标标记记配配基基取取代代，而而NSBNSB由由于于容容量量很很大大，空空余余的的位位点点很很多多，放放射射性性不不被被取取代代。所所以以要要从从TBTB中中减减去去NSBNSB，最最基基本本的的办办法法是是做做一一系系列列平平行行管管，所所有有的的条条件件都都与与
16、TBTB管管相相同同，只只是是多多加加 10010010001000倍倍量量的的非非标标记记配配基基，将将SBSB完完全全取取代代掉掉，这这时时的的放放射射性性结结合合即即为为NSBNSB。由由于于NSBNSB和和放放射射配配基基呈呈直直线线关关系系，多多点点饱饱和和法法的的实实验验中中往往往往只只需需做做3 34 4点点，再再用用直直线线回回归归法法求求出出其其余余各点的放射性。各点的放射性。 （四）正负协同作用（四）正负协同作用 当当一一部部分分受受体体与与配配基基结结合合后后使使相相邻邻的的受受体体的的亲亲和和力力发发生生改改变变，倘倘若若亲亲和和力力逐逐步步下下降降，称称之之为为负负协
17、协同同作作用用如如曲曲线线（2 2） ，亲亲和和力力逐逐步步增增大大，称称之之为为正正协协同同作作用用如曲线（如曲线（3 3）。）。 （五）受体与配基反应的动力学（五）受体与配基反应的动力学（kineticskinetics） 受体与配基的结合反应一般都较快（多数在数十受体与配基的结合反应一般都较快（多数在数十秒至数十分钟）达到平衡。当周围的游离配基急剧下秒至数十分钟）达到平衡。当周围的游离配基急剧下降，或非标记配基浓度急剧升高时，放射性复合物的降，或非标记配基浓度急剧升高时，放射性复合物的解离也很快，这种快速结合和快速解离对保证受体的解离也很快，这种快速结合和快速解离对保证受体的迅速反应有很
18、重要的意义。迅速反应有很重要的意义。（六）竞争性取代反应（六）竞争性取代反应 在在一一个个受受体体和和放放射射配配基基的的反反应应系系统统中中加加入入另另一一个个化化合合物物，它它若若能能和和受受体体的的结结合合位位点点结结合合，则则会会与与放放射射配配基基竞竞争争与与受受体体结结合合，最最终终将将表表现现为为放放射射配配基基与与受受体体形形成成复复合合物物的的能能力力降降低低，但但受受体体数数量量不不变变, ,所所以以叫叫竞竞争争性性取取代代反反应应。此此时时，非非标标记记的的起起竞竞争争作作用用的的配配基基称称为为竞竞争争剂剂, ,它它们们和和受受体体结结合后不改变受体分子的结构。合后不改
19、变受体分子的结构。 表表示示竞竞争争剂剂抑抑制制作作用用强强弱弱的的指指标标有有二二个个：ICIC5050值值和和KIKI。ICIC5050值值是是指指抑抑制制5050受受体体与与放放射射配配基基结结合合所所需需竞竞争争剂剂的的浓浓度度，ICIC5050值值大大，表表明明竞竞争争剂剂抑抑制制作作用用小小。KIKI则则是是指指竞竞争争剂剂的的平平衡衡解解离离常常数数，KIKI越越小小，表明竞争剂抑制作用越大。表明竞争剂抑制作用越大。 二、双（多）位点系统二、双（多）位点系统 一一种种配配基基可可以以和和两两种种以以上上的的受受体体亚亚型型结结合，每种亚型都有相应的合，每种亚型都有相应的KDKD值
20、（自学）。值（自学）。3. 3. 受体放射分析的基本方法受体放射分析的基本方法 离体离体RBARBA基本方法的流程为基本方法的流程为： 一、放射性配基的要求一、放射性配基的要求 制制备备优优良良的的放放射射性性配配基基是是受受体体结结合合试试验验的的首首要要条条件件。对对任任何何一一种种受受体体系系统统，通通常常都都有有好好几几种种标标记记配配基基可可供供选选择择。选选择择应应从从两两方方面面考考虑虑：配配基基的的特特性性；实验目的。实验目的。 （一）对放射性配基的基本要求（一）对放射性配基的基本要求1 1、高高比比活活度度：组组织织细细胞胞内内的的受受体体浓浓度度一一般般都都很很低低，约约1
21、0104 4-10-105 5个个/ /细细胞胞，或或0.01-3.0 0.01-3.0 pmol/mgpmol/mg蛋蛋白白的的水水平平，低比活度的配基难于达到分析灵敏度的要求。低比活度的配基难于达到分析灵敏度的要求。 一一般般要要求求配配基基比比活活度度至至少少在在3.7103.7101111BqBq（10Ci10Ci）mmolmmol以以上上。另另外外，配配基基比比活活度度高高，加加入入反反应应管管的的放放射射性性配配基基量量才才有有可可能能减减少少，从从而而有有利利于于用用小小量量标标本本得得到到可可靠靠的数据，并有利降低非特异性结合率。的数据，并有利降低非特异性结合率。2 2、高高亲
22、亲和和力力: :亲亲和和力力高高，可可以以减减少少标标记记配配基基用用量量，从从而而既既可可降降低低非非特特异异性性结结合合，又又可可使使放放射射性性配配基基与与受受体体的的结结合合物物解解离离变变慢慢，便便于于进进行行结结合合和和游游离离配配基基的的分分离离。不不仅方便操作，而且获得的数据准确。仅方便操作，而且获得的数据准确。 3 3、特特异异性性强强: :即即该该配配基基与与所所研研究究受受体体有有选选择择性性结结合合，理理想想的的是是该该配配基基只只与与一一种种受受体体或或受受体体亚亚型型结结合合。但但没没有有一一种种配配基基是是完完全全选选择择性性的的，所所以以要要结结合合实实验验研研
23、究究的的目目的的，选选择择对对某某一一受受体体或或其其中中某某一一亚亚型型亲亲和和力力高高的的放放射性配基。射性配基。4 4、高的稳定性及放化纯度、高的稳定性及放化纯度: :包括标记的稳定性、包括标记的稳定性、贮藏时的稳定性以及温育分析时之稳定性贮藏时的稳定性以及温育分析时之稳定性, ,同时具有同时具有95%95%以上的放化纯度。以上的放化纯度。 总的来说总的来说, ,配基的选择要根据实验目来定。配基的选择要根据实验目来定。 目目前前，用用作作受受体体放放射射分分析析的的放放射射性性配配基基多多用用3 3H H、125125I I标标记记。 3 3H H标标记记配配基基与与原原型型配配基基为为
24、同同型型式式，生生物物学学活活性性好好，多多数数情情况况下下比比活活度度也也能能达达到到要要求求，且且半半衰衰期期长长，使使用用方方便便，主主要要缺缺点点是是需需用用液液闪闪测测量量，操操作作较较麻麻烦烦，一一般般实实验验室室不不能能进进行行标标记记。多多肽肽及及蛋蛋白白质质配配基基多多用用125125I I标标记记，其其优优点点是是可可以以达达到到较较高高的的比比活活度度。只只要要很很好好掌掌握握标标记记条条件件，仍仍能能保保持持较较好好的的生生物物活活性性。另另外外，碘标记法快速、方便、经济，一般实验室可进行。碘标记法快速、方便、经济，一般实验室可进行。（二）放射性配基的质量鉴定（二）放射
25、性配基的质量鉴定 1 1、放射化学纯度、放射化学纯度: : 除新鲜产品外除新鲜产品外, ,存放一定时存放一定时间后的标记配基均应重测其放化纯度，以保证间后的标记配基均应重测其放化纯度，以保证分析的准确性。一般要求放化纯度应在分析的准确性。一般要求放化纯度应在9595以以上。上。 2 2、结合活性鉴定、结合活性鉴定 3 3、比活度：、比活度：受体结合分析的结果计算离不开受体结合分析的结果计算离不开准确的比活度数据。准确的比活度数据。二、受体标本的制备二、受体标本的制备 在在受受体体结结合合实实验验的的研研究究中中，所所用用的的受受体体材材料料可可以以是是组组织织切切片片，也也可可以以是是完完整整
26、的的单单层层培培养养细细胞胞或或游游离离活活细细胞胞，粗制的或纯化的细胞膜受体，可溶性的受体蛋白等。粗制的或纯化的细胞膜受体，可溶性的受体蛋白等。 （一）组织切片（一）组织切片 冷冷冻冻组组织织切切片片常常用用明明胶胶粘粘贴贴于于玻玻片片上上，在在温温育育缓缓冲冲液液中中与与标标记记配配基基进进行行反反应应。反反应应后后用用缓缓冲冲液液洗洗几几次次即即可可，切切片片厚厚度度一一般般为为5-50m5-50m。用用组组织织切切片片的的目目的的更更多多是研究受体的分布（用放射自显影法或免疫组化）。是研究受体的分布（用放射自显影法或免疫组化）。 （二）游离的完整细胞悬液（二）游离的完整细胞悬液 完完整
27、整的的活活细细胞胞可可以以是是血血细细胞胞，培培养养的的单单层层细细胞胞，肿肿瘤瘤的的腹腹水水型型细细胞胞以以及及经经处处理理的的原原代代细细胞胞等等，使使用用完完整整细胞的优点：细胞的优点：1 1、受受体体处处于于原原有有的的正正常常环环境境中中。膜膜未未受受扰扰乱乱，膜膜内内pHpH、离离子子梯梯度度也也保保存存着着。受受体体与与其其相相连连的的效效应应系系统统（如如G G蛋白）也保存完好。蛋白）也保存完好。2 2、在在受受体体功功能能反反应应完完全全的的情情况况下下研研究究受受体体，可可以以同同时时观观察察配配基基与与受受体体结结合合的的情情况况和和细细胞胞的的生生物物效效应应。所所得得
28、的的结果更能反映受体的生理特点。结果更能反映受体的生理特点。3 3、能直接给出平均每一个细胞的受体数、能直接给出平均每一个细胞的受体数。 但但完完整整细细胞胞的的受受体体分分析析较较难难控控制制分分析析条条件件。操操作作过过程程可可能能导导致致细细胞胞表表面面生生理理活活性性的的改改变变，因因此此结结果果有有时时不不够够稳稳定定。另另外外，若若细细胞胞上上某某种种受受体体的的含含量量低低，作作分分析析时时需需加加入入大大量量细细胞胞才才能能获获得得足足够够的的放放射射性性计计数数，给给实实际际工工作作带带来来一一定定困困难难。完完整整细细胞胞来来源源分分三三种种：从从组组织织分分离离出出游游离
29、离细细胞胞；血血细细胞胞；培培养养细细胞胞。一一般般都需采用台盼蓝等检查细胞活性。都需采用台盼蓝等检查细胞活性。 （三）膜制剂（三）膜制剂（membranous preparationmembranous preparation） 绝绝大大多多数数受受体体结结合合分分析析使使用用膜膜制制剂剂。使使用用膜膜制制剂剂可可以以减减少少非非特特异异性性结结合合率率。而而且且，在在膜膜制制备备过过程程中中，通通过过洗洗膜膜的的方方法法，可可以以将将内内源源性性配配基基洗洗去去，并并除除去去部部分分蛋蛋白白溶溶解解酶酶。膜膜制制剂剂通通常常也也保保存存有有受受体体- -效效应应器器结结合合系系统统。但但受
30、受体体功功能能的的其其他他方方面面则则失失去去了了。另另外外，膜膜内内离离子子浓浓度度梯梯度度、受受体体与与细细胞胞结结构构关关系系也也失失去去了了。但但是是，受受体体结结合合需需要要的的是是膜膜双双层层脂脂质质结结构构本本身身，而而不不是是细细胞胞内内其其他他组组份份。所所以以膜膜碎碎片片内内仍仍保保留受体的药理学特性。留受体的药理学特性。 细细胞胞膜膜和和细细胞胞浆浆受受体体的的制制备备一一般般都都利利用用蔗蔗糖糖密密度度（0.250.250.3mol0.3molL L）梯梯度度离离心心法法分分离离不不同同的的亚亚细细胞胞组组分分。其其优优点点是是除除去去大大部部分分杂杂蛋蛋白白，以以减减
31、小小非非特特异异结结合合。为为保保证证所所制制得得的的膜膜受受体体保保持持良良好好的的结结合合活活性性，需需注注意意：全全部部过过程程在在0-40-4下下进进行行操操作作。制制备备缓缓冲冲液液的的蔗蔗糖糖密密度度，离离子子强强度度，pHpH值值及及其其它它物物质质（如如 EDTAEDTA，MgMg2 2）应应严严格格控控制制。组组织织匀匀浆浆条条件件应应保保持持一一致致。离离心心的的时时间间、速速度度、温温度度应应保保持持恒恒定定。为为防防止膜受体蛋白被蛋白酶水解常加蛋白酶抑制剂。止膜受体蛋白被蛋白酶水解常加蛋白酶抑制剂。 细细胞胞组组份份的的分分离离一一般般采采用用差差速速离离心心法法。通通
32、过过适适当当控控制制离离心心力力及及离离心心时时间间可可使使某某些些颗颗粒粒组组份份沉沉淀淀，而而另另一一些些保保留留在在上上清清液中。细胞组份的一般分离流程如下：液中。细胞组份的一般分离流程如下： 三、结合反应的类型三、结合反应的类型 （一）标记配基饱和法（一）标记配基饱和法1 1、单单点点饱饱和和法法：定定量量受受体体制制剂剂加加大大量量的的标标记记配配基基使使受受体体得得以以饱饱和和结结合合。根根据据受受体体- -配配基基复复合合物物的的放放射射性性计计算算受受体体结结合合容容量量（或或结结合合位位点点数数）。这这种种方方法法操操作作简简便便、标标本本用用量量少少。但但只只凭凭单单点点实
33、实验验数数据据计计算算受受体体结结合合容容量量，比比多多点点法法的的结结果果略略低低，不不能能给给出出KDKD，误误差差也也相相对大些。对大些。 2 2、多多点点饱饱和和法法：一一定定量量的的受受体体制制剂剂，逐逐步步增增加加标标记记配配基基的的量量（一一般般7-87-8个个实实验验点点），使使受受体体的的结结合合趋趋于于饱饱和和。用用曲曲线线拟拟合合法法或或直直线线拟拟合合法法计计算算受受体体结结合合容容量量和和亲亲和和力力（RTRT、KDKD），结结果果可可靠靠性性高高。但但受受体体标标本本、标记配基用量大，工作量大。标记配基用量大，工作量大。 （二）非标记配基饱和法（二）非标记配基饱和法
34、 一一定定量量的的受受体体制制剂剂和和标标记记配配基基，逐逐渐渐增增加加非非标标记记配配基基（一一般般7 78 8个个实实验验点点），使使受受体体饱饱和和结结合合，曲曲线线拟拟合合法法或或直直线线拟拟合合法法计计算算受受体体结结合合容容量量和和亲亲和和力力。这这种种方方法法克克服服了了多多点点饱饱和和法法标标记记配配基基用用量量大大的的缺缺点点，但但由由于于非非标标记记配配基基的的用用量量逐逐渐渐加加大大，放放射射性性逐逐步步减减少少，必必需需标标记记配配基比活度较高才能得到满意结果。基比活度较高才能得到满意结果。 四、分析条件的选择四、分析条件的选择 （一）标记配基浓度（一）标记配基浓度 （
35、二）受体浓度（二）受体浓度 （三）温育温度与时间（三）温育温度与时间 （四）缓冲液（四）缓冲液 五、结合与游离配基的分离五、结合与游离配基的分离 受受体体- -配配基基结结合合分分析析主主要要是是测测定定反反应应平平衡衡时时结结合合配配基基的的量量，求求解解受受体体的的密密度度与与平平衡衡解解离离常常数数。反反应应一一般般在在达达到到平平衡衡后后先先经经分分离离，再再测测结结合合部部分分的的放放射射性性。理理论论上上，一一经经分分离离，反反应应的的平平衡衡就就会会被被破破坏坏，所所以以选选择择适适当当的的分分离离方方法法和和环环境境，使使受受体体- -配配基基复复合合物物在在分分离离过过程程中
36、中的的解解离离减减少少到到最最低低限限度度。低低温温是是降降低低解解离离的的最有效手段，分离快慢也是重要因素。最有效手段，分离快慢也是重要因素。 常常用用的的分分离离方方法法有有离离心心法法、滤滤膜膜法法、吸吸附附法法、透透析析法法、电电泳泳法法等等。若若复复合合物物解解离离快快，则则只只能能选选择择快快速速的的分分离离方方法法。同同时时一一定定要要在在分分离离时时间间，分分离离温温度度等等方方面保持各样品管之间的一致性，以减少误差面保持各样品管之间的一致性，以减少误差。4.4.受体放射分析的数据处理及应用受体放射分析的数据处理及应用 一、数据处理一、数据处理 受受体体放放射射分分析析所所得得
37、测测定定数数据据都都是是放放射射性性单单位位，如如cpmcpm，dpmdpm等等，而而受受体体分分析析没没有有标标准准品品，不不能能通通过过标标准准曲曲线线得得到到所所需需结结果果，只只能能靠靠数数据据换换算算来来解解决决。如如换换算算成成每每毫毫克克蛋蛋白白或或10106 6细细胞胞所所含含受受体体数数（通通常常以以fmolfmol或或受受体体分分子子数数表表示示）或或平平衡衡解解离离常常数数（通通常常以以nmol/Lnmol/L表表示示）。另另外外，较较多多的的受受体体放放射射分分析析是是各各种种多多点点法法，实实验验得得到到的的是是若若干干点点的的实实测测值值，需需要要经经过过用用一一定
38、定的的数数学学模模型型进进行行直直线线或或曲曲线线拟拟合合，才才能能得得到到所所要要的的结结果果。所所以以受受体体放放射射分分析析的的数数据据处处理理包包括括两两个个方方面面，一一是是正正确确的的单单位位换换算算，二二是是各种手工或计算机的数据拟合。各种手工或计算机的数据拟合。 二、二、 RBA应用的几个主要方面应用的几个主要方面 1 1在在内内分分泌泌学学和和神神经经生生理理方方面面：通通过过RBARBA证证明明，几几乎乎所所有有的的激激素素和和神神经经递递质质都都通通过过特特定定的的受受体体发发挥挥作作用用。一一些些激激素素和和递递质质影影响响细细胞胞代代谢谢和和功功能能的的机机制制现现正
39、正通通过过RBARBA和和其其它它指指标标（如如酶酶活活力力、基基因因表表达达）的的综综合合观观察察得得到新的认识。到新的认识。 2 2在在药药理理学学及及药药物物筛筛选选方方面面：RBARBA是是研研究究药药物物作作用用原原理理的的重重要要手手段段，包包括括药药物物作作用用部部位位、协协同同作作用用和和拮拮抗抗作作用用的的机机制制竞竞争争性性RBARBA为为比比较较不不同同药药物物的的作作用用和和寻寻找找更更有有效效的的新新药药提提供供了了一一种种极极有有用用的的手手段段，在在受受体体亚亚型型的研究中更是不可缺少的技术。的研究中更是不可缺少的技术。 3 3免免疫疫学学方方面面：正正在在用用R
40、BARBA逐逐步步证证明明，免免疫疫细细胞胞表表面面存存在在能能识识别别各各种种特特异异性性和和非非特特异异性性免免疫疫刺刺激激剂剂的的受体，这是研究免疫调节机制的关键性环节之一。受体，这是研究免疫调节机制的关键性环节之一。 4 4在在病病理理学学和和临临床床医医学学方方面面：受受体体的的研研究究更更受受到到很很大大注注意意，RBARBA已已提提供供一一些些重重要要证证据据，说说明明有有些些疾疾病病的的发生发展与受体变化直接有关。发生发展与受体变化直接有关。 5 5近近年年来来我我国国科科学学家家在在中中西西医医结结合合的的研研究究中中也也开开始始注意受体这一环节注意受体这一环节 6 6八八十十年年代代以以来来，受受体体研研究究的的一一个个重重要要趋趋势势是是设设法法纯纯化化各各种种受受体体蛋蛋白白，以以探探讨讨受受体体的的本本质质及及受受体体与与配配基相互作用的分子生物学基础。基相互作用的分子生物学基础。
