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1、病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法与与防治原则防治原则第第2424章章 第一节第一节 病毒感染的病毒感染的检查方法检查方法病毒感染的检查病毒感染的检查 一般原则：特异、敏感、快速、简便一般原则：特异、敏感、快速、简便方法方法1 1根根据据流流行行病病学学和和临临床床特特点点初初步步判判定定可可能能感感染染的病毒。的病毒。2 2根根据据可可疑疑病病毒毒的的生生物物学学性性状状，机机体体免免疫疫应应答答和和临临床床过过程程以以及及病病人人当当前前所所处处的的时时机机，确确定定实实验诊断方法。验诊断方法。 病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗体抗体 病毒颗粒病
2、毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包含体光镜检查包含体 分离培养分离培养一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似原则基本与细菌相似，但，但应注意：应注意： 1.1.标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 2.2.低温保存低温保存，尽快送检尽快送检 3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定一般程序：一般程序：标本标本标本标本无菌处理无菌处理无菌处理无菌处理动物接种动物接种动物接种动物接种鸡胚培养鸡胚培养鸡胚培养鸡胚培养细胞培养
3、细胞培养细胞培养细胞培养指标指标指标指标阳性阳性阳性阳性指标指标指标指标阴性阴性阴性阴性 病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定 盲传盲传盲传盲传2 2 2 23 3 3 3代代代代指标阴性指标阴性指标阴性指标阴性病毒阴性病毒阴性病毒阴性病毒阴性（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 1.1.细胞培养细胞培养 单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养 分类分类 悬浮细胞培养悬浮细胞培养悬浮细胞培养悬浮细胞培养 原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞细胞种类细胞种类 二倍体细胞二倍体细胞二倍体细胞二倍体细胞 传代细胞系传代细胞系传代细胞系传代细胞系病毒的细胞培养病毒的细胞培养细胞培养瓶细胞培养瓶细
4、胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞2.2.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化采用孵化采用孵化9 91414天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜（allantocherionallantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔尿囊腔尿囊腔（allantoic cavityallantoic cavity）接种部位接种部位接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔羊膜腔羊膜腔（amniotic
5、cavityamniotic cavity） 流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊卵黄囊卵黄囊（yolk sacyolk sac） 嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒 2 2、鸡胚培养、鸡胚培养优点：优点：易管理易管理，不带微生物不带微生物，成本较低成本较低缺点：缺点：操作程序复杂操作程序复杂3.3.动物接种动物接种 应用：应用：应用：应用：尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养 动物：动物：动物：动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点
6、：优点：优点：优点：结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型 缺点：缺点：缺点：缺点：有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高，动物动物动物动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒1 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)(1)(1)细细细细 胞胞胞胞 病病病病 变变变变 效效效效 应应应应 （ cytopathcytopathicic effect,effect, CPE CPE ） 细细细细胞胞胞胞变变变变圆圆圆圆、聚聚聚聚集集集集、坏坏坏
7、坏死死死死、溶溶溶溶解解解解或脱落等（多数病毒）或脱落等（多数病毒）或脱落等（多数病毒）或脱落等（多数病毒）； 形形形形成成成成多多多多核核核核巨巨巨巨细细细细胞胞胞胞或或或或称称称称融融融融合合合合细细细细胞胞胞胞（麻麻麻麻疹疹疹疹病病病病毒毒毒毒、巨巨巨巨细细细细胞胞胞胞病病病病毒毒毒毒、呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道合合合合胞病毒胞病毒胞病毒胞病毒等）等）等）等）； 在在在在培培培培养养养养细细细细胞胞胞胞中中中中形形形形成成成成包包包包涵涵涵涵体体体体（狂狂狂狂犬病病毒、麻疹病毒等犬病病毒、麻疹病毒等犬病病毒、麻疹病毒等犬病病毒、麻疹病毒等）。）。）。）。 （二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定
8、2 2. .病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定电子显微镜电子显微镜电子显微镜电子显微镜：设备、操作复杂，：设备、操作复杂，：设备、操作复杂，：设备、操作复杂，应用受限应用受限应用受限应用受限光学显微镜光学显微镜光学显微镜光学显微镜：可见：可见：可见：可见大病毒大病毒大病毒大病毒（痘类病毒），痘类病毒），痘类病毒），痘类病毒）， 对一般病毒检测对一般病毒检测对一般病毒检测对一般病毒检测意义不大意义不大意义不大意义不大3 3. .病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型 ( ( ( (1 1 1 1) ) ) )血凝抑制试验血凝抑制试
9、验血凝抑制试验血凝抑制试验正粘正粘正粘正粘病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定 病毒病毒病毒病毒鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞凝集凝集凝集凝集（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验） 病毒病毒病毒病毒特异性抗体特异性抗体特异性抗体特异性抗体鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞不凝集不凝集不凝集不凝集 （血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验） (2)(2)免免 疫疫 标标 记记 法法 （ FIAFIA、 EIAEIA、RIARIA） 多种病毒鉴定多种病毒鉴定( (3 3) )凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验 多种病毒鉴定多种病毒鉴定4 4. .病毒分
10、子生物学鉴定病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增核酸扩增核酸扩增核酸扩增 核酸杂交核酸杂交核酸杂交核酸杂交 基因芯片基因芯片基因芯片基因芯片 基因测序基因测序基因测序基因测序（三）（三）病毒数量与感染性测定病毒数量与感染性测定1 1 1 1. . . .血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）死病毒）死病毒）死病毒）2.2.2.2.蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验 3 3 3 3. . . .50505050组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量 感染性
11、病毒量感染性病毒量( (四四) ) 新病毒的鉴定新病毒的鉴定核酸类型的测定核酸类型的测定 理化性状的检测理化性状的检测 形态学鉴定形态学鉴定 血清学鉴定血清学鉴定 基因测序和生物对比基因测序和生物对比四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测（I IgMgM）（一）（一）形态学检查形态学检查电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查普通光学显微镜检查 包涵
12、体包涵体（二）（二）病毒成分检测病毒成分检测1 1 1 1. . . .病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术2 2 2 2. . . .病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测病毒核酸检测 核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术核酸扩增技术 核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术核酸杂交技术 基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术基因芯片技术 基因测序基因测序基因测序基因测序（三）病毒（三）病毒感染的血清学诊断感染的血清学诊断应用应用：采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时
13、已晚目目目目前前前前尚尚尚尚无无无无分分分分离离离离此此此此病病病病毒毒毒毒的的的的方方方方法法法法或或或或难难难难以以以以分分分分离的病毒离的病毒离的病毒离的病毒为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等1 1. .中和试验中和试验（neutralizing test）病毒病毒病毒病毒中和抗体中和抗体中和抗体中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特点：特点：特点：特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体
14、维持时间长特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长应用：应用：应用：应用：人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查 临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用2.2.补体结合试验补体结合试验 用用用用已已已已知知知知病病病病毒毒毒毒可可可可溶溶溶溶性性性性补补补补体体体体抗抗抗抗原原原原检检检检测测测测病病病病人人人人血血血血清中相应的补体抗体清中相应的补体抗体清中相应的补体抗体清中相应的补体抗体 特点：特点：特点：特点：特异性低，抗体出现早，消失快特异性低，抗体出现早，消失快特异性低，抗体出现早，消失快特异性低，抗体出现早，消失快 应用：应用：应
15、用：应用：近期感染指标。近期感染指标。近期感染指标。近期感染指标。3.血凝抑制试验血凝抑制试验 流感疫苗接种后效果观察及流感流行病学调查流感疫苗接种后效果观察及流感流行病学调查4 4、早期抗体检测早期抗体检测 可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染可诊断急性感染 特异性特异性特异性特异性IgMIgM抗体抗体抗体抗体：孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒 EBVEBV早期抗原早期抗原早期抗原早期抗原抗体抗体抗体抗体 EAVEAV核心抗原核心抗原核心抗原核心抗原抗体抗体抗体抗体 早期抗原的抗体早期抗原的抗体早期抗原的抗体早期抗原的抗体 EAVEAV衣壳抗原衣壳抗原衣
16、壳抗原衣壳抗原抗体抗体抗体抗体第二节第二节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防 微生物及其代谢产物微生物及其代谢产物微生物及其代谢产物微生物及其代谢产物 生物制品生物制品生物制品生物制品 动物免疫血清动物免疫血清动物免疫血清动物免疫血清 免疫细胞免疫细胞免疫细胞免疫细胞 细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子 防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病疫苗疫苗: 死疫苗死疫苗(killed vaccine)如白百破、伤寒、流脑、如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。乙脑、流感、钩端螺旋体等。可激发可激发HI，安全、方便；但安全、方便；但抗原性改变
17、，效果差，需多次注射；反应重）。抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。 活疫苗（活疫苗（living vaccine）如如BCG、鼠疫、炭疽、脊鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。髓灰质炎和麻疹疫苗等。可激发可激发HI、CMI； 多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。升，接种后发病。联合疫苗在试用中。 基因工程疫苗：基因工程疫苗：目的基因目的基因 原核或真核细胞原核或真核细胞 基因产物基因产物 （如乙肝疫苗）（如乙肝疫苗） 导入导入 人工培养人工培养一、人工主动免疫常用生物制品一、人工主动免疫常用生物制品重
18、组载体疫苗：重组载体疫苗： 蛋白质抗原基因蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌减毒的病毒或细菌 基因整合基因整合 基因产物基因产物 疫苗疫苗合成疫苗：合成疫苗： 根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。疫苗。如如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。 缺点缺点是免疫原性弱、只激发是免疫原性弱、只激发B细胞引起细胞引起HI，因为抗病因为抗病毒依赖毒依赖CMI）。）。 转入转入 培养培养 表达表达亚单位疫苗：亚单位疫苗： 除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。苗。如如脑膜炎球菌和流
19、感杆菌脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖表面的特异性多糖+ 吸吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）附剂制成疫苗（不含类脂、无毒） 、流感疫苗、乙流感疫苗、乙肝疫苗等，肝疫苗等，这种疫苗这种疫苗防止防止减毒活疫苗回复突变和肿减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。瘤病毒潜在的致癌作用。DNA疫苗：疫苗： 即即基因疫苗或核酸疫苗基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种（第三代疫苗），这种核酸核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的生细胞毒杀伤功能的T细胞细胞，有效预防病毒、胞内寄，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。生菌及寄生虫
20、引起的传染。转基因植物疫苗：转基因植物疫苗： 将编码某一病原体将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接人们食用植物时，就完成了预防接种。如食用种。如食用西红柿西红柿，获得乙肝疫苗的接种，获得乙肝疫苗的接种。治疗疫苗：治疗疫苗： 葡萄球菌的自身疫苗葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、治疗葡萄球菌的感染、乙乙肝疫苗肝疫苗治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作用，后者是打破免疫耐受。用，后者是打破免疫耐受。 类毒素：类毒素： 细菌细菌外毒素外毒素+0.3%0.4%甲醛甲醛
21、 类毒素类毒素(毒毒性消失性消失,保留抗原性保留抗原性).如白百破疫苗如白百破疫苗.二、人工被动免疫常用生物制品二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白 血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂细胞免疫制剂细胞免疫制剂细胞免疫制剂 IFN-IFN- 、 、 细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子 IL-2 IL-2、IL-6IL-6、IL-12 IL-12 TNF TNF 、CSFCSF 淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞 LAKLAK细胞细胞细胞细胞 第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感
22、染的治疗 核苷类药物核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂 中草药中草药 基因治疗剂基因治疗剂 治疗性疫苗治疗性疫苗 抗病化学制剂抗病化学制剂抗病化学制剂抗病化学制剂反义寡核苷酸反义寡核苷酸反义寡核苷酸反义寡核苷酸干扰干扰RNA核酶（核酶（核酶（核酶（ribozymeribozyme） 思考题思考题1. 分离培养病毒的方法有那些分离培养病毒的方法有那些?2. 病毒性感染的快速诊断方法有哪些？病毒性感染的快速诊断方法有哪些？3. 预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？剂？4. 诊断病毒的核酸技术有哪些？诊断病毒的核酸技术有哪些？ Bye
