中药制剂分析第六章中药制剂中各主要成分的分析医学课件

《中药制剂分析第六章中药制剂中各主要成分的分析医学课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《中药制剂分析第六章中药制剂中各主要成分的分析医学课件（126页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、第六章 中药制剂中各主要成分的分析第一节 生物碱类第二节 黄酮类第三节 三萜皂苷类第四节 醌类第五节 挥发油类第六节 其他成分第一节 生物碱类一、结构特征及理化性质二、定性鉴别三、含量测定四、应用举例一、结构特征及理化性质（一）结构特征（一）结构特征生物碱大多结构复杂且类型众多，主要有杂环类、萜类、甾类及有机胺类等。结构中氮原子存在形式多种多样，如脂氮、芳氮；季铵、叔胺、仲胺及伯胺；游离状态和与酸结合状态等。此外，结构中常有多种取代基存在，如烃基、羟基、羧基、酯基等。 一、结构特征及理化性质（二）理化性质（二）理化性质1. 物理性状物理性状 多数生物碱为结晶型固体，少数为无定形粉末，个别小分子

2、生物碱为液体，如槟榔碱、烟碱等。液体生物碱及个别小分子生物碱具有挥发性和升华性，如麻黄碱具有挥发性、咖啡因具有升华性等。一般生物碱为无色或白色，结构中存在较长共轭体系时可显不同颜色，如黄连生物碱显黄色。2. 溶解性溶解性 大多数生物碱属亲脂性成分，游离状态下难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂；与酸结合成盐后水溶性增加，但与不同酸生成的盐水溶性有差异，一般含氧无机酸及小分子有机酸的生物碱盐水溶性较大。季铵型生物碱、生物碱氮氧化物易溶于水，一些小分子生物碱则既可溶于水也可溶于有机溶剂。含有酸性基团(如酚羟基、羧基)的生物碱可溶于不同碱性的碱水溶液中，含有内酯环、内酰胺结构的生物

3、碱可溶于热苛性碱水溶液。3. 酸碱性酸碱性 大多数生物碱具有不同程度的碱性。碱性强弱取决于生物碱结构中氮原子的杂化方式、电子云密度分布以及分子的立体效应、氢键效应等。酰胺类生物碱一般碱性较弱，几呈中性；如果在生物碱结构中尚存在酸性基团，则同时会表现出酸碱两性。一、结构特征及理化性质4. 沉淀反应沉淀反应 大多数生物碱在酸性水溶液中可以与生物碱沉淀试剂(如碘化物复盐、重金属盐和大分子酸等)生成不溶于水的复盐或分子复合物，借以检查中药制剂中生物碱的存在和测定中药制剂中生物碱成分的含量。但须注意的是，共存的蛋白质、多肽和鞣质等成分，也可与生物碱沉淀试剂生成沉淀，产生假阳性。因此，用沉淀反应进行中药制

4、剂中生物碱成分分析时，要用适宜的方法先行处理样品供试液，排除干扰。5. 显色反应显色反应 少数生物碱可与特定试剂反应产生不同颜色。生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料定量结合，生成有色络合物，被氯仿等有机溶剂定量提取；具有酯键结构的生物碱，如乌头碱等，可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色。这些显色反应可用于中药制剂中生物碱成分的分析。6. 紫外光谱特征紫外光谱特征 结构中具有共轭体系的生物碱可产生 紫外吸收，如吡啶类、喹啉类、吲哚类生物碱等。吸收峰位置和强度除与助色团的种类、位置、数目有关外，需要特别指出的是，生物碱结构中的氮原子若与发色团直接连接或参与发色团，则还与测定溶剂的pH有关。 二、定

5、性鉴别（一）理化鉴别（一）理化鉴别沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，一般在酸性水溶液中进行，苦味酸试剂和三硝基间苯二酚试剂也可在中性条件下进行。由于中药制剂成分复杂，一些非生物碱成分可能引起假阳性结果，因此，制备样品供试液时必须净化处理，以除去干扰成分，方能用沉淀反应进行中药制剂中生物碱类成分的鉴别。另一方面，少数生物碱不能与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应，可能引起假阴性结果，如麻黄碱。二、定性鉴别（二）色谱鉴别（二）色谱鉴别1. 薄层色谱法薄层色谱法 常用硅胶或氧化铝薄层色谱。制备供试品溶液时，要根据被测成分的特点，如存在状态、溶解性及共存成分的性质等，选用适宜的溶剂和方法进行提取，提取液浓缩后

6、或净化处理后，用有机溶剂溶解，点在薄层板上。展开剂常选择氯仿、苯等低极性溶剂，再根据待检识成分的极性加入其他溶剂调整极性，以达到满意的分离效果。由于硅胶显弱酸性，分离检识生物碱时，易导致色谱斑点Rf值很小、拖尾或形成复斑等，因此在硅胶吸附薄层色谱中，常用碱性系统或在碱性环境下展开。薄层色谱展开后，除少数有色生物碱可直接在可见光下观察，有荧光的生物碱可在紫外灯下观察外，绝大多数生物碱需喷试剂显色。最常用的显色试剂是改良碘化铋钾试剂，喷洒后大多数生物碱显橘红色斑点，有时为了提高显色灵敏度，可在喷碘化铋钾试剂之后，再喷硝酸钠试剂。此外还可选用硫酸铈、碘铂酸等作为显色试剂。个别生物碱的显色试剂特殊，如

7、麻黄碱，一般用茚三酮试剂显色。 二、定性鉴别2. 纸色谱法纸色谱法 纸色谱法可用于生物碱盐或游离生物碱的鉴别。鉴别生物碱盐时，一般以水为固定相，极性较大的酸性溶剂为展开剂，最常用的是正丁醇-醋酸-水(BAW)系统。如果用一定pH的酸性缓冲液为固定相，则选用极性较小的溶剂系统为展开剂。鉴别游离生物碱时，常用甲酰胺作固定相，以甲酰胺饱和的亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙酸乙酯为展开剂。3. 高效液相色谱法高效液相色谱法 高效液相色谱法对结构十分相似的生物碱有良好的分离效果。它具有快速、灵敏、微量等优点。在恒定的高效液相色谱条件下，各种生物碱均有一定的保留时间，可作为定性鉴别的参数。如果条件不完全相同

8、，则用已知对照品作内标物，采用峰面积或峰高加大法进行检识。 三、含量测定（一）总生物碱含量测定（一）总生物碱含量测定1. 化学分析法化学分析法 化学分析法包括容量分析法和重量分析法，测定中药制剂中总生物碱成分含量时，多用于处方药味较少、成分较简单、生物碱含量较高的中药制剂。容量分析法主要使用酸碱滴定法，根据生物碱碱性强弱可选择水溶液或非水溶液的酸碱滴定法。重量分析法根据操作可分为两种，一种是将供试液适当净化后，用适宜的方法(如生物碱酸水液加碱碱化，使生物碱游离，沉淀析出)将生物碱沉淀后直接称重。此法可用于混合碱、未知结构或分子量相差较大的生物碱的含量测定，优点是计算简便，不用换算因数，也不必考

9、虑生物碱的分子量；缺点是挥发性生物碱、对碱不稳定的生物碱不宜用。另一种方法是将供试液适当净化后，加入某些试剂，如加入生物碱沉淀试剂使生物碱生成不溶性沉淀，称量沉淀，计算生物碱的含量。这种方法的优点是取样量少、灵敏度高；缺点是操作繁琐，生成沉淀的影响因素较多，如沉淀试剂、pH、温度等。 三、含量测定2. 分光光度法分光光度法 分光光度法用于中药制剂中总生物碱成分的含量测定，可选择待测生物碱成分本身的吸收波长直接测定，也可加入某些试剂如雷氏盐、酸性染料等反应后比色测定。(1)直接测定直接测定 直接测定系指不经过化学反应、利用待测成分自身的紫外吸收直接进行测定的方法。该方法一般用于药味较少、干扰不大

10、的中药制剂中总生物碱的含量测定。(2)离子对萃取比色法离子对萃取比色法 离子对萃取比色法用于中药制剂中微量生物碱类成分的含量测定，其原理是在一定的pH介质中，生物碱与一些酸性染料，或磺酸类、酸类的阴离子，定量地结合为有色离子对(配位物)，此离子对可定量地溶于某些有机溶剂，然后在一定波长下测定有机溶剂的吸收度，或经碱化后释放出的酸性染料等的吸收度，按分 三、含量测定光光度法计算生物碱的含量。可作为离子对配体的试剂有甲基橙、溴麝香草酚兰和溴甲酚绿等酸性染料；甲苯-4-磺酸和萘-2-磺酸等磺酸类成分；苦味酸、苯甲酸和水杨酸等酚类和羧酸类成分。此外，一些无机离子，如 CI一、Br一、I一和 CIO4等

11、，亦可作为离子对配体。总生物碱含量测定多用酸性染料比色法和苦味酸盐比色法。酸性染料比色法：在适当的pH介质中，生物碱B可与氢离子H+结合成盐，成为阳离子BH+，而酸性染料在此条件下解离为阴离子In，生物碱盐的阳离子与染料阴离子定量地结合成有色的配合物(离子对)。此离子对可定量地溶于某些有机溶剂，测定有机溶剂的吸收度或经碱化后释放出的染料的吸收度，按分光光度法计算生物碱的含量。三、含量测定BH十十In(BH十In)BH十In应用本法的关键在于介质的pH、酸性染料的种类和有机溶剂的选择，其中尤以pH的选择最为重要。如果pH偏低，虽然可使生物碱以盐的形式存在，但染料仍以酸的形式存在；如果pH偏高，染

12、料以阴离子形式存在，而生物碱却以游离状态存在，两种情况均不能使阴阳离子定量结合。pH的选择要根据染料的性质及生物碱的碱性(pKa)大小来确定。一般生物碱一元碱与溴麝香草酚兰形成1:1的离子对，pH最好在之间；二元碱与溴麝香草酚兰形成l:2的离子对，则pH最好在之间。常用酸性染料有甲基橙、溴麝香草酚兰、溴甲酚绿、溴酚兰和溴甲酚紫等。选择有机溶剂的原则是根据离子对与有机相能否形成氢键以及形成氢键能力的强弱而定。氯仿、二氯甲烷与离子对形成氢键，有中等程度的提取率，且选择性较好，是常用的提取溶剂。三、含量测定苦味酸盐比色法：苦味酸盐比色法是利用在弱酸性或中性溶液中生物碱可与苦味酸定量生成苦味酸盐沉淀，

13、该沉淀可溶于氯仿等有机溶剂，也可以在碱性下解离释放出生物碱和苦味酸，测定有机溶剂的吸收度或经碱化后释放出的苦味酸的吸收度，按分光光度法计算生物碱的含量。具体操作方法可分为三种：其一，滤取生物碱苦味酸盐沉淀，洗去多余试剂，加碱使沉淀解离，以有机溶剂萃取游离出的生物碱，用含有苦味酸的碱性水溶液进行比色测定，再换算出生物碱的含量；其二，在pH7的缓冲溶液中加试剂，使生物碱与苦味酸成盐，用氯仿提取该盐，再用pH11的缓冲溶液使其解离，苦味酸转溶到碱水液中进行比色，再换算出生物碱的含量；其三，直接在pH45的缓冲溶液中加氯仿提取生物碱苦味酸盐，氯仿液在360nm直接比色测定。三、含量测定(3)雷氏盐比色

14、法雷氏盐比色法 雷氏盐在酸性介质中可与生物碱类成分定量地生成难溶于水的有色络合物。结构中只含1个碱性氮原子的生物碱，与雷氏盐反应生成的沉淀组成受pH影响较小；含2个或2个以上氮原子的生物碱，与雷氏盐反应生成的沉淀组成与各氮原子碱性强弱和pH有关：氮原子碱性均较强的生物碱，在酸性较小的溶液中生成单盐，在酸性较大的溶液中可相应地生成双盐、叁盐等；氮原子碱性较弱的生物碱，则无论酸性较强还是较弱均生成单盐；季铵碱分子中有几个季铵氮原子，即与几分子雷氏盐结合。生物碱雷氏盐沉淀易溶于丙酮，其丙酮溶液所呈现的吸收特征是由于分子结构中硫氰酸铬铵部分，而不是结合的生物碱部分，因此，既可以将生物碱雷氏盐沉淀过滤洗

15、净后溶于丙酮(或甲醇)直接比色测定，换算生物碱的含量；也可以精密加入过量雷氏盐试剂，滤除生成的生物碱雷氏盐沉淀，取滤液在520526nm(溶于甲醇时，其max为427nm)比色测定剩余的过量雷氏盐含量，间接计算生物碱的含量。三、含量测定硫氰酸铬铵在丙酮中的摩尔吸收系数106.5(单盐)，故可根据其吸收值A按下式直接测定而不需绘制标准曲线。式中，W：被测物重量(mg)；M：被测物分子量：V：溶解沉淀所用丙酮的毫升数。雷氏盐比色法测定生物碱含量时，需要注意以下几个问题：雷氏盐的水溶液在室温可分解，故用时应新鲜配制，沉淀也需在低温进行。雷氏盐丙酮(丙酮-水)溶液的吸收值，随时间会发生变化，应尽快测定

16、。三、含量测定(4)异羟肟酸铁比色法异羟肟酸铁比色法 含有酯键结构的生物碱，在碱性介质中加热，酯键水解，产生的羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，再在酸性条件下，与Fe3+生成紫红色配合物(异羟肟酸铁)，可用比色法进行含量测定。三、含量测定（二）单体生物碱含量测定（二）单体生物碱含量测定1. 薄层色谱法薄层色谱法 用薄层色谱法测定中药制剂中含有的单体生物碱成分的含量，具有简便、快速的优点。若中药制剂成分复杂，单体生物碱含量较低，应注意样品的净化富集。薄层色谱吸附剂、展开剂及显色方法选择，与前述定性鉴别相似，但要求较为严格。如使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂(尤其在碱性环境下展开的)后

17、才可喷洒，否则背景深、反差小，影响测定。三、含量测定2. 高效液相色谱法高效液相色谱法 由于生物碱类化合物碱性强弱不同，存在形式不同(游离型或与酸结合成盐)，用高效液相色谱法进行中药制剂中单体生物碱成分的含量测定时，可选择分配色谱法、吸附色谱法以及离子交换色谱法等。在分配色谱法中，既可采用正相色谱也可采用反相色谱，其中以反相高效液相色谱应用较多。常用非极性键合相，如十八烷基键合相(简称ODS或C18)作为固定相，但残存游离硅醇基会影响生物碱色谱行为，使保留时间延长、峰形变宽、拖尾。为了克服游离硅醇基的影响，可在流动相中加入硅醇基抑制剂二乙胺、三乙胺等；也可在流动相中加入低浓度离子对试剂辛烷磺酸

18、钠、十二烷基磺酸钠(调整合适pH值，偏酸性)，季铵盐试剂(如溴化四甲基铵)或一定浓度的电解质缓冲盐。三、含量测定3. 气相色谱法气相色谱法 气相色谱法仅适用于有挥发性的，遇热不分解的单体生物碱的含量测定，如麻黄碱、槟榔碱等。一些游离生物碱及其盐类均可直接进行气相色谱分析，但只能得到一个游离碱的色谱峰，这是由于生物碱盐类在急速加热下，可分解为游离生物碱。生物碱盐在急速加热器中产生的酸对色谱柱和检测器不利，应该注意。 四、应用举例1. 风湿骨痛胶囊麻黄定性鉴别和乌头总生物碱含量测定风湿骨痛胶囊由制川乌、制草乌、红花、甘草、木瓜、乌梅、麻黄加工制备而成。(1) 麻黄定性鉴别麻黄定性鉴别 取本品内容物

19、5g，加浓氨试液湿润，加氯仿50ml，加热回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收氯仿至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(4:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105加热数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。四、应用举例(2)乌头总生物碱含量测定乌头总生物碱含量测定 对照品溶液的制备 精密称取经105干燥至恒重的乌头碱对照品10mg，置100ml量瓶

20、中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含乌头碱0.1mg)。 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置分液漏斗中，依次精密加入氯仿至20ml，再精密加入醋酸盐缓冲液(称取无水醋酸钠，加水使溶解，加冰醋酸，用水稀释至500ml，摇匀，并在pH计上校正)10ml和溴甲酚绿溶液(取溴甲酚绿，加氢氧化钠溶液使溶解，用水稀释至200ml，摇匀)2ml，强力振摇5分钟，静置20分钟，分取氯仿层，用干燥滤纸滤过，滤液照分光光度法(附录 B)，分别在412nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。四、应用举例测定法 取装量

21、差异项下的内容物，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醚-氯仿-无水乙醇(16:8:1)的混合溶液25ml和氨试液，摇匀，称定重量，于快速混匀器上振荡三次，每次2分钟，放置过夜，称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，再于快速混匀器上振荡2分钟，静置，倾取上清液，精密量取5ml，置分液漏斗中，加乙醚5ml，用硫酸溶液提取4次，每次10ml，分取硫酸液，滤过，合并滤液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液4ml，摇匀，用氯仿提取4次，每次10ml，分取氯仿层，滤过，合并滤液，蒸干，残渣于105加热1小时，取出，放冷，加氯仿分次溶解，转移至25ml量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，精密量取20

22、ml，置分液漏斗中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入醋酸盐缓冲液10ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中乌头碱的量(g/ml)，计算，即得。四、应用举例2. 止喘灵注射液生物碱的定性鉴别和含量测定止喘灵注射液生物碱的定性鉴别和含量测定止喘灵注射液由麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘加工制备而成。(1)定性鉴别定性鉴别 取本品20ml，加氨试液使成碱性，用氯仿提取两次，每次10ml，合并氯仿液，取氯仿液4ml，分置2支试管中，一管加氨制氯化铜试液与二硫化碳各5滴，振摇，静置，氯仿层显黄色至黄棕色；另一管为空白，以氯仿5滴代替二硫化碳，振摇后氯仿层应无色或显微黄色。取鉴别项下的氯仿

23、液10ml，蒸至1ml，加甲醇1ml，充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(20:5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105加热约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。四、应用举例2)含量测定含量测定总生物碱 精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加1mol/L氢氧化钠溶液，用氯仿提取4次(10ml、10ml、5ml、5ml)，合并氯仿液，置具塞锥形瓶中，精密加硫酸滴定液

24、(0.01mol/L)10ml及新沸过的冷水10ml，充分振摇，加茜素磺酸钠指示液12滴，用氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)滴定至淡红色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硫酸滴定液(0.01mol/L)相当于的麻黄碱(C10H15NO)。东莨菪碱 照高效液相色谱法 (附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈磷酸钠溶液(含十二烷基硫酸钠用磷酸调pH值至6.0)(30:60)为流动相；检测波长为216nm。理论板数按氢溴酸东莨菪碱峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备 取氢溴酸东莨菪碱对照品适量，精密称定，用磷酸钠溶液(用磷酸调pH值至6.0)溶解

25、，制成每1ml含的溶液，即得(东莨菪碱重量氢溴酸东莨菪碱/1.445)。供试品溶液的制备 精密量取本品20ml，置分液漏斗中，加2mol/L盐酸溶液调pH值至2，用三氯甲烷20ml振摇提取1次，弃去三氯甲烷液，酸水层用浓氨试液调pH值至9，用三氯甲烷振摇提取5次，每次20ml，合并三氯甲烷液，置温水浴上回收三氯甲烷至干，残渣用磷酸钠溶液(用磷酸调pH值至6.0)溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定，即得。第二节 黄酮类一、结构特征及理化性质二、定性鉴别三、含量测定四、应用举例一、结构特征及理化性质一）结构特

26、征一）结构特征黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮的一类化合物，现在泛指两个苯环通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。根据中央三碳链的变化又可分为黄酮、黄酮醇、异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查耳酮、橙酮、花青素、黄烷等类型。 一、结构特征及理化性质（二）理化性质（二）理化性质1. 物理性状物理性状 黄酮类化合物多为结晶性固体，少数(如黄酮苷)为无定形粉末。黄酮类化合物的颜色与分子中是否存在交叉共轭体系及助色团(-OH、-CH3等)的类型、数目以及取代位置有关。一般说来，黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄色至黄色，查耳酮为黄至橙黄色；而二氢黄酮、二氢黄酮醇及黄烷醇因不存在交叉共轭体系，几乎无色

27、；异黄酮因缺少完整的交叉共轭体系，仅显微黄色。2. 溶解度溶解度 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态不同而有很大差异。一般游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。其中，黄酮、黄酮醇、查耳酮等为平面型分子，难溶于水；二氢黄酮及二氢黄酮醇系非平面型分子，在水中溶解度稍大；异黄酮水溶性介于二者之间；花色素因以离子形式存在，具有盐的通性，亲水性较强。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，难溶或不溶于苯、氯仿、乙醚等有机溶剂中。糖链越长，则水中溶解度越大。 一、结构特征及理化性质3. 酸碱性酸碱性(1)酸性酸性 黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故显酸性。酚

28、羟基数目及位置不同，酸性强弱不同，以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序为：7，4二OH 7-或4OH 一般酚-OH 5-OH。(2)碱性碱性 黄酮类化合物分子中-吡喃酮环上的1-位氧原子，因有未共用电子对，表现微弱碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成烊盐，产生特殊颜色，可用于鉴别。4. 显色反应显色反应 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及-吡喃酮环有关。(1)还原反应还原反应 盐酸-镁粉反应：多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红色至紫红色，少数显紫色至蓝色。查耳酮、橙酮、儿茶素类则不显色。异黄酮除少数例外，也不显色。四氢硼钠反应：为二氢黄酮类化合物专属性较高的显色反应，

29、二氢黄酮及二氢黄酮醇类显红色至紫红色，其它黄酮类均为负反应。(2)金属离子络合反应金属离子络合反应 黄酮类化合物可与铝盐、锆盐、镁盐、锶盐、铁盐、铅盐等试剂反应，生成有色配合物。铝盐：常用试剂为1三氯化铝或硝酸铝溶液，生成的配合物多为黄色(max 415nm)，并有荧光，可用于定性及定量分析。锆盐：多用2二氯氧锆甲醇溶液。黄酮类化合物分子中有游离的3-或5-OH存在时，均可反应生成黄一、结构特征及理化性质色的锆配合物。但两种锆配合物对酸的稳定性不同，反应液中加入枸橼酸后，5-羟基黄酮黄色显著褪色，而3-羟基黄酮呈鲜黄色(锆-枸橼酸反应)。镁盐：常用试剂为醋酸镁甲醇溶液，纸片反应紫外灯下观察，二

30、氢黄酮及二氢黄酮醇类显天蓝色荧光。铁盐：多数黄酮类化合物分子中含有酚羟基，可与三氯化铁水溶液或醇溶液发生显色反应，呈紫、绿、蓝等不同颜色。 5. 紫外光谱特征紫外光谱特征 多数黄酮结构中存在有桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭体系，故在200400nm波长区域内有强烈的吸收带，其中带I在300400nm范围内，由B环桂皮酰基系统引起，带在240285nm范围内，由A环苯甲酰基系统引起。加入一些位移试剂如甲醇钠、醋酸钠、三氯化铝等，可使最大吸收波长发生位移，有助于消除杂质干扰，提高选择性，有利于含量测定。二、定性鉴别一）显色反应一）显色反应常用盐酸-镁粉反应。将中药制剂用适当方法提取分离，制成供试

31、品液，取510ml，加入数滴盐酸，然后加入少量镁粉(必要时加热)，数分钟后出现红色至紫红色，说明含有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮或二氢黄酮类化合物。为了避免中药提取液本身颜色的干扰，可注意观察加入盐酸后升起的泡沫颜色。如泡沫为红色，即示阳性。若黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基，则可与金属离子(如Al3+、Zr4+、Pb2+、Sr2+等)形成配合物，这些配合物有的产生荧光或颜色加深(如Al3+、Zr4+)，有的产生沉淀(如Pb2+、Sr2+)，可用于黄酮类成分的定性分析。二、定性鉴别（二）薄层色谱法（二）薄层色谱法薄层色谱法是含黄酮类成分中药制剂最常用的定性分析方法。一般采用吸

32、附薄层，常用吸附剂有硅胶、聚酰胺和纤维素等。1. 硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱 硅胶薄层色谱分离黄酮类化合物常用溶剂系统有：甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5:4:1)，苯-甲醇(95:5)(分离黄酮苷元)；苯-甲醇-乙酸(35:5:5)(分离黄酮苷)；氯仿-甲醇(8:2)(分离黄酮苷元及苷)；甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5:4:1)(分离双黄酮)等。显色方法多为三氯化铝显色后紫外灯下检视荧光。2. 聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱 聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基的黄酮苷和苷元较好。聚酰胺对黄酮类成分的吸附能力较强，展开剂极性一般较大，大多含有醇、酸或水，或三者兼有。3. 纤维素薄层色谱纤维素薄层色谱 纤维素薄层

33、色谱用于分离黄酮苷类成分效果较好，原理与纸色谱相同，色谱流动相可套用纸色谱所用的流动相。常用的展开剂有：正丁醇-乙酸-水(4:1:5)；2甲酸、不同浓度的乙酸(6、10、40、60)；乙酸乙酯-甲酸-水(8:2:3)的上层溶液；异丙醇-氢氧化铵-水(8:1:1)。 三、含量测定中药制剂中如含有黄酮类成分，可根据要求测定制剂中的总黄酮含量、黄酮类单体成分的含量或二者同时测定。（一）总黄酮含量测定（一）总黄酮含量测定黄酮类化合物多具有特定的紫外吸收峰，含黄酮类化合物的原料药及部分制剂经适当提取纯化后，可直接于最大吸收波长处测定吸收度，计算含量。在复方制剂中，由于其它组分吸收的干扰，多需进行显色测定

34、，显色以后显色物与背景最大吸收波长差别较大，可消除背景(即阴性空白)干扰，提高方法的选择性及灵敏度。常用显色剂为三氯化铝和硝酸铝。醋酸钾-三氯化铝与黄酮显色后最大吸收波长为420nm，亚硝酸钠-硝酸铝与黄酮显色后最大吸收波长为500nm，二者皆可用于总黄酮的含量测定。 三、含量测定（二）黄酮单体成分的含量测定（二）黄酮单体成分的含量测定1. 薄层色谱法薄层色谱法 薄层色谱法是测定中药制剂中黄酮单体成分的有效方法之一。样品经有机溶剂或水提取后，可用硅胶、纤维素或聚酰胺进行色谱分离。分离后可将含有待测组分的色斑刮下，再用适当的溶剂洗脱后，用紫外-可见分光光度法测定；也可用薄层扫描仪(单波长或双波长

35、法)直接在薄层板上扫描测定。目前在中药制剂的薄层色谱法分析中以应用后者居多。2. 高效液相色谱法高效液相色谱法 黄酮类化合物在紫外光区有较强的吸收，使用HPLC-UV法检测，灵敏度很高。如中药制剂中含有黄酮类化合物，只要经过适当的预处理，并选择好色谱条件，一般都能得到较满意的结果。黄酮类成分的HPLC条件多选择反相色谱，用C18键合相作固定相，流动相常用甲醇-水-乙酸(或磷酸缓冲液)及乙腈-水。检测器主要采用紫外检测器或荧光检测器。 四、应用举例1. 双黄连口服液黄芩定性鉴别和黄芩苷含量测定双黄连口服液黄芩定性鉴别和黄芩苷含量测定 双黄连口服液由金银花、黄芩、连翘加工制备而成。 (1)黄芩定性

36、鉴别黄芩定性鉴别 取本品1ml，加75乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加75乙醇制成每1ml含的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，吸取上述三种溶液各12l，分别点于同一聚酰胺薄膜(5cm7cm)上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。四、应用举例(2)黄芩苷含量测定黄芩苷含量测定 照高效液相色谱法 (附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(50:50:1)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算

37、应不低于1500。对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含黄芩苷0.1mg)。供试品溶液的制备 精密量取装量项下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5l，注入液相色谱仪，测定，即得。第三节 三萜皂苷类一、结构特征及理化性质二、定性鉴别三、含量测定四、应用举例一、结构特征及理化性质（一）结构特征（一）结构特征三萜类化合物结构根据异戊二烯定则可视为6个异戊二烯单位聚合而

38、成，一般根据三萜类化合物碳环的有无和多少进行分类。目前已发现的三萜类化合物，多数为四环三萜和五环三萜。三萜皂苷由三萜皂苷元和糖、糖醛酸(部分化合物还含有机酸)所组成。糖大多数和皂苷元的C3-OH相连，少数情况C3-OH游离，而糖和其他位置羟基相连。皂苷元分子中羟基大部分和糖结合，形成苷，少数可与有机酸结合，形成酯。一、结构特征及理化性质（二）理化性质（二）理化性质1. 物理性质物理性质 三萜皂苷分子大，不易结晶，大多数为白色或乳白色无定形粉末，仅少数为结晶体，皂苷元大多有完好的结晶。皂苷多数具有苦和辛辣味， 具有吸湿性。三萜皂苷有降低水溶液表面张力的作用，其水溶液经强烈振摇能产生持久性的泡沫，

39、不因加热而消失。三萜皂苷的熔点都很高，常在融熔前分解，分解点多在200350之间。2. 溶解度溶解度 三萜皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，几不溶于或难溶于丙酮、乙醚、苯等极性小的有机溶剂。皂苷在含水丁醇或戊醇中溶解度较好。三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等有机溶剂，而不溶于水。3. 金属盐类的反应金属盐类的反应 三萜皂苷的水溶液可以和一些金属盐类，如铅盐、钡盐、铜盐等产生沉淀。但酸性皂苷水溶液，加入中性盐类即生成沉淀；中性皂苷水溶液则需加入碱式醋酸铅或氢氧化钡等碱性盐类才能产生沉淀。一、结构特征及理化性质4. 显色反应显色反应 三萜化合物在无水条件下，与强酸(硫

40、酸、磷酸、高氯酸)、中强酸(三氯乙酸)或Lewis酸(氯化锌、三氯化铝、三氯化锑)作用，会出现一系列显色变化或荧光。常见显色反应有：(1)醋酐醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应(Liebermann-Burchard反应反应) 将样品溶于醋酐中，加浓硫酸-醋酐(1:20)，产生黄-红-紫-蓝等颜色变化，最后褪色。(2)五氯化锑反应五氯化锑反应(Kahlenberg反应反应)：将样品氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷以20五氯化锑氯仿溶液(不应含乙醇和水)，干燥后6070加热，显蓝色、灰蓝色、灰紫色斑点。(3)三氯醋酸反应三氯醋酸反应(Rosen-Heimer反应反应) 将样品溶液滴在滤纸上，喷25三氯醋酸乙醇

41、溶液，加热100，生成红色渐变为紫色。(4)冰醋酸冰醋酸-乙酰氯反应乙酰氯反应(Tschugaeff反应反应) 样品溶于冰醋酸中，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。(5)氯仿氯仿-浓硫酸反应浓硫酸反应(Salkowski反应反应) 样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在氯仿层呈现红色或蓝色，硫酸层有绿色荧光出现。5. 光谱特征光谱特征 除少数化合物如甘草酸、远志皂苷等外，大多数三萜化合物无明显的紫外吸收或仅在200nm附近有末端吸收。二、定性鉴别对中药制剂中含有的三萜皂苷类成分进行定性鉴别，常用方法有泡沫反应、显色反应和薄层色谱法。其中薄层色谱法应用最广泛，鉴别准确率较高。而

42、泡沫反应、显色反应在检识含皂苷的原料药中较为多用，用于皂苷类成分含量较高、组成药物较少的中药制剂鉴别时，要考虑适当的提取方法和其他成分的干扰，并应作空白对照。1. 泡沫反应泡沫反应 鉴别时取样品一定量，加水10ml，煮沸，滤过，将滤液于试管内强烈振摇，如产生持久性泡沫(15分钟以上)即为阳性反应。2. 显色反应显色反应 显色反应对于原料药和制剂来说，由于样品自身的背景颜色较深，不易判断，故实际应用较少，仅在组成药味简单的中药制剂中使用。二、定性鉴别3. 薄层色谱法薄层色谱法 样品经薄层色谱分离后选用适当的显色剂显色观察，是皂苷类成分定性鉴别中最常用的方法。三萜皂苷类成分多用硅胶为吸附剂，也可选

43、择氧化铝、硅藻土等作为吸附剂。三萜皂苷一般极性较大，展开剂极性亦较大，常用溶剂系统有：氯仿-甲醇-水(13:7:2，10以下放置，下层)、正丁醇-乙酸乙酯-水(4:1:5)、正丁醇-3mol/L氢氧化铵-乙醇(5:2:1)、氯仿-甲醇(7:3)、正丁醇-乙酸-水(4:1:5，上层)等。三萜皂苷元极性较小，如以硅胶为吸附剂，展开剂要有较强的亲脂性，所用溶剂系统常以苯、氯仿、己烷、异丙醚等为主要组分，再加以少量其他极性溶剂。常用溶剂系统有环己烷-乙酸乙酯(1:1)、苯-乙酸乙酯(1:1)、氯仿-丙酮(9:1)、氯仿-乙酸乙酯(1:1)、苯-丙酮(1:1)、氯仿-乙醚(1:1)、苯-乙醇(17:3)

44、等。显色剂可选用三氯醋酸、氯磺酸-醋酸、硫酸、三氯化锑、磷钼酸、醋酐-浓硫酸、碘蒸气等，其中以不同浓度的硫酸乙醇液为最常用。三、含量测定中药制剂中皂苷类成分的定量分析可分为总皂苷(元)测定和皂苷(元)单体成分测定。（一）总皂苷总皂苷(元元)含量测定含量测定总皂苷的含量测定一般需要用适当的溶剂提取。由于皂苷在极性溶剂中溶解度较大，因此提取溶剂可为各种浓度的甲醇(7095)、乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇。提取后经分离得到总皂苷成分，分离可用有机溶剂，如水饱和的正丁醇萃取，也可用大孔吸附树脂处理后溶剂洗脱。总皂苷元的含量测定可按上述总皂苷的提取分离方法得到总皂苷，再加酸(如硫酸、盐酸)加热水解，得到皂苷

45、元；也可以将样品先行水解，再用有机溶剂从水解后的混合液中提取皂苷元。测定总皂苷(元)最常用的方法是重量法和比色法。三、含量测定1. 重量法重量法 根据三萜皂苷类成分的溶解性进行提取、分离及纯化后得总皂苷，恒重，称量并计算样品中总皂苷含量，该方法主要用于含皂苷的原料药质量控制。在中药制剂中，如处方中药味含皂苷类成分较多时，常用正丁醇作溶剂，测定正丁醇浸出物。2. 比色法比色法 利用三萜皂苷能与某些试剂反应后产生颜色，进行比色测定。皂苷类成分的颜色反应专属性虽较差，但反应比较灵敏，方法简便、易行。常用显色剂有香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等。用比色法测定中药制剂

46、中总皂苷或总皂苷元的含量时，可选用单体皂苷或皂苷元作对照品，但要注意测定单体皂苷或皂苷元与总皂苷的换算系数。三、含量测定（二）皂苷单体成分含量测定（二）皂苷单体成分含量测定皂苷单体成分的含量测定方法主要为薄层色谱法和高效液相色谱法。直接用紫外分光光度法测定的不多。1. 薄层色谱法薄层色谱法 薄层色谱法在皂苷类成分的定量分析中占主导地位。样品经适当的提取、纯化后，用薄层色谱法分离，可排除其他组分的干扰，常用于测定中药制剂中的单体皂苷或皂苷元，定量方法可采用薄层洗脱-比色法或薄层扫描法。三、含量测定2. 高效液相色谱法高效液相色谱法 大多数三萜皂苷类成分，如人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末

47、端吸收，用紫外检测器来检测，但灵敏度相对较低。少数三萜皂苷类成分本身具有较强的紫外吸收，如甘草酸、远志皂苷等，可用HPLC法分离并用紫外检测器检测。近年来，随着高效液相色谱检测器技术的发展，蒸发散射检测器(ELSD)的出现，使得高效液相色谱法检测三萜皂苷类成分的文献报道越来越多。用ELSD检测，系统平衡快(大约30分钟)，基线稳定，重现性、灵敏度较好，且通过自然对数拟合，峰面积值与进样量之间呈良好的线性关系，结果较准确；而用UV检测，系统平衡慢(12小时)，基线不稳定，重现性、灵敏度较差，当样品含量较低时测定结果误差较大。四、应用举例乙肝宁颗粒黄芪定性鉴别和黄芪甲苷含量测定乙肝宁颗粒黄芪定性鉴

48、别和黄芪甲苷含量测定乙肝宁颗粒由黄芪、白花蛇舌草、茵陈、金钱草、党参、蒲公英、制何首乌、牡丹皮、丹参、茯苓、白芍、白术、川楝子加工制备而成。(1)黄芪定性鉴别黄芪定性鉴别 取本品1袋，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用以水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加1氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液用以正丁醇饱和的水洗至中性，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5L，分别点于同一硅胶G薄

49、层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(20:40:22:10)10以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。四、应用举例(2)黄芪甲苷含量测定黄芪甲苷含量测定 照高效液相色谱法 (附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (75:25)为流动相；用蒸发光散射检测器检测。温度40。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取

50、本品，研细，取约5g，精密称定，加水20ml使溶解，用以水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液20ml分2次洗涤，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液10L、30L及供试品溶液20L，注入液相色谱仪，用外标两点法对数方程计算，即得。 第四节 醌类一、结构特征及理化性质二、定性鉴别三、含量测定四、应用举例一、结构特征及理化性质（一）结构类型及特征（一）结构类型及特征醌类化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四种类型。苯醌类化合物可分为邻苯醌及对苯醌两大类。前者不稳定，天然存在的苯醌

51、化合物多为对苯醌的衍生物，且在醌核上多有-OH、-OCH3、-CH3等基团或更长的烃类侧链取代。萘醌类化合物分为(1，4)、(1，2)及amphi(2，6)三种类型，天然存在的大多为-萘醌类衍生物。天然菲醌衍生物包括邻醌(A)及对醌(B)两种类型。蒽醌则可分为氧化型和还原型，单蒽核和双蒽核等，常见类型包括蒽醌、蒽酚、氧化蒽酚、蒽酮、二蒽酮、二蒽醌等。中药中存在的蒽醌类成分多为蒽醌的羟基、羟甲基、甲氧基和羰基衍生物，可呈游离形式或糖结合成苷的形式存在。一、结构特征及理化性质（二）理化性质（二）理化性质1. 物理性状物理性状 醌类化合物分子中多有酚羟基等助色团取代，表现出一定的颜色如黄、橙、棕红色

52、以至紫红色等。游离醌类多为有色晶体，结合成苷后，多数难以得到良好结晶。游离醌类多具有升华性，小分子的苯醌及萘醌类具有挥发性，能随水蒸气蒸馏。游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，微溶于或不溶于水。结合成苷后极性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在热水中也可溶解，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。有些醌类化合物对光不稳定，须避光贮存。2. 酸性酸性 蒽醌类化合物分子中多具有酚羟基，具有一定酸性，在碱性水溶液中易溶，但加酸酸化时又可重新沉淀析出。3. 显色反应显色反应 醌类化合物的颜色反应主要取决于其氧化还原性质以及存在的酚羟基的性质。(1)碱性条件下的呈色反应碱性条件下的呈色反应 羟基蒽醌

53、类在碱性溶液中会引起颜色改变并加深，多呈橙、红、紫红色及蓝色。蒽酚、蒽酮、二蒽酮类化合物则需经过氧化形成蒽醌后才能呈色。(2)与金属离子的反应与金属离子的反应 在蒽醌类化合物结构中，如果有-酚羟基或具有邻二酚羟基时，则可与Pb2+、Mg2+等金属离子形成配合物。(3)与对亚硝基二甲苯胺反应与对亚硝基二甲苯胺反应 9位或10位未取代的羟基蒽酮类化合物，尤其是1，8-二羟基衍生物，可与对亚硝基二甲苯胺反应，缩合产生各种颜色，如紫色、绿色、蓝色及灰色等。二、定性鉴别1. 显色反应显色反应 将中药制剂用适当方法提取分离，制成供试品溶液，利用碱性条件下的呈色反应或醋酸镁显色反应等可对羟基蒽醌类成分进行鉴

54、别。 2. 升华法升华法 游离醌类化合物具有升华性。中药制剂中如含有这类成分，且量较大时，可采用升华法得到升华物，可见光下观察或加碱性试液显色。3. 薄层鉴别薄层鉴别 薄层色谱法是中药制剂中醌类成分最主要的定性鉴别方法。吸附剂多用硅胶。展开剂大多使用混合溶剂，且多含有水或甲醇，其中乙酸乙酯-甲醇-水或相近的比例)是用途最广的展开剂，适于分离蒽醌苷元和蒽醌苷。正丙醇-乙酸乙酯-水(4:4:3)和异丙醇-乙酸乙酯-水(9:9:4)适于分离番泻苷和二蒽酮苷。不含水或甲醇的混合溶媒适合于分离蒽醌苷元。显色方法主要有喷碱性试剂或醋酸镁甲醇液、氨气熏及在紫外灯下观察荧光，亦可在可见光下直接观察色斑。三、含

55、量测定（一）蒽醌类成分含量测定（一）蒽醌类成分含量测定1. 游离蒽醌的测定游离蒽醌的测定 游离蒽醌的测定多将样品用弱极性溶剂如乙醚、氯仿等提取后加碱比色测定。具体方法是称取样品适量，置索氏提取器中，用氯仿回流提取至无色。氯仿提取液移入分液漏斗中，以5氢氧化钠-2氢氧化铵混合碱液分次提取至无色，合并碱液，用少量氯仿洗涤，氯仿弃去，碱液调整至一定体积，若不澄清，可用垂熔漏斗过滤，滤液在沸水浴中加热4分钟，用冷水冷却至室温，30分钟后比色测定，以1，8-二羟基蒽醌为对照品，计算含量。2. 结合蒽醌的测定结合蒽醌的测定 蒽醌苷类成分极性较强，可以用极性溶剂提取，通常是取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出，

56、水解成苷元后再测定；也可将药渣先行酸水解，然后用非极性溶剂提取苷元后测定；或取待测样品先行酸水解，然后用非极性溶剂提取苷元后测定，其结果为总蒽醌含量，从中减去游离蒽醌含量，即得结合蒽醌的含量。三、含量测定3. 蒽醌类单体成分的测定蒽醌类单体成分的测定 中药制剂中蒽醌类单体成分的测定一般采用薄层扫描法和高效液相色谱法。薄层扫描法为蒽醌类成分常用定量分析方法，经色谱分离后，可在可见光、紫外光及荧光下扫描测定。蒽醌类成分在紫外及可见光下均有强吸收，利用高效液相色谱-紫外可见光检测器测定蒽醌类单体成分，具有灵敏、准确、简便等特点。在含蒽醌类化合物的中药制剂分析中应用很多。（二）萘醌、菲醌类成分含量测定

57、（二）萘醌、菲醌类成分含量测定重量法、分光光度法常用于测定萘醌、菲醌类总成分含量；薄层色谱法、高效液相色谱法常用于测定萘醌、菲醌类单体成分含量。四、应用举例三黄片大黄定性鉴别和含量测定三黄片大黄定性鉴别和含量测定三黄片由大黄、盐酸小檗碱、黄芩浸膏加工制备而成。(1)大黄定性鉴别大黄定性鉴别 取本品5片，除去糖衣，研细，加甲醇30ml，加热回流提取30分钟，放冷，滤过，取滤液5ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置热水浴中加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次10ml，合并乙醚提取液，挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材1g，同法制成对照药

58、材溶液。再取大黄酚、大黄素对照品，加甲醇制成每1ml中各含的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(3060)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。四、应用举例(2)含量测定含量测定 照高效液相色谱法(附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅

59、胶为填充剂；甲醇磷酸溶液(85:15)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备 分别精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加无水乙醇-醋酸乙酯(2:1)制成每1ml含大黄素、大黄酚的混合溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，精密称定，研细(过三号筛)，精密称取适量(约相当于1片的重量)，置锥形瓶中，精密加乙醇25ml，密塞，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30乙醇-盐酸(10:1)溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4次，每

60、次15ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯(2:1)溶解，移置25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45m)滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。第五节 挥发油类一、结构特征及理化性质二、定性鉴别三、含量测定四、应用举例一、结构特征及理化性质（一）结构特征（一）结构特征挥发油所含成分相当复杂，一种挥发油常含有几十种到一二百种成分。按其化学结构，可分为萜类化合物、脂肪族化合物及芳香族化合物等。单萜、倍半萜及其含氧衍生物是组成挥发油的主要成分，其中含氧衍生物大多生物活性较强，并具有芳香气味，如薄荷醇、

61、薄荷酮、樟脑、龙脑、茴香酮、苍术酮等。脂肪族化合物多为小分子，如正庚烷、正癸烷、辛烯、甲戊酮、醋酸乙酯、乙酸戊酯、丁酸己酯、异戊酸、异戊醛(存在于薄荷油)、癸酰乙醛(即鱼腥草素，存在于鱼腥草油)等。芳香族化合物则包括苯丙烷衍生物，具有C6-C3骨架，如桂皮醛、丁香酚；以及一些具有C6-C2或C6-C1骨架的化合物，如苯乙烯、苯乙醇、花椒油素、茴香醛、丹皮酚、香荚兰醛等。另外还有一些碱性成分和萜源衍生物等。一、结构特征及理化性质（二）理化性质（二）理化性质1. 物理性状物理性状 通常情况下，挥发油为具有特殊而浓烈气味的油状液体，多数比重小于1，沸点在70-300之间；具有折光性，折光率在之间；不

62、溶于水而易溶于大多数有机溶剂和高浓度乙醇。2. 显色反应显色反应 挥发油具有的显色反应，与其组成中各组分结构含有的官能团有关。如含有酚羟基，加入三氯化铁乙醇溶液，可产生蓝色、蓝紫色或绿色反应；含有羰基，加入苯肼或苯肼衍生物、羟胺等试剂，可析出结晶；含有醛基，加入硝酸银氨试液，可发生银镜反应；含有，-不饱和内酯结构，于样品的吡啶溶液中加入亚硝酰铁氰化钠及氢氧化钠溶液，则出现红色并逐渐消失；含有不饱和双键或三键，于样品中加入溴，红棕色褪去；含有薁类结构，加入浓硫酸，可产生蓝色或紫色反应。二、定性鉴别（一）化学反应法（一）化学反应法根据中药制剂中所含挥发油各组分的结构或官能团的化学性质进行鉴别。但因

63、中药复方制剂中成分复杂，干扰因素众多，专属性不强。（二）薄层色谱法（二）薄层色谱法在挥发油的定性分析中薄层色谱应用较为普遍。用薄层色谱法分离检识挥发油时，吸附剂多采用硅胶或中性氧化铝，主要根据挥发油中不同组分极性大小予以分离。针对不同极性的成分，在选择展开剂时，一般常用石油醚(或正己烷)展开非含氧烃类；用石油醚(或正己烷)醋酸乙酯混合溶剂展开含氧烃类。亦可根据具体情况，选择其他展开剂，如苯、乙醚、四氯化碳、氯仿、醋酸乙酯及其不同比例的混合溶剂。对于组成特别复杂，一次展开或单向展开，分离效果不理想者，也可考虑采用其他展开方式，如选择相同或不同展开剂二次展开或双向展开，往往会获得较好的分离效果。对

64、一些难分离的组分，尤其是含不同双键的萜类化合物，可采用硝酸银薄层进行分离。挥发油薄层色谱常用显色剂有：1茴香醛(香草醛)-浓硫酸试剂，2高锰酸钾水溶液，荧光素-溴试剂，2，4-二硝基苯肼试剂，异羟肟酸铁试剂，三氯化铁试剂，溴酚蓝乙醇溶液，硝酸铈铵试剂，对二甲氨基苯甲醛试剂，碘化钾-冰醋酸-淀粉试剂等。二、定性鉴别（三）气相色谱法（三）气相色谱法气相色谱法是研究挥发油的重要手段之一。在挥发油的气相色谱中，固定相常选用非极性的饱和烃润滑油类(如硅酮、甲基硅油等)和极性固定相类(如聚酯、聚乙二醇类等)。前者适用于沸点差异大的萜类成分的分离，而后者适用于沸点差异小，但极性有差异的萜类成分的分离。柱温对

65、分离的影响较大。一般单萜类可在130或低于130的柱温下分离；倍半萜烯在170180或更高的温度下才能得到较好的分离；而含氧衍生物的分离一般柱温在130190之间。鉴于挥发油组成成分复杂，目前多采用程序升温法，可使挥发油中的单萜、倍半萜及其含氧衍生物一次获得分离。（四）气相色谱（四）气相色谱-质谱质谱(GC-MS)联用法联用法 GC-MS是分析鉴定挥发油的有效手段之一，如采用气相色谱-质谱联用法从广陈皮挥发油中分离检定出柠檬烯、-月桂烯、-蒎烯、-桉油烯等24种成分。 此外，也可采用气相色谱-傅立叶变换红外光谱(GC-FTIR)联用法分析鉴定挥发油。三、含量测定（一）气相色谱法（一）气相色谱法

66、气相色谱法是目前测定挥发油含量最常用的方法。在测定时，即可用填充柱，也可用毛细管柱。使用填充柱时，多用经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球作载体，载体直径为、或；固定液可分为非极性的饱和烃润滑油类(如硅酮、甲基硅油等)和极性的聚酯、聚乙二醇类。其中极性固定液对分离醇、醛、酮、酯等挥发性成分效果较好。毛细管柱用玻璃或弹性石英柱，内径一般为或。检测器温度一般为250350。为了克服一般气相色谱分析中药成分周期长，操作复杂，可能破坏或损失某些成分的缺点，可采用闪蒸气相色谱法，将样品置闪蒸器内，在一定温度下，挥发性成分汽化，被载气带入色谱柱进行分析。也可用顶空气相色谱分析法，在热力学平衡的蒸气相

67、与被分析样品同时存在于一个密闭恒温的样品瓶中，测定恒温后样品瓶蒸气相中挥发性成分的含量。气相色谱定量方法可用外标法或内标法。外标法虽然操作方便，但定量准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响较大。因此在分离度允许的情况下，以使用内标法为宜。三、含量测定（二）薄层色谱扫描法（二）薄层色谱扫描法挥发油成分复杂，薄层色谱分离往往很难达到定量分析要求，且挥发性成分在室温下易挥散损失，因此薄层色谱扫描法较少用于挥发性成分定量分析。（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法一些具有紫外吸收的挥发性成分，如小分子芳香族化合物(桂皮醛、丹皮酚、丁香酚等)，可用高效液相色谱法进行测定。（四）（四）GC-MS和和G

68、C-FTIR等联用技术等联用技术GC-MS和GC-FTIR等联用技术用于挥发油的定量分析，具有方法简便、快速等优点。其中尤以GC-MS联用法应用较多，特别是在没有标准品而需要定量未知化合物时，可在利用数据库或分析质谱裂解碎片，对未知化合物进行定性分析的基础上，用归一化法测定含量。四、应用举例冠心苏合丸冰片含量测定冠心苏合丸冰片含量测定冠心苏合丸由苏合香、冰片、乳香(制)、檀香、青木香加工制备而成。含量测定 照气相色谱法(附录 E)测定。 色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇 (PEG)-20M为固定相，涂布浓度为10；柱温为140。理论板数按十五烷峰计算应不低于1200。校正因子测定 取正十五

69、烷适量，用醋酸乙酯溶解并制成每1ml含7mg的溶液，作为内标溶液。另取冰片对照品约10mg，精密称定，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，取1l注入气相色谱仪，计算校正因子，即得。 测定法 取本品10丸，精密称定，研细，或取本品10丸，精密称定，每丸各取四分之一，合并，精密称定，精密加入等量硅藻土，研匀。精密称取适量(约相当于冰片12mg)，置具塞试管中，精密加入内标溶液1ml与醋酸乙酯4ml，密塞，振摇使冰片溶解，静置，取上清液1l，注入气相色谱仪，测定，即得。第六节 其他成分一、香豆素类二、有机酸类三、脂素类四、环烯醚萜苷类五、多糖类六、含动物药中药制剂的分析

70、七、含矿物药中药制剂的分析 一、香豆素类(一一)结构特征及理化性质结构特征及理化性质1. 结构特征结构特征 香豆素类成分在结构上可以看成是顺式邻羟基桂皮酸脱香豆素类成分在结构上可以看成是顺式邻羟基桂皮酸脱水而形成的内酯类化合物。分子中苯环或吡喃酮环上常有取代基存在，水而形成的内酯类化合物。分子中苯环或吡喃酮环上常有取代基存在，如羟基、苯基、异戊烯基等。按其基本环状结构形式，常分为简单香如羟基、苯基、异戊烯基等。按其基本环状结构形式，常分为简单香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素、异香豆素和其他香豆素等。豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素、异香豆素和其他香豆素等。2. 理化性质理化性质(1)性状性状 分子量

71、小的游离香豆素类化合物多具有芳香气味与挥发性，分子量小的游离香豆素类化合物多具有芳香气味与挥发性，能随水蒸汽蒸馏，且具升华性。香豆素苷类一般不具挥发性，也不能能随水蒸汽蒸馏，且具升华性。香豆素苷类一般不具挥发性，也不能升华。香豆素母核本身无荧光，而羟基香豆素在紫外光下大多数能显升华。香豆素母核本身无荧光，而羟基香豆素在紫外光下大多数能显蓝色荧光，荧光的有无或强弱与分子中取代基的种类和位置有关。蓝色荧光，荧光的有无或强弱与分子中取代基的种类和位置有关。(2)溶解性溶解性 游离香豆素类成分易溶于乙醚、氯仿、丙酮、乙醇、甲醇游离香豆素类成分易溶于乙醚、氯仿、丙酮、乙醇、甲醇等有机溶剂，也能部分溶于沸

72、水，但不溶于冷水。香豆素苷类成分易等有机溶剂，也能部分溶于沸水，但不溶于冷水。香豆素苷类成分易溶甲醇、乙醇，可溶于水，难溶于乙醚、氯仿等低极性有机溶剂。溶甲醇、乙醇，可溶于水，难溶于乙醚、氯仿等低极性有机溶剂。 一、香豆素类(3)显色反应显色反应 异羟肟酸铁反应：香豆素类成分具有内酯异羟肟酸铁反应：香豆素类成分具有内酯结构，在碱性条件下开环，与盐酸羟胺缩合生成异羟肟酸，结构，在碱性条件下开环，与盐酸羟胺缩合生成异羟肟酸，在酸性条件下再与在酸性条件下再与Fe3+络合而显红色。络合而显红色。三氯化铁反应：三氯化铁反应：香豆素类成分常具有酚羟基取代，可与三氯化铁溶液反应香豆素类成分常具有酚羟基取代，

73、可与三氯化铁溶液反应产生绿色至墨绿色沉淀。产生绿色至墨绿色沉淀。重氮化反应：香豆素类成分酚重氮化反应：香豆素类成分酚羟基的邻、对位无取代基，可与重氮化试剂反应而显红色羟基的邻、对位无取代基，可与重氮化试剂反应而显红色至紫红色。至紫红色。Gibbs反应或反应或Emerson反应：香豆素类成反应：香豆素类成分酚羟基对位无取代基，或在碱性条件下内酯环水解开环分酚羟基对位无取代基，或在碱性条件下内酯环水解开环生成酚羟基，其对位生成酚羟基，其对位(6位位)无取代，则可与无取代，则可与2，6-二氯二氯(溴溴)苯醌氯亚胺苯醌氯亚胺(Gibbs试剂试剂)或或4-氨基安替比林和铁氰化钾氨基安替比林和铁氰化钾(E

74、merson试剂试剂)反应而显蓝色或红色。反应而显蓝色或红色。(4)光谱特征光谱特征 香豆素类化合物多在紫外光区有很强的特征香豆素类化合物多在紫外光区有很强的特征吸收，最大吸收波长一般在吸收，最大吸收波长一般在300nm左右左右(lg为为4左右左右)，吸收峰的位置与取代基有很大关系。吸收峰的位置与取代基有很大关系。 一、香豆素类(二二)定性鉴别定性鉴别1. 理化鉴别理化鉴别(1)荧光反应荧光反应 羟基香豆素类成分在紫外光(365nm)照射下一般显蓝色或紫色的荧光，可用于鉴别与检识。7-羟基香豆素类往往有较强的蓝色荧光，加碱后其荧光更强，颜色变为绿色；多烷氧基取代的呋喃香豆素类一般呈黄绿色或褐色

75、荧光。(2)显色反应显色反应 香豆素类成分分子中具有内酯结构，往往还具有酚羟基，这些基团的显色反应，如异羟肟酸铁反应、三氯化铁反应、重氮化反应、Gibbs反应或Emerson反应等，可用于鉴别与检识。2. 色谱鉴别色谱鉴别 香豆素类成分一般用薄层色谱检识，常用硅胶作为吸附剂，游离香豆素类可用环己烷(石油醚)-乙酸乙酯、氯仿-丙酮等溶剂系统展开。香豆素苷类可依极性选用不同比例的氯仿-甲醇作展开剂。在紫外光(365nm)下观察，香豆素类成分在色谱上多显蓝色、紫色荧光斑点，或喷异羟肟酸铁试剂显色。此外，纸色谱、聚酰胺色谱也可用于香豆素类化合物的检识。 一、香豆素类(三三)含量测定含量测定 1. 紫外

76、紫外-可见分光光度法可见分光光度法 香豆素类成分都具有紫外吸收，样品杂质较香豆素类成分都具有紫外吸收，样品杂质较少、干扰较少时，可于紫外光区直接测定；也可利用香豆素类成分的少、干扰较少时，可于紫外光区直接测定；也可利用香豆素类成分的颜色反应，生成有色物质，在可见光区比色测定。颜色反应，生成有色物质，在可见光区比色测定。2. 荧光分光光度法荧光分光光度法 羟基香豆素类成分大多能产生较强烈荧光，用荧羟基香豆素类成分大多能产生较强烈荧光，用荧光光度法测定有较高灵敏度。当干扰成分较多时，可采用薄层洗脱定光光度法测定有较高灵敏度。当干扰成分较多时，可采用薄层洗脱定量。量。3. 薄层扫描法薄层扫描法 样品

77、经薄层分离后，利用香豆素类成分具有紫外吸收样品经薄层分离后，利用香豆素类成分具有紫外吸收或能产生荧光的特性，不经显色，直接进行扫描测定。或能产生荧光的特性，不经显色，直接进行扫描测定。4. 高效液相色谱法高效液相色谱法 可以选择正相或反相色谱。反相色谱常用固定相可以选择正相或反相色谱。反相色谱常用固定相为为C18，流动相为不同比例的甲醇，流动相为不同比例的甲醇(乙腈乙腈)-水，检测器选择紫外检测器水，检测器选择紫外检测器或荧光检测器。或荧光检测器。5. 气相色谱法气相色谱法 某些分子量小、具有挥发性的香豆素类成分，可用气某些分子量小、具有挥发性的香豆素类成分，可用气相色谱法测定。相色谱法测定。

78、 一、香豆素类(四四)应用实例应用实例 二丁颗粒秦皮乙素含量测定二丁颗粒秦皮乙素含量测定二丁颗粒由紫花地丁、半边莲、蒲公英、板蓝根加工制备而成。含量测定含量测定 照高效液相色谱法 (附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸(20:80:0.4)为流动相；检测波长为353nm。理论板数按秦皮乙素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备 取秦皮乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品研细，取约，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分

79、钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。二、有机酸类（一）结构特征及理化性质（一）结构特征及理化性质1. 结构特征结构特征 有机酸按结构可分为三类，即脂肪族类、芳香族类和萜类。分子结构中均有羧基取代，按羧基数目又可分为单羧基酸、二羧基酸和三羧基酸等。2. 理化性质理化性质 有机酸类成分具有一般羧酸的性质，如酸性等，可与碳酸氢钠等形成盐。小分子脂肪酸(8个碳以下)常温时多为液体，芳香族有机酸类大都为固体化合物。分子量小的脂肪酸易溶于水，芳香酸易溶于有机溶剂而难溶于水。有些有机酸具有挥发

80、性，能被水蒸气蒸馏。二、有机酸类（二）定性鉴别（二）定性鉴别有机酸的定性鉴别常用PC或TLC，其中尤以TLC最常用，吸附剂多用硅胶、聚酰胺等。展开剂中常加入一定比例的甲酸或乙酸等，防止有机酸展开过程中发生离解，以消除因解离而产生拖尾现象。常用的显色剂为pH指示剂，如溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝、甲基红-溴酚蓝混合指示剂等，当展开剂中含有酸性组分(如甲酸、乙酸)时，在喷洒显色剂前，应先将薄层在120加热，除去薄层板上的酸，以保证显色效果。其他显色剂如芳香胺-还原糖试剂，其灵敏度大于pH指示剂；磷钼酸试剂对脂肪酸有较大灵敏度；二氯靛酚适用于检出酮酸等。具有荧光的物质如绿原酸、阿魏酸等，可不必显色，在

81、荧光灯下观察荧光。 二、有机酸类（三）含量测定（三）含量测定1. 酸碱滴定法酸碱滴定法 适合于测定总有机酸类成分，由于中药中有机酸类成分酸性弱，在水溶液中滴定突跃不明显，可用非水溶液滴定法。2. 高效液相色谱法高效液相色谱法 可对大多数的芳香族有机酸和其他具有紫外吸收的有机酸类成分，进行含量测定。如绿原酸、没食子酸、桂皮酸、丹参素、阿魏酸等。3. 薄层扫描法薄层扫描法 通过薄层分离、显色可测定一些不具有紫外吸收的酸类物质，如脂肪酸类和萜酸类成分。脂肪酸类成分，可选择pH指示剂，如溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝等为显色剂；萜酸类成分可选择磷钼酸、硫酸等为显色剂。可产生荧光者，如阿魏酸、绿原酸等化合物

82、，也可用薄层分离后选择荧光法测定。4. 分光光度法分光光度法 常用于显色后的比色分析，也可在薄层色谱、柱色谱分离后进行分光光度分析。5. 其他方法其他方法 如超临界流体色谱法、高效毛细管电泳法、气相色谱法等。二、有机酸类（四）应用实例桂枝茯苓丸肉桂酸含量测定（四）应用实例桂枝茯苓丸肉桂酸含量测定桂枝茯苓丸由桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁加工制备而成。含量测定 照高效液相色谱法(附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈磷酸溶液(30:70)为流动相；检测波长为285nm。理论板数按肉桂酸峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品10mg，

83、置100ml棕色量瓶中，用50甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加50甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml含肉桂酸5g)。供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，切碎，混匀，取10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。 三、木脂素类（一）结构特征及理化性质（一）结构特征及理化性质1. 结构特征结构特征 木脂素在植物体中大多以游离形式与植物胶、树脂等脂溶性成分共存，少数以

84、苷的形式存在。分子结构类型众多，立体结构复杂。结构中除均含有两个苯环外，多数具有醇羟基、酚羟基、甲氧基、亚甲二氧基、醚环及内酯环等含氧取代基。2. 理化性质理化性质(1)物理性状物理性状 多数木脂素化合物是无色结晶，一般无挥发性，少数具升华性，如二氢愈创木酯酸。木脂素大部分具有光学活性，遇酸易异构化。(2)溶解性溶解性 游离木脂素多具有亲脂性，一般难溶于水，易溶于苯、氯仿、乙醚、丙酮及乙醇等有机溶剂，具有酚羟基的木脂素类还可溶于苛性碱水溶液中。木脂素苷类水中溶解性增大。(3)显色反应显色反应 木脂素类没有共有的特征颜色反应，但对于一些非特征性试剂如磷钼酸乙醇溶液、硫酸乙醇溶液等，不同的木脂素化

85、合物可显示不同的颜色，常用于薄层色谱的显色。分子结构中具有亚甲二氧基的木脂素，Labat反应呈阳性，即加入浓硫酸和没食子酸，可产生蓝绿色。如以变色酸代替没食子酸，并在7080保温20分钟，可产生蓝紫色，称为Ecgrine 反应。 三、木脂素类（二）定性鉴别（二）定性鉴别1. 理化鉴别理化鉴别 利用木脂素分子结构中的功能基具有的颜色反应来进行检识。例如木脂素结构中的酚羟基可与一些酚类试剂如三氯化铁试剂、重氮化试剂反应；结构中的亚甲二氧基有Labat 反应和Eegrine反应。但应注意，因干扰因素较多，复方制剂应用时要进行阴性对照实验，以证明其专属性。2. 色谱鉴别色谱鉴别 木脂素类成分一般具有较

86、强的亲脂性，采用吸附色谱法可获得较好的分离效果，常用硅胶薄层色谱，展开剂一般以亲脂性溶剂为主，如苯、氯仿、氯仿-甲醇(9:1)、氯仿-醋酸乙酯(9:1)、氯仿-二氯甲烷(9:1)和醋酸乙酯-甲醇(95:5)等。显色方法大多用香草醛试剂和10硫酸乙醇溶液，110加热5分钟，另外还可用510磷钼酸乙醇溶液或碘蒸气显色。三、木脂素类（三）含量测定（三）含量测定1. 总木脂素成分含量测定总木脂素成分含量测定 总木脂素类含量测定方法可采用变色酸比色法及柱色谱-比色法等。变色酸比色法是根据某些木脂素成分，其结构中亚甲二氧基与变色酸-浓硫酸试剂反应产生颜色进行比色测定含量，本方法要求供试液纯度较高。2. 木

87、脂素单体成分含量测定木脂素单体成分含量测定 木脂素单体成分的含量测定方法主要用色谱法，常用的有薄层色谱法和高效液相色谱法。其中薄层色谱法，一般多用吸附色谱法，以硅胶为吸附剂，低极性有机溶剂展开。由于木脂素类均有紫外吸收，故可直接测定。高效液相色谱法，一般以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水或甲醇-水为流动相，紫外检测器检测。三、木脂素类（四）应用实例胃肠安丸厚朴的定性鉴别和含量测定（四）应用实例胃肠安丸厚朴的定性鉴别和含量测定胃肠安丸由木香、沉香、枳壳(麸炒)、檀香、大黄、厚朴(姜制)、朱砂、麝香、巴豆霜、大枣(去核)、川芎加工制备而成。(1)厚朴定性鉴别厚朴定性鉴别 取本品1g，研细，加

88、甲醇20ml，浸渍1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取厚朴对照药材，同法制成对照药材溶液。再取厚朴酚与和厚朴酚对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B)试验，吸取上述三种溶液各2l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(18:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1香草醛硫酸溶液，在100加热约10分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 三、木脂素类(2)含量测定含量测定 照高效液相色谱法(附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

89、甲醇-乙腈-水(50:20:40)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备 分别取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚60g、每1ml含和厚朴酚10g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品3g，研细，取，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入氯仿50ml，称定重量，静置过夜，超声处理小时，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液15ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定，即得。四、环烯醚

90、萜苷类（一）结构特征及理化性质（一）结构特征及理化性质1. 结构特征结构特征 环烯醚萜类多具有半缩醛及环戊烷环的结构特点，根据其环戊烷环是否裂环，分为环烯醚萜苷和和裂环环烯醚萜苷二类。环烯醚萜苷C4位多连甲基或羧基、羧酸甲酯和羟甲基等。若C4位无取代基，则称为4-去甲基环烯醚萜苷。2. 理化性质理化性质 环烯醚萜苷类化合物多为白色结晶或无定形粉末，具有旋光性。偏于亲水性，大多数易溶于水和甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇，难溶于氯仿、苯、石油醚等亲脂性有机溶剂。环烯醚萜苷稳定性较差，易被酸和酶水解，苷元化学性质活泼，易氧化聚合。环烯醚萜苷元与氨基酸(甘氨酸、亮氨酸、谷氨酸)共热，显红色至蓝紫色；在

91、冰醋酸溶液中，与少量铜离子加热，产生蓝色反应；与Trim-Hill试剂(乙酸10ml、硫酸铜水溶液1ml、浓硫酸混合溶液)共热产生不同颜色；与Epstahl试剂(对二甲氨基苯甲醛-冰醋酸-磷酸溶液)显色；吡喃衍生物可与Shear试剂(浓盐酸1体积与苯胺15体积混合)反应产生特殊颜色反应；分子结构中有环戊酮结构，可与2，4-二硝基苯肼反应产生黄色。 四、环烯醚萜苷类（二）定性鉴别（二）定性鉴别1. 理化鉴别理化鉴别 可利用不同环烯醚萜类成分与氨基酸、铜离子-冰乙酸试剂、Trim-Hill试剂、Epstahl试剂、Shear试剂反应显不同颜色进行鉴别，但需注意样品的纯化分离，以最大限度地保证显色反

92、应的专属性。2. 色谱鉴别色谱鉴别 主要采用薄层色谱法鉴别。吸附剂可用硅胶G、硅胶GF254和聚酰胺等。显色剂可根据不同成分选择硫酸乙醇液、香草醛-浓硫酸试剂、茴香醛-浓硫酸试剂、对二甲氨基苯甲醛-硫酸试剂、五氯化锑、三氯化锑、碘蒸气、磷钼酸、2，4-二硝基苯肼等。但需要注意的是，上述显色试剂，大多属于通用性显色试剂，能使多种成分显色，在鉴别时，应尽量使用相应的对照品或对照药材作对照。 四、环烯醚萜苷类（三）含量测定（三）含量测定1. 分光光度法分光光度法 利用环烯醚萜类成分与某些试剂的显色反应，用分光光度法测定含量。对于能产生荧光者，可用荧光分光光度法测定含量。2. 薄层扫描法薄层扫描法 薄

93、层扫描法测定环烯醚萜类成分时，可用硅胶GF254薄层，检测荧光熄灭斑点；也可用硅胶G薄层，用显色剂显色后测定。3. 高效液相色谱法高效液相色谱法 常用于有紫外吸收的环烯醚萜类成分的定量，对一些分子结构中有孤立双键者，也可利用其末端吸收进行测定。四、环烯醚萜苷类（一）结构特征及理化性质（一）结构特征及理化性质1. 结构特征结构特征 环烯醚萜类多具有半缩醛及环戊烷环的结构特点，根据其环戊烷环是否裂环，分为环烯醚萜苷和和裂环环烯醚萜苷二类。环烯醚萜苷C4位多连甲基或羧基、羧酸甲酯和羟甲基等。若C4位无取代基，则称为4-去甲基环烯醚萜苷。2. 理化性质理化性质 环烯醚萜苷类化合物多为白色结晶或无定形粉

94、末，具有旋光性。偏于亲水性，大多数易溶于水和甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇，难溶于氯仿、苯、石油醚等亲脂性有机溶剂。环烯醚萜苷稳定性较差，易被酸和酶水解，苷元化学性质活泼，易氧化聚合。环烯醚萜苷元与氨基酸(甘氨酸、亮氨酸、谷氨酸)共热，显红色至蓝紫色；在冰醋酸溶液中，与少量铜离子加热，产生蓝色反应；与Trim-Hill试剂(乙酸10ml、硫酸铜水溶液1ml、浓硫酸混合溶液)共热产生不同颜色；与Epstahl试剂(对二甲氨基苯甲醛-冰醋酸-磷酸溶液)显色；吡喃衍生物可与Shear试剂(浓盐酸1体积与苯胺15体积混合)反应产生特殊颜色反应；分子结构中有环戊酮结构，可与2，4-二硝基苯肼反应产生黄色

95、。 四、环烯醚萜苷类（五）应用实例（五）应用实例栀子金花丸栀子定性鉴别和栀子苷含量测定栀子金花丸栀子定性鉴别和栀子苷含量测定栀子金花丸由栀子、黄连、黄芩、黄柏、大黄、金银花、知母、天花粉加工制备而成。(1)栀子定性鉴别栀子定性鉴别 取本品2g，研细，加乙醚10ml，振摇10分钟，弃去乙醚，药渣挥干，加乙酸乙酯20ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10

96、:6:2:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，在105加热约10分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。四、环烯醚萜苷类(2)栀子苷含量测定栀子苷含量测定 照高效液相色谱法照高效液相色谱法 (附录附录 D)测定。测定。色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈填充剂；以乙腈-水水(11:89)为流动相；检测波长为为流动相；检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加

97、取栀子苷对照品适量，精密称定，加50甲醇制成每甲醇制成每1ml含含30g的溶液，即得。的溶液，即得。供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约取本品适量，研细，取约1g，精密称，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入定，置具塞锥形瓶中，精密加入50甲醇甲醇50ml，密塞，密塞，称定重量，超声处理称定重量，超声处理(功率功率300W，频率，频率50kHz)20分钟，分钟，放冷，再称定重量，用放冷，再称定重量，用50甲醇补足减失的重量，摇匀，甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液滤过，精密量取续滤液10ml，置，置25ml量瓶中，加量瓶中，加50甲甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液

98、，即得。醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。注入液相色谱仪，测定，即得。 四、环烯醚萜苷类（一）结构特征及理化性质（一）结构特征及理化性质1. 结构特征结构特征 环烯醚萜类多具有半缩醛及环戊烷环的结构特点，根据其环戊烷环是否裂环，分为环烯醚萜苷和和裂环环烯醚萜苷二类。环烯醚萜苷C4位多连甲基或羧基、羧酸甲酯和羟甲基等。若C4位无取代基，则称为4-去甲基环烯醚萜苷。2. 理化性质理化性质 环烯醚萜苷类化合物多为白色结晶或无定形粉末，具有旋光性。偏于亲水性，大多数易溶于水和甲

99、醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇，难溶于氯仿、苯、石油醚等亲脂性有机溶剂。环烯醚萜苷稳定性较差，易被酸和酶水解，苷元化学性质活泼，易氧化聚合。环烯醚萜苷元与氨基酸(甘氨酸、亮氨酸、谷氨酸)共热，显红色至蓝紫色；在冰醋酸溶液中，与少量铜离子加热，产生蓝色反应；与Trim-Hill试剂(乙酸10ml、硫酸铜水溶液1ml、浓硫酸混合溶液)共热产生不同颜色；与Epstahl试剂(对二甲氨基苯甲醛-冰醋酸-磷酸溶液)显色；吡喃衍生物可与Shear试剂(浓盐酸1体积与苯胺15体积混合)反应产生特殊颜色反应；分子结构中有环戊酮结构，可与2，4-二硝基苯肼反应产生黄色。 五、多糖类（一）概述（一）概述多糖又称多聚

100、糖，是由10个以上的单糖分子通过苷键聚合而成，分子量较大，一般由几百个甚至几万个单糖分子组成，已失去一般单糖的性质，如无甜味，无还原性等。多糖大致分为两类，一类为水不溶物，主要是形成动植物的支持组织，如纤维素，甲壳素等，分子呈直糖链型；另一类为水溶物，主要是动植物的贮存养料，如淀粉、肝糖元等，分子呈支糖链型。中药中常见的多糖为菊糖、淀粉、树胶和粘液质等，这些多糖大都无生物活性，通常把它们作为杂质除去。近年来发现许多中药中的多糖成分有治疗作用。如香菇多糖、灵芝多糖、猪苓多糖等有抗肿瘤作用；昆布中的昆布素可用于治疗动脉粥样硬化；黄芪多糖和人参多糖具有免疫增强作用；银耳多糖能有效保护肝细胞，减轻CC

101、l4损伤造成的糖元合成减少；南瓜多糖具有降血糖作用；鹿茸多糖具有抗溃疡作用；车前子胶具有缓泻作用等。五、多糖类（二）定性鉴别（二）定性鉴别1. 理化鉴别理化鉴别 Molish反应：多糖与-萘酚-浓硫酸试剂反应，在两液面间有紫色环产生。斐林反应或多伦反应：多糖加酸水解后，与斐林试剂或多伦试剂呈阳性反应。2. 色谱鉴别色谱鉴别 用色谱法鉴别多糖时，一般先将多糖加酸水解成单糖或低聚糖，然后进行薄层色谱、纸色谱、气相色谱、高效液相色谱或离子交换色谱分析。(1)薄层色谱法薄层色谱法 薄层色谱常用吸附剂有硅胶、反相硅胶，也可用纤维素、硅藻土和氧化铝作吸附剂。糖由于极性大，在硅胶薄层上进行层析时，点样量不宜

102、过多(一般少于5g)。若点样过多，斑点就会明显拖尾，Rf值也下降，使一些Rf值相近的糖难以获得满意的分离。若硅胶用硼酸溶液或一些无机盐的水溶液代替水调制吸附剂涂铺薄层，则样品承载量可明显增加，分离效果也有改善。用无机盐水溶液制备薄层时，主要应使用强碱与弱或中等强度的酸所成的盐，如磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙酸钠、亚硫酸氢钠和硼酸盐等。硅胶薄层色谱常用极性较大的含水溶剂系统为展开剂，如正丁醇-乙酸-水、正丁醇-乙酸乙酯-水、丙酮-水、正丁醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-异丙醇-醋酸-水-吡啶等。五、多糖类硅胶薄层色谱常用显色剂有硝酸银试剂，使还原糖显棕黑色；三苯四氮唑盐试剂，使单糖和还原性低聚糖呈红色；

103、苯胺-邻苯二甲酸盐试剂，使单糖中的五碳糖和六碳糖所呈颜色略有区别；3，5-二羟基甲苯-盐酸试剂，使酮糖和含有酮基的低聚糖呈红色；过碘酸加联苯胺试剂，使糖中有邻二羟基结构者呈蓝底白斑。此外，还常用硫酸的水或醇溶液、茴香醛-硫酸试剂、苯胺-二苯胺磷酸试剂、1，3-二羟基萘酚-硫酸试剂、间苯二酚-硫酸试剂和-萘酚-硫酸试剂等。(2)纸色谱法纸色谱法 糖的纸色谱常用水饱和的有机溶剂为展开剂，其中以正丁醇-乙醇-水和水饱和的苯酚两种系统应用最为普遍。因为糖的水溶性很大，在一般含水量少的溶剂系统中展开时，Rf值很小。如果要增加糖在含水量比较少的系统如水饱和的正丁醇中的Rf值，可以在其中加入乙酸、吡啶或乙醇

104、等，如采用醋酸乙酯-吡啶-水、正丁醇-吡啶-水、正丁醇-吡啶-水-苯、异丙醇-乙醇、氯仿-甲醇-醋酸、正丁醇-丙酮-水等为展开剂。对难于区分的糖，还可采用由硼酸、硼砂缓冲液浸过的滤纸，以硼酸、硼砂缓冲液饱和的正丁醇-乙酸乙酯溶剂系统下行法展开。纸色谱常用显色剂基本与硅胶薄层色谱相同，唯含硫酸的显色试剂不能用。其他显色剂还有改良Seliwanoff 试剂、甲苯胺蓝试剂、Somogyi试剂和1碘乙醇试剂等。 五、多糖类(3)气相色谱法气相色谱法 用气相色谱法鉴别糖，有2个不利因素：难于挥发和形成端基异构体，但现已基本上被克服。前者可通过制备成三甲基硅醚衍生物来增加挥发性；后者可通过将醛糖用四氢硼钠

105、还原成多元醇，然后制成乙酰化物或三氟乙酰化物来避免。(4)高效液相色谱法高效液相色谱法 采用高效液相色谱法鉴别糖时，多选用氨基柱，以乙腈-水为流动相，以示差折光检测器检测。也可用硅胶柱动态改性，即在流动相中加入四乙酸胺，以含四乙酸胺的乙腈-水为流动相。(5)离子交换色谱法离子交换色谱法 应用糖的硼酸络合物进行离子交换色谱，在单糖和低聚糖的分析方面已取得很大进展，它与气相色谱相比其优点在于不必制成衍生物，而且可以直接用水溶液进行分析。目前已有糖自动分析仪，用季铵离子交换树脂分离单糖和低聚糖，用四硼酸钾的缓冲溶液洗脱，以3，5-二羟基甲苯-浓硫酸显色，在425nm进行分析。五、多糖类3. 电泳鉴别

106、电泳鉴别 糖的电泳包括纸电泳、玻璃纤维电泳、醋酸纤维薄膜电泳和凝胶电泳(包括琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳)等。糖属于多元醇，分子结构中多存在相邻羟基，易与硼酸络合，形成复盐，增加电导性，因此用纸电泳检识糖时，多用硼酸盐为缓冲液。一些多糖也可根据其特点，选用醋酸盐缓冲液等。染色剂则常用甲苯胺蓝、茴香胺、高碘酸西夫试剂、阿利新蓝、麝香草酚、碱性硝酸银等，其中甲苯胺蓝不易使中性糖染色，多用于酸性多糖。需要注意的是，中性多糖因带静电荷少，在电场中移动速度慢，一般需采用较高电压或延长电泳时间，才能收到较好效果。若为单一多糖，电泳后斑点一般较小，且显色均一；若多糖不均一，则斑点加宽，颜色深浅不匀。五、多

107、糖类（三）含量测定（三）含量测定1. 总多糖含量测定总多糖含量测定 总多糖含量测定主要采用比色法，显色试剂可选用3，5-二硝基水杨酸、硫酸铜-砷钼酸、苯酚-硫酸、地衣酚-硫酸、蒽酮-硫酸等。(1)3，5-二硝基水杨酸二硝基水杨酸(DNS)法法 在碱性溶液中，3，5-二硝基水杨酸与还原糖生成棕红色氨基化合物，在550nm波长处有最大吸收，可用于比色法测定含量。该方法为半微量定量法，操作简便，快速，杂质干扰小，尤其适合于批量测定。(2)Somogyi-Nelson法法 还原糖将铜试剂还原生成氧化亚铜，在浓硫酸存在下与砷钼酸生成蓝色溶液，在560nm波长处有最大吸收，可用于比色法测定含量。(3)苯酚

108、苯酚-硫酸法硫酸法 糖经浓无机酸处理脱水产生糠醛或糠醛衍生物，生成物能与酚类化合物缩合生成有色物质。通常使用的无机酸为硫酸，常用的酚有苯酚、-萘酚、地衣酚、间苯二酚等。其中苯酚-硫酸和地衣酚-硫酸法使用较多。苯酚-硫酸试剂可与游离的或多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应，己糖在490nm波长处、戊糖及糖醛酸在480nm波长处有最大吸收，且吸收度与糖含量呈线性关系。该方法简便，快速，灵敏，显色持久。制作标准曲线时宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖作对照品，绘制标准曲线，应乘以校正系数。对杂多糖，根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。(4)蒽酮蒽酮-硫酸法硫酸法 糖类遇浓硫酸脱水

109、生成糖醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm波长处有最大吸收，吸收度与多糖含量呈线性关系。该方法适用于单糖、多糖的含量测定。注意色氨酸含量较高的蛋白质对显色反应有一定的干扰。2. 单一多糖含量测定单一多糖含量测定 单一多糖含量测定多采用高效凝胶液相色谱法，以已知分子量的多糖对照品作对照，确定其分子量。再将其酸水解后进行高效液相色谱法测定，确定其组成(单糖的种类和比例)，以单糖的量推算多糖的量。五、多糖类四）应用实例四）应用实例乌灵胶囊多糖含量测定：乌灵胶囊多糖含量测定：乌灵胶囊由发酵乌灵菌粉加工制备而成。多糖含量测定：对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品，

110、精密称定，加水制成每1ml含的溶液，即得。标准曲线的制备 精密量取对照品溶液、，分别置试管中，加水至2ml，再加6苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中，加热15分钟，立即冷却，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(附录V A)试验，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。测定法 取本品内容物，研细，取1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入十二烷基磺酸钠溶液30ml，精密称定，加热回流2小时，立即冷却，再称定重量，以水补足减失的重量，摇匀，立即离心(每分钟3500转)，精密量取上清液10ml，加乙醇30ml，摇匀，冷藏24小时，离心，弃

111、去上清液，沉淀用少量乙醇洗涤，弃去洗涤液，加水适量使溶解，转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取2ml，置试管中，自“加6苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度。从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得。 六、含动物药中药制剂的分析（一）牛黄及其制剂的分析（一）牛黄及其制剂的分析牛黄为牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin.干燥的胆结石，为常用名贵中药，广泛用于中成药中，如安宫牛黄丸、牛黄解毒片、牛黄上清丸、牛黄千金散等。但由于天然牛黄药源十分紧缺，现多使用人工牛黄。人工牛黄为牛胆汁或猪胆汁经

112、人工提取制成的浅棕色或金黄色粉末，其化学成分与天然牛黄有一定差异，疗效也不及天然牛黄。1. 化学成分化学成分 天然牛黄及人工牛黄中均含有胆色素、胆汁酸、脂类、肽类、氨基酸和无机元素。(1)胆色素胆色素 牛黄中含胆色素7276。其中胆红素含量为2570，包括游离胆红素、胆红素钙、胆红素脂等。(2)胆汁酸类胆汁酸类 主要含胆酸(710)、去氧胆酸)、鹅去氧胆酸及石胆酸等。并有牛黄胆汁酸、甘氨胆汁酸等结合胆汁酸盐存在。六、含动物药中药制剂的分析2. 主要成分的理化性质主要成分的理化性质(1)胆汁酸：胆汁酸：胆汁酸的主要成分是胆酸和去氧胆酸，较易溶于丙酮与乙醇中，其钠盐易溶于水。胆酸熔点198，pKa

113、，在水、乙醇、氯仿、苯和丙酮中的溶解度分别为、和，胆酸钠盐在水中的溶解度为。去氧胆酸熔点176178，pKa，在水、苯和丙酮中的溶解度分别为、和，去氧胆酸钠盐在水中的溶解度大于333g/L。胆汁酸类成分的主要显色反应有：Pettenkofer反应：蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糠醛，可与胆汁酸结合生成紫色。Gregory Pascoe反应：此反应原理与Pettenkofer反应相似，取胆汁1ml，加入糠醛溶液1 ml，45硫酸6ml，振摇后在65水浴中放置30分钟，有胆酸存在时，显蓝色。此反应可作为胆酸的定量反应。Hammarsten反应：20铬酸溶液(20gCrO3在少量水中，加醋酸至100ml

114、)溶解少量样品，温热，胆酸显紫色，鹅去氧胆酸不显色。该反应产生的颜色不同可区别胆酸同系物。 六、含动物药中药制剂的分析(2)胆红素胆红素：胆红素不溶于水，溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳及碱液中，微溶于乙醇、乙醚。其钠盐易溶于水，在碱液中或遇Fe3+后极不稳定，很快被氧化。主要显色反应有：Gmelin反应：将浓硝酸沿试管壁小心加入含有胆色素的样品中，出现绿、蓝、紫、红及黄等颜色。Van den Bergh反应(重氮化反应)：胆红素和中胆红素与重氮化的对氨基苯磺酸偶合生成偶氮染料，在强酸中呈蓝紫色，时呈红色，以上呈绿色。六、含动物药中药制剂的分析3. 定性鉴别定性鉴别(1)理化鉴别理化鉴别 主要利用

115、胆汁酸和胆红素的显色反应进行鉴别。如取牛黄粉末少许，加氯仿1ml，摇匀，再加硫酸与过氧化氢溶液(30)各2滴，振摇，即显绿色(胆红素反应)。另取牛黄粉末，加60醋酸4 ml，研磨，滤过，取滤液1ml，加新制的糠醛(新蒸馏至几乎无色)溶液(1100ml)1ml与硫酸液(硫酸5ml加水混合)10ml，置70水浴中加热10分钟，即显示蓝紫色(胆酸反应)。(2)薄层色谱薄层色谱 复方制剂中牛黄的鉴别方法常用TLC，以胆红素、胆酸、去氧胆酸等为对照品，以硅胶薄层色谱，用一定的展开系统展开，胆红素可在自然光下检视，胆酸类可在紫外光下检视。4. 含量测定含量测定(1)总胆酸的测定总胆酸的测定 用化学法可测定

116、制剂中总胆酸的含量。利用胆汁酸类的酸性，样品经提取后，用氢氧化钠滴定。但此法常常因为制剂中含有其他酸碱性成分而受到干扰、专属性不高。(2)单体胆酸的含量测定单体胆酸的含量测定 中药制剂中牛黄单体胆酸的含量测定可用色谱法进行分离测定，如用胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸(人工牛黄)等为对照品，经薄层分离后以510硫酸乙醇溶液显色，用薄层扫描法定量；也可用HPLC法测定，由于胆汁酸结构中缺乏共轭结构、无紫外吸收，可利用衍生法技术，使胆酸类成分形成对硝基苯甲酸甲基酯，在254nm波长处检测，也可得到满意结果。(3)胆红素的含量测定胆红素的含量测定 胆红素在453nm有最大吸收，利用此性质可用分光光度法或H

117、PLC法进行测定；也可利用胆红素可发生重氮化反应的原理使其生成重氮盐，在不同pH条件下可产生不同的红色，利用分光光度法测定，从而可消除杂质的干扰。 六、含动物药中药制剂的分析5. 应用实例灵宝护心丹胆酸含量测定应用实例灵宝护心丹胆酸含量测定灵宝护心丹由麝香、蟾酥、牛黄、冰片、红参、三七、琥珀、丹参、苏合香加工制备而成。含量测定 取本品适量，研细，取约，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚(6090)4ml，浸泡1小时，滤过，滤渣及滤纸挥去溶剂，放回锥形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液(110)15ml，摇匀，密塞，称定重量，浸泡12小时，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液(110)补足减失的重量，

118、摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取胆酸对照品适量，精密称定，加冰醋酸无水乙醇溶液(110)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，精密吸取供试品溶液10l、对照品溶液2l与4l，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲酸(6:32:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10磷钼酸无水乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，放冷，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(附录VI B薄层色谱扫描法)进行扫描，波长：s620nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。 六、含动物药中药制剂的分析（

119、二）麝香及其制剂的分析（二）麝香及其制剂的分析麝香为鹿科动物林麝Moschus berezovskii Flerov、马麝 Moschus sifanicus Przewalski和原麝Moschus moschiferus Linnaeus成熟雄体脐下腺香囊中的干燥分泌物。具有开窍醒神、活血通经、消肿止痛的功能。用于热病神昏，中风痰厥，气郁暴厥，闭经，难产死胎，癓瘕，心腹暴痛，痈肿瘰疬，咽喉肿痛，跌打伤痛，痹痛麻木等症，在中成药中应用较多。1. 化学成分化学成分 天然麝香化学成分极为复杂，包括小分子和大分子成分，亲脂性成分和亲水性成分。其中麝香酮是麝香中有香气的主要成分，一般含量为24。六、

120、含动物药中药制剂的分析(1)大环化合物大环化合物：包括麝香酮，降麝香酮、麝香醇、麝香吡喃、麝香吡啶等。(2)甾类化合物甾类化合物：包括3-羟基-5-雄甾烷-17-酮，3-羟基-5-雄甾烷-17-酮，5-雄甾烷-3，17-二酮，5-雄甾烷-3，17-二酮，雄甾-4-烯-3，17-二酮，雄甾-4，6-二烯-3，17-二酮，3-羟基-雄甾-5-烯-17-酮，3-羟基-5-雄烷-17-酮，3-羟基-5-雄烷，3，17-二羟基-5-雄甾烷，3，17-二羟基-5-雄甾烷，3-羟基-雄甾-4-烯-17-酮，5-雄烷-3，17-二醇，5-雄烷-3，17-二醇，睾丸酮，雌二醇，胆甾-4-烯-3-酮，胆甾醇等。2

121、. 主要成分理化性质主要成分理化性质 麝香酮为无色或白色结晶，过冷状态时为无色粘稠性液体。几不溶于水，溶于醇。，17D，熔点135136(缩氨基脲衍生物)。 nm285。 六、含动物药中药制剂的分析3. 定性鉴别定性鉴别含麝香中药制剂的定性鉴别可采用GC法，以麝香酮为对照品，此法专属、可靠、灵敏。因为麝香中还含有雄甾烷类成分，也可以雄甾烷类成分为对照品，用TLC进行鉴别，经薄层分离后用硫酸乙醇液显色，置日光下或紫外光下检视。对于麝香药材还可用紫外光谱法进行鉴别，因为麝香的不同有机溶剂提取液其 max不同，其乙醇提取液在220nm+2nm波长处有最大吸收，在270nm波长处有肩峰；其乙醚提取液在

122、231nm+2nm波长处有最大吸收，在265nm波长附近有肩峰；正己烷提取液在220nm +2nm波长处有最大吸收，在265nm波长附近有肩峰。六、含动物药中药制剂的分析4. 含量测定含量测定麝香的含量测定方法可用GC、TLCS和HPLC法等。麝香酮具有很强的挥发性，主要选择GC法定量，以苯基-甲基硅酮为固定相，柱温200左右，FID检测。少数情况下也可用TLCS进行测定，利用酮类成分可和肼(2，4-二硝基苯肼)生成腙(2，4-二硝基苯腙)，生成的2，4-二硝基苯腙再用TLC分离，因其具有对可见光的吸收，可用TLCS定量。此外，麝香中的另一类主要成分雄甾烷类可用TLCS和HPLC法进行测定。当

123、用TLCS法定量时，薄层分离后，用硫酸乙醇显色；当用HPLC定量时，须将雄甾烷类成分衍生化后再进行检测，以达到较高的灵敏度。 六、含动物药中药制剂的分析5. 应用实例含硫灸剂中麝香酮含量测定应用实例含硫灸剂中麝香酮含量测定含硫灸剂主要由麝香、朱砂、雄黄、硫黄等加工制备而成。含量测定 照气相色谱法(附录 D)测定。 色谱条件 色谱柱：3XF-1105(氰乙基(5)甲基聚硅氧烷)不锈钢柱(1.5m4mm)；柱温：165；进样口与检测器温度：240；检测器：FID；载气：氮气55ml/ min，空气600ml/ min，氢气40ml/ min。内标溶液的制备 精密称取十六醇适量，用无水乙醇溶解，配制

124、成1mg/ml 的无水乙醇溶液。对照品溶液的制备 精密称取麝香酮对照品适量，用无水乙醇溶解配制成1.6 mg/ml的溶液，备用。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得，冰箱保存。供试品溶液的制备 取本品20片，求得平均片重后，研成细粉，精密称取细粉约，加入内标溶液，无水乙醇15ml，于80水浴回流4小时，放冷，滤过，滤液置25ml量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀。标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液、于2 ml量瓶中，加内标溶液，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，进样2L，以麝香酮峰面积与内标峰面积比为纵坐标，麝香酮浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法 吸取供试品溶液2L，注

125、入气相色谱仪，按标准曲线制备法测定，计算，即得。 六、含动物药中药制剂的分析（三）熊胆及其制剂的分析（三）熊胆及其制剂的分析熊胆为熊科动物黑熊Setenarctos thibetanus Cuvier 或棕熊 Ursus arctos Linnacus 的干燥胆。1. 化学成分化学成分 熊胆主要化学成分为胆汁酸类(约占胆汁中的5859)，其中主要含牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸，以及少量或微量鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、石胆酸等。这些胆汁酸通常与牛磺酸、甘氨酸结合，以钠盐或钙盐的形式存在。熊胆中含有的胆色素以胆红素为主，尚有胆黄素、胆褐素。2. 定性鉴别定性鉴别(1)光

126、谱鉴别：光谱鉴别：取熊胆汁少许，制成甲醇液，测定紫外吸收光谱，在270nm1nm、415nm2nm波长处有吸收。六、含动物药中药制剂的分析(2)薄层色谱：薄层色谱：常用硅胶G板及硅胶GF254板，以异辛烷-醋酸乙酯-醋酸(5:5:1)；异辛烷-异戊醚-冰醋酸-正丁醇-水(10:5:5:3:1)；甲苯-冰醋酸-水(10:10:1)；氯仿-甲醇-水(65:25:4)；异戊醇-冰醋酸-水(18:5:3)；正丁醇-冰醋酸-水(17:2:1)等为展开剂(前2种可使游离胆汁酸分离，后4种可使结合胆汁酸分离)。3. 含量测定含量测定 中药制剂中熊胆化学成分的含量测定可选择比色法、薄层色谱-比色法、薄层扫描法

127、、高效液相色谱法或气相色谱法等。六、含动物药中药制剂的分析4. 应用实例应用实例双解注射液中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量测定双解注射液中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量测定双解注射液主要由熊去氧胆酸粉、山羊角、黄芩、连翘、青蒿加工制备而成。含量测定 照薄层色谱法(附录VI B薄层色谱扫描法)测定薄层色谱条件 吸附剂：硅胶G薄层板；展开剂：氯仿-石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸(10:4:6:2.5)，展距15cm；显色剂：5磷钼酸乙醇溶液。薄层扫描条件 双波长反射法锯齿扫描，s590nm，R490nm；狭缝。标准曲线制备 精密称取熊去氧胆酸，用无水甲醇溶解定容于10ml量瓶中，摇匀。精密吸取、点于薄层板上，展

128、开，显色，扫描测定，绘制标准曲线。精密称取鹅去氧胆酸，用无水甲醇溶解定容于10ml量瓶中，摇匀。精密吸取、点于薄层板上，展开，显色，扫描测定，绘制标准曲线。样品测定 精密吸取样品溶液1L，标准溶液及1L展开，显色，扫描测定。 六、含动物药中药制剂的分析（四）蛇胆及其制剂的分析（四）蛇胆及其制剂的分析蛇胆汁为眼镜蛇科、游蛇科或蝰蛇科动物多种蛇的胆汁，具有行气化痰、祛风除湿、清肝明目、平肝熄风、清热解毒等功效。常用于肝热目赤，肺热咳嗽，胃热疼痛，急性风湿性关节炎，痔疮，皮肤热毒等症。1. 化学成分化学成分 蛇胆汁中主要化学成分为胆汁酸类，且多数以与牛磺酸结合的结合胆汁酸形式存在。其中以牛磺胆酸含量

129、最多，此外还有牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨去氧胆酸、甘氨胆酸、石胆酸、胆固醇、胆甾醇等。2. 定性鉴别定性鉴别 中药制剂中蛇胆汁成分的鉴别，多用薄层色谱法。用硅胶G薄层板，以异戊醇-冰醋酸-水(18:10:6或9:3:1)、甲苯-冰醋酸-水(10:10:1)、异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(10:5:5:3:1)等酸性系统为展开剂。显色多用30硫酸乙醇溶液(V/V)，喷后在105烘烤10分钟，置紫外光灯下(254nm)下观察荧光斑点。3. 含量测定含量测定 含蛇胆中药制剂中胆汁酸类成分的含量测定方法很多，如比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法等。 六、含动物药中药制剂的分析4

130、. 应用实例应用实例蛇胆川贝液中牛磺胆酸的含量测定蛇胆川贝液中牛磺胆酸的含量测定含量测定 照高效液相色谱法 (附录 D)测定。色谱条件 色谱柱：YWG-C18柱，10m(4250mm)；柱温：室温；流动相：28乙腈水溶液，15磷酸调pH3；流速：；检测波长：210nm。对照品溶液的制备 准确称取经五氧化二磷真空干燥至恒重的牛磺胆酸钠标准品30mg，用蒸馏水溶解定容至50ml，摇匀，密封，冷存。供试品溶液的制备 准确量取20ml样品置分液漏斗中，用乙醚萃取二次(20ml、15ml)，乙醚萃取液用水洗涤2次(每次5ml)。合并水层，在水浴上蒸发至水层无醚味，放冷，通过D101型大孔吸附树脂(2.5

131、g)柱。先用200ml蒸馏水洗脱，再用95乙醇60ml洗脱，收集乙醇洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣加95乙醇溶解定容于5ml量瓶中，摇匀，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。样品测定 精密吸取供试品溶液10L，对照品溶液20L，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量。六、含动物药中药制剂的分析（五）蟾酥及其制剂的分析（五）蟾酥及其制剂的分析蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo gargarizans Cantor.或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。具有解毒、止痛、开窍醒神的功能。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑吐泻，腹痛神昏，手术麻醉以及强心、升压、兴奋呼

132、吸、抗肿瘤等。由于具有较强的药理活性，同时其毒性也较大，因此，对蟾酥及其制剂需要严格控制质量。1. 化学成分化学成分 蟾酥化学成分复杂，主要含蟾蜍甾二烯类，强心甾烯蟾毒类和蟾毒色胺类。蟾蜍甾二烯类有游离型和结合型之分。游离型主要有蟾毒灵、华蟾毒精、蟾毒它灵、脂蟾毒配基等。结合型又分蟾毒灵-3-辛二酸精氨酸酯、蟾酥配基脂肪酸酯和蟾酥配基硫酸酯3种类型。这类成分往往在干燥加工或提取过程中分解为蟾酥配基类。强心甾烯蟾毒类在蟾酥中数量较少，亦以酯的形式存在。蟾毒色胺类均含有吲哚环，属蟾酥加工炮制过程中分解产物的水溶性部分，主要有蟾蜍色胺、蟾蜍季胺等。六、含动物药中药制剂的分析2. 定性鉴别定性鉴别(1

133、)理化鉴别：理化鉴别：主要通过显色反应。一般来说，Legal反应、Raymond反应、Baljet反应和Kedde反应等可使强心甾烯蟾毒类呈阳性反应，但对蟾蜍甾二烯类呈阴性反应。通常用浓硫酸使蟾蜍甾二烯类显色，各种蟾蜍甾二烯类成分可呈现不同的颜色。(2)色谱色谱：色谱色谱：纸色谱：蟾酥氯仿提取液用纸色谱，以甲酰胺为固定相，苯-氯仿(6:4)为展开剂，或以丙二醇-水(4:1)为固定相，以苯-氯仿(6:4)为展开剂，展开，三氯化锑氯仿液加热显色，日光或紫外光下观察，能检识蟾酥中10个蟾酥甾二烯类成分。薄层色谱法：将蟾酥氯仿提取液点在硅胶G板上，用丙酮-氯仿-环己烷(3:3:4)展开，三氯化锑氯仿溶

134、液显色，可检识华蟾酥毒基及蟾酥毒基。将样品的甲醇溶液点在硅胶G板上，用氯仿-甲醇-氨水(12:7:1)展开，喷邻苯二醛溶液，加热，紫外灯下蟾酥碱显黄色荧光。(3)光谱鉴别：光谱鉴别：主要用于蟾酥药材鉴别。蟾酥药材经溶解后，在不同的溶剂中有不同的紫外吸收光谱，乙醇提取液在292nm 2nm，216nm 2nm波长处有最大吸收；乙醚提取液在292nm 2nm，232nm 2nm波长出有最大吸收；正己烷提取液在284nm 2nm波长处的吸收峰较弱；氯仿提取液在299nm 1nm波长处有最大吸收。蟾酥药材还可用红外光谱法鉴别，在18001700cm-1有吸收峰。六、含动物药中药制剂的分析3. 含量测定

135、含量测定 蟾酥及其制剂的含量测定方法很多，如分光光度法、薄层扫描法、差示光度法、高效液相色谱法和气相色谱法等。(1)分光光度法：分光光度法：分光光度法主要用于蟾酥药材的测定，取一定样品，用氯仿提取后定容，在299nm波长下测定，按脂蟾毒配基的E1cm1为154进行计算含量。(2)薄层扫描法：薄层扫描法：薄层扫描法应用较广，常用硅胶G板，丙酮-氯仿-环己烷展开系统，在s300nm，R340nm处进行反射式锯齿扫描。可测定脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵、蟾毒它灵、远华蟾毒精及日蟾毒它灵等多种成分。(3)气相色谱法：气相色谱法：用气相色谱法测定蟾酥及其制剂的样品需进行适当的预处理，如将样品提取液先经过

136、柱色谱或薄层色谱分离后，方可进行气相色谱测定，采用FID检测器，内标法或外标法定量。(4)高效液相色谱法：高效液相色谱法：蟾酥中含有的蟾蜍甾二烯类、强心甾烯蟾毒类和蟾毒色胺类成分，都具有紫外吸收，可用高效液相色谱法测定。 六、含动物药中药制剂的分析4. 应用实例牙痛一粒丸蟾酥定性鉴别和含量测定应用实例牙痛一粒丸蟾酥定性鉴别和含量测定牙痛一粒丸由蟾酥、朱砂、雄黄、甘草加工制备而成。(1)蟾酥定性鉴别蟾酥定性鉴别：取本品，研碎，置索氏提取器中，加三氯甲烷70ml，加热回流2小时，提取液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取脂蟾毒配基对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层

137、色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各510L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上使成条状，以环己烷-三氯甲烷-丙酮(4:3:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检识。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。(2)含量测定含量测定：照高效液相色谱法 (附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 (50:50)为流动相；检测波长为296nm。理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备 取华蟾酥毒基对照品、脂蟾毒配基对照品各约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，

138、摇匀；精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备 取本品，研细，取约75mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入液相色谱仪，测定，即得。 六、含动物药中药制剂的分析（六）斑蟊及其制剂的分析（六）斑蟊及其制剂的分析斑蟊为芫青科昆虫南方大斑蝥 Mylabris phalerata Pallas 或黄黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus

139、的干燥体。有破血消癓，攻毒蚀疮，引赤发泡之功能，具有很好的抗癌及抗病毒作用。用于癓瘕肿块，积年顽癣，瘰疬，赘疣，痈疽不溃，恶疮死肌。目前主要用于治疗各种癌症。1. 化学成分及性质化学成分及性质 含斑蝥素(斑蝥酸酐)12、脂肪、树脂、蚁酸、甲酸、色素、挥发油、甲壳质等。其中斑蝥素是其主要成分，具有较好的抗癌作用，但毒性也较大。斑蟊素具有升华性。 六、含动物药中药制剂的分析2. 定性鉴别定性鉴别 根据斑蝥素具有升华性的特点，可用升华反应，在显微镜下观察升华物的晶型；或者将升华物溶解后加入间苯二酚少许，加热，在UV灯下观察荧光。斑蝥素的鉴别也可用TLC法。由于斑蝥素中具有酸酐的结构，显较强的酸性，用

140、适当的条件分离后，用酸碱指示剂为显色剂(溴甲酚绿)，加热后观察斑点的颜色。3. 含量测定含量测定 斑蝥素的含量测定方法较多，可用酸碱滴定法、配位滴定法、非水滴定法、紫外分光光度法、薄层扫描法、气相色谱法等。薄层扫描法系利用薄层色谱法将斑蝥素分离后，以溴甲酚绿显色，在S445nm，R605nm处扫描测定。气相色谱法为目前测定斑蝥素最常用方法，以甲基硅橡胶(SE-30)为固定液，FID检测。 六、含动物药中药制剂的分析4. 应用实例斑蝥素乳膏斑蝥素含量测定应用实例斑蝥素乳膏斑蝥素含量测定斑蝥素乳膏由斑蝥油、麻油、维生素E等加工制备而成。含量测定 照气相色谱法(附录 D)测定。色谱条件 色谱柱：玻璃

141、柱；柱温：160；进样口温度：220；检测器：FID；载气：N2；流速：50ml/min。对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的斑蝥素对照品20mg，置100ml量瓶中，加氯仿适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密量取对照品储备液5ml，置10ml量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。供试品溶液的制备 取本品适量(约相当于斑蝥素2mg)，精密称定，置烧杯中，加氯化钠-氯氧化钠溶液(取1mol/L氢氧化钠溶液100ml与氯化钠2g，搅拌，溶解)15ml，置80水浴中加热3分钟，搅拌，使斑蝥素溶解，置冰水浴中冷却，滤过，滤液置50ml量瓶中，同法继续提取3

142、次，每次10ml，滤液并入量瓶中，用氯化钠-氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取此液25ml，置分液漏斗中，加盐酸5ml，用氯仿提取3次(30、20、20ml)，提取液置蒸发皿中，在水浴上浓缩至约5ml，转移到10ml量瓶中，用氯仿洗涤蒸发皿，洗液置量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。六、含动物药中药制剂的分析测定法 取本品适量(约相当于斑蝥素2mg)，精密称定，置烧杯中，加氯化钠-氢氧化钠溶液15ml，按供试品制备项下的方法，自“置80水浴中加热3分钟”起，同法操作。精密量取2L，注入气相色谱仪。另精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的斑蝥素对照品适量，精密称定，加氯仿制成每1

143、ml含的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。七、含矿物药中药制剂的分析1. 定性鉴别定性鉴别(1)化学法化学法 采用化学反应，对含无机元素的中药进行定性分析时，可针对其所含无机元素，参考中华人民共和国药典(2005年版)附录IV“一般鉴别试验”进行。这些鉴别试验涉及亚锡盐、汞盐、钙盐、钠盐、钡盐、铋盐、钾盐、铁盐、铵盐、银盐、铜盐、锌盐、锑盐、铝盐、镁盐、锂盐、硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物等。如鉴别石膏时，取石膏粉末，加稀盐酸10ml，加热使溶解，溶液显钙盐与硫酸盐的鉴别反应；鉴别朱砂时，取朱砂粉末2g，加盐酸-

144、硝酸(3:1)的混合溶液2ml使溶解，蒸干，加水2ml使溶解，滤过，滤液显汞盐与硫酸盐的鉴别反应；鉴别磁石时，取磁石粉末约，加盐酸2ml，振摇，静置，上清液显铁盐的鉴别反应。(2)热分析法热分析法 热分析法是在程序控制温度下，精确记录待测物质理化性质与温度的关系，研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化、还原等化学变化，用以对该物质进行物理常数、熔点、沸点的研究以及作为鉴别和纯度检查的方法。根据矿物药的性质和检测目的不同，可以选用差热分析法和差示扫描量热法等。 七、含矿物药中药制剂的分析2. 定量分析定量分析 在矿物药的定量分析中，对于含量较高的物质，通常可选择

145、经典的容量分析和重量分析法，对含量较低的可选择分光光度法，如可见分光光度法或原子吸收分光光度法等。另外，热分析法也可用于矿物药的定量分析。(1)化学分析法：化学分析法：容量分析法：样品分解后，制备成适当的溶液，如有干扰物质存在；应设法消除其干扰。消除的方法主要有分离法和掩蔽法，然后选择适当的方法进行滴定，常用氧化还原滴定和配位滴定。重量分析法：将样品分解液通过适当处理，得到沉淀，取沉淀干燥至恒重，用分析天平精密称定，再根据其重量换算为样品含量。如测定含汞药物时，称取汞盐适量与硫化铵作用，生成硫化汞沉淀。将此沉淀在加热条件下，溶于过量硫化铵和氢氧化钠溶液，生成硫代汞酸钠。再在此溶液中加入过量硝酸

146、铵并加热(除去氨)，则硫化汞重新析出。利用硫化汞的这一性质，可以将汞与其他许多离子分离，并以硫化汞形式，对汞进行定量分析。(2)分光光度法分光光度法：可见分光光度法：有色无机物一般在可见光区有吸收，或者一些无机元素可与某些化合物形成有色络合物，可用分光光度法测定。如砷盐的检查，可利用砷化氢与Ag-DDC三乙氨的氯仿溶液作用，产生新生态的银，在510nm处有吸收，以测定砷的含量。此外，可利用高价汞与双硫腙作用生成橙色络合物；镉与双硫腙作用生成玫瑰红络合物；三价铬与二苯基止巴腙作用形成紫色络合物的性质等，采用分光光度法测定药物中的汞、镉和铬含量。原子吸收分光光度法：近年来已广泛应用于矿物药及其制剂

147、中各种微量元素的分析。该法能测定几乎全部金属元素，具有灵敏度高，选择性好，抗干扰能力强，适用范围广，操作方便的优点。 七、含矿物药中药制剂的分析（二）含砷矿物药及其制剂的分析（二）含砷矿物药及其制剂的分析含砷矿物药主要有雄黄(主要成分为As2S2)、雌黄(主要成分为As2S3)、砒石(主要成分为As2O3)等，尤以雄黄应用最多。含砷矿物药中的砷既是有效成分，又是有毒性成分，必须严格控制。很多砷化合物具有挥发性，测定砷的试样不宜任意灼烧。雄黄、雌黄等含砷的硫化物常用硝酸、硫酸等酸性溶剂分解，也可采用碱溶法分解，常用过氧化钠，碳酸钠混合熔剂(2:1)熔融，使生成砷酸钠。对于中成药中雄黄的测定常用硫

148、酸-过氧化氢或硫酸-硝酸钾作为分解试剂，具有既能分解雄黄，又能破坏有机物的特点。在硫酸-过氧化氢分解时，一般先在试样中加入浓硫酸，加热使有机物炭化，然后在热溶液中，小心地逐滴加入30过氧化氢溶液，以完成氧化作用。含砷中成药也可加入等量的氢氧化钙，加少量水调成糊状，先用小火加热使炭化，再于500600灼烧，使砷转化为砷酸钾，然后用盐酸提取。 七、含矿物药中药制剂的分析1. 定性鉴别定性鉴别 取本品置坩锅内，加热熔融，继续加热产生白色或黄白色火焰，并伴有白色浓烟，取玻片覆盖后，有白色冷凝物，刮取少许置试管内加水煮沸使溶解，必要时滤过，溶液加硫化氢试液数滴即显黄色，加稀盐酸后产生黄色絮状沉淀，再加碳

149、酸铵试液后，沉淀复溶解。 2. 含量测定含量测定(1)碘量法：碘量法：可用直接碘量法或间接碘量法进行测定。直接碘量法是用硫酸分解使转变成亚砷酸，调pH值至8，以淀粉作指示剂，用碘直接滴定(硫酸分解-直接碘量法)。或用过氧化钠-碳酸钠混合熔剂(2:1)在600-650熔融样品，样品经适当处理后，以淀粉作指示剂，用碘直接滴定(碱熔分解-直接碘量法)。间接碘量法是加碱破坏分解，用硫酸中和，加碘化钾加热煮沸，再加20酒石酸钾钠溶液，加过量的硫代硫酸钠，再用碘滴定。(2)分光光度法：分光光度法：分光光度法是将样品破坏后生成砷化氢，用二乙基二硫代氨基甲酸银-三乙胺-氯仿吸收液，使生成有机物，在510nm波

150、长处测定吸光度，用标准曲线法计算含量。 七、含矿物药中药制剂的分析3. 应用实例应用实例牛黄解毒片雄黄的含量测定牛黄解毒片雄黄的含量测定牛黄解毒片由牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草加工制备而成。测定法 取本品20片，研细，称取2片量(含雄黄约0.1g)，置三角烧瓶中。加硫酸钾1g、硫酸铵2g与样品混匀。加硫酸15ml，置电炉直火加热，随时补加适量的硫酸并冲洗瓶壁，加热至溶液呈淡黄色，冷却。缓缓加水50ml，加热煮沸35分钟，冷却。加酚酞指示剂2滴，用40氢氧化钠中和至显微红色，冷却，加一小块广泛pH试纸，用硫酸液中和至褪色并使pH试纸呈中性颜色。加碳酸氢钠5g，摇匀，用碘标准液滴

151、定，至近终点时加淀粉指示剂2ml，滴定至显紫蓝色，即得。七、含矿物药中药制剂的分析（三）含汞矿物药及其制剂的分析（三）含汞矿物药及其制剂的分析含汞矿物药主要有朱砂(主要成分为HgS)、升药(主要成分为HgO)、轻粉(主要成分为Hg2Cl2)等。含汞矿物药中的汞既是有效成分，又是毒性成分，必须严格控制。对于含汞矿物药及其制剂进行分析时，常需要对样品进行分解，分解的方法主要是酸分解法，常用的有硝酸分解法、王水(3体积盐酸和1体积硝酸的混合酸)或逆王水(1体积盐酸和3体积硝酸的混合酸)分解法，硫酸-硝酸钾分解法等。分解试样时，必须注意防止汞的挥发损失，应低温加热，最好安装回流冷凝管，切勿将样品溶液蒸

152、干。七、含矿物药中药制剂的分析1. 定性鉴别定性鉴别(1)亚汞盐：亚汞盐：取供试品溶液，加氨试液或氢氧化钠试液，即变黑色。或取供试品溶液，加碘化钾试液，振摇，即生成黄绿色沉淀，瞬即变为灰绿色，并逐渐变为灰黑色。(2)汞盐汞盐：取供试品溶液，加氢氧化钠试液，即生成黄色沉淀。或取供试品的中性溶液，加碘化钾试液，即生成猩红色沉淀，能在过量的碘化钾试液中溶解，再以氢氧化钠试液碱化，加铵盐即生成红棕色的沉淀。七、含矿物药中药制剂的分析2. 含量测定含量测定(1)硫氰酸盐法：硫氰酸盐法：硫氰酸盐法是测定含汞矿物药汞含量的最常用方法。在520的硝酸溶液中，以硫酸铁铵或硝酸铁为指示剂，用硫氰酸铵或硫氰酸钾标准

153、溶液滴定。滴定反应如下：氯离子能与汞离子形成配离子，严重干扰测定。因此分解试样时不宜用王水或逆王水，可选用硫酸-硝酸钾。如试样中含有有机化合物，此时也被破坏。生成的一氧化氮，因其可与Fe3+离子显红色，妨碍终点观察，必须除尽。溶液中形成的亚硝酸也影响滴定，需预先用高锰酸钾氧化，过剩的高锰酸钾再用硫酸亚铁还原。测定时溶液的温度不宜超过25，否则将使指示剂生成的红色减褪。硫氰酸汞沉淀有吸附硝酸汞的作用，故标定硫氰酸盐标准溶液的条件应与测定试样的条件一致，否则将产生误差。 七、含矿物药中药制剂的分析(2)分光光度法：分光光度法：用硝酸-硫酸-高氯酸对含汞试样进行消化，分解释放出Hg2+。在pH12的

154、溶液中，高价汞与双硫腙作用生成橙色配合物，此配合物可溶于四氯化碳，在492 nm波长处进行分光光度法测定。(3)原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：对于含汞矿物药的制剂，往往含汞量较低，不宜用容量分析法，可选用原子吸收分光光度法进行含量测定。由于汞离子被还原成金属汞后极易挥发和蒸发，所以样品经适当处理后即可用冷原子吸收进行测定；也可将样品处理成适当的溶液后，用火焰原子化法进行测定；如果是固体样品也可用无火焰原子化法进行测定。 七、含矿物药中药制剂的分析3. 应用实例应用实例小儿金丹片朱砂的含量测定小儿金丹片朱砂的含量测定小儿金丹片由朱砂、橘红、川贝母、胆南星、前胡、玄参、清半夏、大青叶、关

155、木通、桔梗、荆芥穗、羌活、西河柳、地黄、枳壳(炒)、赤芍、钩藤、葛根、牛蒡子、天麻、甘草、防风、冰片、水牛角浓缩粉、羚羊角粉、薄荷脑加工制备而成。含量测定 取本品，研细，取细粉约，精密称定，置250ml锥形瓶中，加硫酸25ml，硝酸钾2g，加热使成乳白色，放冷，加水50ml，滴加1高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加2硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)相当于硫化汞(HgS)。思考题思考题1. 酸性染料比色法测定中药制剂中生物碱成分时，为什么pH值是主要影响因素之一？2. 雷氏盐比色法测定总生物碱含量时

156、，需注意哪些问题？3. 止喘灵注射液处方组成为麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘，请设计用薄层色谱法鉴别麻黄碱的方法。4. 二陈丸中橙皮苷的鉴别：取本品5g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2L，分别点于同一用氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(100:17:13)为展开剂，展开，展距约3cm，取出，晾干，再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水(20:10:1:1)的上层溶液为展开剂，展开，展距约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(1)简述二次展开的意义和操作注意事项。(2)简述喷以三氯化铝试液的作用和反应机理。5. 在中药制剂皂苷类单体成分分析中，试论述如何根据待测成分结构特征和理化性质确定分析条件和方法。6. 人参养容丸由人参、白术、茯苓等药味组成，试设计该制剂中人参二醇、人参三醇鉴别方法。7. 简述含大黄中药制剂中游离蒽醌和结合蒽醌的含量测定方法。8. 用化学反应鉴别挥发油成分的依据是什么？用GC法定性鉴别挥发油成分的依据是什么？9. 如何测定某中药制剂中的总挥发油含量？10. 简述酸碱滴定法在有机酸类成分分析中的应用。