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1、实验室规则 接触到病原菌，一定要坚持无菌操作进实验室穿上白大衣，离开时反折严禁饮食，也不要以手抚摸头、面等部位若发生吸入菌液，割破手指等事故，必须报告老师接触过菌液的吸管、玻片等器材，投入含有2 % 3%来苏儿的容器内实验完毕，整理桌面 一、显微镜的使用及细菌的观察 实验目的掌握油镜的使用和保护熟悉细菌的基本形态和特殊结构的镜下特点掌握无菌操作掌握革兰染色法实验内容操作：油镜的使用细菌材料玻片标本制备革兰染色法（Gram Stain ）示教 细菌的基本形态链球菌螺形菌 - 弧菌（霍乱弧菌）细菌的特殊结构鞭毛（变形杆菌）荚膜（肺炎链球菌）芽胞（破伤风梭菌）显微镜的使用原理油镜的使用先按低倍镜到高
2、倍镜的操作步骤找到物像，并将观察部分移至视野的中央。 转动旋转盘，使高倍镜移向一侧，在盖玻片上滴一滴香柏油，然后将油镜对准通光孔，使油镜下端与香柏油接触(注意操作动作要慢，以免压碎玻片或损坏镜头)。 从目镜内观察，微微上下转动细调节器，至视野内出现清晰的物像时为止。 油镜使用完毕后，必须用拭镜纸沾少许二甲苯将油镜上的香柏油擦净，并用干的拭镜纸擦去二甲苯。显微镜用毕后，升高镜筒，取下玻片标本，转动旋转盘，使每个物镜都不对准通光孔，再下降镜筒，使物镜接近载物台，将聚光镜降下，最后放回橱内。 细菌材料玻片标本制备涂片涂片-干燥干燥-固定固定固定的目的固定的目的杀死微生物，固定其细胞结构保证菌体能牢固
3、地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原生质容易着色。革兰染色法原理G菌菌胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫碘复合物从胞内渗出，故细菌仍保留初染时的紫色紫色G菌菌胞壁结构较为疏松，肽聚糖层很薄，外膜含大量脂质，易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性变大，使结晶紫-碘复合物被乙醇溶解析出而脱色，故细菌呈复染时的红色红色革兰染色法初染：滴加结晶紫结晶紫染液,染1分钟,水洗.媒染：滴加卢戈氏碘液卢戈氏碘液,作用1分钟后,水洗.脱色：加95%酒精酒精23滴于涂片上,频频摇晃35秒钟后,斜持玻片,使酒精流去;再滴加酒精
4、,如此反复23次,直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时为止,约半分钟。水洗复染：滴加稀释石炭酸复红稀释石炭酸复红染1/21分钟,水洗,待干,油镜检查.（紫碘酒红紫碘酒红、分分半半）、分分半半）革兰染色结果 - 阳紫阴红+凡能固定结晶紫与碘的复合物,而不易被酒精脱色,仍保留紫色,称为革兰阳性菌革兰阳性菌.+凡易能被酒精脱色,再经复染成红色的细菌,称为革兰阴革兰阴性菌性菌 观察（染色性，形态，排列）革兰染色的意义+鉴别细菌：鉴别细菌：鉴别G+,G-,初筛标本+选择用药选择用药+致病物质致病物质大多 G+外毒素，G-内毒素示教 - 细菌的基本形态细菌从形态上分，主要有球菌、杆菌、螺形菌三种。链球菌的示教
5、片霍乱弧菌的示教片示教 - 细菌的特殊结构细菌的特殊结构：芽胞、荚膜、鞭毛，菌毛（电镜下观察）芽胞增强细菌对不良环境的抗性；荚膜抗吞噬、抗损伤、抗干燥；鞭毛运动器官，单生、双生、丛生、周生。观察鞭毛（变形杆菌）荚膜（肺炎链球菌）芽胞（破伤风梭菌）破伤风梭菌破伤风梭菌鞭毛（变形杆菌）鞭毛（变形杆菌）二、细菌的分布手指皮肤上细菌的检测操作 (4人一组) 用手指直接涂于普通琼指平板上，放37温箱孵育，24小时后观察结果，记录有多少种不同特征的菌落。三、病原性球菌咽喉部细菌的检测 取灭菌棉拭在被检者咽喉部轻轻涂擦后，涂于血琼脂培养基一侧。 改用灭菌接种环作分离划线接种。 盖上平皿，倒置后在37孵育24h。甲型链球菌
