药品质量标准分析方法验证 PPT课件

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1、药品质量标准分析方法验证指导原则l药品质量标准分析方法验证指导原则收载于中国药典2010版二部附录-A l药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。l方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。l只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量。l方法验证是制订质量标准的基础。方法验证是药物研究过程中的重要内容。前 言l是判断采用的分析方法是否科学、合理，l是否能有效控制药品的内在质量。l从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。l对几个分析方法的组

2、合进行总体的评价 分析方法验证的目的分析方法验证的目的1、建立药品质量标准；2、药品生产工艺变更；3、制剂的组分变更；4、对原分析方法进行修订时。 方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草说明或修订说明中。分析方法验证的时机分析方法验证的时机l鉴别试验，l杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法），l原料药或制剂中有效成分含量测定，l制剂中其他成分（如防腐剂等）的测定。l药品溶出度、释放度等检查中溶出量等测试方法。分析方法验证的项目分析方法验证的项目 1、准确度； 2、精密度 重复性 中间精密度 重现性 3、专属性； 4、检测限； 5、定量限； 6、线性； 7、范围； 8、耐用性。分析方

3、法验证的内容分析方法验证的内容1、检测的类型2、采用的技术3、检测方法视具体方法拟订验证的内容l分析方法（步骤）：是指进行分析的方式和步骤。l分析方法应给出完成每个分析试验所需的详细步骤。l可能包括供试品、对照品和试剂的配制和制备；l仪器的使用说明；l标准曲线的绘制；l计算公式的使用等信息，l当然，分析方法的内容不仅限于上述信息。l在实际工作中，可以对实验工作进行充分的设计，使得可以同时考察多个适当的验证项目，提供分析方法科学的、综合的能力情况，比如：专属性、线性、范围、准确度和精密度。 分析方法验证的内容分析方法验证的内容准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率（

4、%）表示。准确度应在规定的范围内建立。精密度：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 重复性：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度 专属性：指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充 ，以获得对待测物质所需的分离能力。 分析方法验证的内容分析方法验证的内容检测限：指试样中被测物能被检测出

5、的最低量。药品的鉴别试验和杂质检查方法，均应通过测试确定方法的检测限。常用的方法如下。 非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。 信噪比法 ：用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3:1或2:1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。定量限：指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。 常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10:1时相应的浓度或注入仪器的量确定定量限。 分析方法验证的内容

6、分析方法验证的内容线性：指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。应在规定的范围内测定线性关系。制备一系列供试样品，至少5份。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。范围：指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定。 耐用性：指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。

7、分析方法验证的内容分析方法验证的内容验证检测项目的分类验证检测项目的分类1、鉴别 鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性。2、杂质检查（限度试验、定量试验） 杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂质等。 杂质检查要准确反应供试品的纯度特性，可分为限度试验和定量试验两种情况。用于限度试验的分析方法验证侧重专属性和检测限。用于定量试验的分析方法验证强调专属性、准确度和定量限。 3、定量测定 定量测定包括含量测定、制剂的溶出度（释放度）测定等，由于此类项目对准确性要求较高，故所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性。4

8、、其他特定检测项目。 其他特定检测项目包括粒径分布、旋光度、分子量分布等，由于这些检测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量测定等有所不同，对于这些项目的分析方法验证应有不同的要求。验证检测项目的分类验证检测项目的分类项项目内容目内容鉴别鉴别杂质测杂质测定定含量含量测测定及溶定及溶出量出量测测定定定量定量限度限度准确度准确度+精密度精密度+重复性重复性+中中间间精密度精密度+专专属性属性检测检测限限定量限定量限线线性性范范围围耐用性耐用性检检验验项项目目和和验验证证内内容容已有重现性验证，不需验证中间精密度。已有重现性验证，不需验证中间精密度。如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。如一种方法

9、不够专属，可用其他分析方法予以补充。视具体情况予以验证视具体情况予以验证。l1鉴别反应 l各论中鉴别项目的目的就是为待测物质的真伪鉴定提供确证信息。l鉴别方法要保证具有可能好的专属性。应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。 l不含被测成分的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物（活性物质和辅料能被区分开来），均应呈负反应。lIR：结晶水、同类物质、结晶溶剂l一个物质的紫外光谱极少能独立成为鉴别的判断依据。比值的专属更强（有关物质增加对UV最大吸收的影响）l本鉴别方法需要使用对照品，结合原位的化学反应，也就是在薄层展开后用适当的显色剂进行l显色，可以增

10、强 TLC鉴别法的专属性。lTLC分离系统，尽管为了保证药品的鉴别试验，可能仍然需要对色谱条件的分离能力进行规定。如果出于保证鉴别试验准确的目的，在鉴别项下会规定分离度要求。l如果适用的话，纯度检查项下的TLC系统更适于作为鉴别方法。用于鉴别试验的供试品溶液和对照品溶液的浓度应适当降低，使点样量在 520ug。有时可能需要将某个通用检测系统变更为更有区分力的检测系统。一、准确度一、准确度l 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值接近的程度。 一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。对于制剂一般以回收率试验来进行验证

11、。 准确度应在规定的范围内测试。一、准确度一、准确度l1含量测定方法的准确度l 原料药 可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。一、准确度一、准确度l1含量测定方法的准确度l 制剂 可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。一、准确度一、准确度l2杂质定量测定的准确度l可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。l在不能测

12、得杂质或降解产物的响应因子或对原料药的相对响应因子情况下，可在线测定杂质的相关数据，如采用二极管阵列检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照法）。应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（%）或面积比（%）。一、准确度一、准确度l3数据要求l在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价，例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。应报告已知加入量的回收率（%），或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差或可信限。l用于药品的含量测定时，样品浓度应设定于含量100的20之间；l用于溶出（释放）曲线考察时，

13、样品浓度应设定于全曲线范围的上、中、下部位。 二、精密度二、精密度l精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。l精密度包括：重复性、中间精密度和重现性。l含量测定和杂质的定量测定应考虑方法的精密度。二、精密度二、精密度l1重复性l在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性； l在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价，例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试溶液，进行测定。或100%的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价。二、精密度二、精密度l2中间精密度l在同一个实验室，不同时

14、间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度； l为考察随机变动因素对精密度的影响，应设计方案进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。二、精密度二、精密度l3重现性l在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。l当分析方法将被法定标准采用，应进行重现性试验。应注意重现性试验用的样品本身的质量均匀性和贮存运输中的环境影响因素，以免影响重现性结果。三、专属性三、专属性l专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。l鉴别反应、杂质检查、含量测定方法、有机溶剂残留量测定等均应考察其专属性。l如

15、方法不够专属，应采用多个方法予以补充。 三、专属性三、专属性l1鉴别反应l应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。l需确证含被分析物的供试品呈正反应，而不含被测成分的阴性对照呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。三、专属性三、专属性l2杂质检查 l作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质的含量，如有关物质、重金属、有机溶剂等。因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性。l在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能得到分离和检出，并具适当的准确度与精密度。三、专属性三、专属性l2杂质检查l在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过与另

16、一种已证明合理但分离或检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果比较来确定。或将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。 三、专属性三、专属性l3、含量测定l含量测定目的是得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果。l在杂质可获得的情况下，对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的供试品比较测定结果。三、专属性三、专属性l3、含量测定l在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个经验证了的或药典方法进行比较，

17、对比两种方法测定的结果。也可采用破坏性试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。 三、专属性三、专属性l2含量测定和杂质测定l 在杂质或降解产物不能获得的情况下，可将含有杂质或降解产物的试样进行测定，与另一个经验证了的或药典方法比较结果。l用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解或氧化的方法进行加速破坏，以研究可能的降解产物和降解途径。l含量测定方法应比对二法的结果，杂质检查应比对检出的杂质个数，必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查。三、专属性

18、三、专属性l专属性验证常见主要问题l验证方法不科学。主要是破坏性试验条件选择不合理，往往出现破坏条件太剧烈或使用破坏条件无效。l破坏条件选择参考标准：能出现杂质峰，主成分峰的峰面积约相当于破坏前的8090，并能与产生的杂质峰很好的分离。四、检测限l检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。l该验证指标的意义在于考察方法是否具备灵敏的检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证检出需控制的杂质。l药品的鉴别试验和杂质检查方法，均应通过测试确定方法的检测限。常用的方法如下。四、检测限l1非仪器分析目视法（直观法 ）l检测限的测定是通过对一系列已知浓度

19、被测物的试样进行分析，并以能准确、可靠检测被测物的最小量或最低浓度来建立。用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。四、检测限l2信噪比法l用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算可检出的最低浓度或量。一般以信噪比为3：1时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。l其他方法有基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的方法等。l无论用何种方法，均应用一定数量的试样，其浓度为近于或等于检测限，进行分析，以可靠地测定检测限。五、定量限五、定量限l定量限系指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。l定量限体现了分析方法

20、是否具备灵敏的定量检测能力。杂质定量试验，需考察方法的定量限，以保证含量很少的杂质能够被准确测出。l杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定方法的定量限。l常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为101时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。五、定量限五、定量限l1、直观法l直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。l定量限一般通过对一系列含有已知浓度被测物的试样进行分析，在准确度和精密度都符合要求的情况下，来确定被测物能被定量的最小量。五、定量限五、定量限l2、信噪比法l用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算出可检出的最低浓度或量。一般可信

21、噪比为10：1。l其他方法有基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的方法等。l无论用何种方法，均应用一定数量的试样，其浓度为近于或等于定量限，进行分析，以可靠地测定定量限。六、线性六、线性l线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。l应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试样品的方法进行测定，至少制备5份供试样品。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。七、范围七、范围l范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用

22、的高低限浓度或量的区间。l范围应根据剂型和分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定。l1、原料药和制剂含量测定，范围应为测试浓度的80%120%；七、范围七、范围l2、制剂含量均匀度检查，范围应为测试浓度的70%130%；l3、溶出度的溶出量测定，范围应为限度的20%，l4、释放度中如规定了限度范围，则应为下限的-20%至上限的20%；l5、杂质测定范围应根据初步实测，拟订为规定限度的20%。l如果含量测定与杂质检查同时用百分归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的-20%至含量限度（或上限）的20%。八、耐用性八、耐用性l耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程

23、度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。l耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的抗干扰能力。八、耐用性八、耐用性l典型的变动因素有：l1、被测溶液的稳定性，样品的提取次数、时间等。l2、液相色谱法中，流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速等。八、耐用性八、耐用性l3、气相色谱法，不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。l经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。方法再验证方法再验证l在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制剂处方改变、分

24、析方法发生部分改变等，均有必要对分析方法再次进行全面或部分验证，以保证分析方法可靠，这一过程称为方法再验证。 l再验证原则：根据改变的程度进行相应的再验证。 方法再验证方法再验证l当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。 方法再验证方法再验证l当制剂的处方组成改变、辅料变更时，可能会影响鉴别的专属性、溶出度和含量测定的准确度，因此需要对鉴别、含量测定方法再验证。l当原料药产地来源发生变更时，可能会影响杂质检查和含量测定的专属性和准确度，因此需要对杂质检

25、查方法和含量测定方法进行再验证。 方法再验证方法再验证l当质量标准中某一项目分析方法发生部分改变时，如采用高效液相色谱法测定含量时，检测波长发生改变，则需要重新进行检测限、专属性、准确度、精密度、线性等内容的验证，证明修订后分析方法的合理性、可行性。 方法再验证方法再验证l已有国家标准的药品质量研究中，基于申报的原料药合成工艺、制剂处方中的辅料等一般无法保证与已上市药品的一致性，需对质量标准中部分项目进行方法的再验证。 l方法再验证是对分析方法的完善过程，应根据实际改变情况进行再验证，从而保证所采用的分析方法能够控制药品的内在质量。 有关方法验证值得关注的几个问题有关方法验证值得关注的几个问题

26、l1、并非每个检测项目的分析方法都需进行所有内容的验证，但同时也要注意验证内容应充分，足以证明采用的分析方法的合理性。如杂质限度试验一般需要验证专属性和检测限，而对于精密度、线性、定量限等涉及定量测定的项目，则一般不需要进行验证。 有关方法验证值得关注的几个问题有关方法验证值得关注的几个问题l2、方法验证应注重整体性和系统性。l例如，对于鉴别项目所需要的专属性，一般一种分析方法不太可能完全鉴别被分析物，此时采用两种或两种以上分析方法可加强鉴别项目的整体专属性。 l如原料药含量测定采用容量分析法时，由于方法本身原因，专属性略差，但假如在杂质检测时采用了专属性较强的色谱法，则一般认为整个检测方法也

27、具有较强的专属性。有关方法验证值得关注的几个问题有关方法验证值得关注的几个问题l3、越来越多的新方法不断被用于质量控制中，对于这些方法如何进行验证需要具体情况具体分析，而不能机械照搬指导原则。l谢谢！方法学验证药物分析方法的选择和建立药物分析方法的选择和建立一、药物分析方法的选择原则一、药物分析方法的选择原则2 2、被测组分的含量、被测组分的含量常量组分常量组分滴定滴定分分析法析法微量组分微量组分仪器仪器分析法分析法3 3、干扰物质的影响、干扰物质的影响4 4、测定的具体要求、测定的具体要求我们必须根据药物我们必须根据药物的结构、性质和含的结构、性质和含量、测定的对象和量、测定的对象和要求、存

28、在的干扰要求、存在的干扰组分情况和现有设组分情况和现有设备与技术条件，选备与技术条件，选用适宜的测定方法。用适宜的测定方法。1 1、被测组分的性质、被测组分的性质二、药物分析方法的建立二、药物分析方法的建立根据该药物的结构特征，选择可能采根据该药物的结构特征，选择可能采用的分析方法。用的分析方法。查阅文献查阅文献药物分析方法的选择和建立药物分析方法的选择和建立验验证证分分析析项项目目2原料药或制剂中有效成分含量测定原料药或制剂中有效成分含量测定.3 3 制剂中其他成分（降解产物、防制剂中其他成分（降解产物、防 腐剂等）的测定腐剂等）的测定. .4 4 药品溶出度、释放度等功能检查药品溶出度、释

29、放度等功能检查. .1 1 鉴别试验、杂质定量或限度检查鉴别试验、杂质定量或限度检查. .药物分析方法的验证药物分析方法的验证验验证证内内容容1 1 准确度准确度2 2 精密度精密度3 3 专属性专属性4 4 检测线检测线5 5 定量线定量线6 6 线性线性7 7 范围范围8 8 耐用性耐用性药物分析方法的验证药物分析方法的验证一一 精精 密密 度度在规定的测试条件下在规定的测试条件下, ,同一个均匀同一个均匀样品经多次测定所得结果样品经多次测定所得结果彼此符彼此符合程度合程度. .以以标准差标准差SDSD或相对标准差或相对标准差RSDRSD表示表示. .方法的精密度以三种形方法的精密度以三种

30、形式表达式表达. . 1 1 重现性重现性2 2 中间精密度中间精密度3 3 重复性重复性药物分析方法的验证药物分析方法的验证一一 精精 密密 度度1 1 重现性重现性 (reproducibility)指在不同实验室由不同分析者测定结指在不同实验室由不同分析者测定结果的精密度果的精密度. (. (药典分析方法的建立）药典分析方法的建立）2 2 中间精密度中间精密度通过通过同一实验室同一实验室,不同的时间由不不同的时间由不同分析者或使用不同的仪器进行测定同分析者或使用不同的仪器进行测定的结果的精密度的结果的精密度.3 3重复性重复性(repeatability)在相同条件在相同条件, ,由一个

31、分析者测定所得结果由一个分析者测定所得结果的精密度的精密度. .药物分析方法的验证药物分析方法的验证一一 精精密密度度容量分析、重量分析法容量分析、重量分析法0.3%0.5%;氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法0.5%;紫外、原子吸收分析法紫外、原子吸收分析法1.5%HPLC、GC分析法分析法2%TLC分析法分析法2%精密度试验结果的精密度试验结果的RSDRSD允许数值允许数值: :药物分析方法的验证药物分析方法的验证二二 准准确确度度 指用该方法测定的结果与真实值接指用该方法测定的结果与真实值接近的程度近的程度. . 一般以回收率表示一般以回收率表示. .要求：制剂要求：制剂 RSD2%RSD2%回收率回

32、收率9898 102%102%（UVUV、HPLCHPLC、GC)GC) 9898 102%102%（容量法）容量法） 体内药物分析体内药物分析8080 120%120%药物分析方法的验证药物分析方法的验证准确度准确度(accuracy)药物分析方法的验证药物分析方法的验证原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。如该分析方法已经测试并求出了精密度、线性和专属性，准确度有

33、时也可推算出来，可不必再做。二二 准准确确度度药物分析方法的验证药物分析方法的验证 杂质定量测定的准确度 二二 准准确确度度可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。在不能测得杂质或降解产物的响应因子或对原料药的相对响应因子情况下，可用原料药的响应因子。应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（%）或面积比（%）。.三三 检检 测测 限限 指试样中被测物能被测出的最低量指试样中被测物能被测出的最低量. .检测限检测限 (limitofdetection,LOD)药物分析方法的验证药物分析

34、方法的验证1非仪器分析目视法非仪器分析目视法用已知浓度的被测物试验出能被可靠地用已知浓度的被测物试验出能被可靠地检测出最低浓度或量检测出最低浓度或量.2仪器分析信噪比法仪器分析信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法用于能显示基线噪音的分析方法.以以3倍信噪比（倍信噪比（S/N=3)相对应浓度确相对应浓度确定检测限量定检测限量. 指样品中被测物能被定量测定的最指样品中被测物能被定量测定的最低量低量. .（应具有一定的准确度和精密度）（应具有一定的准确度和精密度）四四 定定量量 限限确定方法确定方法: : 1 1 仪器分析仪器分析 S/N=10定量限定量限(limitofquantitation,L

35、OQ)药物分析方法的验证药物分析方法的验证能准确并专一测出被测物的能力能准确并专一测出被测物的能力. .是在分析复杂样品是在分析复杂样品混合物时衡量其是否受到干扰及其程度的一种方法混合物时衡量其是否受到干扰及其程度的一种方法. .五五 专专 属属 性性 )专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。专属性专属性(specifity在杂质或降解产物不能获得的情况下，可将含有杂质或降解产物的试样进行测定，与另一个经验证了的或药典方法比较结果。用强光照射，高温

36、，高湿，酸、碱水解，或氧化的方法进行加速破坏，以研究可能的降解产物和降解途径。含量测定方法应比对二法的结果，杂质检查应比对检出的杂质个数，必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行纯度检查。 指在一定的浓度范围内指在一定的浓度范围内, ,测试结测试结果与供试物浓度呈正比关系的程度果与供试物浓度呈正比关系的程度. . 六六 线线 性性方法方法 用用作图法或计算回归方程建立作图法或计算回归方程建立. . Y=ax+b r=0.999Y=ax+b r=0.999浓度浓度 应包括一定梯度的应包括一定梯度的5-85-8个浓度个浓度. .对于含量测定要求浓度上限为样品对于含量测定要求浓度上限为样品最高浓度

37、的最高浓度的120%,120%,下限为样品最低浓下限为样品最低浓度的度的80%,80%,但应高于但应高于LOQ.LOQ.线性线性(linearity)七七 线线性性范范围围 指利用一种方法取得精密度和准确指利用一种方法取得精密度和准确度均符合要求的试验结果度均符合要求的试验结果, ,而且成而且成线性的供试物浓度的变化范围线性的供试物浓度的变化范围. .原料药和制剂含量测试浓度原料药和制剂含量测试浓度 80%120%制剂含量均匀度测试浓度制剂含量均匀度测试浓度 70%130%溶出度或释放度的溶出量溶出度或释放度的溶出量 限度限度20% 药物分析方法的验证药物分析方法的验证目的目的 为常规检验提供

38、依据为常规检验提供依据. . 体现耐用性因素：体现耐用性因素：被测溶液的稳定性，样品的提取次数、时间等。液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速等。气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。 八八 耐耐 用用 性性 指在测定条件有小的变动时指在测定条件有小的变动时, ,分析相分析相同样品所测得的试验结果的重现程度同样品所测得的试验结果的重现程度. .耐用性耐用性(robusness不不同同分分析析方方法法对对验验证证参参数数的的要要求求验证项目验证项目鉴别鉴别杂检杂检含量测含量测定定

39、生物样生物样品测定品测定定量定量定性定性精密度精密度精密度精密度-+准确度准确度-+-+检测限检测限-+-+定量限定量限-+-+专属性专属性+线性范围线性范围-+-+重复性重复性-+-+耐用性耐用性+1用于鉴别方法用于鉴别方法专属性专属性耐用性耐用性2 2 用于原料药中主成分或制剂中有效用于原料药中主成分或制剂中有效 成分含量测定方法成分含量测定方法除不需检测限、定量限外其余除不需检测限、定量限外其余6 6项项 验验证证方方法法应应用用3 3 原料药中杂质测定或制剂中降解产原料药中杂质测定或制剂中降解产 物等其他杂质测定方法物等其他杂质测定方法用于定量用于定量- -除检测限，精密度外其余除检测

40、限，精密度外其余6 6项项用于限度检查用于限度检查- -专属性专属性 耐用性耐用性 检测限检测限药物分析方法的验证药物分析方法的验证黑龙江所新药复核的内容在新药复核过程中，对申报单位提供的质量标准进行复核，是新药注册检验工作的内容之一，也是新药注册检验质量的保证，对整个质量标准的最终制定起到关键的作用。为更好地与申报进行交流与沟通,做好新药注册检验的复核工作，提高复核水平，特将我所新药复核情况与大家共享。黑龙江所新药复核的内容通用名： 中国药品通用名称化学名 汉语拼音 英文名 分子式分子量命名性状根据实样描述；及与检查项的关联根据实样描述；及与检查项的关联鉴别原料：在 说明中写明每一个鉴别实验

41、（特别是化学反应）的原理，强调灵敏度、专属性。制剂：在每一个鉴别实验中考察空白辅料考察空白辅料的影响。检查对每个新药制订的检查项，首先需要考虑的是选择这些“检查项”是否充分，有没有必要，同时结合含量等整个质量标准各方面的指标考察检查项制定的合理性，其次才是对每一检查项实验合理性、文字规范性等各方面的内容进行复核。 黑龙江所新药复核的内容有关物质 最小检出量：应予以考察。最小检出量：应予以考察。专专一一性性：将将样样品品经经高高温温或或强强光光照照射射等等破破坏坏后后，按按有有关关物物质质的的测测定定方方法法制制备备成成相相应应浓浓度的供试品溶液，考察实验方法的专属性度的供试品溶液，考察实验方法

42、的专属性 稳稳定定性性：将将供供试试品品溶溶液液在在测测定定6-8小小时时，考考察察溶溶液液是是否否稳稳定定，若若供供试试品品溶溶液液杂杂质质峰峰面面积积有有变变化化或或升升高高，则则需需在在质质量量标标准准中中写写明需明需“立即测定立即测定” 辅辅料料的的影影响响：将将空空白白辅辅料料照照处处方方的的量量配配制制成成供供试试品品溶溶液液，考考察察其其对对有有关关物物质质测测定定的的影响。溶出度回收率：配制三个浓度各三份，即相当于溶出限度规定80% 100% 120%的浓度的回收率试验溶液。辅料的影响：将空白辅料照处方的量配制成供试品溶液，考察其对溶出度测定的影响。 说明项式写明：溶出介质的选

43、择、转速的选择、取样时间和限度的确定（根据处方筛选和溶出曲线的内容）；测定方法的选择及测定方法的合理性（包括本所的复核情况）等。 含量测定 说明中对方法的选择、以及研制单位对方法的认证内容进行描述，并进行方法的复核工作 。线性：取对照品溶液稀释一系列 浓度，考察和对照品溶液的线性关系。回收率：配制样品测定浓度80%、100%和120%的回收率试验溶液各三份，每个点各测定三次，计算回收率。同时制备相应的空白辅料溶液，考察其影响。含量测定稳定性取对照品溶液每隔1小时重复测定，一般做到6-8小时，考察溶液的稳定性。总体对本方法的可行性进行简单的评述,上国外药典的与其作简单比较 .今后将重点关注:溶剂残留晶型手性光学异构体毒性杂质