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1、单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术简介河南科技大学医学院段冷昕单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术的研究背景单克隆抗体技术的研究背景杂交瘤技术原理简述杂交瘤技术原理简述单克隆抗体技术的研究进展与意义单克隆抗体技术的研究进展与意义单克隆抗体技术的研究方向和存在的问题单克隆抗体技术的研究方向和存在的问题单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术的研究背景单克隆抗体技术的研究背景Georges J.F. KohlerGeorges J.F. Kohler1975年将产生抗体的淋巴细胞同肿瘤细胞融合年将产生抗体的淋巴细胞同肿瘤细胞融合, 成功成功建立了单克隆抗体技术。建立了单克隆抗体技术。1984年获得诺贝尔医学和生
2、理学奖。年获得诺贝尔医学和生理学奖。Cesar MilsteinCesar MilsteinNiels K. JerneNiels K. Jerne单克隆抗体技术简介理理论依据依据抗抗原原分分子子上上可可以以诱诱导导出出抗抗体体的的部部位位或或片片段段，特特称称之之为为 抗抗原原决决定定基基 (antigenic (antigenic determinant)determinant)；一一个个抗抗原原分分子子上上通通常常都都有有许许多多处处抗抗原原决决定定基基，而而每每个个决决定定基基至至少少都都可可诱诱生生出出一一种种抗抗体体；因因此此在在传传统统抗抗血血清清中中，都都含含有有许许多多种种不
3、不同同的的抗抗体体，分分别别对对抗抗这这些些不不同同的的决决定基。定基。对对于于分分子子构构造造相相似似的的抗抗原原，由由于于它它们们含含有有共共同同或或相相似似的的抗抗原原决决定定基基，所所产产生生的的抗抗血血清清对对这这两两种种相相似似的的抗抗原原都都会会产产生生反反应应；因因此此在在检检定定此此类类抗抗原原时时，其其 专专一一性性 不不很很理理想想，常常常常会会出出现现假假阳阳性性，也也称称为为 交交叉叉反反应应性性。 同同时时又又由由于于免免疫疫动动物物的的个个别别体体质质不不同同，对对抗抗原原的的反反应应也也有有相相当当的的差差异异，以以致致无无法法准准确确控控制制所所得到每批抗血清
4、得到每批抗血清 效价效价 的高低。的高低。单克隆抗体技术简介血血清清中中的的每每一一种种抗抗体体是是由由单单一一种种B B细细胞胞 所所分分泌泌产产生生，若若能能把把此此 B B 细细胞胞由由脾脾脏脏中中挑挑出出来来，单单独独培培养养成成细细胞胞株株，则则可可得得单单一一种种类类的的抗抗体体，只只会会对对一一种种 抗抗原原决决定定基基 反反应应，其其专专一一性性极极高高。 大大量量培培养养此此细细胞胞株株，即即可可有质量一定、纯度均一的抗体，此即为有质量一定、纯度均一的抗体，此即为 单株抗体。单株抗体。然然而而 B B 细细胞胞不不易易在在培培养养基基中中生生长长，虽虽然然有有人人一一直直努努
5、力力，想想找找出出在在体体外外培培养养脾脾脏脏细细胞胞的的条条件件，但但结结果果均均不不甚理想，因此上述想法不易达成。甚理想，因此上述想法不易达成。癌癌细细胞胞 的的生生长长不不受受控控制制，很很容容易易在在培培养养基基中中生生长长，有有很很多多已已经经建建立立好好的的癌癌细细胞胞株株，其其生生长长特特性性均均已已了了解解； 若若把把癌癌细细胞胞永永续续生生长长的的特特性性，利利用用细细胞胞融融合合法法导导入入可可生生产产有有用用抗抗体体的的 B B 细细胞胞中中，则则得得到到可可在在培培养养基基中中永永久生长的久生长的 B B 细胞株，此即融合瘤细胞株。细胞株，此即融合瘤细胞株。单克隆抗体技
6、术简介杂交瘤技术原理简述杂交瘤技术原理简述动物免疫动物免疫细胞融合细胞融合杂交瘤细胞的筛选杂交瘤细胞的筛选单克隆抗体技术简介动物免疫动物免疫动物体内的动物体内的B 淋巴细胞在特定外来抗原的刺激下淋巴细胞在特定外来抗原的刺激下, 可以可以大量增殖变成浆细胞大量增殖变成浆细胞, 以分泌针对该抗原的抗体。以分泌针对该抗原的抗体。这种抗体具有特异性这种抗体具有特异性, 动物免疫作用就是用特定的外来动物免疫作用就是用特定的外来抗原对动物进行一次或多次免疫抗原对动物进行一次或多次免疫,以刺激其能分泌对于以刺激其能分泌对于该抗原的该抗原的B 淋巴细胞大量增殖淋巴细胞大量增殖, 从而得到大量产生专一从而得到大
7、量产生专一反应的反应的B 淋巴细胞。淋巴细胞。单克隆抗体技术简介细胞融合细胞融合B 淋巴细胞受外来抗原刺激后可以分泌抗体淋巴细胞受外来抗原刺激后可以分泌抗体, 但在体外但在体外存活时间很短（最多两周）后即死亡。存活时间很短（最多两周）后即死亡。而骨髓瘤细胞不分泌任何免疫球蛋白而骨髓瘤细胞不分泌任何免疫球蛋白, 却能在体外长期却能在体外长期存活。存活。如果将这两种细胞的特性结合起来如果将这两种细胞的特性结合起来, 就能得到既能分泌就能得到既能分泌抗体又能在体外长期存活的细胞。抗体又能在体外长期存活的细胞。然而在杂交过程中必然将产生混合物然而在杂交过程中必然将产生混合物, 因此就需要进一因此就需要
8、进一步筛选出其中唯一有用的杂交瘤细胞。步筛选出其中唯一有用的杂交瘤细胞。单克隆抗体技术简介杂交瘤细胞的筛选杂交瘤细胞的筛选杂交瘤细胞由于继承了杂交瘤细胞由于继承了B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性。重特性。能够合成能够合成HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和和TK（胸腺嘧啶激酶）（胸腺嘧啶激酶）, 故在故在HAT (H-次黄嘌呤、次黄嘌呤、A -氨基喋呤、氨基喋呤、T-胸腺嘧啶胸腺嘧啶)培养基中可长期存活。培养基中可长期存活。在历经在历经2 周左右的时间后即可得到该杂交瘤细胞周左右的时间后即可得到该杂交瘤细胞, 成为成为制造单克隆
9、抗体的细胞源。制造单克隆抗体的细胞源。单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术的研究进展单克隆抗体技术的研究进展单克隆抗体单克隆抗体生殖健康诊断试纸生殖健康诊断试纸早早孕检测试纸条早早孕检测试纸条 女性在怀孕以后体内会分泌绒毛膜促性腺激素。早期检测该激女性在怀孕以后体内会分泌绒毛膜促性腺激素。早期检测该激素素, , 对女性具有非常重要的指导意义。对女性具有非常重要的指导意义。女性排卵检测试纸条女性排卵检测试纸条 准确检测出尿液中准确检测出尿液中促黄体生成激素促黄体生成激素的峰值水平的峰值水平, , 使女性能预知最使女性能预知最佳的受孕或避孕时间。佳的受孕或避孕时间。乙肝表面抗原检测试纸条乙肝表面抗原检
10、测试纸条 特异性地检测标本中的乙肝表面抗原特异性地检测标本中的乙肝表面抗原, , 重复性好重复性好, , 质量稳定。质量稳定。吗啡类毒品检测试纸条吗啡类毒品检测试纸条 样品中的吗啡含量大于样品中的吗啡含量大于300ngmg，即可被检出。，即可被检出。单克隆抗体技术简介癌症及其它病症的研究和治疗癌症及其它病症的研究和治疗全球治疗性单克隆抗体上市情况列表全球治疗性单克隆抗体上市情况列表全球治疗性单克隆抗体上市情况列表全球治疗性单克隆抗体上市情况列表.doc.doc全球在研治疗性单克隆抗体临床全球在研治疗性单克隆抗体临床IIIIII期以上的期以上的品种列表品种列表全球在研治疗性单克隆抗体临床全球在研
11、治疗性单克隆抗体临床IIIIII期以上的期以上的品种列表品种列表.doc.doc单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术的研究意义单克隆抗体技术的研究意义如果将单克隆抗体作为一些肿瘤药物的包裹物如果将单克隆抗体作为一些肿瘤药物的包裹物, 那么药那么药物将精确地到达肿瘤所在的部位。物将精确地到达肿瘤所在的部位。单克隆抗体可以提高杀伤肿瘤的效果及减少副作用单克隆抗体可以提高杀伤肿瘤的效果及减少副作用, 把把一些抗癌药物或放射性同位素附在单克隆抗体上一些抗癌药物或放射性同位素附在单克隆抗体上, 便能便能命中肿瘤细胞命中肿瘤细胞, 并且不损伤自身细胞并且不损伤自身细胞,有的医学家称这种有的医学家称这种治疗为治
12、疗为“导弹导弹”疗法或疗法或“靶性药物靶性药物”疗法。疗法。在人类肺癌、肝癌、胃癌的治疗中也取得一定效果在人类肺癌、肝癌、胃癌的治疗中也取得一定效果, 对对于手术后或化疗后残存癌细胞于手术后或化疗后残存癌细胞, 单克隆抗体可以说是所单克隆抗体可以说是所向无敌。向无敌。单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术的研究方向单克隆抗体技术的研究方向新一代单克隆抗体、疫苗类药物最新进展与前景与展望新一代单克隆抗体、疫苗类药物最新进展与前景与展望新一代单克隆抗体、疫苗类药物的国际市场研究状况新一代单克隆抗体、疫苗类药物的国际市场研究状况新一代单克隆抗体、疫苗类药物生产的新工艺和新技术新一代单克隆抗体、疫苗类药物生
13、产的新工艺和新技术: 包包括上游表达技术、细胞培养技术、抗体嵌合技术、抗体人括上游表达技术、细胞培养技术、抗体嵌合技术、抗体人源化技术、下游纯化技术、单抗及疫苗类药物新的制剂方源化技术、下游纯化技术、单抗及疫苗类药物新的制剂方法等法等新一代单克隆抗体、疫苗类药物的产业化配套技术新一代单克隆抗体、疫苗类药物的产业化配套技术, 检测手检测手段段, 病毒、朊病毒灭活病毒、朊病毒灭活, 工艺认证等工艺认证等与单克隆抗体检测试剂有关的新技术与单克隆抗体检测试剂有关的新技术: 如抗体的筛选、试纸如抗体的筛选、试纸的制造等的制造等疫苗研究的最新进展。疫苗研究的最新进展。“单克隆抗体技术与基因克隆技术相单克隆
14、抗体技术与基因克隆技术相结合更将为分离和鉴定新的蛋白质和基因开辟一条宽阔途结合更将为分离和鉴定新的蛋白质和基因开辟一条宽阔途径径”单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术存在的问题单克隆抗体技术存在的问题肿瘤细胞产生一些封闭性抗体肿瘤细胞产生一些封闭性抗体, 把自己保护住把自己保护住, 使单克隆抗使单克隆抗体所携的药物不能很好地发挥作用。体所携的药物不能很好地发挥作用。银屑病单克隆抗体治疗试验的失败银屑病单克隆抗体治疗试验的失败, 也表明人类对单克隆抗也表明人类对单克隆抗体技术的应用还并不是那么得心应手体技术的应用还并不是那么得心应手, 仅仅是刚刚起步。仅仅是刚刚起步。单克隆抗体产物是从具有肿瘤细胞表
15、型特征细胞而来的单克隆抗体产物是从具有肿瘤细胞表型特征细胞而来的, 来来自这种细胞的产物是否有潜在的生物毒害作用自这种细胞的产物是否有潜在的生物毒害作用, 特别是可能特别是可能释放致癌病毒。释放致癌病毒。单克隆抗体可能诱发抗个体型反应单克隆抗体可能诱发抗个体型反应, 而从抗体对其靶抗原角而从抗体对其靶抗原角度看度看,这可能造成单克隆抗体失活。反复注射单克隆抗体这可能造成单克隆抗体失活。反复注射单克隆抗体, 可可能造成对单克隆抗体的个体型免疫能造成对单克隆抗体的个体型免疫, 并使单克隆抗体失去生并使单克隆抗体失去生物活力物活力, 这在理论上是可能的。这在理论上是可能的。单克隆抗体技术简介国际抗体
16、公司国际抗体公司AbcamAbMARTAssay DesignsBDBiodesignBioVisionCalbiochem corpCaymanCell Signaling Technology(CST)ChemiconDynal Biotech ASA.MBLMerckNeoMarkersNovusORGENTECPeproTechPierceR&DSanta单克隆抗体技术简介国际抗体会议国际抗体会议2010 Americas Antibody Congress Annual Proteins Congress Antibody Congress 2008 Antibody Enginee
17、ring & Antibody Therapeutics BITs 3rd International Congress of Antibodies-2011European Antibody Congress 2010Gordon Research Conferences - 2010 Program (Antibody Biology)Recombinant Antibodies 2010 The 10th International Congress on Antiphospholipid Antibodies The 6th annual European Antibody Congress Therapeutic Antibodies in Europe 单克隆抗体技术简介谢谢！谢谢！单克隆抗体技术简介
