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1、 临床检验实验室安全知识培训临床检验实验室安全知识培训 (二二) 检验科检验科 2010 20101 生物安全柜生物安全柜 (safety cabinet)2l一种专用的排风柜。通过对排到一种专用的排风柜。通过对排到 大气中的气体过滤大气中的气体过滤(filter)，防止，防止 操作者和环境接触到处理有潜在操作者和环境接触到处理有潜在 危险性和危险微生物时产生的危险性和危险微生物时产生的气气 溶胶。溶胶。3生物安全柜产品的特点生物安全柜产品的特点:l1、整个操作区内的三面墙体都为双、整个操作区内的三面墙体都为双 层墙体，其夹层互相贯通层墙体，其夹层互相贯通(包括台面下包括台面下 部的夹层，形成
2、互相连通的负压风道部的夹层，形成互相连通的负压风道.l2、安全柜内部墙体一体成型，三面、安全柜内部墙体一体成型，三面 墙体间无接缝墙体间无接缝(seamless).l3、采用进口的超高效过滤器、采用进口的超高效过滤器 (HEPA)，过滤效率高达，过滤效率高达99.999%.4生物安全柜的辅助装置保障操作者安全生物安全柜的辅助装置保障操作者安全l1、负压报警装置负压报警装置： 安全柜的负压不能达到要求时，安全柜的负压不能达到要求时， 自动报警。自动报警。l2、操作窗高度报警操作窗高度报警： 操作窗高度超过安全高度时，操作窗高度超过安全高度时， 自动报警。提醒您注意调整。自动报警。提醒您注意调整。
3、5l3、过滤器报警过滤器报警： 当其压力超过范围时自动报警可当其压力超过范围时自动报警可 提醒您通知厂家更换过滤器。提醒您通知厂家更换过滤器。l4、蝶阀蝶阀： 安全柜内液体通过柜体下方蝶阀安全柜内液体通过柜体下方蝶阀 安全排出，将交叉感染的可能降安全排出，将交叉感染的可能降 到最低。到最低。6工作原理工作原理:1. 物理屏障物理屏障2. 高效过滤高效过滤3. 空气屏障空气屏障4. 定向层流定向层流7诱捕效应诱捕效应 静电效应静电效应拦截效应拦截效应 沉降效应沉降效应 扩散效应扩散效应0.3 um 的颗粒过的颗粒过滤效率滤效率 99.999% ;0.12 um 的颗粒过的颗粒过滤效率滤效率 99
4、.99%.8 垂直层流洁净台垂直层流洁净台9I级生物安全柜级生物安全柜:1.保护操作者和操保护操作者和操作环境。作环境。2.样品没有得到保样品没有得到保护。护。3.通过样品区的空通过样品区的空气，经高效过滤器气，经高效过滤器的过滤之后，的过滤之后，100%地排放到实地排放到实验室环境中。验室环境中。10II 级生物安全柜级生物安全柜 - C A型型(B3):30% 外排进入环境外排进入环境30% 外界空气补充外界空气补充70% 经过滤后循经过滤后循 环使用环使用11II 级生物安全柜级生物安全柜 C B1型型70%外排进入环境外排进入环境70% 外界空气补充外界空气补充30% 过滤后循环使过滤
5、后循环使 用用12III级生物安全柜级生物安全柜样品、操作者、操样品、操作者、操作环境都得到保护作环境都得到保护(操作时戴全密封手操作时戴全密封手 套套）100%外排进入环境外排进入环境100%外界空气补充外界空气补充无循环使用的气流无循环使用的气流13l如下情况使用生物安全柜：如下情况使用生物安全柜： l（1）致病微生物气溶胶或溅出）致病微生物气溶胶或溅出l的操作应在生物安全柜的操作应在生物安全柜 l（级生物安全柜为宜）级生物安全柜为宜）14l（2）处理高浓度或大容量感染性）处理高浓度或大容量感染性l材料均须在生物安全柜材料均须在生物安全柜 (级安全级安全l柜为宜）或物理抑制设备中进行，柜为
6、宜）或物理抑制设备中进行，l并使用个体防护设备。并使用个体防护设备。15l（3）上述材料的离心操作如果使）上述材料的离心操作如果使l用密封的离心机转子用密封的离心机转子 或安全离心或安全离心l杯，且它们只在生物安全柜中开闭杯，且它们只在生物安全柜中开闭l和装载感染性材料，则可在实验室和装载感染性材料，则可在实验室l中进行。中进行。16l11操作步骤操作步骤:l开启电源和内外风扇；开启电源和内外风扇；l在机器预热时将所有必需的物品置于安全在机器预热时将所有必需的物品置于安全柜内；柜内；l准备一块浸有准备一块浸有75%的酒精的纱布；的酒精的纱布；l开始工作前及完成工作后，让安全柜工作开始工作前及完
7、成工作后，让安全柜工作15min来完成来完成“净化净化”过程；过程；l手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕才开始对物品分钟，以使安全柜调整完毕才开始对物品进行处理；进行处理；17l接种环灭菌时，用电子加热器，而不应该接种环灭菌时，用电子加热器，而不应该使用明火；使用明火；l在实验结束时，生物安全柜里的所有物品在实验结束时，生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染，标本个培养基移出安都应清除表面污染，标本个培养基移出安全柜；全柜；l每天实验结束时，用每天实验结束时，用75%酒精擦拭工作台酒精擦拭工作台面、四壁及玻璃的内外侧等部位来清除污面
8、、四壁及玻璃的内外侧等部位来清除污染；染；l有标本溢出等污染时，用爱尔施消毒，然有标本溢出等污染时，用爱尔施消毒，然后用水再次进行擦拭。后用水再次进行擦拭。18l1.2注意事项注意事项:l每次开始实验之前将所需物品置于安全柜每次开始实验之前将所需物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出次数；内，以尽可能减少双臂进出次数；l双臂应该垂直地缓慢进出前面的入口；双臂应该垂直地缓慢进出前面的入口；l尽量减少操作者身后的人员活动；尽量减少操作者身后的人员活动；l生物安全柜在使用中不能打开玻璃观看挡生物安全柜在使用中不能打开玻璃观看挡板；板；l在生物安全柜内操作时，不能进行文字工在生物安全柜内操作时，不能进
9、行文字工作；作；l级生物安全柜千面的进气口格栅不能被级生物安全柜千面的进气口格栅不能被纸、仪器设备或其他物品阻挡；纸、仪器设备或其他物品阻挡；19l可产生气溶胶的设备可产生气溶胶的设备(如混匀器、离心机等如混匀器、离心机等)应靠近安全柜的后部位置；应靠近安全柜的后部位置；l生物危害性废弃物袋放在安全柜内右侧，生物危害性废弃物袋放在安全柜内右侧，袋中放入爱尔施消毒剂；袋中放入爱尔施消毒剂；l房间中有人时要关闭紫外灯，以保护眼睛房间中有人时要关闭紫外灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害；和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害；l安全柜一直维持运行状态安全柜一直维持运行状态8小时工作期间小时工作
10、期间，不能反复开关；，不能反复开关；l当气流警报响起时，立刻停止工作，并报当气流警报响起时，立刻停止工作，并报告生物安全负责人。告生物安全负责人。20 离心机的生物安全离心机的生物安全211.高效微粒隔离膜（高效微粒隔离膜（HEPA filter) 材料是聚偏氟乙烯（材料是聚偏氟乙烯（PVDF）, 孔孔 径为径为0.2 m.22l. 双重锁定转头盖双重锁定转头盖 (Dual Locking Rotor Lid) 把转头从离心腔拿出至安全柜时，把转头从离心腔拿出至安全柜时， 保持转头的密封保持转头的密封23l . 生物安全转头生物安全转头 (BiocontainmentRotor) 样品瓶外套是
11、转头的一部分样品瓶外套是转头的一部分 样品瓶可于安全柜内打开样品瓶可于安全柜内打开 保证漏出的样品保留在瓶内保证漏出的样品保留在瓶内24 、多重保护的试管盖、多重保护的试管盖部件包括密封圈，内盖及管部件包括密封圈，内盖及管/瓶盖瓶盖25离心机使用操作规程离心机使用操作规程(7)；l1.先检查离心管和盛标本的容器是否破先检查离心管和盛标本的容器是否破损损?l2.称重平衡称重平衡, 正确放置十字轴和离心桶；正确放置十字轴和离心桶；l3.空离心管用蒸馏水来平衡；空离心管用蒸馏水来平衡；l4.管内容物不能装得过满，需留出一定管内容物不能装得过满，需留出一定空间空间;26l5.离心的试管应加盖离心的试管
12、应加盖, 离心时机器呈关离心时机器呈关闭态；闭态；l6.每次用毕，清洁离心桶、转子和离心每次用毕，清洁离心桶、转子和离心机腔的污染；机腔的污染；l7.机器状态复位机器状态复位.27消毒隔离处理原则消毒隔离处理原则 (先消毒先消毒, 后处理后处理) l1、带有传染性标本的一次性用品，要、带有传染性标本的一次性用品，要焚烧处理。焚烧处理。l2、非一次性使用的，要高压灭菌后毁、非一次性使用的，要高压灭菌后毁型、回收。型、回收。28如何消毒如何消毒?l针对有传染性的标本针对有传染性的标本: 1. 按体积加漂白粉按体积加漂白粉(5,24h; 肝炎肝炎, 结核等结核等6h) 倒入厕所。倒入厕所。 2. 微
13、生物培养标本微生物培养标本, 培养物高压培养物高压 后弃后弃. 3. 污染的液体、废液、洗涤液加污染的液体、废液、洗涤液加漂白水漂白水(10%, 过夜过夜)入下水道。入下水道。29l针对实验室的空气：针对实验室的空气： 1. 低臭氧紫外线灯消毒低臭氧紫外线灯消毒(无人无人). 2. 化学消毒化学消毒: 含有效氯消毒含有效氯消毒“消毒消毒 灵灵”1.5g/L喷喷 洒消毒洒消毒. 3. 静电吸附式空气净化器持续消静电吸附式空气净化器持续消 毒毒, 室内有无人时均适用室内有无人时均适用.30l针对实验室的地面针对实验室的地面, 台面和仪器台面和仪器: 可用可用0.5%1%过氧乙酸过氧乙酸 或或“消毒
14、消毒 灵灵”1.5g/L 喷雾喷雾 .31l地面的清洁与消毒应达到以下要求：地面的清洁与消毒应达到以下要求：l1)、地面应湿式清扫，保持洁净；当有血迹、地面应湿式清扫，保持洁净；当有血迹、粪便、体液等污染时，应及时以含氯消毒粪便、体液等污染时，应及时以含氯消毒拖洗。拖洗。l2)、拖洗工具使用后应先洗净、消毒、再晾、拖洗工具使用后应先洗净、消毒、再晾干。干。 32l 针对化验报告单：针对化验报告单： 应设立专门的清洁区打印报告单应设立专门的清洁区打印报告单.33 手卫生手卫生( hand of hygiene)l目的：目的：l 控制医院性感染的最重要控制医院性感染的最重要l 最简便易行最简便易行
15、 的措施之一。的措施之一。l （包括保护个人自己）（包括保护个人自己）l （避免交叉感染）（避免交叉感染）34 洗手、手消毒和外科洗手洗手、手消毒和外科洗手l 洗手（洗手（handwashing）：）： 指用普通肥皂和皂液通过流动水指用普通肥皂和皂液通过流动水 洗手。为仅去除手部皮肤污垢、洗手。为仅去除手部皮肤污垢、 碎屑和部分致病菌的一个过程。碎屑和部分致病菌的一个过程。35l手消毒（手消毒（hand antisepsis）：）： 指用含抗菌剂肥皂指用含抗菌剂肥皂/液，或消毒剂液，或消毒剂 擦洗手。在一般性洗手或刷手的基擦洗手。在一般性洗手或刷手的基 础上对残留手部的微生物作进一步础上对残留
16、手部的微生物作进一步 清除，除去或杀灭皮肤上的致病菌清除，除去或杀灭皮肤上的致病菌 的过程。的过程。36l外科手消毒外科手消毒: (surgical hand antisepsis) 要清除或消灭要清除或消灭暂居菌暂居菌和减少和减少常驻菌常驻菌 能降低术中因手套破损而导致细菌能降低术中因手套破损而导致细菌 侵入手术区域的风险。侵入手术区域的风险。37l暂居菌暂居菌指寄生在皮肤表层指寄生在皮肤表层, 常规洗常规洗 手易被清除的微生物手易被清除的微生物. 接触病人或接触病人或 被污染的物体表面时获得被污染的物体表面时获得, 如果没如果没 有通过肥皂和水的冲洗和机械摩擦有通过肥皂和水的冲洗和机械摩擦
17、 或者用消毒手刷将其破坏或者用消毒手刷将其破坏, 它可随它可随 时通过手传播。时通过手传播。38l常居菌常居菌是能从大部分人的皮肤上是能从大部分人的皮肤上 分离的微生物，这类微生物是皮分离的微生物，这类微生物是皮 肤上持久固有的寄居者，不易被肤上持久固有的寄居者，不易被 机械性的摩擦清除固有的细菌包机械性的摩擦清除固有的细菌包 括凝固酶阴性葡萄球菌、一些棒括凝固酶阴性葡萄球菌、一些棒 状杆菌类、不动杆菌属、丙酸菌状杆菌类、不动杆菌属、丙酸菌 属及某些肠道细菌族成员等。属及某些肠道细菌族成员等。39l洗手指征：洗手指征：直接接触病人前后直接接触病人前后/无菌操作前后无菌操作前后穿脱工作服等前后穿
18、脱工作服等前后/再进入清洁区前再进入清洁区前接触特殊易感病人前后接触特殊易感病人前后 接触或处理病人的血液、体液、分接触或处理病人的血液、体液、分泌物后等等泌物后等等40l正确的洗手方法：正确的洗手方法： 1、掌心对掌心、掌心对掌心 2、手指交叉掌心对手背、手指交叉掌心对手背 3、换一手后操作同上、换一手后操作同上 4、两手互握互搓指背、两手互握互搓指背 5、拇指在掌中转动摩擦、拇指在掌中转动摩擦 6、指尖聚掌心中摩擦、指尖聚掌心中摩擦41l标准标准：各区域工作的医务人员的手均：各区域工作的医务人员的手均不能不能检出致病性微生物。对于常驻菌检出致病性微生物。对于常驻菌（条件性）（条件性）要求要
19、求检出细菌菌落数；检出细菌菌落数； 类区域和类区域和类区域类区域: 5cfu/cm2 类区域类区域:10cfu/cm2 类区域类区域: 15cfu/cm242l手套的使用与要求手套的使用与要求: 手套的种类手套的种类 : 1、清洁手套、清洁手套 2、无菌手套、无菌手套 手套的使用手套的使用: 1、手术、护理特殊病人或入、手术、护理特殊病人或入 体腔的操作（无菌手套）体腔的操作（无菌手套） 2、手可能被污染时（清洁手套、手可能被污染时（清洁手套 ）43l手套使用须注意手套使用须注意 1、手套不能代替洗手、手套不能代替洗手 2、带手套只能接触可能污染的、带手套只能接触可能污染的 物品物品 3、脱手
20、套后要洗手、脱手套后要洗手 44l消毒消毒(disinfection): 杀灭物体上病原微生物的方法杀灭物体上病原微生物的方法, 并并 不一定杀死含芽胞的细菌或非病原不一定杀死含芽胞的细菌或非病原 微生物。微生物。45l灭菌灭菌(serilization): 指杀灭物体上所有微生物的方法。指杀灭物体上所有微生物的方法。 灭菌比消毒的要求高，包括杀死细灭菌比消毒的要求高，包括杀死细 菌芽胞在内的全部病原微生物和非菌芽胞在内的全部病原微生物和非 病原微生物。病原微生物。46l抑菌抑菌(bacteriostasis): 指抑制体内或体外细菌的生长繁殖指抑制体内或体外细菌的生长繁殖 常用的抑菌剂为各种
21、抗生素常用的抑菌剂为各种抗生素, 用于用于 体内可抑制其生长繁殖体内可抑制其生长繁殖; 用于体外用于体外 是通过抑菌试验来验证细菌对抗生是通过抑菌试验来验证细菌对抗生 素的敏感性。素的敏感性。47l防腐防腐(antisepsis): 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方防止或抑制体外细菌生长繁殖的方 法。细菌一般不死亡。使用同一种法。细菌一般不死亡。使用同一种 化学药品在高浓度时称为消毒剂，化学药品在高浓度时称为消毒剂， 而以低浓度达到抑菌目的时又称之而以低浓度达到抑菌目的时又称之 为抑菌剂。为抑菌剂。48l防腐防腐(antisepsis): 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方防止或抑制体外细菌生长繁殖
22、的方 法。细菌一般不死亡。使用同一种法。细菌一般不死亡。使用同一种 化学药品在高浓度时称为消毒剂，化学药品在高浓度时称为消毒剂， 而以低浓度达到抑菌目的时又称之而以低浓度达到抑菌目的时又称之 为抑菌剂。为抑菌剂。49 消毒灭菌的手段消毒灭菌的手段l一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法l二、化学消毒灭菌法二、化学消毒灭菌法l三、生物消毒灭菌法三、生物消毒灭菌法50 一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法l(一一) 热力热力 湿热湿热/干热干热, 前者的效率更大前者的效率更大.l(二二) 辐射辐射l(三三) 滤过滤过l(四四) 超声波超声波l(五五) 干燥干燥/低温低温51高压蒸气灭菌器高压蒸气灭菌
23、器 ：1、灭菌原理：、灭菌原理： 通过预先抽真空的方法将蒸汽引入柜室通过预先抽真空的方法将蒸汽引入柜室,穿透到物品中间以热力使菌体蛋白凝固穿透到物品中间以热力使菌体蛋白凝固。2、注意事、注意事项: 操作人员须经专业培训，合格后方能上岗操作人员须经专业培训，合格后方能上岗;安全使用防灼伤安全使用防灼伤; 保证锅内空气流通并定期灭保证锅内空气流通并定期灭菌效果监测并记录菌效果监测并记录; 保持高压锅整洁。保持高压锅整洁。3、操作操作（见后）：（见后）： 52 将拟灭菌的物品随同盛装的桶放入灭菌器将拟灭菌的物品随同盛装的桶放入灭菌器内；盖好盖子，拧紧元宝螺丝，勿使漏气；内；盖好盖子，拧紧元宝螺丝，勿
24、使漏气；锅下加热，打开排气活门，放出冷空气（一锅下加热，打开排气活门，放出冷空气（一般般在水沸后排气般般在水沸后排气10-15分钟左右）分钟左右）,关闭放关闭放气活门，使压力逐渐上升至气活门，使压力逐渐上升至103Kpa，温度达，温度达121.3，维持，维持20分钟以上，排气至分钟以上，排气至“0”时，时，慢慢打开盖子。切忌突然开盖，是冷空气大慢慢打开盖子。切忌突然开盖，是冷空气大量量进入，蒸汽凝成水滴，使物品潮湿，且量量进入，蒸汽凝成水滴，使物品潮湿，且玻璃类易发生爆裂。待压力指针到玻璃类易发生爆裂。待压力指针到“0”位置位置和和热空气排尽后，才能打开柜门，去除物品；热空气排尽后，才能打开柜
25、门，去除物品；关紧进气阀。关紧进气阀。53 二、化学消毒灭菌法二、化学消毒灭菌法l应用化学消毒剂注意事项应用化学消毒剂注意事项: 1. 明确消毒剂的种类与作用特点明确消毒剂的种类与作用特点 2. 不同消毒剂的适宜使用对象不同消毒剂的适宜使用对象 3. 不同消毒剂间的配伍禁忌不同消毒剂间的配伍禁忌 4. 影响消毒剂消毒灭菌效果的因素影响消毒剂消毒灭菌效果的因素54l影响消毒剂消毒灭菌效果的因素影响消毒剂消毒灭菌效果的因素 1. 消毒剂的性质消毒剂的性质, 浓度与作用时间浓度与作用时间 2. 微生物的种类与数量微生物的种类与数量 3. 消毒作用时的温度消毒作用时的温度(高提高效果高提高效果) 4. 消毒剂杀菌受酸碱度影响消毒剂杀菌受酸碱度影响 5. 消毒环境中存在有机物影响效果消毒环境中存在有机物影响效果55 三、生物消毒灭菌法三、生物消毒灭菌法l噬菌体噬菌体(bacteriophage, phage) 一种感染细菌一种感染细菌, 真菌或其他微生物真菌或其他微生物 的病毒。其中毒性噬菌体能在宿主的病毒。其中毒性噬菌体能在宿主 菌细胞内复制增殖形成大量子代噬菌细胞内复制增殖形成大量子代噬 菌体，并最终裂解宿主菌。菌体，并最终裂解宿主菌。56l 谢谢 谢谢57
