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1、微量铁的测定微量铁的测定pOBJECTIVE1 1掌握分光光度法的基本原理掌握分光光度法的基本原理2 22 2 学会光度法测定物质的含量学会光度法测定物质的含量3 33 3 学习可见分光光度计的使用方法学习可见分光光度计的使用方法21 显色反应及其条件显色反应及其条件因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它 操作时，必须在平行原则的条件下进行操作时，必须在平行原则的条件下进行2 测定方法：标准曲线法测定方法：标准曲线法(空白溶液作对照空白溶液作对照)：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素 溶剂空白：溶剂空白：显色
2、剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白 溶液溶液 试剂空白：试剂空白：显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶 剂剂(不加试样溶液不加试样溶液) 试样空白：试样空白：试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应 相同条件进行操作相同条件进行操作9显色剂：显色剂：磺基水杨酸磺基水杨酸 pH 1.82.5 淡紫色淡紫色 4.08.0 橙红色橙红色 8.011.5 黄色黄色 12 沉淀沉淀吸收波长：吸收波长：380480nm范围内，选择最大
3、吸收波长范围内，选择最大吸收波长max(425nm)实验条件：实验条件：10PROCEDURE1系列标准溶液和待测溶液的配制系列标准溶液和待测溶液的配制 编号编号 空白空白 1 2 3 4 5 6 未知未知标准溶液标准溶液(ml) 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液待测液)10%磺基水杨酸磺基水杨酸(ml) 5.00HOAc-NaOAc缓冲液缓冲液(ml) 10蒸馏水蒸馏水 稀释至稀释至50.00ml112标准曲线的制作标准曲线的制作波长波长425nm下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓测定一系列标准溶
4、液的吸光度以测定一系列标准溶液的吸光度以Fe3+含量为横坐标，含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线吸光度为纵坐标绘制标准曲线 编号编号 空白空白 1 2 3 4 5 6 Fe3+含量含量(mg/ml) 吸光度吸光度(A)波波 长长 425nm 123 试样注入比色皿，插入试样槽试样注入比色皿，插入试样槽 调节波长至调节波长至 425nm 盖上样品室盖，将空白试样移入光路盖上样品室盖，将空白试样移入光路 按按 A / T / C / F 键，切换至键，切换至 A 明亮明亮 按按 / 100% 键，使键，使A值显示为值显示为 0.000 (即置空白试样为即置空白试样为0.000) 推或拉推或拉
5、SAMPLE 依次测试标准系列溶液依次测试标准系列溶液 A值值1 接通电源，预热接通电源，预热30min2 打开样品室盖，按打开样品室盖，按 / 0% 键键, 使使 T 显示显示 000.0可见分光光度计操作：可见分光光度计操作：130ACC样品样品A样品样品 相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上 查出查出Fe3+的含量的含量.3 未知铁盐溶液中未知铁盐溶液中Fe3+含量的测定含量的测定 14表表1 微量铁含量测定结果微量铁含量测定结果DATA 编号编号 空白空白 1 2 3 4 5 6 未知未知Fe3+标准溶液标准溶液(ml) 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液待测液)10%磺基水杨酸磺基水杨酸(ml) 5.00HOAc-NaOAc缓冲液缓冲液(ml) 10蒸蒸 馏馏 水水 稀释至稀释至50.00ml波波 长长 425nmFe3+ 含量含量(mg/ml)吸光度吸光度(A)15QUESTION & DISCUSSION1 本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？ 2 为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？16
