细胞实验课件细胞化学

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1、细胞化学细胞化学1.Feulgen反应显示细胞中DNA的分布2.Brachet反应显示DNA和RNA在细胞中的分布3.PAS反应显示细胞中糖原的分布 在保持细胞结构完整的条件下，通过细胞化学反应研究细胞内各种成分（主要是生物大分子）的分布情况以及这些成分在细胞活动过程中的动态变化。 实验目的实验目的 1.了解Feulgen、Brachet、PAS反应的原理，掌握有关的操作方法。 2.了解细胞内DNA、RNA、多糖等化学成分的分布情况。Feulgen反应反应 组成DNA的单核苷酸由脱氧核糖、碱基和磷酸根构成。经盐酸水解，嘌呤碱和脱氧核糖之间的糖苷键打断，并使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，

2、与Schiff试剂反应。 Feulgen反应反应 Schiff试剂是由碱性品红、盐酸、偏重亚硫酸钠配制而成，碱性品红因其结构中含有发色基团-醌基显示紫红色；与盐酸、偏重亚硫酸钠反应后，醌基两端的双键被打开，形成无色品红溶液，很不稳定，需要避光密闭保存；在和醛基反应后，重新生成醌基结构，故有DNA的部位被染成紫红色。 Brachet反应反应 甲基绿派洛宁为碱性染料，它能分别与细胞内的DNA、RNA结合而呈现不同颜色。当其作为混合染料时，甲基绿和DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与RNA选择结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不

3、同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色，派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色，但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色。PAS反应反应 强氧化剂过碘酸能打开C-C键，使多糖分子中的乙二醇基氧化成乙二醛基，醛基再与shiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类的多少有关。细胞化学细胞化学1.仪器、用具 显微镜、小烧杯、试管、试管架、恒温水浴箱、酒精灯、温度计、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸、擦镜纸等。2.材料 洋葱鳞茎内表皮、马铃薯块茎3.试剂 1mol/l盐酸、Schiff试剂、亚硫酸水、甲基绿派洛宁染色液（ unna试剂 ）、 1mol/l乙酸缓冲液（PH4.8）、过碘酸酒精

4、溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、70%乙醇Feulgen反应反应1.将洋葱鳞茎内表皮放在1mol/l盐酸中，60水解10min。2.蒸馏水水洗3次。3.Schiff试剂遮光染色30min。4.用新鲜配制的亚硫酸水溶液浸洗3次，每次1min。5.蒸馏水浸洗5min。6.盖片，镜检。对照：1.材料不经盐酸水解，按照步骤2-6进行。 2.先用5%三氯醋酸90处理材料15min，将DNA抽提掉，再 按照步骤2-6进行。 Brachet反应反应n1.撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于载玻片上；n2.滴加甲基绿派洛宁试剂，染色30min。n3.蒸馏水洗；注意派洛宁极易被洗脱，水洗需迅速。n4.盖片，镜检。n？1.先用5%三氯醋酸90处理材料15min，再按照步骤2-4进行。 ？2.先用0.1%RNA酶室温处理材料15min，再按照步骤2-4进行。 PAS反应反应1.将马铃薯徒手切片。2.过碘酸溶液浸泡15min。3.移入70%乙醇10秒。4.Schiff试剂染色15min。5.亚硫酸水溶液浸洗3次，每次1min。6.蒸馏水洗。7.盖片，镜检。对照：步骤2中过碘酸改为70%乙醇。