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1、仿制药分析方法的验证和药品仿制药分析方法的验证和药品稳定性的研究稳定性的研究谭海松谭海松 PhDNov27,2011主要内容主要内容n仿制药的仿制药的GMP要求要求n仿制药分析方法的验证仿制药分析方法的验证n仿制药稳定性的研究仿制药稳定性的研究FDAFDA官员来制药公司检查时的留言官员来制药公司检查时的留言n我们并不期望在检查过程中所有事我们并不期望在检查过程中所有事情都是完美无缺的情都是完美无缺的, ,但是我们的确但是我们的确希望所检查到的东西全在你们的希望所检查到的东西全在你们的有有效控制效控制之中之中.药检局对仿制药的要求药检局对仿制药的要求n仿制药品系指仿制国家已批准正式生产仿制药品系
2、指仿制国家已批准正式生产并收载于国家药品标准的品种并收载于国家药品标准的品种.n仿制药与被仿制药应具有相同的剂型仿制药与被仿制药应具有相同的剂型, ,剂量剂量, ,质量质量, ,用途用途, ,用法用法, ,效果和安全度效果和安全度. . 仿制药的质量控制仿制药的质量控制药品测试药品测试分析方法分析方法分析方法验证分析方法验证科学性科学性( (理论正确理论正确) )药品药品质量质量可靠性可靠性( (避免人为和仪器误差避免人为和仪器误差) )准确性准确性 ( (正确反映真实值正确反映真实值) )分析方法分析方法验证的前提验证的前提:GMP:GMP标准标准标准物和试剂标准物和试剂仪器仪器操作人员操作
3、人员分析方法验证分析方法验证标准作业程序标准作业程序(SOP)(SOP)实验室实验室标准物和试剂标准物和试剂的的SOPSOP要求要求n包装上注明生产厂家包装上注明生产厂家, 批号和有效期批号和有效期n如生产厂家没有提供有效期如生产厂家没有提供有效期, SOP要规要规定有效期定有效期n实验记录要有所用到的实验记录要有所用到的标准物和试剂的标准物和试剂的生产厂家生产厂家, 批号和有效期批号和有效期分析分析仪器仪器的的SOPSOP要求要求n所有分析所有分析仪器都要仪器都要有使用记录有使用记录n分析分析仪器在使用前要用仪器在使用前要用标准物校准标准物校准n分析分析仪器仪器每半年进行一次每半年进行一次仪
4、器仪器校准校准HPLC在使用前用在使用前用标准物校准举例标准物校准举例溶剂空白溶剂空白定量限或分离效率检查定量限或分离效率检查标准物溶液标准物溶液-1 (注射注射3次次)标准物溶液标准物溶液-2 (注射注射3次次)样品溶液样品溶液 (每隔每隔10个样品注射标准物溶液个样品注射标准物溶液-1,2).标准物溶液标准物溶液-1 标准物溶液标准物溶液-2定量限或分离效率检查定量限或分离效率检查溶剂空白溶剂空白实验室的实验室的SOPSOP要求要求n所有仪器都要有所有仪器都要有校准日期或相应的注释校准日期或相应的注释n所有样品和所有样品和溶液溶液都要有批号都要有批号, ,有效期和有效期和来源来源n实验室中
5、的工作人员要有必要的安全防实验室中的工作人员要有必要的安全防护护n实验室要保持整洁实验室要保持整洁工作人员工作人员的的SOPSOP要求要求n每个工作人员都要每个工作人员都要有相关有相关SOP的培训记培训记录录n工作人员工作人员每年至少参加一次每年至少参加一次GMP培训培训主要内容主要内容n仿制药的GMP要求n仿制药分析方法的验证仿制药分析方法的验证n仿制药稳定性的研究仿制药的研发过程仿制药的研发过程找到原料药找到原料药稳定性的研究稳定性的研究专利保护将失效或专利保护将失效或专利挑战专利挑战生物等效性临床试验生物等效性临床试验简化新药简化新药(ANDA)申请申请分析方法的研究和验证分析方法的研究
6、和验证配方和生产工艺的研究配方和生产工艺的研究成品药片分析样品的制备实例成品药片分析样品的制备实例n把把10片药品放于片药品放于500毫升容量瓶中毫升容量瓶中, 加入加入400毫升溶剂毫升溶剂, 以以200rpm摇摇30分钟分钟, 然后加入溶剂然后加入溶剂到刻度到刻度. 摇匀后摇匀后, 以以8,000rpm高速离心高速离心10分钟分钟, 取上清液用取上清液用高压液相色谱高压液相色谱(HPLC)(HPLC)进行进行分析分析.n分析方法的验证分析方法的验证API全部溶于溶剂全部溶于溶剂HPLC正确分析出样品溶液的浓度正确分析出样品溶液的浓度分析结果的可靠性分析结果的可靠性分析方法验证的内容分析方法
7、验证的内容nAPI全部溶于溶剂全部溶于溶剂准确度准确度, 精密度精密度n正确分析出样品溶液的浓度正确分析出样品溶液的浓度专属性专属性, 线性线性, 范围范围, 检测限检测限, 定量限定量限n分析结果可靠性分析结果可靠性 耐用性耐用性, 精密度精密度分析方法验证内容分析方法验证内容n专属性专属性n线性线性n准确度准确度n精密度精密度n范围范围n检测限检测限, 定量限定量限n耐用性耐用性n样品溶液稳定性样品溶液稳定性分析方法验证分析方法验证-专属性专属性n专属性的定义专属性的定义在其它成分可能存在下在其它成分可能存在下, ,分析方法能够正确检分析方法能够正确检测出被分析物的特性测出被分析物的特性.
8、 .n专属性的测定举例专属性的测定举例: :高压液相色谱高压液相色谱高压液相色谱的系统适用性高压液相色谱的系统适用性n色谱峰的容量因子色谱峰的容量因子: 1k20: 1k=1.5: R=1.5n色谱峰的拖尾系数色谱峰的拖尾系数: T2.0: T=99.9% : =99.9% (LC/MS, DAD, UV)(LC/MS, DAD, UV)高压液相色谱的系统适用性高压液相色谱的系统适用性色谱峰的容量因子色谱峰的容量因子: k=t/tM-1色谱峰分辨率色谱峰分辨率: R=2(t2-t1)/(W1+W2)高压液相色谱的系统适用性高压液相色谱的系统适用性色谱峰的拖尾系数色谱峰的拖尾系数: T=W0.0
9、5/(2f)高压液相色谱的系统适用性高压液相色谱的系统适用性色谱峰分辨率色谱峰分辨率: 2.0色谱峰的拖尾系数色谱峰的拖尾系数: 1.0分析方法验证分析方法验证-线性线性n线性的定义线性的定义在测定范围内在测定范围内, ,检测结果与被分析物浓检测结果与被分析物浓度呈线性关系的程度度呈线性关系的程度. .n线性的测定线性的测定在被分析物浓度在被分析物浓度20%-150%20%-150%内内, ,至少测至少测5 5个个浓度浓度. .例如例如20%,80%,100%,120%,150%20%,80%,100%,120%,150%最小二乘法线性回归最小二乘法线性回归, R=0.999, R=0.999
10、线性举例线性举例-HPLC线性举例线性举例-HPLC分析方法验证分析方法验证-准确度准确度n准确度的定义准确度的定义测定结果与真实值之间的接近程度测定结果与真实值之间的接近程度. 向向制剂中加入已知量的被测物进行回收率制剂中加入已知量的被测物进行回收率测定来验证测定来验证.n准确度的测定准确度的测定在在3 3个浓度个浓度(80%,100%,120%)(80%,100%,120%)中中, ,每个浓每个浓度制备度制备3 3个样品个样品. .每个浓度每个浓度3 3个样品的平个样品的平均均回收率必须在回收率必须在98-102%.98-102%.分析方法验证分析方法验证-精密度精密度n精密度的定义精密度
11、的定义同一样品多次取样测试结果的接近程度同一样品多次取样测试结果的接近程度n精密度的测定精密度的测定: %RSD=2% (6: %RSD=2% (6个样品个样品) )重复性重复性: 同一分析人所得结果的精密度同一分析人所得结果的精密度中间精密度中间精密度: 同一实验室同一实验室, 不同的日期不同的日期, 设设备和人员所得结果的精密度备和人员所得结果的精密度重现性重现性: 不同实验室不同实验室, 不同人员所得结果的不同人员所得结果的精密度精密度分析方法验证分析方法验证-范围范围n范围的定义范围的定义分析药品达到一定准确分析药品达到一定准确度度, 精密精密度度和线和线性的区间性的区间. .n范围的
12、要求范围的要求含量测定含量测定: 80-120%: 80-120%含量均匀度测定含量均匀度测定: 70-130%: 70-130%溶出度溶出度: 50-150%: 50-150%杂质测定杂质测定: : 规定限度规定限度20%20%分析方法验证分析方法验证-检测限和定量限检测限和定量限n检测限检测限: 试样中被分析物能被检测到的试样中被分析物能被检测到的最低量最低量, 一般定义为信噪比大于一般定义为信噪比大于3:1n定量限定量限: 试样中被分析物能被定量测定试样中被分析物能被定量测定的最低量的最低量, 一般定义为信噪比大于一般定义为信噪比大于10:1检测限和定量限信噪比的测量检测限和定量限信噪比
13、的测量分析方法验证分析方法验证-耐用性耐用性n耐用性耐用性的定义的定义测定条件发生小的变动时测定条件发生小的变动时, 测定结果不测定结果不受影响的承受程度受影响的承受程度n耐用性耐用性测定的举例测定的举例: :高压液相色谱高压液相色谱流动相流动相: 组成组成, pH值值, 流速的变动流速的变动色谱柱色谱柱: 厂家厂家, 批号批号, 柱温的变动柱温的变动分析方法验证分析方法验证-样品溶液稳定性样品溶液稳定性n样品溶液稳定性样品溶液稳定性的定义的定义样品溶液在一定储藏条件下可被重复使样品溶液在一定储藏条件下可被重复使用的时间用的时间n样品溶液稳定性样品溶液稳定性的测定的测定样品溶液稳定性样品溶液稳
14、定性测定结果是初始结果测定结果是初始结果%.%.仿制药分析方法的来源仿制药分析方法的来源n中国药典n美国药典（USP）n欧洲药典（EP）n日本药典（JP）n原料药厂家n文献分析方法验证的参考文献分析方法验证的参考文献nICHQ2-ValidationofAnalyticalProceduresn美国药典（USP）主要内容主要内容n仿制药的GMP要求n仿制药分析方法的验证n仿制药稳定性的研究仿制药稳定性的研究稳定性测试目的稳定性测试目的n考察原料药或制剂的性质在温度考察原料药或制剂的性质在温度, ,湿度湿度, , 光线等条件的影响下随时间变化的规律光线等条件的影响下随时间变化的规律. .n为药品
15、的生产、包装、贮存、运输条件为药品的生产、包装、贮存、运输条件和有效期的确定提供科学依据和有效期的确定提供科学依据, ,以保证以保证临床用药安全有效临床用药安全有效. .稳定性测试的趋势稳定性测试的趋势n包括更多的贮藏条件以使临床实验可在包括更多的贮藏条件以使临床实验可在不同国家进行不同国家进行n提早开始稳定性研究来附和不同国家药提早开始稳定性研究来附和不同国家药检局的要求检局的要求稳定性测试稳定性测试需要控制的条件需要控制的条件n测试内容和标准测试内容和标准n贮存条件贮存条件 n测试频率测试频率n测试完成时间测试完成时间原料药的原料药的测试内容和标准测试内容和标准n外观变化外观变化: 颜色颜
16、色n物理性质变化物理性质变化: 晶型晶型, 熔点熔点, 热失热失重重, 水含量水含量 n主要成分含量主要成分含量: 97-103%n杂质含量：杂质含量：0.15%仿制药对原料药的要求仿制药对原料药的要求n与被仿制药品的与被仿制药品的原料药原料药具有相同的物理具有相同的物理化学性质化学性质: :如盐如盐, ,晶型和异构体晶型和异构体( (对映体对映体) )n原料药的杂质限度原料药的杂质限度原料药杂质的含量应低于质控限度原料药杂质的含量应低于质控限度杂质的种类和含量杂质的种类和含量与被仿制药相同与被仿制药相同如如杂质的含量明显高于质控限度且与杂质的含量明显高于质控限度且与被仿被仿制药不同制药不同,
17、 ,应做必要的安全性研究应做必要的安全性研究原料药中基因毒性杂质要被有效控制原料药中基因毒性杂质要被有效控制原料药的杂质限度原料药的杂质限度最大日剂量最大日剂量报告限度报告限度鉴定限度鉴定限度质控限度质控限度2g0.03%0.05%0.05%原料药中基因毒性杂质的控制原料药中基因毒性杂质的控制n基因毒性杂质举例基因毒性杂质举例alkylatingelectrophiliccenter,unstableepoxide,aromaticamines,aromaticnitro,azo-structure,N-nitroso-groupn基因毒性杂质的控制限基因毒性杂质的控制限1.5ug/day药物
18、制剂的药物制剂的测试内容和标准测试内容和标准n外观变化外观变化: 颜色颜色n主要成分含量：变化小于主要成分含量：变化小于5%n降解产物降解产物: 70%at45minn物理性质物理性质: 水含量水含量, 颗粒度颗粒度制剂的杂质限度制剂的杂质限度最大日剂量最大日剂量 报告限度报告限度 鉴定限度鉴定限度质控限度质控限度2g0.05%0.1%0.15%溶出度测定模拟人体的消化过程溶出度测定模拟人体的消化过程溶出度测定的重要性溶出度测定的重要性n控制药物制剂质量的一个重要指标控制药物制剂质量的一个重要指标 n决定决定药物制剂稳定性的一个重要依据药物制剂稳定性的一个重要依据n用来评价药物制剂质量是否受原
19、料药用来评价药物制剂质量是否受原料药, 配方配方, 生产工艺和生产地变化的影响生产工艺和生产地变化的影响USP1:转篮法转篮法n溶出度测试过程中溶出度测试过程中, , 药品滞留在转篮里药品滞留在转篮里n可以调节缓冲液的可以调节缓冲液的值而不影响值而不影响篮里的药篮里的药品品n适用于片剂适用于片剂, ,胶囊等胶囊等USP2:桨法桨法n溶出度测试过程中溶出度测试过程中, ,药品留在容器底部的药品留在容器底部的中间中间n适用于片剂适用于片剂, ,胶囊和胶囊和悬浮液等悬浮液等USPII 溶出度测定仪器溶出度测定仪器USPII溶出度测定举例溶出度测定举例USP3:往复式圆筒法往复式圆筒法n药品随药品随圆
20、筒在溶液圆筒在溶液中做上下运动中做上下运动n不同缓冲液可放在不同缓冲液可放在不同不同容器中容器中n适用于片剂适用于片剂, ,胶囊胶囊和缓释药等和缓释药等USPIII 溶出度测定仪器溶出度测定仪器52USPIII溶出度测定举例溶出度测定举例USPIII溶出度测定举例溶出度测定举例溶出度测定方法的要素溶出度测定方法的要素n选择适当缓冲液选择适当缓冲液(pH): API(pH): API在缓冲液中在缓冲液中的溶解度是药品的溶解度是药品100%100%释放的释放的5-105-10倍倍. .n设定设定适当的转速适当的转速(USPI,USPII): (USPI,USPII): 50rpm,75rpm,10
21、0rpm50rpm,75rpm,100rpmn使用使用适当的分析方法适当的分析方法: UV,HPLC: UV,HPLC海南华益泰康药业有限公司海南华益泰康药业有限公司n成立于2010年6月，海口市引进的重大科技项目，总投资1亿元人民币。n以新药研发为主，集生产、销售于一体的综合性国际化医药企业。n公司关键核心研发人员均来自美国，有10年以上在美国著名制药医药公司药物制剂开发和技术管理的经验。海南华益泰康药业有限公司海南华益泰康药业有限公司n公司总建筑面积达1万多平方米，4000平米的制剂研发和生产车间，2500平米的分析研发和质量控制实验室。n生产车间及研发实验室完全按照美国GMP要求标准建设
22、，并引入国外药厂的现代化设计和管理理念为产品把关。n目前有近十个项目处于研发阶段，大部分是缓释和肠溶等复杂剂型。分析实验室仪器设备分析实验室仪器设备n液相色谱：安捷伦1260和1100型n气相色谱：安捷伦7890加顶空自动进样n紫外可见：安捷伦8453加自动进样器n溶出仪：安捷伦708加自动进样器n溶出仪USPIII：安捷伦(Varian)Bio-Disn傅里叶红外：岛津Prestige稳定性测试的稳定性测试的贮贮存条件存条件气候带气候带温度温度( (O OC)C)湿度湿度(%RH)(%RH)温带温带2145地中海地中海气候气候, ,亚热带亚热带2560干干热带热带3025湿热带湿热带3070
23、国际气候带国际气候带稳定性测试的稳定性测试的贮贮存条件存条件贮贮存条件存条件最短时间最短时间 ( (月月) )长期长期试验试验25C/60%RHor30C/65%RH12加速加速试验试验40C/75%RH6稳定性测试的储存条件稳定性测试的储存条件贮贮存条件存条件最短时间最短时间 ( (月月) )长期长期试验试验5C3C12加速加速试验试验25C/60%RH6稳定性测试的储存条件稳定性测试的储存条件贮贮存条件存条件最短时间最短时间 ( (月月) )长期长期贮贮存存-20C5C12光照稳定性的测试光照稳定性的测试n总光照：1.2millionluxhoursn光强：200watthours/n实验
24、要求：裸露在光源下放在包装中成品药有效期的确定成品药有效期的确定n稳定性好的药品一般以长期稳定性好的药品一般以长期试验结果来试验结果来确定有效期确定有效期n综合加速综合加速试验和试验和长期长期试验结果进行统计试验结果进行统计分析分析如三批统计分析结果差别较小如三批统计分析结果差别较小, ,取平均值为取平均值为有效期有效期如统计分析结果差别较大如统计分析结果差别较大, ,取最短的为取最短的为有效有效期期稳定性的测试频率稳定性的测试频率n长期长期试验试验第一年第一年: : 每三个月测一次每三个月测一次第二年第二年: : 每六个月测一次每六个月测一次第二年以后第二年以后: : 每年测一次每年测一次n
25、加速加速试验试验六个月时间六个月时间: 至少至少测三次测三次, ,包括包括起始点和第起始点和第六个月的点六个月的点. .稳定性的测试时间和有效期稳定性的测试时间和有效期贮存条件贮存条件(C/%RH)测试时间测试时间 (月月)136912 18每年每年结束结束5TTT30/65 or 25/60TTTTTTT40/75(T)TT50TT光照试验光照试验T有效期有效期61212182430+12结束结束 测试完成时间测试完成时间测试时间测试时间 (月月)完成时间完成时间 ( (天天) )328稳定性测试稳定性测试样品的选择样品的选择n最少采用三批样品最少采用三批样品n采用一定规模生产的样品采用一定
26、规模生产的样品n能够代表大规模生产条件下的产品质量能够代表大规模生产条件下的产品质量合成路线合成路线配方配方包装包装 稳定性测试稳定性测试样品生产规模的要求样品生产规模的要求n口服固体制剂口服固体制剂: :片剂片剂, ,胶囊等胶囊等1000010000个制剂单位个制剂单位n大体积包装的制剂大体积包装的制剂: :静脉输液静脉输液稳定性试验所需总量的稳定性试验所需总量的1010倍以上倍以上哪些变化需要重测原料药的哪些变化需要重测原料药的稳定性稳定性n改变合成路线改变合成路线n改变合成过程中最后的纯化步骤改变合成过程中最后的纯化步骤n改变大规模生产的步骤改变大规模生产的步骤n改变分析方法和规格要求改
27、变分析方法和规格要求哪些变化需要重测成品药的哪些变化需要重测成品药的稳定性稳定性n不同的制剂和配方不同的制剂和配方n改变主要添加剂的比例改变主要添加剂的比例n改变生产步骤改变生产步骤, ,生产设备和生产地生产设备和生产地n改变药品的包装改变药品的包装稳定性研究的特点稳定性研究的特点n周期长周期长n样品选择较严格样品选择较严格n重测率高重测率高n成本较高成本较高稳定性研究的参考文献稳定性研究的参考文献nICHQ1A-StabilityTestingofNewDrugSubstancesandProductsnICHQ1B-StabilityTesting:PhotostabilityTestin
28、gofNewDrugSubstancesandProductsnICHQ3-ImpuritiesFDA 483 举例举例YourfirminvalidatedanalyticaldatawithoutanyscientificjustificationYourinvestigationattributesanunknownpeaktoinjectorcontaminationbutthispeakwasnotpresentinprevioussystemsuitabilityorsampleinjectionsYourcorrectiveactionaddressesproductdispos
29、itionbutdoesnotaddresshowtopreventreoccurrenceoftheOOSresultFDA 483 举例举例Stabilityfailureswereattributedtoinexperiencedanalystswhenexpertanalystsrepeatedtheresultsandobtainedpassingresults.Thebatchwasreleasedonretestdatawithoutjustificationforignoringtheoriginalresults.TheQualityUnitwasunawareoftheor
30、iginalfailingresults.Laboratoryinvestigationandcorrectiveactionswerenotcompletedinatimelymanner.FDA 483 举例举例Somereagents,buffersolutions,referencecompound,andwaterusedforanalysis,presentinthelaboratoryarea,werenotappropriatelylabeled,wereexpiredorcarriednoexpirydate.Refrigeratordoesnothavetemperaturerecorderfor24hours.SOPdoesnotdefinefreezertemperature(e.g.below-10C).UseofprotectiveclothinginthelaboratoryareaisnotdescribedinanSOP.Thequalificationrecordsofthecomputeradministratorarenotcompleteandthejobdescriptionisnotavailable.
