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1、血清丙氨酸氨基转血清丙氨酸氨基转移酶移酶（ALTALT）测定）测定目的要求目的要求v掌握掌握ALT活性测定的基本原理活性测定的基本原理;v掌握比色法的原理和分光光度计的使用掌握比色法的原理和分光光度计的使用方法方法;v了解了解ALT活性测定的临床意义。活性测定的临床意义。比色分析法是通过比较溶液比色分析法是通过比较溶液颜色深浅来测定物质浓度的方法。颜色深浅来测定物质浓度的方法。 比色法的基本原理比色法的基本原理比色法的基本原理比色法的基本原理v当当一一束束单单色色光光通通过过有有色色溶溶液液时时，由由于于溶溶液液吸吸收收了了一一部部分分光光线线，透过光的强度就减弱。透过光的强度就减弱。v透光率
2、：透光率：T= I/ IoT= I/ Iov吸光度吸光度(A) : (A) : A=- A=-lgTlgT=-=-lglg (I/ Io) (I/ Io)v溶液的透光率越大，说明对光溶液的透光率越大，说明对光的吸收越少；反之，透光率越的吸收越少；反之，透光率越小，说明对光的吸收越多小，说明对光的吸收越多;T;T值值越小，越小，A A值越大。值越大。 v朗伯朗伯- -比尔定律比尔定律: : A=KLCA=KLC 即吸光度即吸光度A A与溶液的浓度与溶液的浓度C C和和溶液的厚度溶液的厚度L L的乘积成正比关系的乘积成正比关系 。 在其他条件相同时，溶液的在其他条件相同时，溶液的浓度越大或是厚度越
3、大，则溶浓度越大或是厚度越大，则溶液对光的吸收越强（光密度越液对光的吸收越强（光密度越大），而透光度则越小。大），而透光度则越小。 比色法的基本原理比色法的基本原理v当一束单色光通过同一有色溶液的两种不同当一束单色光通过同一有色溶液的两种不同浓度的溶液时，可得出下列两式：浓度的溶液时，可得出下列两式：v 标准管：标准管：A A标标=KC=KC标标L L 测定管：测定管：A A测测KCKC测测L L v则则 比色法的基本原理比色法的基本原理C C测测=A=A测测/A/A标标 C C标标谷丙转氨酶 ALT实验原理实验原理- 酮酮戊二酸二硝基苯戊二酸二硝基苯腙腙(干干扰扰)取试管4支，按下表加入试剂
4、： 静置静置10分钟，在分钟，在520nm 下读取各管吸光度。下读取各管吸光度。实验操作实验操作活力单位：活力单位：1ml 1ml 血清于血清于37 37 条件下与底物作条件下与底物作 用用30min30min产生产生2.5g2.5g丙酮酸为一个丙酮酸为一个1ALT1ALT单位。单位。计算计算A A测测- A- A测空测空C C测测( (ug/ml )= =A A标标- A- A标空标空 C C标标( (100ug/ml) 1ml1ml血清产生的丙酮酸血清产生的丙酮酸ugug数数(C(C测测) )2.5ug2.5ugALTALT活力单位活力单位/ml=/ml= ALTALT广泛存在于一般组织细
5、胞中广泛存在于一般组织细胞中, ,肝细胞中此肝细胞中此酶含量最多。肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝病时，酶含量最多。肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝病时，血清中此酶活性增加，其他疾病如心肌梗塞、心血清中此酶活性增加，其他疾病如心肌梗塞、心肌炎等亦有增高。故血清谷丙转氨酶活性得测定肌炎等亦有增高。故血清谷丙转氨酶活性得测定在临床诊断上具有重要意义。在临床诊断上具有重要意义。 生理意义生理意义 正常值：正常值：2-40单位单位/ml。 分光光度计的结构和使用分光光度计的结构和使用 v分分光光光光度度计计的的基基本本原原理理：利利用用比比色色法法的的原原理理，采采用用棱棱镜镜或或光光栅栅等等分分光光器器从从含含有有各各种种波波长长的的混混合合光光中中获获得得纯纯度度较较高高的的单单色色光光来来测测量量未未知知溶溶液液的的浓浓度度的的仪仪器器称称为为分分光光光光度计。度计。分光光度计的结构和使用分光光度计的结构和使用 722722型分光光度计原理图和仪器图型分光光度计原理图和仪器图 722722型分光光度计型分光光度计 722722型分光光度计型分光光度计 722722型分光光度计型分光光度计 722722型分光光度计型分光光度计
