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1、动物细胞培养WStillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？那么动物细胞常用的技那么动物细胞常用的技术手段呢？术手段呢？植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交问题探讨问题探讨 动物细胞工程的技术手段动物细胞工程的技术手段动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等动物细胞融合、生产单克隆抗体等动物细胞工程技术的基础动物细胞工程技术的基础动物细胞培养动物细胞
2、培养 从动物机体中取出相关的组织，从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些适宜的培养基中，让这些细胞生细胞生长和增殖长和增殖。原理：细胞增殖细胞增殖动物细胞培养的过程（见课本）动物胚胎或幼龄动物的组动物胚胎或幼龄动物的组织、器官织、器官（取材）（取材）细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液（分解细胞间的蛋白）（分解细胞间的蛋白）原代培养原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎剪碎细胞株细胞株细胞系细胞系动物组织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中
3、含有一定量蛋白质有一定量蛋白质遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变 细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别：1、遗传物质、遗传物质2、培养代数、培养代数原代培养：原代培养：传代培养：传代培养：原代培养与传代培养的区别原代培养与传代培养的区别分装之前，分装之前，10代以前代以前分装后继续培养，分装后继续培养，1010代以后代以后1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件添加一定量的抗生素添加一定量的抗生素定期更换培养液定期更换培养液培养液和培养器具无菌处培养液和培养器具无菌处理理动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境、无菌
4、、无毒的环境2、营养、营养补充合成培养基中补充合成培养基中缺乏的物质缺乏的物质葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子、因子、动物血清、血浆等动物血清、血浆等培养基的不同培养基的不同是是动物细胞培动物细胞培养和植物组织养和植物组织培养最重要的培养最重要的区别区别动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境2、营养、营养3、温度和、温度和PH36.5 +0.5度度 PH为为7.2-7.4动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境2、营养、营养3、温度和、温度和PH4、气体环境：、气体环境：
5、O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？做动物细胞培养材料？1、较植物组培培养基有何独特之处？、较植物组培培养基有何独特之处？独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等成分中有动物血清等这些组织或器官上的细胞生这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强命力旺盛，分裂能力强3、为什么培养前要将组织细胞、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？分散成单个细胞？防止细胞间接触抑制现象，使细胞与防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液更充分接触培养液更充分
6、接触4、动物细胞培养能否像绿色植物组织、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，而不能发育成个体数目增多，而不能发育成个体5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能能6、动物细胞培养过程中特别要注意什么？、动物细胞培养过程中特别要注意什么？注意时间的控制注意时间的控制7 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么白酶吗？为什么？ 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PHPH不同，不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋而正常组织细胞的生存环境与胰蛋
7、白酶的最适白酶的最适PHPH较接近较接近动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基细胞增殖细胞增殖培养结果培养结果培养目的培养目的培养基特有培养基特有成分成分培养基性质培养基性质原理原理（1 1）生产蛋白质生物制品：）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。扰素、单克隆抗体等。（2 2）培
8、养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究）用于生理、病理、药理等方面的研究动物细胞培养的应用动物细胞培养的应用 如何使动物细胞的全能性表达出来如何使动物细胞的全能性表达出来? 利用动物细胞核移植技术利用动物细胞核移植技术 动物核移植： 将动物的一个细胞的将动物的一个细胞的细胞核细胞核，移入一个已，移入一个已经去掉细胞核的经去掉细胞核的卵母细胞卵母细胞中，使其重组并中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终最终发育为动物个体发育为动物个体。分为。分为
9、胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植和和体细胞核移植体细胞核移植（难度高）（难度高） 用核移植的方法得到的动物。用核移植的方法得到的动物。克隆动物：动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术黑面绵羊去核卵母细胞黑面绵羊去核卵母细胞白面绵羊乳腺细胞核白面绵羊乳腺细胞核重组细胞重组细胞动物细胞培养动物细胞培养（或早期胚胎培养）（或早期胚胎培养）早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利细胞核移植细胞核移植1、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级卵、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞母细胞2、原因？、原因？细胞比较大，易操作细胞比较大，易操作
10、细胞质中含有使体细胞核全能性表达细胞质中含有使体细胞核全能性表达出来的物质出来的物质3、克隆过程运用的技术手段？、克隆过程运用的技术手段？动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植4、多利的大部分性状与谁一样？、多利的大部分性状与谁一样？白面绵羊白面绵羊5、结论？、结论？高度分化的体细胞核具有全能性高度分化的体细胞核具有全能性克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种改良动物品种 3.作为异种移植的供体作为异种移植的供体4.保护濒危动物保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问
11、题体细胞核移植技术存在的问题1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低成功率非常低3、克隆动物食品的安全性问题。、克隆动物食品的安全性问题。1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（）胞（） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （ ）A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B. B.单克隆抗体单克隆抗体C.C
12、.胚胎移植胚胎移植 D. D.动物细胞培养动物细胞培养AD3.3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于A.A.培养基不同培养基不同 B. B.动物细胞培养不需要在无菌条动物细胞培养不需要在无菌条件下进行件下进行 C. C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能不能D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。养成植株。A教学反馈教学反馈4 4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）无毒的环境无毒的环境 无菌的环境无菌的
13、环境 培养基培养基需要加入血清需要加入血清 温度与动物体温相似温度与动物体温相似 需要需要O O2 2，不需要，不需要COCO2 2 CO CO2 2能调节培养能调节培养液液PHPHA A、 B B、 C C、 D D、 D D5 5、动物细胞培养的特点、动物细胞培养的特点 （ ）细胞贴壁细胞贴壁 有丝分裂有丝分裂 细胞细胞分化分化 接触抑制接触抑制 减数分裂减数分裂 原代培养一般传原代培养一般传1 11010代代A A、 B B、C C、 D D、A A 7. 7.动物细胞培养与植物细胞培养的重要动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于区别在于-（ ） A. A.培养基不同；培养基不同； B
14、. B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；行； C. C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；不能； D. D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。只能培养成植株。A8.8.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是( ( ) ) A. A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中渡过程中 B. B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、 无机盐、生长素和动物血清等无机
15、盐、生长素和动物血清等 C. C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌蛋白泌蛋白 D. D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理酶处理D9.9.下列哪项不属于体细胞核移植技术的下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用（应用（ ） A. A.加速家畜遗传改良进程，促进优良加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育畜群繁育 B. B.保护濒危物种保护濒危物种 C. C.获得组织器官异体移植的供体获得组织器官异体移植的供体 D. D.大量产生紫杉醇大量产生紫杉醇D1010、下图是动物细胞培养的基本过程示、下图是动物细胞培
16、养的基本过程示意图。请据此回答：意图。请据此回答：1 1）容器）容器A A中放置的是动物器官或组织。中放置的是动物器官或组织。它一般取自它一般取自_。（2 2）容器）容器A A中的动物器官或组织首先中的动物器官或组织首先要进行的处理是要进行的处理是 ，然后用，然后用 酶处理，这是为了酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是使细胞分散开来，这样做的目的是 。动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养使细胞与培养液充分接触，便于培养（3 3）培养首先在）培养首先在B B瓶中进行，瓶中的瓶中进行，瓶中的培养基成分有培养基成分有 _等。等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第胞衰老死亡，这是培养到第 代，代，到这时的培养称为到这时的培养称为_ _ 。（4 4）为了把）为了把B B瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到C C瓶瓶中，用中，用 处理，然后配置成处理，然后配置成 ，再分装。，再分装。 动物血清动物血清10原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶细胞悬液细胞悬液
