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1、血吸虫病动物模型一、选用动物：小白鼠及家兔。一、选用动物：小白鼠及家兔。二、阳性钉螺：由浙江疾控中心提供。二、阳性钉螺：由浙江疾控中心提供。三、逸出尾蚴条件：水温三、逸出尾蚴条件：水温25-30度度,2-3小时。小时。四、感染度：四、感染度：30条尾蚴条尾蚴/鼠鼠,500条尾蚴条尾蚴/兔。兔。血吸虫病动物模型操作步骤：操作步骤：一、固定动物。一、固定动物。二、剪毛。二、剪毛。三、计数尾蚴。三、计数尾蚴。四、感染动物四、感染动物(15-20分钟分钟)。五、除去盖玻片，干棉球擦干。五、除去盖玻片，干棉球擦干。血吸虫病动物模型注意事项：注意事项：一、固定动物时小心不要被咬伤。一、固定动物时小心不要被
2、咬伤。二、剪毛要干净又不能剪掉皮肤。二、剪毛要干净又不能剪掉皮肤。三、尾蚴计数要准确。三、尾蚴计数要准确。四、感染时要注意观察，保持湿润、不掉四、感染时要注意观察，保持湿润、不掉玻片。玻片。五、五、注意自我保护注意自我保护。解剖、观察血吸虫动物模型一、目的、要求：一、目的、要求： 1 .熟悉解剖小鼠方法。熟悉解剖小鼠方法。 2 .挑取血吸虫成虫挑取血吸虫成虫(门静脉门静脉) 3 .观察病肝病理变化并压片镜检。观察病肝病理变化并压片镜检。 4 .取病肝准备做病理切片。取病肝准备做病理切片。解剖、观察血吸虫动物模型解剖、观察血吸虫动物模型二、方法：二、方法：1.眼球取血：眼球取血：2.处死小鼠：处
3、死小鼠：3.剖腹、固定：剖腹、固定：4.挑取成虫并观察：挑取成虫并观察：5.观察肝脏并压片：观察肝脏并压片：6.取肝脏并固定备用：取肝脏并固定备用：免疫学诊断技术免疫学诊断技术酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验 ( ELISA )：(一一) 常规常规ELISA ：1. 基本原理基本原理: 间接法间接法, 酶标记技术。酶标记技术。2. 方法评价：是应用最普遍、适用范围最方法评价：是应用最普遍、适用范围最广的一种方泛。广的一种方泛。3. 适用范围：用于很多寄生虫病的诊断。适用范围：用于很多寄生虫病的诊断。血吸虫抗体ELISA检测操作程序：操作程序：一、加样反应：一、加样反应： 用样本稀释液（用样本稀
4、释液（5号液）将待检血清样本按号液）将待检血清样本按1:50稀释，然后每孔加稀释，然后每孔加已稀释血清样本已稀释血清样本100 l (对照品不用稀释直接加）对照品不用稀释直接加）,37oC避光反应避光反应30分钟分钟后，甩去孔内液体，每孔注满洗涤液洗涤后，甩去孔内液体，每孔注满洗涤液洗涤3次，每次置次，每次置60秒后甩去拍干。秒后甩去拍干。二、加酶反应：二、加酶反应： 每孔加酶结合物（每孔加酶结合物（1号液）号液）1滴，滴，37oC避光反应避光反应30分钟后，甩去孔分钟后，甩去孔内液体。每孔注满洗涤液洗涤内液体。每孔注满洗涤液洗涤3次，每次置次，每次置60秒后甩去拍干。秒后甩去拍干。三、显色反
5、应：三、显色反应： 每孔加底物（每孔加底物（3号液）和显色剂（号液）和显色剂（4号液）各号液）各1滴，混匀，滴，混匀， 37oC避光反避光反应应10分钟。加中止液（分钟。加中止液（6号液）号液） 1滴，混匀，终止反应。滴，混匀，终止反应。血吸虫抗体ELISA检测结果判断：结果判断：1、肉眼观察： 在白色背景下观察各孔显色反应。黄色表示阳性反应。2、仪器判断： 以空白对照调零用酶标仪于450nm波长读取OD值。待检孔OD值大于阴性对照2.1倍者为阳性。免疫学诊断技术免疫学诊断技术间接血凝试验间接血凝试验 (IHA )：1.基本原理基本原理: 用红细胞作载体，吸附抗原。用红细胞作载体，吸附抗原。2
6、.实验步骤：实验步骤：红细胞致敏红细胞致敏 试验试验 结果判断结果判断3.方法评价：方法评价：方法简单、敏感性高、特异性方法简单、敏感性高、特异性强。强。4.适用范围：适用范围：用于某些寄生虫病的辅助诊断用于某些寄生虫病的辅助诊断和流行病学调查。和流行病学调查。血吸虫抗体IHA检测1.配置致敏红细胞悬液配置致敏红细胞悬液：致敏红细胞一支加致敏红细胞稀释液1ml,充分混匀。2. 加样加样：血凝板的第一孔加标本稀释液100l,第2-4孔加标本稀释液25l.于第一孔加25l待测血清，充分混匀后吸出25l于第二孔，依次倍比稀释至第四孔，第四孔混匀后弃去多余的25l、第一孔弃去75l.3. 加至敏红细胞加至敏红细胞：每孔加25l致敏红细胞悬液，震摇1-2分钟后置370C,30分钟后观察结果。4. 每次试验均应设阴性、阳性对照。每次试验均应设阴性、阳性对照。血吸虫抗体IHA检测结果判定：1. “”: 红细胞全部下沉在孔底，形成肉眼可见的紧密、边缘光滑的小圆点。2. “+”: 多数红细胞下沉在孔底形成圆点，周围可见少量凝集的红细胞。3. “+”:孔底中心可见少量红细胞下沉的小圆点，多数凝集的红细胞在孔底周围形成小薄层。4. “+”: 红细胞形成薄层凝集，布满整个孔底。实验报告一、血吸虫病动物模型的建立：材料、方法、过程及意义。二、血吸虫病免疫诊断（ ELISA）的机理、方法、结果判断。
