药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立

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1、药品质量研究与质量标准药品质量研究与质量标准药品质量研究与质量标准药品质量研究与质量标准- - - -有关物质检查常见问题讨论有关物质检查常见问题讨论有关物质检查常见问题讨论有关物质检查常见问题讨论 药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立第一次飞跃第一次飞跃第二次飞跃第二次飞跃杂质质控理念的变迁杂质质控理念的变迁纯度控制度控制杂质控制控制杂质谱控制控制药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质（杂质（ImpurityImpurity）的定义与分类）的定义与分类任何影响药品纯度的物质均称为杂质。任何影响药品纯度的物质均称为杂质。 - -中国药典中国药典20102010年版

2、附录对药品杂质的定义年版附录对药品杂质的定义原料药中：原料药中：化学结构化学结构和该药品不一样的任何物质和该药品不一样的任何物质制剂中：制剂中： 除除原料药和辅料原料药和辅料外的任何其他成分外的任何其他成分 - - ICHICH对杂质的定义对杂质的定义 药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质按活性分类杂质按活性分类杂质活性活性杂质无活性无活性杂质（无毒无效）（无毒无效）毒性毒性杂质（有毒无效）（有毒无效） （毒大效低）（毒大效低）有效有效杂质（有效无毒）（有效无毒）（高效低毒）（高效低毒）药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质按来源分类杂质按来源分类杂质有关物有

3、关物质 （relatedsubstancesrelatedsubstances）无关无关杂质外源物外源物质药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质来源1 有关物质有关物质起始原料起始原料中间体、副产物中间体、副产物 异构体和聚合物异构体和聚合物 多晶型多晶型降解产物降解产物 异构体和聚合物异构体和聚合物 多晶型多晶型微生物微生物污染异物污染异物非法添加非法添加 物物3 外源物质外源物质2无关杂质无关杂质试剂试剂 配位体、无机配位体、无机 盐、溶剂盐、溶剂重金属催化剂重金属催化剂 过滤介质、活过滤介质、活 性炭性炭药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立已鉴定杂质已鉴定杂

4、质Identified Impurity特定杂质特定杂质Specified Impurity潜在杂质潜在杂质PotentialImpurity杂质谱杂质谱Impurity Profile已确证了已确证了结构特征结构特征的杂质的杂质在质量标准中在质量标准中规定检查并有规定检查并有自己限度标准自己限度标准的杂质。已鉴的杂质。已鉴定或未鉴定定或未鉴定理论推测在理论推测在生产或贮藏生产或贮藏过程中可能过程中可能产生的杂质产生的杂质实际产品中实际产品中不一定存在不一定存在存在于药存在于药品中的所品中的所有杂质组有杂质组成或模式成或模式药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立新杂质的研究新杂质的

5、研究 药物杂质的可能来源药物杂质的可能来源药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立1.原料：原料：红霉素红霉素 A、红霉素、红霉素 B、红霉素、红霉素 C、红霉素、红霉素D、红霉素、红霉素 E、红霉素、红霉素 F、阿奇霉素阿奇霉素B、阿奇霉素、阿奇霉素C、阿奇霉素、阿奇霉素E、阿奇霉素、阿奇霉素F2.中间体：中间体：红霉素红霉素A肟（肟（Z）、）、6，9-亚胺醚、氮红霉素亚胺醚、氮红霉素A、红霉素、红霉素A肟（肟（E）、红）、红霉素霉素 C肟（肟（E）、）、9，11-亚胺醚、红霉素亚胺醚、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素亚胺醚、红霉素A内酰胺内酰胺 3.副产物：副产物：红霉素红霉素-

6、N-氧化物、氧化物、N-去甲基红霉素去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素氨基阿奇霉素A、N-甲酰基甲酰基-N去甲基阿奇霉素去甲基阿奇霉素A、N-去甲基去甲基-N-苯磺酰基阿奇苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素霉素、阿奇霉素N-氧化物、氧化物、3-去（二甲氨基）去（二甲氨基）- 3,4-去氢阿奇霉素、去氢阿奇霉素、 O-甲苯甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、硼酸酯、 N，N-去去二甲基二甲基N-甲酰基阿奇霉素甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基去二甲基氨基-酮酮基阿奇霉

7、素基阿奇霉素A、阿奇霉素、阿奇霉素11，12-硼酸酯硼酸酯4.降解产物：降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水脱水-6，9-半缩酮、红霉素半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮螺缩酮阿奇霉素中可能存在的杂质：阿奇霉素中可能存在的杂质：37种种药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立附录附录 F 药品杂质分析指导原则药品杂质分析指导原则附录附录 A 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证指导原则指导原则20102010年版年版药典中的杂质分析药典中的杂质分析药品质量研究与质量标准有关物质检

8、查常见问题讨论余立Q3A新原料药中的杂质新原料药中的杂质Q3B新制剂中的杂质新制剂中的杂质ICHICH中的中的杂质分析分析药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立其他参考资料其他参考资料化学药物杂质研究的技术指导原则化学药物杂质研究的技术指导原则 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立有关物质检查的常用方法有关物质检查的常用方法适用多种适用多种杂质杂质（定性定量）（定性定量）主要用于没主要用于没有紫外吸收有紫外吸收的杂质的杂质（定性半定量）（定性半定量）适用不同的适用不同的特定杂质特定杂质（

9、定性定量）（定性定量）TLCHPLC其他方法其他方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立有关物质检查的其他方法有关物质检查的其他方法容量滴定容量滴定原子吸收原子吸收重量法重量法比色比浊比色比浊物理常数物理常数紫外紫外其他方法其他方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立物理常数测定法物理常数测定法旋光度旋光度-检查具有光学活性的杂质检查具有光学活性的杂质紫外分光光度法紫外分光光度法 杂质吸光度杂质吸光度-在特定波长具有紫外吸收的杂质在特定波长具有紫外吸收的杂质容量滴定法容量滴定法游离脂肪酸、过氧化物、还原糖游离脂肪酸、过氧化物、还原糖重量法重量法 酸中不溶物、水中可溶

10、物酸中不溶物、水中可溶物 比色比浊法比色比浊法 游离淀粉、碘化物、铁盐等；氯化物、硫酸盐游离淀粉、碘化物、铁盐等；氯化物、硫酸盐 有关物质检查的其他方法有关物质检查的其他方法有关物质检查的其他方法有关物质检查的其他方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：检查金属杂质检查金属杂质毛细管电泳法：毛细管电泳法：抑肽酶中检查去丙氨酸抑肽酶中检查去丙氨酸-去甘氨酸去甘氨酸-抑抑肽酶和去丙氨酸肽酶和去丙氨酸-抑肽酶两个特定杂质抑肽酶两个特定杂质气相色谱法：气相色谱法：检查挥发性杂质检查挥发性杂质热分析法：热分析法：检查不同晶型的杂质检查不同晶型的杂质

11、拉曼光谱法、红外光谱法、拉曼光谱法、红外光谱法、X-射线粉末衍射射线粉末衍射生物检定法、酶联免疫试剂盒（抗生素残留量）生物检定法、酶联免疫试剂盒（抗生素残留量） 有关物质检查的其他方法有关物质检查的其他方法有关物质检查的其他方法有关物质检查的其他方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立HPLCHPLC方法的建立与验证方法的建立与验证高高效效液液相相色色谱谱法法系系用用高高压压输输液液泵泵将将规规定定的的流流动动相相泵泵入入装装有有填填充充剂剂的的色色谱谱柱柱进进行行分分离离测测定定的的色色谱谱方方法法。注注入入的的供供试试品品由由流流动动相相带带入入柱柱内内，各各成成分分在在柱柱

12、内内被被分分离离并并依依次次进进入入检检测测器器，由由记记录录仪仪、积积分分仪仪或或数数据据处处理理系系统统记录色谱信号。记录色谱信号。药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立检测器的种类检测器的种类药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立HPLCHPLC方法的建立方法的建立溶液浓度溶液浓度 流动相流动相 检测波长检测波长 色谱柱色谱柱 系统适应性系统适应性试验方法试验方法进样体积进样体积 柱温柱温 溶剂溶剂 药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立新方法新方法分析方法的有效性（氨分析方法的有效性（氨苄西林西林钠/舒巴坦舒巴坦钠）原方法原方法中国抗生素杂志，中国抗

13、生素杂志，中国抗生素杂志，中国抗生素杂志，中国抗生素杂志，中国抗生素杂志，200920092009，343434：734734734在在对对已有方法比已有方法比较较的基的基础础上确定最佳分析方法上确定最佳分析方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立典型的典型的HPLCHPLC方法测定有关物质方法测定有关物质 有关物质有关物质 照高效液相色谱法（附录照高效液相色谱法（附录 D D）测定。）测定。 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂填充剂；以磷酸盐缓冲液（；以磷酸盐缓冲液（pH6.3pH6.3）取磷酸二氢钾）取磷酸

14、二氢钾9.07g9.07g，加水加水1000ml1000ml使溶解，用无水磷酸氢二钠溶液使溶解，用无水磷酸氢二钠溶液（9.46g1000ml9.46g1000ml）调节）调节pHpH值至值至6.36.3，临用前稀释，临用前稀释1010倍倍- -乙乙腈腈- -甲醇（甲醇（3636：1111：3 3）为）为流动相流动相，流速流速每分钟每分钟1.5ml1.5ml；检测检测波长波长为为200nm200nm；柱温柱温4040。分别取前列地尔对照品溶液、前。分别取前列地尔对照品溶液、前列腺素列腺素A1A1和前列腺素和前列腺素B1B1杂质对照品溶液各适量，按（杂质对照品溶液各适量，按（1 1：1 1：1 1

15、）比例混合，摇匀，作为）比例混合，摇匀，作为系统适用性试验系统适用性试验用溶液。取该溶用溶液。取该溶液液25l25l注入液相色谱仪，调节色谱系统，使前列地尔峰的注入液相色谱仪，调节色谱系统，使前列地尔峰的保留时间保留时间约为约为11111313分钟，前列腺素分钟，前列腺素A1A1峰与前列腺素峰与前列腺素B1B1峰的峰的分离度分离度应符合要求；同时调节检测应符合要求；同时调节检测灵敏度灵敏度，使前列腺素，使前列腺素B1B1峰峰的高度约为满量程的的高度约为满量程的10%10%。药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立 测测定定法法 精精密密称称取取本本品品适适量量，用用乙乙腈腈- -水水

16、（9 9：1 1）溶溶解解并并定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含1mg1mg的的溶溶液液作作为为供供试试品品溶溶液液；精精密密量量取取含含量量测测定定项项下下的的对对照照品品溶溶液液适适量量，用用乙乙腈腈- -水水（9 9：1 1）稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含10g10g的的溶溶液液，作作为为前前列列地地尔尔对对照照品品溶溶液液；另另精精密密称称取取前前列列腺腺素素A1A1和和前前列列腺腺素素B1B1杂杂质质对对照照品品各各适适量量，用用乙乙腈腈- -水水（9 9：1 1）分分别别溶溶解解并并定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含15g15g和和

17、5g5g的的溶溶液液作作为为前前列列腺腺素素A1A1和和前前列列腺腺素素B1B1的的杂杂质质对对照照品品溶溶液液。精精密密量量取取供供试试品品溶溶液液、前前列列腺腺素素A1A1、前前列列腺腺素素B1B1杂杂质质对对照照品品溶溶液液和和前前列列地地尔尔对对照照品品溶溶液液各各25l,25l,分分别别注注入入液液相相色色谱谱仪仪，记记录录供供试试品品溶溶液液的的色色谱谱图图至至主主成成分分峰峰保保留留时时间间的的4 4倍倍。前前列列腺腺素素A1A1和和前前列列腺腺素素B1B1均均按按外外标标法法计计算算，分分别别不不得得过过1.5%1.5%和和0.5%0.5%；其其他他杂杂质质按按主主成成分分自自

18、身身对对照照法法计计算算，单单个个最最大大杂杂质质的的峰峰面面积积不不得得过过前前列列地地尔尔对对照照品品溶溶液液的的主主峰峰面面积积（1.0%1.0%）；杂质总量不得过）；杂质总量不得过2.0%2.0%（小于小于0.01%0.01%的色谱峰不计的色谱峰不计）。药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立HPLCHPLC方法的建立与验证方法的建立与验证溶剂的选择：溶剂的选择：溶液稳定性考察溶液稳定性考察-溶解度高且溶解度高且稳定定8小小时不需提示不需提示4小小时提示提示临用用现配或立即配或立即进样2小小时改改换溶溶剂-无背景干无背景干扰或小或小溶溶剂峰、倒峰峰、倒峰-低毒价廉低毒价廉药品

19、质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立检测波长的选择检测波长的选择药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立检测波长的选择检测波长的选择 主波长、低波长、杂质波长、权衡波长主波长、低波长、杂质波长、权衡波长药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立检出杂质的数与量检出杂质的数与量干扰因素干扰因素操作的便捷性操作的便捷性 检测波长的选择检测波长的选择药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立色谱柱的选择色谱柱的选择反相色谱系统使用非极性填充剂反相色谱系统使用非极性填充剂C18、 C8；氰基柱、氨基柱；氰基柱、氨基柱正相色谱系统使用极性填充剂正相色谱系统使用极性填充

20、剂 硅胶柱硅胶柱 离子交换填充剂；离子交换填充剂； 凝胶或高分子多孔微球；凝胶或高分子多孔微球； 手性键合填充剂手性键合填充剂药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立色谱柱的选择色谱柱的选择-常见问题常见问题色谱柱与流动相性质不匹配色谱柱与流动相性质不匹配100%的水或的水或Buffer最好最好选水相柱（水相柱（AQ柱柱）普通普通C18柱柱流动相中用到离子对试剂，用后应好好冲流动相中用到离子对试剂，用后应好好冲最好专用！最好专用！因色谱柱填料性质已与原来有所不同因色谱柱填料性质已与原来有所不同在在该该柱柱上上所所摸摸索索的的色色谱谱条条件件，可可能能在在其其它它同同类类柱柱子子上上得

21、得不到重现！不到重现！ 药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立流动相的选择流动相的选择-分离能力分离能力强（各种有关物（各种有关物质基本分离）基本分离）-温和温和稳定定（pH、比例适中、比例适中对柱柱伤害小，性害小，性质稳定）定）-配制配制简单、易得价廉、易得价廉-无毒无毒环保保药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立头孢曲曲松松钠的的流流动相相原原来来0.8%四四庚庚基基溴溴化化铵乙乙腈溶溶液液-水水-磷磷酸酸盐缓冲冲液液-枸枸橼酸酸缓冲冲液液（500：440：55：5），由由4种种成成分分组成成，需配制需配制3种种缓冲液；冲液；后后改改为0.02mol/L正正辛辛胺胺

22、溶溶液液-乙乙腈（73：27），用用磷磷酸酸调节pH值为6.5，仅由由2种种成成分分组成成流动相的选择流动相的选择药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立分离能力的考察分离能力的考察-粗粗产品品溶液或配制各种溶液或配制各种杂质混合物混合物（起始原料，中（起始原料，中间体，副体，副产物）物）-强制降解制降解（酸、碱、光、（酸、碱、光、热、氧化）、氧化）药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立二、二、HPLCHPLC方法的建立与验证方法的建立与验证强制降解的考察方法误区：强制降解的考察方法误区：（酸、碱、光、（酸、碱、光、热、氧化）、氧化）-破坏破坏条件条件过于于强烈烈（控制在

23、主成分降低（控制在主成分降低10%20%为宜）宜）-中和方法中和方法-目的不明确，目的不明确，结论不正确不正确分离能力的考察分离能力的考察药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立二、二、HPLCHPLC方法的建立与验证方法的建立与验证-不不规定柱温定柱温（不需加温且（不需加温且对温度不敏感）温度不敏感）-25或或30（不需加温但（不需加温但对温度敏感，需保持恒温）温度敏感，需保持恒温）-3570（需加温且（需加温且对温度敏感，需保持恒温）温度敏感，需保持恒温）作为耐用性试验之一作为耐用性试验之一且可与溶液稳定性同时进行且可与溶液稳定性同时进行柱温的确定柱温的确定药品质量研究与质量标准

24、有关物质检查常见问题讨论余立溶液的配制溶液的配制需要注意的几点：需要注意的几点：-需否避光？需否避光？-可否超声、加可否超声、加热、多久？、多久？过滤？滤材？材？-浓度与度与线性范性范围和和检测限是否匹配？限是否匹配？弃弃20ml20ml初滤液？用初滤液？用xxxx膜过滤？膜过滤？用聚四氟酰胺小瓶？用聚四氟酰胺小瓶？机械振摇机械振摇xxxx分钟等等？分钟等等？药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立二、二、HPLCHPLC方法的建立与验证方法的建立与验证- - 常用常用10l10l100l100l- -过低误差大，影响重现性过低误差大，影响重现性- -太多过载，影响峰形与分离太多过载

25、，影响峰形与分离 - - 配合溶液浓度保证检测灵敏度配合溶液浓度保证检测灵敏度进样体积的确定进样体积的确定药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立色谱系统的适用性试验色谱系统的适用性试验-指指标的的应用用-分离度的保分离度的保证-灵敏度的灵敏度的测试-精密度的要求精密度的要求药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立Company Logo系统适用性试验要求系统适用性试验要求重重复复性性理理论板板数数分离度分离度保留保留时间拖尾因子拖尾因子常用指标常用指标药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立分离度指标性物质的选择分离度指标性物质的选择- - 难分离物质对难分离物

26、质对- - 最常出现的杂质最常出现的杂质- - 单独规定限度的特定杂质单独规定限度的特定杂质 - - 结构性质相近且结构性质相近且 不干扰测定的物质不干扰测定的物质药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立二、二、HPLCHPLC方法的建立与验证方法的建立与验证- -准确定量分析时通常两峰间准确定量分析时通常两峰间R1.5R1.5- -峰高峰谷比峰高峰谷比分离度的要求分离度的要求药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立拖尾因子（拖尾因子（T T）的要求与应用）的要求与应用为保保证分离效果和分离效果和测量精度用于量精度用于评价价色色谱峰峰对称性称性的指的指标T=W0.05h/2

27、d1式中式中W0.05h为5峰高峰高处的峰的峰宽；d1为5峰高出峰峰高出峰顶点至峰前沿点至峰前沿之之间的距离的距离除另有除另有规定外，峰高法定量定外，峰高法定量时T应在在0.951.05之之间。峰面峰面积法法测定定时，若拖尾，若拖尾严重，将重，将影响峰面影响峰面积的准确的准确测量。量。峰前峰后有峰前峰后有紧邻杂质峰峰时，对拖尾因子作出拖尾因子作出规定。定。药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立重复性（重复性（RSD）的要求）的要求用于用于评价价连续进样后，色后，色谱系系统响响应值的重复性能。的重复性能。采用采用外外标法法时，通常取各品种，通常取各品种项下的下的对照品溶液，照品溶液，

28、连续进样5次，除另有次，除另有规定外，其峰面定外，其峰面积测量量值的相的相对标准偏差准偏差应不大于不大于2.0%；采用；采用内内标法法时，通常配制相，通常配制相当于当于80%、100%和和120%的的对照品溶液，加入照品溶液，加入规定量的定量的内内标溶液，配成溶液，配成3种不同种不同浓度的溶液，分度的溶液，分别至少至少进样2次，次，计算平均校正因子。其相算平均校正因子。其相对标准偏差准偏差应不大于不大于2.0%在质量标准中如果没有明确规定，就是在质量标准中如果没有明确规定，就是2.0%2.0%药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立Company Logo特定杂质峰定位的方法杂质对照

29、品照品混合混合对照品照品临时降解降解相相对保留保留时间+参参考考图峰定位峰定位药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立方法的验证方法的验证验证验证 定量定量 限度限度-准确度准确度+-精密度精密度+-重复性重复性+-中中间精密度精密度（+）-专属性属性+-检测限限（+）+-定量限定量限+-线性范性范围+-耐用性耐用性+药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立Company Logo杂质含量的计算杂质含量的计算对照品照品外外标法法主成分自主成分自身身对照法照法加校正因加校正因子的自身子的自身对照法照法面面积归一化法一化法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立对照品

30、外标法优点优点缺点缺点50%定位定位方便方便定量定量准确准确要求要求严严费用费用高高70%有条件时首选的方法有条件时首选的方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立主成分自身对照法优点优点缺点缺点50%不需不需定位定位费用费用低低定量定量粗粗70%没条件时首选的方法没条件时首选的方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法优点优点缺点缺点50%定位定位方便方便定量较定量较准确准确需测定需测定因子因子定位难定位难70%杂质与主成分响应因子差异大（超过杂质与主成分响应因子差异大（超过0.91.1 ）且对照品昂贵时选用的方

31、法且对照品昂贵时选用的方法药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立面积归一化法优点优点缺点缺点50%不需不需定位定位费用费用低低定量粗定量粗70%不提倡使用的方法不提倡使用的方法影响多影响多 重复性重复性差差药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立Company Logo特定特定杂质非特定非特定杂质有效杂质宽管有效杂质宽管毒性杂质严控毒性杂质严控杂质限度的规定杂质限度的规定单个个不得不得过0.10%根据生根据生产现状状药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质限度的规定杂质限度的规定毒性杂质严控：毒性杂质严控：-遵守公遵守公认标准准-不超越前期不超越前期标准准-

32、以相关安全以相关安全实验数据数据为科学依据科学依据-以保证临床安全为根本目的以保证临床安全为根本目的药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质限度的规定杂质限度的规定有效杂质宽管：有效杂质宽管：-不能不管不能不管（三磷酸腺苷二钠、头孢拉定）（三磷酸腺苷二钠、头孢拉定）-不超越前期不超越前期标准准-以投入以投入产出比等利弊平衡出比等利弊平衡为科学依据科学依据药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质限度的规定杂质限度的规定非特定杂质：非特定杂质：-不超越前期不超越前期标准准-一般不得一般不得过0.10%（2010年版）年版）-以安全以安全实验和投入和投入产出比等利弊平衡出

33、比等利弊平衡为科科学依据学依据药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立辅料影响的排除辅料影响的排除- -有关物质检查有关物质检查前沿色谱峰，易排除前沿色谱峰，易排除少峰，可定位，能排除少峰，可定位，能排除多峰，难定位，不能排除多峰，难定位，不能排除 辅料对测定的干扰辅料对测定的干扰药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立辅料对测定的干扰辅料对测定的干扰1 1、避免使用、避免使用 （辅料或方法）（辅料或方法） 2 2、不排除可以（默认或校正）、不排除可以（默认或校正）3 3、排除辅料干扰方法要明确、易重现、具、排除辅料干扰方法要明确、易重现、具 可操作性、可操作性、配混合液配

34、混合液4 4、保证特定杂质（最具代表性降解产物）、保证特定杂质（最具代表性降解产物） 检出效果检出效果- -不得已的最后一招不得已的最后一招 药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立比较比较研究的标尺问题研究的标尺问题 - -购买的对照品购买的对照品/ /标准品标准品对照品对照品对照品对照品/ /标准品标准品标准品标准品 权威性权威性 真实性真实性 准确性准确性- -发票、标签、批号、分析报告单、盐基发票、标签、批号、分析报告单、盐基/ /碱基、水分碱基、水分药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立详细精制方法、质量检验报告详细精制方法、质量检验报告标定方法与结果标定方法与

35、结果 详细提取精制方法、质量检验详细提取精制方法、质量检验 报告、标定方法与结果报告、标定方法与结果详细合成精制方法、质量检验报详细合成精制方法、质量检验报告、标定方法与结果告、标定方法与结果 纯化精制纯化精制纯化精制纯化精制提取精制提取精制提取精制提取精制 合成精制合成精制合成精制合成精制比较比较研究的标尺问题研究的标尺问题-非购买的对照品非购买的对照品/标准品标准品药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立建立标准时要考虑的问题建立标准时要考虑的问题Growth200820072006200520042003 200220012000 数据标定：用正确的方法由至少数据标定：用正确的

36、方法由至少3位实验者，不同仪器进行不少位实验者，不同仪器进行不少于于10个数据的测定个数据的测定待标品质量考察：证明不待标品质量考察：证明不仅是对的而且还是好的仅是对的而且还是好的 对数据进行数理统计处理对数据进行数理统计处理比较比较研究的标尺问题研究的标尺问题 - -对照品对照品/ /标准品的标定标准品的标定药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立标定者测定结果（%）n均值（%）RSD（%）1.98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17%599.11%0.17%2.98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98%599.04%0.12%3

37、.99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18%599.06%0.09%经Corchan检验，三位，三位标定者的定者的方差没有差异方差没有差异，均来自，均来自同一正同一正态分布分布。用。用Dixon法法检验15组数据中的最大数据中的最大值99.25%，最小，最小值98.82%均非均非离群离群值。T1-0.05S置信区置信区间=X=99.080.068n1/2标定定结果的置信区果的置信区间为99.1599.01%，因此，本批，因此，本批对照照品的色品的色谱纯度度总均均值为99.08%。药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立对比研究对比检验研究项目原执行标准考察方

38、法原法定标准比较比较研究的范围与方法研究的范围与方法 - -考察项目与方法的选择原则考察项目与方法的选择原则药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立物料不同物料不同原料、原料、辅料料分析分析对象象工工艺不同不同路路线、中、中间体体设备不同不同质材、参数精度材、参数精度不全面不全面没的学（复方无有关物没的学（复方无有关物质）已有已有标准准不完善不完善不不应学（地学（地标升国升国标标准）准）不适用不适用不能学（厂送不能学（厂送设备）为什么呢？为什么呢？药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立产品生产个性应关注标准隐性变化同类最新动态如何在已有标准基础上变化拓展如何在已有标准基础

39、上变化拓展药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立项目目原研厂原研厂标准准拟定定标准准EP7.0EP7.0USP34USP34JP15JP15含量限度按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg效价不得少于150I.U.（非口服制剂），每1mg效价不得少于120I.U.（口服制剂按干燥品计算，每1mg中效价不得少于180USP 肝素单位每1mg的效价不得少于110单位。性状白色或类白色的粉末，有引湿性白色或类白色的粉末，极具引湿性白色或几乎白色的粉末，有适度的引湿性白色到灰棕色的粉末或颗粒溶解度在水中易溶在水中易溶

40、，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度不小于+35(40mg/ml,水)应不小于+50(40mg/ml,水)鉴别1、电泳法2、钠盐1、电泳法2、钠盐A、具有抗凝血作用B、比旋度C、电泳法：D. 钠盐A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、钠盐酸碱度5.07.5（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）5.58.0（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）6.08.0药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立杂质研究技术杂质研究技术柱串联技术柱串联技术适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，适用于溶解度无

41、明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，通过将一根通过将一根SCXSCX（阳离子交换）短柱与一根（阳离子交换）短柱与一根MG MG C C1818长柱串联长柱串联就可以简单达到将其分离的目的。就可以简单达到将其分离的目的。原理：原理：有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于SCXSCX短柱的离子交换短柱的离子交换作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入质）与中性物质则会

42、毫无阻碍的通过短柱进入C18C18长柱中，从长柱中，从而成功分离；然后由于而成功分离；然后由于MGC18MGC18长柱中疏水性基团间的相互作长柱中疏水性基团间的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与短柱与C C1818长柱前接一根长柱前接一根NHNH2 2短柱（它可与阴离子发生交换作用）短柱（它可与阴离子发生交换作用），进行

43、三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质，进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的分离效果。达到更好的分离效果。 药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立毒性快速评价平台斑斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。优点：点：杂质用量少用量少无需知道无需知道杂质结构构实验周期短周期短（34天一个周期）天一个周期）药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立药物耳毒性检测药物耳毒性检测利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的利用一种特殊染料对斑马鱼

44、幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。存活状态，来判断检测物的耳毒性。下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后药后1神经丘消失。神经丘消失。给药后给药后系统对照组系统对照组（正常幼体）（正常幼体）药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立药典采用现代分析技术举例药典采用现代分析技术举例由于某些药物组成的复杂性，特别是一些生物大分子药由于某些药物组成的复杂性，特别是一些生物大分子药物，使用传统的分析方法已经不能满足当前的质控需要，物，使用传统的分

45、析方法已经不能满足当前的质控需要，20102010年版药典逐渐改用现代分析技术。年版药典逐渐改用现代分析技术。 首次运用首次运用毛细管电泳法毛细管电泳法 注射用抑肽酶：检查两个特定杂质注射用抑肽酶：检查两个特定杂质 注射用盐酸头孢吡肟：注射用盐酸头孢吡肟： 方法方法1-1-毛细管电泳法毛细管电泳法 N- N-甲基吡咯烷甲基吡咯烷 方法方法2-HPLC2-HPLC法（羧基柱，电导检测）法（羧基柱，电导检测）药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立毛细管电泳法检查特定杂质毛细管电泳法检查特定杂质抑肽酶由上海药检所起草，参考抑肽酶由上海药检所起草，参考USPUSP增订增订去丙氨酸去丙氨酸-

46、 -去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶酶和去丙氨酸抑肽酶检查项检查项色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：3030，电极液：磷，电极液：磷酸二氢钾溶液；分离压：酸二氢钾溶液；分离压：12KV12KV；波长：；波长：214nm214nm结果：去丙氨酸抑肽酶结果：去丙氨酸抑肽酶RTRT为为0.990.99，去丙氨酸，去丙氨酸- -去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽酶抑肽酶RTRT为为0.980.98，两相关物间分离度，两相关物间分离度1.401.40，去丙氨酸，去丙氨酸- -抑肽酶与抑肽酶间分抑肽酶与抑肽酶间分离度离度1.241.24、抑肽酶拖尾因子

47、、抑肽酶拖尾因子1.81.8药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立抑抑肽酶SDS-PAGESDS-PAGE凝胶凝胶电泳泳图本品系自牛胰或肺中提取、纯化制得的肽酶抑制剂。本品系自牛胰或肺中提取、纯化制得的肽酶抑制剂。采用采用SDS-PAGESDS-PAGE凝胶电泳的方法抑肽酶的有关物质，结凝胶电泳的方法抑肽酶的有关物质，结果如图所示，都只有一个条带。可能是抑肽酶和有关果如图所示，都只有一个条带。可能是抑肽酶和有关物质的分子量相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离物质的分子量相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立药典采用现代分析技术举例药典采用

48、现代分析技术举例首次运用首次运用肽图分析技术肽图分析技术： 根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶，一般为肽链内点，使用专一性较强的蛋白水解酶，一般为肽链内切酶，作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，切酶，作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，再通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，再通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，用此法进行鉴别，专属性强，可鉴别仅相差一个氨用此法进行鉴别，专属性强，可鉴别仅相差一个氨基酸残基的不同种属来源的样品。基酸残基的不同种属来源的样品。 如如胰岛素胰岛素- -采用采用V8

49、V8酶解酶解+HPLC+HPLC法；法； 重组人生长激素重组人生长激素- -采用胰蛋白酶酶解采用胰蛋白酶酶解+HPLC+HPLC法获得肽法获得肽图进行鉴别图进行鉴别等。等。药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立胰岛素肽图胰岛素肽图人胰岛素酶解人胰岛素酶解-HPLC-HPLC肽图肽图猪胰岛素酶解猪胰岛素酶解-HPLC-HPLC肽图肽图药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立如何借鉴进口药注册标准如何借鉴进口药注册标准读懂读懂读懂读懂取长补短取长补短取长补短取长补短更上一层楼更上一层楼更上一层楼更上一层楼学到位学到位学到位学到位药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立 +先进性先进性完成时应该是当时最完成时应该是当时最为严格的同品种标准为严格的同品种标准专属性专属性仅属于某个企业专有仅属于某个企业专有个性化个性化某些项目的适用性及某些项目的适用性及推广性较差推广性较差保密性保密性非公开的，仅在非公开的，仅在CDE，中检所和口岸所等部门中检所和口岸所等部门存档存档进口口药注册注册标准的特点准的特点药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立Thank You!谢谢大家！谢谢大家！药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立药品质量研究与质量标准有关物质检查常见问题讨论余立