细胞化学染色2ppt课件

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1、临床血液学和血液学检验临床血液学和血液学检验第四章第四章造血检验的根本方造血检验的根本方法法华中科技大学同济医学院医学检验系陈万新第二节 细胞化学染色细胞化学或组织化学是在细胞形状学的根底上运用无机化学、有机化学或生物化学等技术研讨细胞在发育、增殖分化过程中的主要化学成分的定位、定量及代谢功能形状的学科，是细胞形状学的重要组成部分。细胞化学染色普通包括固定、显示、复染等步骤。主要用于：显示细胞或组织的酶、蛋白质、糖类、脂类、无机盐如铁等化学成分的含量及分布情况；研讨细胞组织来源及分化程度；为疾病的诊断、鉴别诊断及治疗提供重要的根据。中性粒细胞碱性磷酸酶染色NAP.原理：原理：方方法法一一偶偶氮

2、氮偶偶联联法法：在在PH9.29.8的的碱碱性性溶溶液液中中，细细胞胞中中的的碱碱性性磷磷酸酸酶酶能能将将底底物物磷磷酸酸萘萘酚酚钠钠水水解解，生生成成a-萘萘酚酚和和磷磷酸酸钠钠，再再以以稳稳定定的的重重氮氮盐盐与与萘萘酚酚偶偶联联生生成成不不溶溶性性有有色色偶偶氮氮染染料料沉沉淀，定位于细胞浆中。淀，定位于细胞浆中。试剂：试剂：1.固定剂：19福尔马林乙醇液，即40甲醛溶液福尔马林10ml加无水乙醇90ml混合即得。2.a-磷 酸 萘 酚 钠 溶 液 ： 100mg a-磷 酸 萘 酚 钠 溶 于100ml0.2mol/LpH9.19.7Tris缓冲溶液中，混匀后4保管。3.Tris缓冲溶

3、液0.2mol/LpH9.2：Tris粉三羟甲基氨基甲烷2.43g溶于100ml蒸馏水中，加浓盐酸0.2ml0.167ml。4.任务液配制临用时现配：取a-磷酸萘酚钠溶液1.5ml于试管内37oC水温箱中预热5分钟，加巩固篮BB盐1.5mg，混匀即可。染色步骤：染色步骤：1、枯枯燥燥涂涂片片察察看看片片及及阳阳性性对对照照片片，滴滴加加固固定定剂剂布布满满血血膜膜固固定定5秒秒钟钟，流流水水冲冲洗，待干或滤纸吸干。洗，待干或滤纸吸干。2、滴滴加加作作用用液液室室温温下下或或37oC染染色色1520分钟，流水冲洗，待干。分钟，流水冲洗，待干。3、中中性性红红溶溶液液复复染染3分分钟钟，流流水水冲

4、冲洗洗，干后鏡检。干后鏡检。结果判别：结果判别：阳阳性性反反响响呈呈蓝蓝黑黑色色颗颗粒粒状状，定定位位于于细细胞胞浆中。浆中。计数方法：数方法：按按碱碱性性磷磷酸酸酶活活性性强弱弱，分分为5级(0IV或或0+)。0级0胞胞浆呈原色，无呈原色，无颗粒。粒。级+胞胞浆呈呈浅浅灰灰色色，阳阳性性颗粒粒占占胞胞浆的的25%50%。级+阳性阳性颗粒粒约占胞占胞浆面面积的的50%75%。III级+阳性阳性颗粒占胞粒占胞浆面面积的的75%100%。级+胞胞浆充充溢溢蓝黑黑色色致致密密的的阳阳性性颗粒粒，占胞占胞浆面面积的的l00%，甚至遮盖胞核。，甚至遮盖胞核。每每例例的的血血片片，均均计数数100个个中中

5、性性粒粒细胞胞杆杆状状核核及及分分叶叶核核粒粒细胞胞，求求出出NAP阳阳性性细胞胞的的百百分分比比(阳阳性性率率)，并并按按酶活活性性的的强弱弱不不同同，求求得得阳阳性性指数指数(积分分)。0级 0 胞浆呈原色，无颗粒。 级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝黑色颗粒占胞浆面积的25%50%。 级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝黑色颗粒占胞浆面积的25%50%。级 + 胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的50%75%。 级 + 胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的50%75%。级 + 胞浆充溢棕黑色沉淀，分布均匀，中到大颗粒占胞浆面积的75%100%。 级 + 胞浆充溢棕黑色沉淀，分布均匀

6、，中到大颗粒占胞浆面积的75%100%。 级 + 胞浆充溢深黑色致密的团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中到大颗粒占胞浆面积的l00%。 本卷本卷须知：知：1.重重氮氮盐以以巩巩固固篮BB盐为最最正正确确，其其次次为巩巩固固篮B盐及巩固及巩固篮RR盐。2.也也可可用用新新颖配配制制的的六六偶偶氮氮副副品品红为重重氮氮盐，配配方方为：10mla-磷磷酸酸萘酚酚钠溶溶液液中中加加六六偶偶氮氮副副品品红50l，其其NAP阳阳性性反反响响呈呈红色色颗粒粒状状。六六偶偶氮氮副副品品红：4%副副品品红2N盐酸酸溶溶液液与与4%亚硝酸硝酸钠溶液溶液1 1混合，静置混合，静置1min。3.重重氮氮盐应适适量量，过量量

7、会会导致致染染色色失失败，出出现假阴性；量缺乏，那么阳性反响假阴性；量缺乏，那么阳性反响较弱。弱。4.任任务液配好后液配好后应立刻便用立刻便用5min以内。以内。需需用用感感染染发热病病人人或或正正常常人人外外周周血血涂涂片片作作为阳阳性性对照。照。.正常分布：正常分布：阳阳性性反反响响主主要要见见于于成成熟熟中中性性粒粒细细胞胞杆杆状状及及分分叶叶粒粒细细胞胞中中，反反响响结结果果以以阳阳性率和积分值报告。性率和积分值报告。正正常常参参考考值值：成成人人NAP阳阳性性率率28.720%40%，积分，积分32.12080。.临床意床意义：类白白血血病病反反响响与与慢慢性性粒粒细胞胞白白血血病病

8、的的鉴别诊断断：前前者者显著著增增高高，阳阳性性率率常常达达90%以以上上，积分常高于分常高于200分；后者分；后者显著减低，著减低，积分可分可为0。细菌菌性性化化脓性性感感染染时，积分分显著著增增高高；病病毒毒性感染性感染时多多为正常或稍低。正常或稍低。淋淋巴巴细胞胞白白血血病病时常常增增高高；单核核细胞胞白白血血病病时正正常常或或增增高高；慢慢性性中中性性粒粒细胞胞白白血血病病时增增高高，其其它它各各型型粒粒细胞胞白白血血病病时减减低低；白白血血病病伴伴感感染染时增高。增高。真真性性红细胞胞增增多多症症、骨骨髓髓纤维化化、再再生生妨妨碍碍性性贫血血时增高，增高，PNH时常减低。常减低。5.

9、某某些些肿瘤瘤的的鉴别诊断断，如如骨骨肿瘤瘤、消消化化道道肿瘤的瘤的肿瘤瘤细胞碱性磷酸胞碱性磷酸酶常常为较强阳性反响。阳性反响。酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色ACP方法一：Gomori硫化铅法原理：在酸性条件下pH4.7酸性磷酸酶能将底物甘油磷酸钠水解，产生PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉淀，定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化铵作用，生成棕黑色的硫化铅沉淀。试剂：1.固定固定剂：40%甲甲醛溶液福溶液福尔马林。林。2.任任务液配制：液配制：蒸蒸馏水水37ml0.2mol/LpH4.7醋酸醋酸缓冲溶液冲溶液6ml0.15mol/L5%硝酸硝酸铅1ml0.1mol/L3.2%甘油磷酸甘油磷酸钠

10、2ml3.稀稀硫硫化化铵溶溶液液临用用时现配配：取取硫硫化化铵水水剂0.75ml加蒸加蒸馏水至水至50ml。4.甲甲基基绿溶溶液液：1g甲甲基基绿溶溶于于50ml蒸蒸馏水中。水中。染色步骤：1. 新颖枯燥涂片甲醛蒸气固定510min，流水冲洗5min，待干。2.入任务液37孵育23h，流水冲洗数次。3.稀硫化铵溶液浸泡23min，流水冲洗。4.甲基绿溶液复染10min，流水冲洗，干后镜检。结果判别：阳性反响呈棕黄色至棕黑色定位于胞浆中。本卷本卷须知：知：1.固定固定剂以甲以甲醛蒸气蒸气为最正确。最正确。2.涂涂片片应薄薄而而枯枯燥燥，否否那那么么固固定定后后易易零零落。落。3.此此法法稳定定性

11、性、反反复复性性好好，染染色色效效果果最最为理想。理想。正常分布正常分布1.巨巨噬噬细胞胞、部部分分网网状状细胞胞呈呈较强阳阳性性反响。反响。2.单核核细胞胞、T淋淋巴巴细胞胞、浆细胞胞呈呈中中等等强度阳性。度阳性。3.粒粒细胞胞、巨巨核核细胞胞、血血小小板板为阴阴性性或或弱阳性。弱阳性。4.红细胞系胞系统、B淋巴淋巴细胞呈阴性反响。胞呈阴性反响。5.大大多多数数组织的的细胞胞含含有有酸酸性性磷磷酸酸酶，前列腺前列腺细胞中此胞中此酶活性最活性最强。临床意床意义1.单核核细胞胞性性白白血血病病、真真性性组织细胞胞性性淋淋巴巴瘤瘤、T细胞胞白白血血病病及及淋淋巴巴瘤瘤、毛毛细胞胞白白血血病病、浆细

12、胞胞白白血血病病、浆细胞胞瘤瘤、多多发性骨髓瘤性骨髓瘤细胞均呈胞均呈较强阳性反响。阳性反响。2.高高雪雪细胞胞为强阳阳性性；尼尼曼曼匹匹克克细胞胞为阴性。阴性。3.某某些些白白血血病病，成成熟熟中中性性粒粒细胞胞酸酸性性磷磷酸酸酶活活性性加加强，可可呈呈弱弱阳阳性性至至中中等等强度度阳性。阳性。4.用于某些用于某些肿瘤瘤细胞的胞的鉴别诊断。断。苏丹黑苏丹黑B染色染色SBB原理苏丹黑B是一种脂溶性染料，能将细胞内的脂类显示出来，呈棕黑色颗粒状定位于胞浆中。试剂1.固固定定剂1 9福福尔马林林乙乙醇醇液液，即即40甲甲醛溶溶液液福福尔马林林10ml加加无无水水乙乙醇醇90ml混合即得。混合即得。2

13、.苏丹丹黑黑B溶溶液液5g/L0.5g苏丹丹黑黑B粉粉剂溶于溶于100ml70%乙醇中，可用乙醇中，可用1月。月。染色步染色步骤1.涂涂片片用用1 9福福尔马林林乙乙醇醇液液固固定定5s，流水冲洗，待干。流水冲洗，待干。2.入入苏丹丹黑黑B溶溶液液37孵孵育育1h，流流水水冲洗，待干或冲洗，待干或滤纸吸干。吸干。3.瑞瑞氏氏染染色色液液复复染染，流流水水冲冲洗洗，干干后后镜检。结果果判判别阳阳性性反反响响呈呈棕棕黑黑色色颗粒粒状状定定位位于胞于胞浆中。中。本卷本卷须知知1.涂涂片片可可不不固固定定，直直接接入入苏丹丹黑黑B溶溶液液孵育。孵育。2.苏丹丹黑黑B溶溶液液的的温温度度升升至至37后后

14、开开场计时。3.通通常常苏丹丹黑黑B溶溶液液运运用用1月月后后，染染色色效效果果会会有有所所减减弱弱；此此时参参与与1g聚聚乙乙烯吡吡咯咯啉啉酮K30吡吡咯咯烷酮于于100ml苏丹丹黑黑B溶液中，可延伸运用溶液中，可延伸运用时间。正常分布：正常分布：1.粒粒细细胞胞系系统统：粒粒细细胞胞系系统统除除早早期期原原始始粒粒细胞外，下阶段细胞均为阳性反响。细胞外，下阶段细胞均为阳性反响。2.单单核核细细胞胞系系统统：部部分分细细胞胞为为弱弱阳阳性性反反响响，颗颗粒粒细细小小疏疏松松，弥弥散散分分布布；部部分分细细胞胞可可呈阴性反响。呈阴性反响。3.组组织织细细胞胞及及巨巨噬噬细细胞胞可可呈呈不不同同

15、程程度度的的阳阳性反响。性反响。4.淋淋巴巴细细胞胞、浆浆细细胞胞、红红细细胞胞、巨巨核核细细胞胞均为阴性反响。均为阴性反响。临床意义临床意义同髓过氧化物酶染色。同髓过氧化物酶染色。髓过氧化物酶染色髓过氧化物酶染色MPO或或POX方法一Washurn联苯胺法原理：当细胞中存在具有活性的髓过氧化物酶时，能分解底物H2O2释放新生态氧，将联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氢化钠构成稳定的蓝色颗粒定位于胞浆中。试剂：1.联苯苯胺胺溶溶液液0.3g联苯苯胺胺溶溶于于99ml88%95%的的乙乙醇醇溶溶液液中中，加加360g/L亚硝硝基基铁氰化化钠饱和和溶溶液液1ml，储存存于于棕棕色色瓶中，可保管瓶

16、中，可保管8个月。个月。2.稀稀双双氧氧水水新新颖配配制制50ml蒸蒸馏水中加水中加30%H2O250l。3.瑞瑞氏氏姬姆姆萨染染色色液液瑞瑞氏氏粉粉1g、姬姆姆萨粉粉0.5g、甘油、甘油10ml溶于溶于500ml甲醇中。甲醇中。染色步染色步骤1、枯枯燥燥涂涂片片，滴滴加加联苯苯胺胺溶溶液液1ml布布满血膜作用血膜作用1分分钟，保管。，保管。2、加加等等量量稀稀双双氧氧水水，混混匀匀，染染色色45分分钟，流水充分冲洗。，流水充分冲洗。3、瑞瑞氏氏姬姆姆萨染染色色液液复复染染510分分钟，流水冲洗，待干后鏡，流水冲洗，待干后鏡检。结果判果判别阳阳性性反反响响呈呈棕棕黑黑色色至至蓝黑黑色色颗粒粒状

17、状，定定位于位于细胞胞浆中。中。本卷本卷须知知1.稀稀双双氧氧水水易易失失效效，最最好好临用用时现配配，一一次次配配制制的的稀稀H2O2最最多多能能用用12周周。假假设发现成成熟熟粒粒细胞胞MPO反反响响较弱弱或或呈呈阴阴性性、或或染染色色时血血膜膜上上不不产生生气气泡泡，那那么么阐明明稀稀H2O2能能够失失效效，需重新配制。需重新配制。2.稀稀H2O2的的最最适适浓度度为0.05mol/L,浓度度过高高，会会抑抑制制MPO的的活活性性。假假设涂涂片片中中成成熟熟红细胞胞呈呈棕棕色色或或蓝绿色色颗粒粒状状阳阳性性反反响响，而而成成熟熟中中性性粒粒细胞胞阳阳性性较弱弱或或无无阳阳性性颗粒粒，那那

18、么么阐明明H2O2过浓。3.阳阳性性细胞胞较多多的的增增生生极极度度活活泼的的骨骨髓髓涂涂片片，部分部分细胞的胞的MPO阳性阳性颗粒可呈棕黄色。粒可呈棕黄色。4.Washurn联苯苯胺胺法法不不用用预先先固固定定血血膜膜；预先先固固定定了了的的血血膜膜应尽尽快快做做MPO染染色色，超超越越48h酶的活性会的活性会显著降低或消逝。著降低或消逝。5.复复染染也也可可用用瑞瑞氏氏染染液液、姬姆姆萨染染液液或或中中性性红溶液等。溶液等。髓过氧化物酶染色髓过氧化物酶染色MPO或或POX方法二方法二氧化亚甲蓝碘化钾法氧化亚甲蓝碘化钾法原原理理：细细胞胞中中的的过过氧氧化化物物酶酶作作用用于于染染料料氧氧化

19、化亚亚甲甲蓝蓝中中的的过过氧氧化化键键产产生生新新生生态态氧氧，后后者者与与KI作作用用产产生生碘碘，碘碘与与亚亚甲甲蓝蓝等等显显色色剂剂中中的的有有效效成成分分结结合合构构成成有有色色颗粒定位于胞浆中。颗粒定位于胞浆中。试剂：1.固固定定剂：1 9甲甲醛乙乙醇醇液液，即即40%甲甲醛溶溶液液10ml加无水乙醇加无水乙醇90ml混合即得。混合即得。2.磷酸磷酸盐缓冲溶液：冲溶液：0.067mol/LpH5.8。3.KI溶液：溶液：500mg碘化碘化钾溶于溶于50ml蒸蒸馏水中。水中。4.氧氧化化MB溶溶液液：500mg亚甲甲蓝Methyleneblue溶溶于于100ml50%甲甲醇醇中中，待待

20、完完全全溶溶解解后后，加加30%H2O250l。5任任务液液临用用时现配配：取取磷磷酸酸盐缓冲冲溶溶液液1ml，加加KI溶溶液液150l、氧氧化化亚甲甲蓝溶溶液液300l边滴滴边摇，2小小时内运用。内运用。染色步骤：染色步骤：1枯枯燥燥的的骨骨髓髓涂涂片片或或外外周周血血涂涂片片，滴滴加加固固定定剂剂布布满满血血膜膜固固定定3060s，流流水水冲冲洗洗，晾干或滤纸吸干。晾干或滤纸吸干。2滴滴加加任任务务液液于于涂涂片片上上，染染色色4060s后后倾去不用水冲洗，滤纸吸干，镜检。倾去不用水冲洗，滤纸吸干，镜检。结果判别：结果判别：本本法法MPO阳阳性性产产物物呈呈棕棕色色至至棕棕黑黑色色颗颗粒粒

21、状定位于胞浆中；状定位于胞浆中；本卷本卷须知知1.氧氧化化MB-KI法法，使使其其一一步步到到位位到到达达最最正正确确氧氧化化成成熟熟程程度度，以以后后每每次次配配制制MPO染染色色任任务液液时不用加不用加H2O2。2.固固定定剂可可用用1 9甲甲醛甲甲醇醇液液或或4 3甲甲醇醇乙乙醇醇液。液。3.本本法法在在显示示MPO的的同同时，细胞胞核核能能被被染染成成浅浅红色，可不需另外复染色，可不需另外复染细胞核。胞核。4.假假设出出现因因细胞胞太太多多，MPO反反响响较弱弱或或着着色色不不理理想想，可可用用任任务液液对涂涂片片进展展再再次次染染色色，以以加加强染染色色效效果果。KI的的量量对MPO

22、的的反反响响强度度也有一定的也有一定的调理作用。理作用。5.碘碘化化钾法法MPO染染色色阳阳性性颗粒粒易易溶溶于于水水，应防防止用水冲洗。止用水冲洗。正常分布：正常分布：1.粒粒细细胞胞系系统统：中中性性粒粒细细胞胞除除早早期期原原始始粒粒细细胞胞外外，下下阶阶段段细细胞胞均均为为阳阳性性反反响响；嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞反反响响最最快快，着着色色最最强强；嗜嗜碱碱性性粒粒细细胞胞为为阴阴性性反反响。响。2.单单核核细细胞胞系系统统：部部分分细细胞胞为为弱弱阳阳性性反反响响，颗颗粒粒细细小小疏疏松松，弥弥散散分分布布；部部分分细细胞胞可可呈呈阴阴性性反反响。响。3.组组织织细细胞胞及及巨巨噬噬

23、细细胞胞可可呈呈不不同同程程度度的的阳阳性性反反响。响。4.淋淋巴巴细细胞胞、浆浆细细胞胞、红红细细胞胞、巨巨核核细细胞胞均均为为阴性反响。阴性反响。临床意床意义：用于急性白血病的用于急性白血病的类型型鉴别：.急急性性粒粒细胞胞白白血血病病较分分化化的的原原始始粒粒细胞胞为阳性，阳性，Auer小体小体为阳性。阳性。.急急性性单核核细胞胞白白血血病病细胞胞为阴阴性性或或弱弱阳性。阳性。.急性淋巴急性淋巴细胞白血病胞白血病细胞胞为阴性。阴性。用用于于Chediak-Higashi综合合征征等等疾疾病病的的诊断及断及鉴别诊断。断。氯醋酸氯醋酸AS-D奈酚酯酶染色奈酚酯酶染色CE原理：原理：氯醋酸氯醋

24、酸AS-D萘酯能被酯酶水解生成萘酯能被酯酶水解生成AS-D萘酚，再与稳定的重氮盐偶联，生萘酚，再与稳定的重氮盐偶联，生成不溶性的蓝色沉淀定位于细胞浆中。成不溶性的蓝色沉淀定位于细胞浆中。阳性反响通常仅出现于粒细胞中，故又阳性反响通常仅出现于粒细胞中，故又称特异性酯酶染色。称特异性酯酶染色。试剂1.固定固定剂：缓冲甲冲甲醛丙丙酮溶液溶液0.076mol/LNa2HPO411.25ml0.076mol/LKH2PO418.75ml丙丙酮45ml40%甲甲醛25ml，混合。，混合。2.磷酸磷酸盐缓冲液：冲液：M/15Na2HPO485mlM/15KH2PO415ml混合。混合。3.任任务液配制：液配

25、制：PBS0.95ml0.2%氯醋酸醋酸AS-D萘酯50ulN，N二甲基甲二甲基甲酰胺胺巩固巩固篮BB1mg，混匀。，混匀。染色步骤：染色步骤：1、枯枯燥燥涂涂片片，滴滴加加固固定定剂剂布布满满血血膜膜固固定定5秒钟，流水冲洗，待干或滤纸吸干。秒钟，流水冲洗，待干或滤纸吸干。2、滴滴加加任任务务液液室室温温下下染染色色1520分分钟钟，流水冲洗，待干。流水冲洗，待干。3、10g/L藏藏红红花花红红或或中中性性红红溶溶液液复复染染1分钟，流水冲洗，干后鏡检。分钟，流水冲洗，干后鏡检。结果判别：结果判别：阳阳性性反反响响呈呈蓝蓝黑黑色色颗颗粒粒状状，定定位位于于细细胞胞浆中。浆中。本卷本卷须知知1

26、.氯醋醋酸酸AS-D萘酯溶溶液液应避避光光、保保管管于于4冰箱。冰箱。2.氯醋醋酸酸AS-D萘酯溶溶液液变黄黄及及混混浊那那么失效。么失效。3.重重氮氮盐以以巩巩固固篮BB最最正正确确，也也可可用用巩固巩固篮B、巩固、巩固篮RR盐。正常分布：正常分布：1.粒粒细细胞胞系系统统除除早早期期的的原原始始粒粒细细胞胞外外，均均为为阳阳性反响；性反响；2.其它各系细胞均呈阴性反响。其它各系细胞均呈阴性反响。临床意床意义：主要用于急性白血病的：主要用于急性白血病的鉴别诊断。断。急急性性粒粒细胞胞白白血血病病时，白白血血病病细胞胞可可呈呈不不同同程度的阳性反响。程度的阳性反响。2.急急性性粒粒-单核核细胞

27、胞白白血血病病时，部部分分白白血血病病细胞胞呈阳性反响粒呈阳性反响粒细胞成分。胞成分。3.其它其它类型白血病型白血病细胞呈阴性反响。胞呈阴性反响。4.其其它它少少数数实体体瘤瘤肿瘤瘤细胞胞可可呈呈弱弱阳阳性性反反响。响。酸性非特异性酯酶染色酸性非特异性酯酶染色ANAE原理盐酸副品红与亚硝酸钠反响生成六偶氮副品红重氮盐，底物a-醋酸萘酯在酯酶的作用下分解为a-萘酚，a-萘酚与六偶氮副品红结合生成棕红色沉淀，定位于胞浆中。任任务液配制：液配制：40g/L副品副品红溶液溶液2NHCL0.1ml、40g/L亚硝酸硝酸钠溶液溶液0.1ml，混匀，静置混匀，静置1分分钟，磷酸磷酸盐缓冲溶液冲溶液3.0ml

28、,醋酸醋酸萘酯溶液溶液0.1ml乙二醇乙二醇单甲甲醚混匀，置混匀，置2分分钟备用。用。染色步骤：染色步骤：1、枯枯燥燥涂涂片片，滴滴加加固固定定剂剂布布满满血血膜膜固固定定1秒钟，流水冲洗，待干或滤纸吸干。秒钟，流水冲洗，待干或滤纸吸干。2、滴滴加加任任务务液液布布满满血血膜膜室室温温下下或或37oC30分钟，流水冲洗，待干或滤纸吸干。分钟，流水冲洗，待干或滤纸吸干。3、10g/L甲甲基基绿绿溶溶液液复复染染1530秒秒钟钟或或0.1%孔孔雀雀绿绿溶溶液液复复染染2秒秒钟钟，流流水水冲冲洗洗，待干后鏡检。待干后鏡检。结果果判判别：阳阳性性反反响响呈呈棕棕色色或或棕棕红色色，定位于定位于细胞胞浆

29、中。中。点点样型型：主主要要见于于成成熟熟T淋淋巴巴细胞胞，阳阳性性反反响响呈呈棕棕色色或或棕棕红色色14个个圆形形、团块、边境境清清楚楚的的大大点点状状颗粒粒定定位位于于胞胞浆中。中。弥弥散散型型：阳阳性性反反响响呈呈棕棕红色色尘粒粒状状，弥弥散散分分布布，可可位位于于细胞胞浆的的某某一一部部分分，边境不清。境不清。单核核细胞胞型型：阳阳性性反反响响为均均匀匀棕棕红色色弥漫性遍及整个弥漫性遍及整个细胞胞浆。本卷本卷须知知1.任任务液液的的pH值为5.8，小小鼠鼠为6.4，可可用用冰醋酸冰醋酸调pH值。2. 涂涂片片可可不不固固定定而而直直接接加加任任务液液做做ANAE染染色色，阳阳性性反反响

30、响强于于固固定定者者；37时阳性反响阳性反响强于室温。于室温。3.磷磷酸酸盐缓冲冲液液的的pH值约为7.53，用用其其配制任配制任务液液时不用用冰醋酸不用用冰醋酸调pH值。4.Na2HPO4、KH2PO4的的称称量量应准准确确，特特别是是有有些些试剂含含有有结晶晶水水，计算算时要要留意。留意。5.做做NaF抑抑制制实验时，NaF的的用用量量为每每ml任任务液中加液中加NaF1.5mg。正常分布：正常分布：1.单单核核细细胞胞系系统统：呈呈强强阳阳性性反反响响，其其反反响响可被氟化钠抑制。可被氟化钠抑制。2.粒粒细细胞胞系系统统：各各期期粒粒细细胞胞多多呈呈阴阴性性反反响响，有有时时少少数数粒粒

31、细细胞胞可可呈呈弱弱阳阳性性反反响响，其其反反响不被氟化钠抑制。响不被氟化钠抑制。3.巨核细胞及血小板为阳性。巨核细胞及血小板为阳性。4.成成熟熟T淋淋巴巴细细胞胞呈呈点点状状阳阳性性，B淋淋巴巴细细胞及浆细胞为阴性反响。胞及浆细胞为阴性反响。5.单单核核细细胞胞源源性性的的组组织织细细胞胞、巨巨噬噬细细胞胞呈呈强强阳阳性性反反响响，高高雪雪氏氏细细胞胞、海海蓝蓝组组织织细细胞为阳性。胞为阳性。6.有有核核红红细细胞胞常常呈呈阴阴性性反反响响，部部分分病病例例的的有有核核红红细细胞胞可可呈呈弱弱至至中中等等强强度度的的阳阳性性，阳性反响能被氟化钠抑制。阳性反响能被氟化钠抑制。临床意床意义主要用

32、于急性白血病的主要用于急性白血病的鉴别诊断：断：.急急性性单核核细胞胞白白血血病病的的原原始始单核核细胞胞至至成成熟熟单核核细胞胞大大多多呈呈阳阳性性反反响响，其其反反响能被响能被NaF抑制。抑制。.急急性性粒粒细胞胞白白血血病病时，其其白白血血病病细胞胞为阴阴性性M3除除外外；有有时少少数数粒粒细胞胞可可呈弱阳性，其反响不被呈弱阳性，其反响不被NaF抑制。抑制。.急急性性早早幼幼粒粒细胞胞白白血血病病M3时，白白血病血病细胞可呈中度至弱的阳性。胞可呈中度至弱的阳性。.急急性性粒粒-单核核细胞胞白白血血病病时，部部分分细胞胞单核核细胞成分胞成分为阳性反响。阳性反响。.急急性性T淋淋巴巴细胞胞白

33、白血血病病时，白白血血病病细胞胞可可呈呈阳阳性性；B淋淋巴巴细胞胞白白血血病病那那么么为阴阴性。性。.急性巨核急性巨核细胞白血病胞白血病时，可呈阳性。，可呈阳性。可用于恶性肿瘤的鉴别诊断：.癌细胞多为强阳性，肉瘤细胞多为阴性或弱阳性。特别是淋巴结转移癌为阳性，而淋巴瘤细胞为阴性。.单核-巨噬细胞源性的真性组织细胞型淋巴瘤(组织细胞肉瘤)细胞为阳性。ANAECE酯酶双染色酯酶双染色原理、原理、试剂：见ANAE及及CE。染色步染色步骤1.枯燥涂片，滴加固定枯燥涂片，滴加固定剂布布满血膜固定血膜固定1秒秒钟，流水冲洗，待干或流水冲洗，待干或滤纸吸干。吸干。2.滴加滴加ANAE染色任染色任务液布液布满

34、血膜室温下或血膜室温下或37oC30分分钟，流水冲洗，待干或，流水冲洗，待干或滤纸吸干。吸干。3.滴加滴加CE染色任染色任务液室温下染色液室温下染色1520分分钟，流水冲洗，待干。流水冲洗，待干。结果判果判别ANAE阳性反响呈棕色或棕阳性反响呈棕色或棕红色，定位于色，定位于细胞胞浆中。中。CE阳性反响呈阳性反响呈蓝黑色黑色颗粒状，定位于粒状，定位于细胞胞浆中。中。酯酶双染阳性双染阳性为同一同一细胞的胞胞的胞浆中中见上述两种阳性反响。上述两种阳性反响。临床意床意义1.急急性性单核核细胞胞白白血血病病的的白白血血病病细胞胞ANAE呈呈阳性反响；阳性反响；CE呈阴性反响。呈阴性反响。2.急急性性粒粒

35、细胞胞白白血血病病的的白白血血病病细胞胞ANAE呈呈阴阴性性反反响响M3除除外外；CE可可呈呈不不同同程程度度的的阳阳性性反响。反响。3.急急性性早早幼幼粒粒细胞胞白白血血病病M3的的白白血血病病细胞可胞可为ANAECE酯酶双染阳性反响。双染阳性反响。4.急急性性粒粒-单核核细胞胞白白血血病病，单核核细胞胞成成分分ANAE为阳阳性性反反响响；粒粒细胞胞成成分分CE为阳阳性性反反响响；其其中中M4C的的白白血血病病细胞胞ANAECE酯酶双双染染阳阳性反响。性反响。丁酸丁酸萘酯萘酯酶酶染色染色 NBE 原理在碱性条件下，a-丁酸萘酚被细胞内酯酶水解，产生a-萘酚，与重氮盐偶联生成不溶性有色沉淀，定

36、位于胞浆中。试剂1.固定固定剂：缓冲甲冲甲醛丙丙酮溶液溶液2.a-丁丁酸酸萘酚酚溶溶液液：a-丁丁酸酸萘酚酚500mg溶溶于于25ml乙二醇甲乙二醇甲醚中。中。3.磷酸磷酸盐缓冲液：冲液：0.1mol/L,pH8.0。4.任任务液配制：液配制：4%副品副品红2N盐酸溶液酸溶液0.25ml、4%亚硝硝酸酸钠溶溶液液0.25ml，混混匀匀，静静置置1分分钟，磷酸磷酸盐缓冲溶液冲溶液95ml,丁丁酸酸萘酯乙乙二二醇醇甲甲醚溶溶液液5ml，混混匀匀，过滤后后均均分分于于两两个个染染色色缸缸中中，其其中一缸加氟化中一缸加氟化钠75mg。染色步染色步骤：1.枯枯燥燥涂涂片片，滴滴加加固固定定剂布布满血血膜

37、膜固固定定30s，流水冲洗，待干或，流水冲洗，待干或滤纸吸干。吸干。2. 滴滴加加任任务液液布布满血血膜膜室室温温下下或或37oC孵孵育育45min，流流水水冲冲洗洗，待待干干或或滤纸吸干。吸干。3.10g/L甲甲基基绿溶溶液液复复染染5min或或0.1%孔孔雀雀绿溶溶液液复复染染5s，流流水水冲冲洗洗，待待干干后后鏡鏡检。结果判果判别：阳阳性性反反响响呈呈红色色或或棕棕红色色，定定位位于于细胞胞浆中。中。本卷须知本卷须知1.标本要新颖。标本要新颖。2.任任务务液液配配制制后后应应及及时时运运用用，以以免免影影响响染染色效果。色效果。3.重重氮氮盐盐也也可可用用巩巩固固篮篮BB盐盐或或固固酱酱

38、紫紫GBC盐，以替代六偶氮副品红。盐，以替代六偶氮副品红。正常分布：正常分布：1.单核核细胞胞系系统：呈呈阳阳性性反反响响，其其反反响响可被氟化可被氟化钠抑制。抑制。2.粒粒细胞胞系系统：各各阶段段粒粒细胞胞均均呈呈阴阴性性反响。反响。3.成成熟熟T淋淋巴巴细胞胞呈呈点点状状阳阳性性，B淋淋巴巴细胞及胞及浆细胞胞为阴性反响。阴性反响。4.巨核巨核细胞及血小板胞及血小板为阴性。阴性。5.单核核细胞胞源源性性的的组织细胞胞、巨巨噬噬细胞胞呈呈强阳阳性性反反响响，高高雪雪氏氏细胞胞、海海蓝组织细胞胞为阳性。阳性。临床意床意义主要用于急性白血病的主要用于急性白血病的鉴别诊断：断：1.急急性性单核核细胞

39、胞白白血血病病的的原原始始单核核细胞胞至至成成熟熟单核核细胞胞呈呈阳阳性性反反响响，其其反反响响能能被氟化被氟化钠抑制。抑制。2.急急性性粒粒细胞胞白白血血病病M1、M2时，其白血病其白血病细胞胞为阴性。阴性。3.急急性性早早幼幼粒粒细胞胞白白血血病病M3的的白白血血病病细胞胞为阴性。阴性。4.急急性性粒粒-单核核细胞胞白白血血病病的的部部分分白白血血病病细胞胞单核核细胞成分胞成分为阳性反响。阳性反响。5.急性巨核急性巨核细胞白血病，胞白血病，为阴性。阴性。糖原染色糖原染色PAS原理：高碘酸能使原理：高碘酸能使细细胞内多糖的乙二醇胞内多糖的乙二醇基基-CHOH-CHOH氧化，构成二氧化，构成二

40、醛醛基基-CHO-CHO。醛醛基与雪夫氏基与雪夫氏schiff试剂试剂中的无色品中的无色品红结红结合生成紫合生成紫红红色化色化合物，定位于合物，定位于细细胞胞浆浆中。反响的中。反响的强强弱程弱程度与度与细细胞内参与反响的乙二醇基的量成胞内参与反响的乙二醇基的量成正比。正比。试剂1.固固定定剂：1 9福福尔马林林乙乙醇醇液液，即即40甲甲醛溶溶液液福福尔马林林10ml加加无无水水乙乙醇醇90ml混合即得。混合即得。2.schiff试剂：碱碱性性品品红中中国国品品红1g溶溶于于200ml沸沸水水中中；当当冷冷却却至至5550时，加加20ml1N盐酸酸；冷冷却却至至3025时，参参与与亚硫硫酸酸钠2

41、g，塞塞紧瓶瓶口口过夜夜；次次日日，溶溶液液应为无无色色透透明明，否否那那么么，应参参与与300mg活活性性炭炭振振摇均均匀匀，过虑后后，塞塞紧瓶瓶口口，保保管管于于冰冰箱箱中中。溶溶液液变红那那么么失效。失效。1.染色步染色步骤：1、枯枯燥燥涂涂片片，滴滴加加固固定定剂布布满血血膜膜固固定定15秒秒钟，流水冲洗，待干或，流水冲洗，待干或滤纸吸干。吸干。2、滴滴加加高高碘碘酸酸溶溶液液1.0ml作作用用1015分分钟，流水冲洗，待干或，流水冲洗，待干或滤纸吸干。吸干。3、滴滴加加Schiff溶溶液液1.0ml作作用用30分分钟，流水冲洗流水冲洗5分分钟。4、20g/L甲甲基基绿溶溶液液复复染染

42、15分分钟或或0.1%孔孔雀雀绿溶溶液液复复染染2秒秒钟，流流水水冲冲洗洗，干后鏡干后鏡检。结结果果判判别别：阳阳性性反反响响呈呈红红色色至至紫紫红红色色颗颗粒状或块状，定位于细胞浆中。粒状或块状，定位于细胞浆中。有有核核红红细细胞胞阳阳性性程程度度可可分分为为5级级：0：胞胞浆浆中中无无弥弥漫漫型型红红色色物物质质或或红红色色颗颗粒粒；+：胞胞浆浆呈呈浅浅红红色色或或有有少少量量细细小小红红色色颗颗粒粒；+：胞胞浆浆内内见见110粒粒中中等等大大小小的的红红色色颗颗粒粒；+：胞胞浆浆内内见见1120粒粒较较粗粗大大的的红红色色颗颗粒粒；+：胞胞浆浆内内见见20粒粒以以上上红红色色颗颗粒粒，粗

43、粗大大而而致致密密，着着色色较较深深，可可溶溶合合成块状。成块状。本卷本卷须知：知：1.固固定定剂以以95%乙乙醇醇为首首选，用用10%甲甲醛甲甲醇醇溶溶液液或或10%甲甲醛乙乙醇醇溶溶液液，效效果果也很好。也很好。2.保保管管良良好好的的已已固固定定或或未未固固定定的的陈旧旧涂涂片片、已已做做过瑞瑞氏氏染染色色的的涂涂片片，均均可可进展展PAS染染色色。但但做做过瑞瑞氏氏染染色色的的涂涂片片做做PAS前，最好先用乙醇脱色。前，最好先用乙醇脱色。3.过碘碘酸酸粉粉末末易易受受潮潮，保保管管时应留留意意防防潮或保管于枯燥器中。潮或保管于枯燥器中。4.Schiff溶溶液液应密密封封塞塞紧瓶瓶口口、

44、避避光光保保管管，或或小小瓶瓶分分装装存存放放。运运用用时不不要要暴暴露露于于空空气气中中过久久，否否那那么么溶溶液液中中的的SO2外外逸，逸，导致溶液致溶液变红而失效。而失效。5.变红了的Schiff溶液可通入SO2气体，至红色消逝后再用。但应留意，溶液中过量的SO2越少，反响越灵敏。6.某些酮类如丙酮、碱类、不饱和化合物或某些能与SO2作用的物质，均不宜与Schiff溶液接触；否那么，易发生化学反响，使溶液变为桃红色而失效。7.染色时，Schiff反响最好在室温下进展。由于37下孵育或水浴时，容易损失SO2而使Schiff溶液失效变红。8.PAS染色后的涂片应及时镜检察看结果，放置1W后，

45、阳性反响开场逐渐褪色。9.配制Schiff溶液时碱性品红可用副品红替代，亚硫酸钠可用亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、偏重亚硫酸钠替代。正常分布：正常分布：1.粒粒细细胞胞系系统统：原原粒粒细细胞胞多多为为阴阴性性反反响响，早早幼幼粒粒细细胞胞至至分分叶叶粒粒细细胞胞阳阳性性反反响响逐逐渐渐加加强强，呈呈细细颗粒状。颗粒状。2.单单核核细细胞胞呈呈弱弱阳阳性性反反响响，巨巨噬噬细细胞胞呈呈较较强强的的阳性反响。阳性反响。3.淋巴细胞多呈阴性反响，少数呈弱阳性反响。淋巴细胞多呈阴性反响，少数呈弱阳性反响。4.幼红细胞呈阴性反响。幼红细胞呈阴性反响。5.巨核细胞及血小板呈阳性反响。巨核细胞及血小板呈阳性反响

46、。6.对对PAS呈呈阳阳性性反反响响的的除除了了糖糖原原外外，还还有有粘粘多多糖糖、粘粘蛋蛋白白、醣醣蛋蛋白白、醣醣脂脂、磷磷脂脂及及硫硫酸酸软软骨骨素素等等，对对PAS呈呈阳阳性性反反响响的的细细胞胞组组织织很很多多，运运用用非非常常广广泛泛。肝肝、肾肾、心心肌肌、骨骨骼骼肌肌、肾肾小小管管上皮细胞等富含糖原。上皮细胞等富含糖原。临床意床意义：急急性性淋淋巴巴细胞胞白白血血病病的的原原始始及及幼幼稚稚细胞胞常常为阳性，阳性物阳性，阳性物质呈粗大呈粗大颗粒状或粒状或块状。状。急急性性粒粒细胞胞白白血血病病的的原原始始细胞胞多多为阴阴性性反反响响，较分分化化的的原原始始粒粒细胞胞及及早早幼幼粒粒

47、细胞胞可可呈呈弱弱阳阳性性，阳性物阳性物质为红色色细颗粒状，均匀分布。粒状，均匀分布。急急性性单核核细胞胞白白血血病病的的原原始始单核核细胞胞可可呈呈阳阳性反响，性反响，为红色色细颗粒状，弥散分布。粒状，弥散分布。急急性性及及慢慢性性巨巨核核细胞胞白白血血病病的的原原始始及及幼幼稚稚巨巨核核细胞胞、MDS的的小小巨巨核核细胞胞可可呈呈较强的的阳阳性性反反响。响。红白白血血病病及及某某些些MDS的的幼幼红细胞胞可可呈呈较强阳阳性性反反响响；巨巨幼幼细胞胞性性贫血血及及再再生生妨妨碍碍性性贫血血幼幼红细胞胞为阴性反响。阴性反响。高高-雪雪氏氏细胞胞、海海蓝组织细胞胞为较强的的阳阳性性反反响，尼曼响

48、，尼曼-匹克氏匹克氏细胞胞为阴性至弱阳性反响。阴性至弱阳性反响。7.在在某某些些肿瘤瘤细胞胞的的鉴别诊断断中中具具有有广广泛泛的的运运用用，如如精精原原细胞胞瘤瘤、软骨骨肉肉瘤瘤、腺腺癌癌为强阳阳性性，神神经母母细胞瘤可呈不同程度的阳性，等。胞瘤可呈不同程度的阳性，等。MPOCEANAEPASALL-粗+/-M0-M1+/-细+/-M2+/-/弱+细+M3+细+M4+细+M5+/-+细+M6+/-/+细+M7-+粗+铁染色铁染色.原理：原理：正常骨髓中存在一定量的正常骨髓中存在一定量的储存存铁，以含，以含铁血黄素的方式血黄素的方式储存于存于组织巨噬巨噬细胞中，胞中，可供有核可供有核红细胞利用合

49、成血胞利用合成血红蛋白。蛋白。这种存在于种存在于红细胞以外的胞以外的储存存铁称称为细胞胞外外铁；部分中、晚幼；部分中、晚幼红细胞及少数成熟胞及少数成熟红细胞也含有胞也含有铁颗粒，分粒，分别称称为铁粒幼粒幼红细胞及胞及铁粒粒红细胞，它胞，它们属于属于细胞内胞内铁。酸性。酸性亚铁氢化化钾能与能与细胞内、外胞内、外铁发生普生普鲁士士蓝反响，构成反响，构成蓝色的色的亚铁氢化化铁沉淀，定位于沉淀，定位于细胞胞浆中。中。试剂试剂任务液配制：任务液配制：取取浓浓盐盐酸酸0.25ml于于试试管管中中，缓缓慢慢滴滴加加200g/L亚铁氰化钾溶液亚铁氰化钾溶液1.25ml，边滴边摇。，边滴边摇。反反响响过过程程由

50、由开开场场生生成成的的白白色色沉沉淀淀至至沉沉淀淀消逝。消逝。染色步骤：染色步骤：1、枯枯燥燥涂涂片片，滴滴加加任任务务液液布布满满血血膜膜染染色色30分分钟钟，流流水水充充分分冲冲洗洗5分分钟钟，待待干干或或滤纸吸干。滤纸吸干。2、10g/L藏藏红红花花红红溶溶液液或或中中性性红红溶溶液液复染复染1分钟，流水冲洗，干后鏡检。分钟，流水冲洗，干后鏡检。结果判别：结果判别：阳阳性性反反响响呈呈蓝蓝黑黑色色颗颗粒粒状状或或块块状状，定定位位于细胞浆中。于细胞浆中。1.细胞外铁判别规范：低倍镜下于片尾骨髓小粒察看细胞外铁，必要时需油镜下证明。其阳性程度分为5级。0：全片无细胞外铁的蓝色阳性反响及颗粒

51、。+：见少量铁颗粒或偶见少许铁小珠。+：见较多铁颗粒和铁小珠。+：见很多铁颗粒、铁小珠和少量铁小块。+：见极多铁颗粒、铁小珠和很多密集成堆的铁小块。2.细胞内铁判别规范：油镜计数100个中幼红及晚幼红细胞内铁阳性程度。阳性程度分为5级：0：细胞浆内无铁颗粒。+：细胞浆内含1个铁颗粒。+：细胞浆内含25个铁颗粒。+：细胞浆内含69个铁颗粒。+：细胞浆内含10个以上铁颗粒。环形铁粒幼红细胞：含6个以上铁颗粒，且2/3以上的铁颗粒围绕细胞核周围陈列成完全或不完全的环形1/2以上的核周有铁粒环绕。本卷本卷须知：知：1.所用玻片及器具所用玻片及器具应干干净、无、无铁污染。染。2.亚铁氰化化钾暴暴露露于于

52、空空气气或或见光光易易蜕变，应密密闭、储存于棕色瓶中。存于棕色瓶中。3.所用所用盐酸酸纯度要高，不能含度要高，不能含铁质。4.应选择骨骨髓髓小小粒粒较多多的的骨骨髓髓涂涂片片做做铁染染色色，同同一一涂涂片片上上既既察察看看细胞胞外外铁也也察察看看细胞内胞内铁。5.已已做做过瑞瑞氏氏染染色色着着色色好好、无无沉沉渣渣的涂片，也可做的涂片，也可做铁染色，且不需复染。染色，且不需复染。6.复复染染前前，涂涂片片应充充分分冲冲洗洗，否否那那么么会会产生生较多多针状状结晶体。晶体。.正常分布参考正常分布参考值：1.骨髓骨髓细胞外胞外铁+。2.骨骨髓髓细胞胞内内铁：中中晚晚幼幼红细胞胞阳阳性性率率19%4

53、4%，颗粒粒10粒粒以以下下，无无环形形铁粒幼粒幼红细胞。胞。临床意床意义：缺缺铁性性贫血血时，骨骨髓髓细胞胞外外铁明明显减减少少，甚甚至至消消逝逝；铁粒粒幼幼红细胞胞的的百百分分率率减减低低，常常小小于于0.16，严重重时小于小于0.10，铁粒粒5粒以下。粒以下。铁粒粒幼幼细胞胞性性贫血血时，铁粒粒幼幼红细胞胞高高于于0.40，可可达达0.70以以上上，铁颗粒粒数数目目增增多多，颗粒粒粗粗大大，可可见环形形铁粒粒幼幼红细胞胞，细胞胞外外铁多多为“+，可达，可达“+。MDS-RAS时，铁粒粒幼幼细胞胞百百分分率率增增高高，铁粒数目增多，粒数目增多，环形形铁粒幼粒幼细胞大于胞大于0.15。溶溶血血性性贫血血及及多多次次输血血的的病病人人细胞胞外外铁可可明明显增多。增多。5.痰痰涂涂片片或或胃胃液液离离心心涂涂片片做做铁染染色色，用用以以鉴别含含铁血血黄黄素素细胞胞，对于于诊断断慢慢性性肺肺淤淤血血心心衰衰细胞胞、幼幼儿儿特特发性性肺肺含含铁血血黄黄素素冷冷静静症症具具有有重要意重要意义。6.用用于于证明明某某些些肿瘤瘤内内的的陈旧旧性性出出血血，通通常常以以为出血出血24h后，即可有含后，即可有含铁血黄素血黄素细胞出胞出现。