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1、n n培养基的分培养基的分类和成分和成分n n自养异养微生物碳源的区自养异养微生物碳源的区别n n比比较消毒和消毒和灭菌菌n n举例例说明消毒和明消毒和灭菌菌n n制制备培养基的程序培养基的程序n n溶化操作中溶化操作中搅拌的作用拌的作用n n为什么将平板倒置什么将平板倒置专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。术的操作，进行微生物的培养。 一、课题目标：一、课题目标： 掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板划线法平板划线法等基本操作技术，熟练、规范
2、等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：课前预习课前预习n一、平板划线法一、平板划线法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 1. 通过接通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线种环在琼脂固体培养基表面连续画线 接种环接种环 烧红烧红 菌液中沾取一环菌液菌液中沾取一环菌液 迅速伸入平板内迅速伸入平板内划划35条平行线条平行线 第一区域划线的末端开始往第一区域划线的末端开始往第二区域内第二区域内 最后一区域的划线与第一区相连最后一区域的划线与第一区相连
3、2.稀释稀释 不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面体培养基的表面 稀释度足够高时稀释度足够高时 9 试管灭试管灭菌菌 1 1 酒精酒精 0.1 810s 均匀均匀 转动培养转动培养面面 分布均匀分布均匀 二、临时二、临时 40c 甘油甘油 -200cn预习自测： C D D D B 接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法: :通过接种环在琼脂固体培养通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作基表面连续画线的操作, ,将聚集的菌钟逐步将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面稀释分散到培养基的表面
4、. .在数次画线后在数次画线后, ,可可以分离到以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体子细胞群体, ,这就是这就是菌落菌落. .微生物的接种技术微生物的接种技术（二）、纯化大肠杆菌（二）、纯化大肠杆菌菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落菌落是鉴定菌种的重要依据。是鉴定菌种的重要依据。n一个菌落就是一个种群一个菌落就是一个种群菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种
5、而异 （1 1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是操作的第一步灼烧接种环是每次划线前灼烧接种环是每次划线前灼烧接种环是划线结束后灼烧接种环划线结束后灼烧接种环是消灭接种环上的微生物是消灭接种环上的微生物 ；消灭接种环上残留菌种消灭接种环上残留菌种 （使下一次划线时，接种环（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划
6、线时菌种的数目逐渐减少，以次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。）便得到菌落。）是防止细菌污染环境和感染是防止细菌污染环境和感染操作者。操作者。（2 2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。（3 3）在作第二次以及其后的划线操作时，为）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端
7、开始，能使处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 （2 2）应从操作的各个细节保证）应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。（1）要注意防止杂菌污染，比如试管、移液管要经）要注意防止杂菌污染，比如试管、移液管要经过灭菌，操作在酒精灯附近进行（移液管和试管口应过灭菌，操作在酒精灯附近进行（移液管和试管口应在离火焰在离火焰1-2cm处）。处）。问题探讨问题探讨2n（1）培养未接种的培养基的作用是对照，若）培养未接种的培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。n（2）原有培养基灭菌不彻底或杂菌污染。）原有培养基灭菌不彻底或杂菌污染。
