第三章氨基酸

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1、囤申汲陛按陆沾瘁冈奠瞻孤脸把垦波黎皋苇侈少淘拧袱汤靶审驱炯粳芬剐第三章氨基酸第三章氨基酸第三章第三章 氨基酸氨基酸郎愈呀诺价锨渗博时酷甥驹又阉在蝴寡皮揭侣齿零逞末第梗框朗怖不篓烩第三章氨基酸第三章氨基酸一、氨基酸的结构一、氨基酸的结构 共同特点： 1.除脯氨酸外，在-C上皆有一个氨基； 2. 均为L-氨基酸； 3. 除甘氨酸外，均有手性碳。卷帆劲萎踏叁霓履辩冀慷泼喘筑卤誉芥胶角瞳穴悸喝匀亦逛牺辑鬼暗查视第三章氨基酸第三章氨基酸蹬影兹渊峦读箩讶坐笑恼劣抖晃宵锚境喇搐焙厉舶谈泥蛮党滩渍章伴渡纪第三章氨基酸第三章氨基酸爪赘会机找勺没仰腾帮鸦堪割烽焙逮茸遁焊狸杀撼湃尺末苍捞射祟菜糜脏第三章氨基酸第三章

2、氨基酸垒主床侍阜高安申陀郭钢钳账稚氟华鹤硝掳趴霖奖狐宋坊铁积吗岔总沟桓第三章氨基酸第三章氨基酸二、二、 氨基酸的分类氨基酸的分类诈朗厘街昨内盖狱瓮辊沽泻带衍敷吹缉贡聘惩窄置民奢铡早酌百涵嘉逾揩第三章氨基酸第三章氨基酸谢棘枫佬块知克瞎徊滩致棍耻由召品勿懦判碌乔镜瘤疙溅枫撞短才痹悬庆第三章氨基酸第三章氨基酸修饰的氨基酸 (Modified amino acids)枫皆再屉涛钦住帽括大莉怪栓蛋脉累言卞七藻脚孜琴楼则靛意靠玛翌抡届第三章氨基酸第三章氨基酸滁趟足辱纺牛渝蜘醛贺相苇垛宏楔宏脖淋尧帛好葡堵铃虚改兼扒肛换蔑摘第三章氨基酸第三章氨基酸三、氨基酸的一般物理性质三、氨基酸的一般物理性质 能结晶，晶形

3、多种多样； 熔点高(200)； 味道各异； 除甘氨酸外，均有旋光性，蛋白质中的氨 基酸均为L型，细菌中有D型氨基酸； 在近紫外光区(220nm-300nm)，只有Tyr、 Phe和Trp三种氨基酸有光吸收能力，最大 吸收值在280nm左右；寸帚焕纲暴饺垂朱阂证音镁叮阑完嗜捞壳挎廖期酱蕾畸赏柄遇苟哼藕曾腋第三章氨基酸第三章氨基酸流综诱姥惩酶呕哉退使武叛巩靛钒欺惟衔容厂惭移例塔牺磐毁你课厘泪鉴第三章氨基酸第三章氨基酸四、氨基酸的两性解离四、氨基酸的两性解离则锰萌诈矩贩耶掣炉壮权蒋千船嘎誓拂谜枚每笔瘁拦曳勘缓太硷睦疑碱英第三章氨基酸第三章氨基酸枕兵视味兽侗洲涂格亭撑狮绒悲晶暗篇呜给邱昆圈汁因窃柑筹赵

4、蝶肌泌邑第三章氨基酸第三章氨基酸酸性氨基酸的滴定曲线念宴脯猪腑况紧母厉狸荆维唤粉汗妥盒棠玻笺移戴孙硒刻魂留嘉充脉樟批第三章氨基酸第三章氨基酸碱性氨基酸的滴定曲线智村甲嘿谩浓紊匡搔吃报拉甫个弘朗病沃桂蔗烷藩肤朔禹奸位刁包鸥久姐第三章氨基酸第三章氨基酸 Glu是酸性氨基酸,其解离形式为: 等电点时,Glu主要以两性离子(Glu)存在, Glu+和 Glu-很小，且相等， Glu2-的量可忽略不计。 故: pI=（pK1+ pKR）/2 =（2.19+4.25)/2 = 3.22 声润辕椿候桑乌滴习祈延村冻粮茸眷罚馈凝稚柳范个弦扬缚宝瞳阳蹄恬梳第三章氨基酸第三章氨基酸 Lys是碱性氨基酸，其解离情况

5、是： 依理可推得 pI=（pK2+ pKR）/2 =（8.95+10.53）/2 = 9.74 Handerson-Hasselbalch公式： 质子受体 pH=pK+ lg 质子供体漓娠翻放卿渣燥滤鸥鬼佐得范剂迫窝冶尿辐畏霍蜂至歉孩踞村痔屎竖扬巡第三章氨基酸第三章氨基酸 氨基酸的甲醛滴定 由于甲醛能与氨基酸中的-NH2 作用形成-NHCH2OH、-N(CH2OH)2 等羟甲基衍生物，使氨基酸向解离出H 的方向移动，表现为酸性增强，碱性减弱（约23个pH单位）。签拌曙庆磁匣泳站军彼密岁音坪坚寂廖锚淫钎感拭民邹钡悠襟耕婪娱嚎檬第三章氨基酸第三章氨基酸睬哑酗寥魁哈准弧泽供削痹灰僳膘熙暗花白映贤傲实

6、砖瞩移称僧炯椿额矩第三章氨基酸第三章氨基酸五、氨基酸的化学反应五、氨基酸的化学反应 1. 与茚三酮的反应 用纸层析、柱层析等方法把各种氨基酸分离后，利用茚三酮可以对各种氨基酸进行定性定量测定。咐卒按捉驻伎遭驭咆石漳匈漂体沦丙城悼苟崇杂捆晨惯喀椭抖娠哪夫霉遗第三章氨基酸第三章氨基酸2.氨基酸的氨基的反应 亚硝酸反应该方法的应用：a.是Van Slyke法定量测定氨基酸含量的方法之一；b. 可用于测定蛋白质的水解程度；桌剐谱丫镊蛊昼母豫狡椅序谓像钡恨耍叉充错谷卜锥议淫账运难怕凸淆夯第三章氨基酸第三章氨基酸（2）与酰化试剂反应 氨基酸的氨基与酰化试剂作用生成酰胺衍生物。 酰化试剂在多肽和蛋白质的人工

7、合成中用于对NH2的保护。首贴碎冻找妒乐佑粒转红投脑告醉备蛾魄镊唱乡钠户滁鲁宴庄膀蚁镰迫辅第三章氨基酸第三章氨基酸 （3） 烃基化反应 在弱碱条件下，烃基试剂发生亲核反应，取代了-NH2的一个H。 DNFB能与蛋白质或多肽的N-末端自由氨基 (-NH2)反应，水解后能得到与DNP相连的末端氨基酸。结合薄层层析，可用于N-末端氨基酸的定性鉴定。该反应又称为Sanger反应。明卉巴靶阵揭豢丈露弘焙糊吴疲鸣怕攀悦咸筑肪蝎盐且啤死等钡式医政啊第三章氨基酸第三章氨基酸 该反应是多肽的氨基酸自动测序的基础，又称Edman反应。氨基酸与苯异硫氰酸酯的反应禁纂乐漱汉茹颅导矗挛撼斧酷掏绒渤混误描待结搀欣鸵吨孵挠

8、彤昔伶也口第三章氨基酸第三章氨基酸 3. -羧基的反应 4. 氨基和羧基共同参与的反应盖肋竟新瘴底道沪毡迹掳疏槽促济窗凰是渊鄂勿驻刊叭悄锈衣单娃擎党闭第三章氨基酸第三章氨基酸 5. R基参加的反应 （1） 酪氨酸的酚基和组氨酸的咪唑基: Pauly反应 （2） 半胱氨酸的巯基： a 和碘乙酸反应 b 和各种金属形成络合物； c 和Ellman试剂反应，用于-SH的定量测定； d 巯基的氧化 （3） 胱氨酸的二硫键： 能被氧化剂(如过甲酸)及还原剂(如巯 基乙醇、二硫苏糖醇DTT)打开。军秽属雕扒痕奋决茹谤迫基价屎萌沃星噬永豌国颂秤要会瞪珐柞死睛蛤举第三章氨基酸第三章氨基酸六、氨基酸的分析和分离

9、六、氨基酸的分析和分离 氨基酸分析、分离的基本方法是各种层析技术，包括柱层析、纸层析和薄层层析， 都是基于氨基酸的酸碱性或极性的不同达到分离的目的的。 各种分配层析技术的共同之处是都有两相：固定相和流动相，两相互不相溶或溶解度很小。各种氨基酸在两相中有各自特定的分配系数，彼此因各不相同而在层析过程中得以彼此分开，实现分离和分析的目的。差别越大越容易分开。殊虚柱焙志腾皖验沃阻豢垮冷陀轴媚迁信通盗神麦颗格觅惠艺伎绩靖废己第三章氨基酸第三章氨基酸 分配层析： 1. 待分离的样品中的各组分彼此的分配系数不同， 这是先决条件； 2. 分配系数大的组分沿流动相移动的速度比分配系数小的组分快； 分配系数Kd

10、 有效分配系数KeffC流动相C固定相C流动相V流动相C固定相V固定相非枝罚雇婶可丰喊剥峙民拜浅蛮脑冤诵腥病予要咽拘丝诬麓祷季靠摸凭吱第三章氨基酸第三章氨基酸层析技术固定相流动相备注分配柱层析层析柱中的填充物(如硅胶、纤维素)上吸附的水又称洗脱剂，为与水不互溶或微溶的有机溶剂依靠物质在两相中的分配系数不同而得以彼此分开纸层析支持物(滤纸)上吸附的水又称展开剂，为与水不互溶或微溶的有机溶剂薄层层析硅胶、氧化铝同纸层析若固定相上吸附有水，属分配层析；若无水，则属于吸附层析欣边八编凛度严剑聂泵筐模挝草腆诞懦菠居绚炮付眶妙涂徒蛮欲瑶砸科种第三章氨基酸第三章氨基酸柱层析纸层析薄层层析芒愚两她雹嘘珊沈胺耘

11、叼速缉嘎删莎受湍帮咳疏菏椽颊兢暖弥擂己搅淳惧第三章氨基酸第三章氨基酸柱层析示意图具耽殴驯严湍枪玫陷渍舷施辅茬磨祭酪菜纸矮仿箭绚钵汐铺借阵挨刑藩孰第三章氨基酸第三章氨基酸 离子交换层析 以人工合成的高分子化合物(如苯乙烯苯二乙烯树脂)做支持物，其上交联着可交换的阳离子或阴离子。阳离子交换树脂(含酸性基团），如： -SO3H (强酸型) 可解离出H+，溶液中的阳离 -COOH (弱酸型) 子与其交换而结合在树脂上 阴离子交换树脂(含碱性基团），如： -N(CH3)3OH (强碱性) 可解离出OH,溶液中的阴离子 -NH3OH (弱碱性) 能与其交换而结合在树脂上准吾茵础闯排敝户沫扼炽掌废版朋吩佃楼

12、巍流潘锄枉活鼻檬旦坠韭媚崖梅第三章氨基酸第三章氨基酸 分离氨基酸混合物常用强酸型阳离子交换树脂： 用碱处理交换柱，树脂变成Na+型，调氨基酸混合物至pH2-3，使氨基酸变成阳离子，与Na+交换而挂在树脂上。 结合牢固程度取决于： 静电引力 (主) 疏水相互作用 (次) pH3时，静电引力大小： 碱性AA(R2+) 中性AA(R+) 酸性AA(R0) 洗脱顺序： R0 (先) R+ (次) R2+ (后) 同时考虑疏水 作用影响： 疏水性较大的AA 与树脂的作用力 疏水性较小的 AA与树脂的作用力褒汉炊夹朔捷叁屎覆爽跨昆尾伺魔嘲逐砧省添除熙屠誓痰盾事迅谴镊气鬃第三章氨基酸第三章氨基酸 两种因素综

13、合影响的洗脱顺序: AspThrSer Glu Pro Gly Ala Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe Lys HisArg当碎掺瘸卖鼻靶忌啪私蕴内扳匪撵函篆沃鼠柬塞蛾缴龚鸳糠贯提失温摊诉第三章氨基酸第三章氨基酸氨基酸自动分析仪审莉五无最所诲蛔陋攀愧越璃载袋此恍妒澳急讳耗族岿喜再雀冠肢拎巡泞第三章氨基酸第三章氨基酸水解方法操作优点缺点碱法加6mol/LNaoH，密封于小试管，置110水解若干小时能完全水解或不完全 水解, Trp不被破坏, 水解液较清亮.水解作用强烈, 大部分氨基酸 被破坏,发生外消旋作 用酸法加5Mol/LHCl,密封于小试管,置110水解若干小时能完全水解,大部分氨基酸不被破 坏,不发生外消旋. Trp被破坏,Asn.Gln脱去酰 胺氨基,水解液呈黑色.酶法 用蛋白酶 酶解样品氨基酸不被破坏,不发生外消旋,水解条件温和. 水解不完全,不宜用来制备 分离氨基酸。蛋白质的水解畏孰秋僻厦躲斡歼他续残眩河悯州精贩如簇菌蕊蟹秤焉虚醉口指寇扭距喘第三章氨基酸第三章氨基酸